【免费下载】3植物组织中总糖和还原糖的测定35 二硝基水杨酸法 副本
3,5-二硝基水杨酸法测定山楂片中还原糖和总糖含量
3,5-二硝基水杨酸法测定山楂片中还原糖和总糖含量3,5-二硝基水杨酸法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法，其原理基于还原糖在酸性条件下与3,5-二硝基水杨酸反应生成红色化合物，而总糖则在强硫酸存在下加热分解，生成由葡萄糖和六碳糖等组成的还原糖，在酸性条件下与3,5-二硝基水杨酸反应生成红色化合物。
具体操作步骤如下：1. 取一定质量的山楂片粉末，加入适量的蒸馏水，加热水浴至沸腾，过滤，将过滤液冷却至室温。
2. 取0.2 ml 过滤液，加入2 ml 3,5-二硝基水杨酸溶液，摇匀后在60摄氏度恒温水浴中反应10分钟，然后放冷。
3. 吸收液的吸光度在515 nm处测定，还原糖含量的计算公式为：还原糖含量（%)= (As–A0)/(有效光程×C×0.88)×100，其中As为样品吸光度，A0为空白试剂吸光度，有效光程为1 cm，C为样品初始体积，0.88为还原糖的摩尔吸光系数。
4. 取剩余过滤液，加入相当于5倍于样品初始体积的浓硫酸，浸于沸水中煮2小时，浸于水中冷却，并用蒸馏水将瓶口水洗入容量瓶，摇匀。
5. 取0.1ml 还原糖水样稀释液加入容量瓶，加入相当于5倍于样品初始体积的浓硫酸，摇匀后加入适量的蒸馏水到刻度线，摇匀后离心。
6. 取0.1 ml 离心上清液，加入2 ml 3,5-二硝基水杨酸溶液，摇匀后在60摄氏度恒温水浴中反应10分钟，然后放冷。
7. 吸收液的吸光度在515 nm处测定，总糖含量的计算公式为：总糖含量（%)= (As–A0)/(有效光程×C×0.88)×100，其中As为样品吸光度，A0为空白试剂吸光度，有效光程为1 cm，C为样品初始体积，0.88为还原糖的摩尔吸光系数。
总之，3,5-二硝基水杨酸法是一种稳定可靠的方法，能够准确测定山楂片中的还原糖和总糖含量，为山楂片的质量控制提供了重要的参考。
总糖含量的测定—3, 5-二硝基水杨酸法
总糖含量的测定——3, 5-二硝基水杨酸法原理：在氢氧化钠或丙三醇的的存在下, 还原糖能将3, 5-二硝基水杨酸(DNS) 中的硝基还原成氨基, 生成氨基化合物, 此化合物在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈橘红色。
试剂：葡萄糖;3, 5-二硝基水杨酸(化学纯) ;酒石酸钾钠、苯酚、盐酸、氢氧化钠、无水亚硫酸钠(均为分析纯);超纯水。
仪器和设备：紫外可见分光光度计；电子天平（感量为0.0001g）；电热鼓风干燥箱；电热恒温水浴锅。
溶液的配制（1）DNS试剂的配制：称取18.2 g酒石酸钾钠、0.63 g3，5-二硝基水杨酸、2.1 g Na OH、0.5 g苯酚、0.5 g无水Na2SO3，分别加少量超纯水溶解，将酒石酸钾钠溶液放于45℃水浴锅，然后依次加入上述溶解好的试剂，边加边搅拌，取出后冷却至室温，加超纯水定容至100 m L，贮存于棕色瓶内，暗处保存，一周后使用。
（2）葡萄糖标准溶液的配制：将葡萄糖置于105℃中干燥至恒重，精密称取0.100g 葡萄糖于100mL烧杯中，加水溶解，定容至1000mL，即得浓度为0.1mg/mL的葡萄糖标准溶液。
样品溶液的制备：准确称取样品0.2g～1.0g，精确到0.0001g，于50 mL试管中，加入20 m L蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min，取出冷却，过滤入100 mL容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度，即为样品测定液。
标准曲线的制作：精密量取0.1mg/mL的葡萄糖标溶液0mL，0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，1.0mL 置于25mL具塞比色管中，加入蒸馏水补充至2.0mL。
向试液中分别加入3 mL DNS显色剂，于沸水浴中加热9 min，立即冷却至室温，定容至刻度，显色20 min后于波长540 nm处，用可见分光光度计测定不同浓度葡萄糖混合溶液的吸光度，并以葡萄糖质量浓度 (x)为横坐标，吸光度 (y)为纵坐标，绘制葡萄糖溶液标准曲线。
实验三35-二硝基水杨酸法测定还原糖
实验三3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖一、实验目的1、掌握还原糖定量测定的原理和方法。
2、掌握分光光度计的使用方法。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖10257 RP麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验器材1、实验仪器1）恒温水浴锅2）可见光分光光度计3）电子天平4）三角瓶（100ml）5）容量瓶（100ml）6）胶头滴管7）移液管2、实验材料1）食用面粉2）1 mg/ ml 葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在8 0 ℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml的容量瓶中，以馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
3）3, 5- 二硝基水杨酸试剂：将6.3g 3, 5- 硝基水杨酸和262ml 2mol/NaOH溶液，加到500ml含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解。
冷却后加蒸馏水定容至 1000ml，贮于棕色瓶中备用。
4）碘-碘化钾溶液：称取5g 碘和10g 碘化钾，溶于100 ml 蒸馏水中。
5）酚酞指示剂：称取0.1g 酚酞，溶于250ml 70 ％乙醇中。
6）6mol/L HCl。
7）6mol/L NaOH。
实验一,3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
还原糖和总糖的测定
1.样品中还原糖的提取：称取 5g 左右的平菇，用碾碎装置碾碎，再用研钵研磨，将渣和 汁全部转移到 100ml 的三角瓶中，用水冲洗碾碎装置和研钵，所得液体并入三角瓶中，置于 500C 的恒温水浴中保温 30min， 使还原糖浸出。 10000rpm 离心 2min。 将液体全部转入 100ml 的容量瓶中，用蒸馏水洗涤三角瓶，并转入容量瓶中定容。得到还原糖的待测液。 2. 显色：取三支具有 25ml 刻度的试管，编号，按下表所示的量，精确加入待测液和试 剂。 将各管摇匀， 在沸水浴中加热 5min， 取出冷却到室温， 以蒸馏水定容至 25ml， 混匀后， 在 540nm 波长下，测定各管的消光值。
1
还原糖的测定---3,5-二硝基水杨酸比色法
标准曲线测定结果：
管号 1 0 0 2 10 0.087 3 20 0.263 4 30 0430 5 40 0.598 6 60 0.752 7 80 0.883
葡萄糖含量 （ug） OD 值
葡萄糖标准曲线表
1 0.8 0.6 OD值 0.4 0.2 0 0 -0.2 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 葡萄糖mg y = 0.770x - 0.031 R² = 0.995
管号 还原糖测定液（ml） 蒸馏水（ml） 3,5-二硝基水杨酸试剂（ml） 参比管 0 0 2 1.5 还原糖测定管号 1 2 0 1.5 2 2 0 1.5
还原糖% =
查曲线所得含糖 mg 数 × （提取液总体积/测定时取用体积） 样品 mg 数
× 100
2
总糖的测定----3,5-二硝基水杨酸比色法
1.样品中总糖的提取：称取 5g 左右的平菇，先用碾碎装置碾碎，再用研钵研磨，将渣和
汁全部转移到 100ml 的三角瓶中，用水冲洗碾碎装置和研钵，所得液体并入三角瓶中，加入 20ml 6mol/L 的 HCl 及 30ml 的蒸馏水， 置于沸水浴中保温 1h。 待三角瓶中的水解液冷却后， 用 PH 试纸检测， 以 6mol/L NaOH 中和至中性。 10000rpm 离心 2min。 将液体全部转入 250ml 的容量瓶中，用蒸馏水洗涤三角瓶，并转入容量瓶中定容。得到总糖的待测液。 2.显色： 取三支具有 25ml 刻度的试管， 编号， 按下表所示的量， 精确加入待测液和试剂。 将各管摇匀，在沸水浴中加热 5min，取出冷却到室温，以蒸馏水定容至 25ml，混匀后，在 540nm 波长下，测定各管的消光值。
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定（3,5—二硝基水杨酸法）实验报告前言糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。
同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。
我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。
本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。
本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。
首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法3、学习分光光度法测定的原理和方法二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
植物组织中总糖及还原糖的测定
1、还原糖：指含有游离的半缩醛(酮)基糖。 单糖都是还原糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、
乳糖等）；多糖为非还原糖。 2、总糖的提取及双、多糖的酸水解。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、 双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和 多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进 行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量 （还原糖以葡萄糖含量计）。
四、实验步骤：
1、葡萄糖标准曲线的绘制 2、还原糖的提取 3、样品含糖量的测定:
1、葡萄糖标准曲线的绘ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ:
取7支试管，按下表操作，以标准葡萄糖含量为横坐标， 对应的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
管 号
葡萄糖 标准液
mL
蒸馏水 mL
DNS mL
沸水 蒸馏水 光密度值 浴 mL OD540nm
葡萄糖含 量（μg）
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分 子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：苹果（约0.5 g） 2、仪器：水浴锅；可见分光光度计等。 3、试剂：
（1）1 mg/mL葡萄糖标准液 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂(碱性) （3）6M HCl和6M NaOH
2、还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂反应：
在碱性条件下，还原糖与DNS试剂反应，还原糖被 氧化成糖酸及其它产物， DNS被还原为棕红色的3-氨 基-5-硝基水杨酸。
3,5-二硝基水杨酸 (DNS)
3-氨基-5-硝基水杨酸 (棕红色,A540)
3、在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质(3氨基-5-硝基水杨酸)颜色的深浅成正比关系，利用 分光光度计，在540nm波长下测定光密度值， 查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖 的含量。
实验一还原糖和总糖的测定——3,5二硝基水杨酸比色法
《生物化学》实验指导书适用专业：生物科学、食品科学、生物工程、农学、园艺、环境科学孝感学院生命科学与技术学院生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。
1. 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。
2. 严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。
非本实验组的同学不准进入实验室。
3. 进入实验室必须穿实验服。
各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。
绝对禁止用实验仪器或药物嬉耍。
4. 实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。
5. 实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。
否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。
6. 使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。
7. 做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。
8. 实验后，要及时完成实验报告。
目录实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１实验二油脂酸价的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５实验三蛋白质的提取及浓度测定¬(紫外吸收法)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．７实验四淀粉酶活力的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．９实验五酶的激活和抑制作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１３实验六氨基酸的分离鉴定――纸层析法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１４实验七基因组DNA的快速提取---碘化钾法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１６实验八琼脂糖凝胶电泳技术――DNA样品检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１８实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
实验一,3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
实验一-还原糖和总糖的测定-3-5-二硝基水杨酸比色法
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计）.还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3，5—二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3—氨基—5—硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计，在540 nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量.由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0。
9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉（1000 g）2．主要仪器(1）具塞玻璃刻度试管:20 mL×11 （2）滤纸（3）烧杯：100 mL×2 （4)三角瓶：100 mL×1 (5)容量瓶：100 mL×3 （6）刻度吸管：1mL×1；2 mL×2；10 mL×1 （7)恒温水浴锅（8）煤气炉(9）漏斗（10)天平（11）分光光度计3．试剂（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80 ℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100 mg,置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
(2）3,5-二硝基水杨酸(DNS）试剂3,5－二硝基水杨酸(DNS）试剂：称取6。
5 g DNS溶于少量热蒸馏水中,溶解后移入1000 mL容量瓶中，加入2 mol/L氢氧化钠溶液325 mL，再加入45 g丙三醇,摇匀，冷却后定容至1000 mL。
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH 试纸。
2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
3,5-二硝基水杨酸法测定蔓菁中还原糖和总糖含量
１１３ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ２０２０年５月５日第２９卷第９期Ｖｏｌ．２９牞Ｎｏ．９牞Ｍａｙ５牞２０２０基金项目：山西省科技厅面上自然基金项目犤２０１８０１Ｄ１２１２９６犦。
第一作者：高文军，男，硕士研究生，助理工程师，研究方向为食品药品成分分析，（电子信箱）ｑｘｙｇｗｊ＠１６３．ｃｏｍ。
△通信作者：李卫红，女，大学本科，教授级高级工程师，研究方向为食品药品检测技术及质量标准，（电子信箱）ｌｗｈ１９１＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ。
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－４９３１．２０２０．０９．０３４调查犤Ｊ犦．中药材，２００１，２４（１）：２０－２１．犤２犦毛文山，严智慧，马兴民，等．中药真伪鉴别犤Ｍ犦．西安：陕西科学技术出版社，１９８４：２６１．犤３犦卫生部药品生物制品检定所－中国科学院植物研究所．中药鉴别手册（二册）犤Ｍ犦．北京：科学出版社，１９７９：２６５．犤４犦肖培根．新编中药志：一卷犤Ｍ犦．北京：化学工业出版社，２００１：６９１．犤５犦韦欣，任广聪，孙庆文，等．贵州产菝葜属及肖菝葜属８个品种的鉴别研究犤Ｊ犦．时珍国医国药，２０１１，２２（２）：４９２－４９４．犤６犦杜素兰，张晋宏，耿爱萍，等．短梗菝葜的定性与定量检测方法研究犤Ｊ犦．中国药事，２００８，２２（３）：２３０－２３２．犤７犦陈艺粼，吴小利，聂飞，等．短梗菝葜药材的生药学鉴别研究犤Ｊ犦．中药材，２０１８，４１（２）：３１３－３１６．犤８犦张凌燕，叶冰莹，黄骐，等．ＭＰＬＣ测定虎杖中白藜芦醇含量犤Ｊ犦．天然产物研究与开发，２００６（２）：３０８－３１０．犤９犦张存莉，李文闯，高锦明，等．黑刺菝葜中的甾体皂甙研究犤Ｊ犦．西北农林科技大学学报（自然科学版），２００３，３１（４）：１６３．犤１０犦ＳＩＥＭＡＮＮＥＨ，ＣＲＥＡＳＹＬＬ，Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｈｙｔｏａｌｅｘｉｎｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｉｎｗｉｎｅ犤Ｊ犦．ＥｎｏｌｏｇｙａｎｄＶｉｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，１９９２，４３（１）：４９－５２．犤１１犦ＣＡＲＵＳＯＦ，ＴＡＮＳＫＩＪＡ，ＶＩＬＬＥＧＡＳＥ，ｅｔ．ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｂａｓｉｓｆｏｒａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｒａｎｓ－ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ：Ａｂｉｎｉｔｉｏｃａｌｃｕｌａ－ｔｉｏｎｓａｎｄｃｒｙｓｔａｌａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅ犤Ｊ犦．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４，５２（２４）：７２７９－７２８５．犤１２犦ＦＡＲＺＡＮＥＧＡＮＡ，ＳＨＯＫＵＨＩＡＮＭ，ＪＡＦＡＲＩＳ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｉ－ｈｉｓｔａｍｉｎｉｃＥｆｆｅｃｔｓｏｆＲｅｓｖｅｒａｔｒｏｌａｎｄＳｉｌｙｍａｒｉｎｏｎＨｕｍａｎＧｉｎｇｉｖａｌＦｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ犤Ｊ犦．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１９，４２（５）：１６２２－１６２９．犤１３犦ＣＨＥＮＹＲ，ＣＨＥＮＹＳ，ＣＨＩＮＹＴ，ｅｔａｌ．Ｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓｉｎｔｅｒｆｅｒｅｗｉｔｈｒｅｓｖｅｒ ａｔｒｏｌ－ｉｎｄｕｃｅｄａｎｔｉ－ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｏｒａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ犤Ｊ犦．Ｆｏｏｄａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ：ａｎｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｊｏｕｒｎａｌｐｕｂｌｉｓｈｅｄｆｏｒｔｈｅＢｒｉｔｉｓｈＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２０１９，１３２：１１０６９３．犤１４犦培勤，郭传勇．自藜芦醇药理作用的研究进展犤Ｊ犦．医药导报，２００６，２５（６）：５２４－５２５．牗收稿日期：２０１９－０９－１６牘檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨３，５－二硝基水杨酸法测定蔓菁中还原糖和总糖含量 高文军，李卫红△，王喜明，乔丽芳（山西省医药与生命科学研究院，山西太原０３０００６）摘要：目的建立测定晋南蔓菁还原糖和总糖含量的３，５－二硝基水杨酸比色（ＤＮＳ）法。
植物组织中总糖及还原糖的测定
0(参比溶液)
0
1
0.114
0
1
0.2
0.8
200
2
0.4
0.6
400
3 4
0.6 0.8
0.4 0.2
Байду номын сангаас
1.0
5min 冷却
4
600 800
5
1.0
0
1000
还原糖提取液
1.0ml
χ1
2、还原糖的提取
① 取0.5g样品于研钵中，加水2-3ml，充分研 磨。
② 用2-3ml蒸馏水分三次冲洗研钵(总体积小于 10 ml)，转入试管中。
二、实验原理:
1、还原糖：指含有游离的半缩醛(酮)基糖。 单糖都是还原糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、
乳糖等）；多糖为非还原糖。 2、总糖的提取及双、多糖的酸水解。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、 双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和 多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进 行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量 （还原糖以葡萄糖含量计）。
水解后还原糖含量 (μg) ×样液总体积×0.9 测定用样品液体积×样品鲜重(g)
六、思考题：
1、何谓还原糖？ 2、本实验的注意事项?
Thank you!
③ 在50℃水浴中恒温20分钟，冷却后于3000转 离心5分钟。
④ 取上清转入试管中，用蒸馏水定容20毫升， 待测。
3、样品含糖量的测定: 取提取液1.0ml，按上表操作。
五、计算：
还原糖含量(μg/ g )=
还原糖含量χ1(μg) ×样液总体积 测定用样品液体积×样品鲜重(g)
总糖含量(μg/ g )=
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华南农业大学实验报告
专业班次11农学一班组别201130010110题目植物组织中总糖和还原糖含量的测定姓名梁志雄日期
【实验目的】
1、掌握总糖和还原糖的提取方法；
2、掌握定量测定总糖和还原糖的原理和操作要点；
3、熟练地掌握分光光度法的操作技术。
【实验原理】
3,5-二硝基水杨酸是一种具有芳香环结构的分子。
还原糖与3，5-二硝基水杨酸在碱性条件下加热时，还原糖将3,5-二硝基水杨酸还原成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，而还原糖本身则被还原成糖酸。
在一定的浓度范围内，棕红色颜色的深浅与3-氨基-5硝基水杨酸的含量成正比，可用分光光度计在540nm波长下测定，利用系列浓度的葡萄糖测定后做成标准曲线，可以查出样品的还原糖的相应含量。
样品中的双糖、寡糖、和多糖需要用酸水解变成还原糖后再用此法测定。
【实验仪器和用品】
分光光度计、恒温水浴锅、电子天平、试管、三角瓶、容量瓶、量筒、滤纸、移液管。
【实验材料】
发芽水稻种子、3,5-二硝基水杨酸、标准葡萄糖溶液、氢氧化钠溶液、盐酸溶液
【实验步骤】
1、标准葡萄糖曲线的绘制取6支试管，编号1~6，按照下表1的顺序加入试剂
标准曲线的制作
管号123456
0.00.10.20.30.40.5
500ug/ml标准葡萄糖溶液
（ml）
蒸馏水（ml）0.50.40.30.20.10.0 DNS试剂（ml）0.50.50.50.50.50.5
沸水浴5min，冷却
蒸馏水444444
各管糖含量
050100150200250（ug）
A54000.0380.1200.1820.2450.295将各试管摇匀后，在分光光度计上把第一支试管调零，在540nm波长处分别读取各管的吸光值A540，分别填在表上，以表中“各管糖含量（ug）”一项数据为横坐标，以A540一项为纵坐标，做出标准曲线，曲线过原点。
2、样品中还原糖的提取在天平上称取去掉外稃后的水稻种子0.3g，放在研钵上，加蒸馏水3ml，加入少量的石英砂研磨成匀浆。
匀浆液转移到50ml的三角瓶中，用少许的蒸馏水清洗研钵，一并转入三角瓶中。
将三角瓶放在沸水浴中保温20min，取出冷却后，将匀浆液转移到501ml的容量瓶中，用少量的水荡洗三角瓶，一起转入容量瓶，用水定容到50ml，过滤，取滤液待测。
3、样品中总糖的水解和提取在天平中准确称取植物材料（发芽种子，去掉外稃）
0.2g，放入研钵中，加蒸馏水3ml，加入少许的石英砂匀浆，匀浆液转移到50ml的三角瓶中，用10ml的蒸馏水分2次清洗研钵，一并转入三角瓶中。
向三角瓶中加入
6mol/LHCL溶液10ml，摇匀，将三角瓶放在沸水浴中保温20min，取出冷却后，向三角瓶中加入6mol/LNacH溶液10ml，摇匀。
将瓶中匀浆液转移到100ml的容量瓶中，用少量水荡洗三角瓶一起转入容量瓶，用水定容到100ml，过滤。
取滤液1ml放入试管中，加蒸馏水2ml，摇匀待测。
4、样品中含糖量的测定取5支试管，分别编号1~5.按表2加入样品和试剂。
表二
试管编号12345
还原糖待测液
00.50.500
（ml）
总糖待测样品
0000.50.5（ml）
蒸馏水（ml）0.50000.5
DNS试剂（ml）0.50.50.50.50.5
沸水浴中加热保温5min，取出冷却
蒸馏水（ml）44444
A54000.4830.5680.0860.077
将各支试管摇匀后，在分光光度计中用第一支试管调零，在540nm波长分别读取各管的吸光值（A540），分别填在表二中，用各管的读数分别在标准曲线上查出相应的含糖量。
【实验数据处理】
根据表一可以做出下图
根据表二中的数据，查上图中的标准曲线可以得出
试管中还原糖待测样品
2号管为403ug ；
3号管为473ug ；
试管中总糖待测样品
4号管为72ug ；
5号管为64ug 。
根据下列公式
还原糖含量=
M ∗V
m ∗0.5∗100%
总糖含量=
M ∗V ∗0.9
m ∗0.5
∗100%
所以2
号管的还原糖含量==13.4%
403∗50
3000000∗0.5
∗100%
3
号管的还原糖含量==15.8%
473∗50
3000000∗0.5
∗100%
所以还原糖含量为（13.4%+15.8%）/2=14.6%
4
号管中总糖含量==19.4%
72∗300∗0.9
200000∗0.5
∗100%
5
号管中总糖含量==17.3%64∗300∗0.9
200000∗0.5
∗100%
所以总糖含量为（19.4%+17.3%）/2=18.35%
【实验总结】
本实验测得样品中总糖含量为18.35%，还原糖含量为14.6%，从上图中的标准曲线所得出的线性方程可知，其R2=0.9937，所以实验测得的数据可靠，误差较少。