谷氨酸发酵 实验报告材料(1)
谷氨酸实验报告
一、实验目的1. 了解谷氨酸棒杆菌的生长特性及其发酵条件。
2. 掌握谷氨酸发酵的基本原理和操作流程。
3. 通过实验，掌握还原糖消耗和谷氨酸生成的测定方法，分析发酵过程。
二、实验原理谷氨酸棒杆菌是一种产谷氨酸的微生物，其在合适的培养基中经摇瓶培养能快速生长。
谷氨酸棒杆菌将糖类转化为谷氨酸，同时消耗还原糖。
还原糖的消耗和谷氨酸的生成是衡量谷氨酸发酵是否正常的重要标志。
三、实验材料与仪器1. 谷氨酸棒杆菌2. 葡萄糖3. 牛肉膏4. 磷酸氢二钠5. 磷酸二氢钠6. 硫酸铵7. 硫酸镁8. 硫酸铜9. 氯化钠10. 琼脂11. pH计12. 恒温摇床13. 摇瓶14. 实验记录本四、实验方法1. 制备培养基：按照配方配制谷氨酸棒杆菌培养基，高压灭菌后备用。
2. 接种：将谷氨酸棒杆菌接种于培养基中，在恒温摇床中培养至对数生长期。
3. 谷氨酸发酵：将培养好的谷氨酸棒杆菌接种于发酵培养基中，调节pH值，控制温度和通气量，进行发酵。
4. 还原糖消耗和谷氨酸生成测定：发酵过程中，每2小时取样一次，测定还原糖和谷氨酸含量。
5. 数据分析：根据还原糖消耗和谷氨酸生成数据，绘制糖耗曲线和谷氨酸生成曲线。
五、实验结果与分析1. 还原糖消耗：发酵过程中，还原糖含量逐渐降低，当还原糖降至1%以下时，表明谷氨酸发酵完成。
2. 谷氨酸生成：发酵过程中，谷氨酸含量逐渐增加，达到峰值后趋于稳定。
六、实验结论1. 谷氨酸棒杆菌在合适的培养基中能快速生长，并产生大量谷氨酸。
2. 还原糖消耗和谷氨酸生成是衡量谷氨酸发酵是否正常的重要标志。
3. 通过控制发酵条件，可以提高谷氨酸产量。
七、实验讨论1. 实验过程中，温度和通气量对谷氨酸发酵影响较大，应严格控制。
2. pH值对谷氨酸发酵也有一定影响，应保持适宜的pH值。
3. 实验中，谷氨酸棒杆菌的生长和发酵过程受到多种因素的影响，如营养物质、氧气、pH值等，应综合考虑。
八、实验总结通过本次谷氨酸发酵实验，我们掌握了谷氨酸发酵的基本原理和操作流程，了解了还原糖消耗和谷氨酸生成的测定方法，并分析了发酵过程。
谷氨酸发酵生产实训
答:（1）主要是利用氯化钙的絮凝作用，提高淀粉酶耐热性； （2）作为淀粉酶的保护剂和激活剂。
任务二: 注:配制液体种子培养基时，调pH时先用pH试纸测量，测
出大致范围，再用pH计准确测量。
任务三:1、一级种子的培养目的:制备大量高活性的菌体
2、二级种子的培养目的:制备和发酵罐体积及培养条件相称的高活性菌
答:a.菌体可能缺氧，乳酸增多，导致pH降低
b.可能前期发酵时温度偏高，导致菌种衰老得较快或其他原因导致菌体死亡 c.可能因为糖含量过多
步骤: ①平衡——加入20ml扩展剂，密封20min;
②规划——层析滤纸下端2cm处画直线A,标记间隔2cm的4个记号，滤纸左边 缘1cm 画直线B;
③点样——毛细管取样，同一位置2~3次，每次2~3ml ,点完一点后立刻吹干；
④层析——两侧不能接触烧杯壁，扩展剂加到1cm；
⑤显色——喷雾剂烘干，待正丁醇挥发加热，氨基酸显示蓝紫色斑点；
五，课后思考及实验的分析讨论
• 1.如何判断淀粉的液化和糖化终点？ • a.液化:取少量淀粉溶液放平皿中，加几滴碘液，若
是红褐色或无色，则液化结束。 • b.糖化：取少量液化后的淀粉溶液放置平皿中，加
无水酒精无沉淀，则糖化结束。 • 2.淀粉的结构和性质？ • 含有几百个葡萄单元，经熬煮不易成糊状，冷却后
四.实验结果
• 得到一瓶300ml淀粉水解糖（水解淀粉： 15g α-淀粉酶:0.01g氯化钙：0.04g糖化酶： 0.09g）
• 水解20g淀粉，需要α-淀粉酶，氯化钙，糖 化酶的用量:
• α-淀粉酶:(20g*12u/g)/4000u/g=0.006g • 氯化钙：20g*0.2‰=0.04g • 糖化酶：（20g*300u/g）=0.006g
谷氨酸摇瓶发酵
谷氨酸摇瓶发酵班级：生物工程***姓名：*****学号：200900*****指导老师：黄**摘要谷氨酸主要用来生产味精，是索逊1856年发现的。
谷氨酸的生物合成包括糖酵解作用（EMP途径）、戊糖磷酸途径（HMP途径）、三羧酸循环（TCA循环）、乙醛酸循环和丙酮酸羧化支路（CO2固定反应）。
现在谷氨酸生产菌主要是棒状杆菌属、短杆菌属、小杆菌属及节杆菌属中的细菌。
影响谷氨酸发酵过程的参数有很多，谷氨酸发酵过程主要受种子质量，培养基组成，温度，pH以及供氧速率等因素控制。
关键词：谷氨酸，发酵，生物合成途径，生产菌种，影响因素。
AbstractMost of the Glutamic acid is used to produce aginomoto.It was discovered by Sorson in 1856. Glycolytic pathway,pentose phosphat epathway,tricarboxylic acid cycle,glyoxylate cycle and pyruvate carboxylase branch are included in the pathway of biosynthesis of glutamic acid.Presently Corynebacterium，Brevibacterium，Microbacterium and Arthrobacterium are used to produced Glutamic . microorganism.The state of glutamic fermentation depends on many parameters and variables，e.g，the quality of seeds ，mediumcomposition，temperature of fermentation，pH of broth and supply rate of oxygen.Key word：glutamic，fermentation，biosynthetic pathway，producing strains，influencing factors.前沿谷氨酸是氨基酸的一种，主要用于生产谷氨酸钠，即味精。
谷氨酸发酵
第一章文献综述1.1谷氨酸简介谷氨酸在生物体内的蛋白质代谢过程中占有重要地位，参与动物、植物和微生物中的许多重要化学反应。
目前，我国许多工厂采用多种方法来提高谷氨酸产率，如选育高产菌种、改进发酵工艺、搞好发酵控制、引进微机控制、增加控制参数等。
这些方法对于提高谷氨酸产率非常有效。
谷氨酸是生产味精的主要原料，随着发酵法生产谷氨酸技术的发展，我国味精生产始于1923年，至今已有80多年历史，随着科学技术的不断进步，味精生产技术也在不断变革，由创建之初的以面筋、豆粕为原料水解法生产工艺，改变为现在以淀粉为原料发酵法生产工艺，发酵法生产工艺从1964年在上海味精厂首次投入生产以来，发酵法生产谷氨酸的生产技术进步较大，尤其是近几年随着菌种的突破以及新技术，新设备的应用进展更快，进入九十年代，尤其九五年后，技术进步较快，目前行业最好水平时（仅少数厂家）制糖收率99%以上，发酵产酸11-12%，转化率59-62%，提取收率96-98%精制收率96%，与80年代比较全行业平均制糖收率提高了10%，发酵产酸率提高了117%，转化率提高了43%，提取收率提高了20%，精制收率提高了8.8%，综合技术指标淀粉消耗下降了166%1.2谷氨酸的生产工艺流程1.2.1液化和糖化因为大米涨价, 目前大多数味精厂都使用淀粉作为原材料。
淀粉先要经过液化阶段。
然后再与β- 淀粉酶作用进入糖化阶段。
首先利用α- 淀粉酶将淀粉浆液化, 降低淀粉粘度并将其水解成糊精和低聚糖, 应为淀粉中蛋白质的含量低于原来的大米, 所以经过液化的混合液可直接加入糖化酶进入糖化阶段, 而不用像以大米为原材料那样液化后需经过板筐压滤机滤去大量蛋白质沉淀。
液化过程中除了加淀粉酶还要加氯化钙，整个液化时间约30min。
一定温度下液化后的糊精及低聚糖在糖化罐内进一步水解为葡萄糖。
淀粉浆液化后, 通过冷却器降温至60℃进入糖化罐, 加入糖化酶进行糖化。
糖化温度控制在60℃左右, pH 值4.5, 糖化时间18～32h。
谷氨酸系列发酵实验
谷氨酸发酵工程系列实验一、实验目的1、了解发酵工业菌种的制备工艺和质量控制，为发酵实验准备菌种。
2、了解发酵罐的操作，完成谷氨酸发酵的全过程操作、3、了解和掌握快速测定还原糖含量的方法。
4、了解和掌握快速测定发酵过程谷氨酸含量的方法5、了解用等电点法从发酵液中回收谷氨酸的方法二、实验原理谷氨酸是由谷氨酸棒杆菌以葡萄糖为原料生产的一种呈味氨基酸，其代谢机理为：葡萄糖先经EMP途径生成丙酮酸，丙酮酸经氧化脱氨基作用生成乙酰辅酶A，乙酰辅酶A进入三羧酸循环生成α—酮戊二酸，α—酮戊二酸再经氨基化作用生成谷氨酸。
由于谷氨酸棒杆菌为生物素缺陷型突变株，因此在发酵过程中要控制生物素亚适量。
三、实验材料、仪器与试剂1、材料：谷氨酸棒杆菌、发酵培养基、谷氨酸发酵液不同发酵时间所取的样品等。
2、仪器：三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、pH试纸、天平、高压蒸汽灭菌锅、培养箱、显微镜、发酵罐及控制系统、蒸汽发生器、空气压缩机、补料瓶、补料针、硅胶管、滴定管、滴定架、电炉、容量瓶、高速离心机、分光光度计、恒温水浴锅、移液器及枪头、无极调速搅拌机、旋转蒸发器、冰箱等3、试剂：无水乙醇、牛肉膏、蛋白胨、蔗糖、可溶性淀粉、蛋白胨、酵母提取液、NaCl、NaOH、HCl、KNO3、去离子水、葡萄糖、尿素、消泡剂、硫酸铜、亚甲基蓝、酒石酸钾钠、氢氧化钠、亚铁氢化钾、盐酸、L-谷氨酸分析纯、茚三酮、丙酮、酒精等。
四、实验步骤1、培养基的制备（1）斜面培养基：葡萄糖0.1%；蛋白胨1%；牛肉膏1%；NaCl0.5%；琼脂2%（pH7.0）（2）一级培养基：蛋白胨1%；酵母浸出粉0.5%；NaCl1%（pH7.2）（3）二级培养基：葡萄糖 2.5%；尿素0.34%；K2HPO4·3H2O0.16%；MgSO4·7H2O；FeSO4·7H2O、MnSO4·H2O各0.0002%（pH7.0）各培养基分装到到三角瓶，用铝箔纸封口，高压灭菌。
实训6-谷氨酸发酵菌体蛋白生产饲料实训指导书
综合实训6 谷氨酸发酵菌体蛋白生产饲料
氨基酸发酵菌体的蛋白质含量丰富（占菌体干重的50%~80%），氨基酸组分齐全，且含有丰富的维生素、核酸、多糖等。
如果将发酵废液中的大量菌体直接排走，既会严重污染环境，又会造成大量蛋白资源的浪费。
据报道，日本、美国等国家近年以蛋白质水解物生产调味品，因其含有丰富的氨基酸，营养价值较高，具有很大的市场消费量。
目前，我国的蛋白质水解物类调味品也有较大的发展，但利用氨基酸发酵菌体为原料，仍以生产饲料蛋白为主。
以谷氨酸发酵为例，发酵液经提取谷氨酸后，提取废液中含有大量的菌体蛋白，约占废液中有机成分的30%~40%，可采用絮凝气浮法或超滤法进行分离菌体，所得菌体经脱水干燥可制备饲料添加用的菌体蛋白，其蛋白含量可达70%以上。
本实验将从发酵工厂收集到的菌体蛋白配制成一定浓度的浑浊液，用喷雾干燥塔实施干燥，实训主要目的为熟悉谷氨酸发酵生产废液生产菌体蛋白的工艺流程及喷雾干燥塔的操作流程。
1、实训前准备工作
（1）仪器设备：喷雾干燥塔，电子天平，玻棒，标签纸。
（2）材料试剂：味精厂菌体蛋白泥。
2、实训步骤
（1）每组称取菌体蛋白1kg，在小桶内用蒸馏水搅拌配制成浑浊液，每组配制3L含菌体蛋白的浑浊液。
（2）用喷雾干燥塔干燥悬液，小心收集所有干燥后的蛋白粉，观察外观，称重并记录。
（3）精心操用，细心观察记录实训过程，整理分析数据，认真撰写实训报告。
发酵法生产谷氨酸工艺试验
发酵法生产谷氨酸工艺实验指导书一、实验目的与意义：实验设置涉及生物产品谷氨酸生产过程的基本单元操作和方法，强调锻炼基本操作能力，掌握使用摇床对谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)的工业菌株进行谷氨酸发酵产酸验证的方法；学习控制发酵培养基的组成与摇床的转速、温度、浓缩糖流加、尿素补充等试验技术与手段；掌握发酵罐的使用方法与利用发酵罐发酵生产氨基酸的方法。
掌握各种发酵实验仪器的使用方法及注意事项；熟悉用浓缩连续等电法、离子交换法等从发酵液中提取谷氨酸的基本流程。
二、主要实验内容与要求：1.培养基的配制与菌种培养学会配制斜面培养基、种子培养基和摇瓶培养基并掌握各种培养基的灭菌方法。
培养基组成：活化斜面培养基：无水葡萄糖1，蛋白胨10，牛肉膏10，酵母膏5，NaCl 2.5，琼脂条20，pH7.0-7.2 0.1MPa 20min种子培养基：葡萄糖25 玉米浆30ml 豆浓20ml K2HPO4 1.5 MgSO4 0.4 尿素2 豆浓20ml 调pH值为7.0-7.2，121℃灭15min发酵培养基：葡萄糖150 Na2HPO4 1.0 KCl 1.2 MgSO4 0.8 MnSO4 2mg FeSO4 2mg VB1 0.2mg 豆浓20ml 调pH为7.0-7.2，115℃灭15min2.种子生长曲线的绘制种子质量的优劣不仅与培养基组成有关，还与种子的生理性状有关菌种接入种子瓶后，要经过延滞期、对数生长期、静止期和衰亡期。
种龄太短的种子转发酵，往往会出现前期生长缓慢、整个发酵周期延长、产物开始形成的时间推迟等现象，甚至造成异常发酵；种龄过长则会引起菌体过早自溶，导致产物生成能力下降。
摇瓶种子培养条件pH控制在7.0左右，温度32℃，220r/min摇床上培养，每2h取样测定菌体光密度OD620nm，做出生长曲线。
根据自己制作的种子生长曲线，能够说出菌种接入种子培养基后何时进入对数生长期，何时结束对数生长转入稳定期，因此选择何时作为接种时间。
谷氨酸发酵实验报告
一、实验目的1. 了解谷氨酸发酵的基本原理和过程。
2. 掌握谷氨酸发酵实验的操作方法。
3. 通过实验验证谷氨酸发酵过程中还原糖的消耗和谷氨酸的生成情况。
4. 分析发酵条件对谷氨酸发酵的影响。
二、实验原理谷氨酸发酵是一种典型的微生物发酵过程，主要利用谷氨酸棒杆菌在适宜的培养基和条件下，将糖类物质转化为谷氨酸。
发酵过程中，还原糖的消耗和谷氨酸的生成是衡量发酵是否正常的重要指标。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 谷氨酸棒杆菌菌种- 葡萄糖- 酵母提取物- 牛肉膏- 磷酸氢二钠- 氯化钠- 琼脂- pH试纸- 还原糖检测试剂盒- 谷氨酸检测试剂盒- 恒温摇床- 恒温水浴锅- 721分光光度计2. 实验仪器：- 烧杯- 玻璃棒- 移液管- 试管- 离心机- 电子天平四、实验步骤1. 培养基制备：- 称取酵母提取物10g、牛肉膏5g、葡萄糖20g、磷酸氢二钠2g、氯化钠1g，加入100mL蒸馏水溶解，定容至1000mL。
- 将培养基分装至锥形瓶中，121℃高压灭菌15分钟。
2. 菌种活化：- 将谷氨酸棒杆菌菌种接种于装有适量培养基的锥形瓶中，37℃恒温培养24小时。
3. 发酵实验：- 将活化后的菌液以1%的接种量接种于装有100mL培养基的锥形瓶中，置于恒温摇床中，37℃、150r/min振荡培养。
- 每隔2小时取样，测定还原糖和谷氨酸的含量。
4. 数据处理：- 根据还原糖和谷氨酸的测定结果，绘制糖耗曲线和谷氨酸生成曲线。
- 分析发酵条件对谷氨酸发酵的影响。
五、实验结果与分析1. 糖耗曲线：实验过程中，还原糖含量随时间逐渐降低，说明谷氨酸棒杆菌在发酵过程中不断消耗葡萄糖。
2. 谷氨酸生成曲线：实验过程中，谷氨酸含量随时间逐渐增加，说明谷氨酸棒杆菌在发酵过程中不断合成谷氨酸。
3. 发酵条件对谷氨酸发酵的影响：- 温度：37℃时，谷氨酸发酵效果较好。
- pH值：pH值在6.5-7.0时，谷氨酸发酵效果较好。
发酵工程实验的实验报告
一、实验目的1. 了解发酵工程的基本原理和操作方法。
2. 掌握发酵过程中菌种培养、培养基配制、发酵条件控制等基本技能。
3. 熟悉发酵过程中产物生成的监测方法。
二、实验原理发酵工程是指利用微生物的代谢活动，将生物质资源转化为人类所需产品的一门综合性工程技术。
本实验以谷氨酸棒杆菌为研究对象，通过摇瓶发酵的方式，探究其在适宜条件下对葡萄糖的转化率及谷氨酸的生成情况。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：摇床、锥形瓶（250ml）、移液管、pH计、生物传感仪、分析天平、发酵培养基、葡萄糖、酵母膏、胰蛋白胨、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、苯甲酸钠、EDTA钠、氯化钠等。
2. 试剂：葡萄糖、酵母膏、胰蛋白胨、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、苯甲酸钠、EDTA钠、氯化钠等。
四、实验步骤1. 培养基配制：按照实验要求，称取葡萄糖、酵母膏、胰蛋白胨、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、苯甲酸钠、EDTA钠、氯化钠等试剂，加入适量的去离子水，充分溶解后，调节pH至7.0，定容至1000ml。
2. 菌种活化：从菌种保藏管中取出谷氨酸棒杆菌，接种于装有适量培养基的锥形瓶中，置于摇床上，37℃恒温培养24小时。
3. 接种：将活化后的菌种以1%的接种量接种于新鲜培养基中，置于摇床上，37℃恒温培养。
4. 发酵过程监测：每隔2小时取样，测定还原糖含量、谷氨酸含量、pH值等指标。
5. 数据处理与分析：将实验数据绘制成曲线，分析发酵过程中还原糖消耗、谷氨酸生成、pH值变化等规律。
五、实验结果与分析1. 还原糖消耗曲线：在发酵过程中，还原糖含量逐渐降低，表明谷氨酸棒杆菌在消耗葡萄糖的同时，产生谷氨酸。
2. 谷氨酸生成曲线：在发酵过程中，谷氨酸含量逐渐升高，表明谷氨酸棒杆菌在适宜条件下能够高效地将葡萄糖转化为谷氨酸。
3. pH值变化曲线：在发酵过程中，pH值逐渐下降，表明谷氨酸棒杆菌在代谢过程中产生酸性物质。
六、实验结论1. 本实验成功实现了谷氨酸棒杆菌的摇瓶发酵，为谷氨酸生产提供了实验依据。
谷氨酸发酵生产
谷氨酸发酵生产谷氨酸发酵一、实验目的谷氨酸(glutamic acid)是最先成功地利用发酵法进行生产的氨基酸。
谷氨酸发酵是典型的代谢调控发酵，其代谢途径相对研究得比较清楚。
因此，了解谷氨酸发酵机制，掌握其发酵工艺，将有助于对代谢调控发酵的理解，有助于对其他有氧发酵的理解和掌握，也有助于对已掌握的生化、微生物知识的融会贯通。
通过本次实验，掌握有氧发酵的一般工艺，熟练掌握通用机械搅拌罐的设备使用。
二、实验原理1、谷氨酸发酵机制谷氨酸发酵是菌体异常代谢的产物，菌体正常代谢失调时，才能积累谷氨酸。
在正常的微生物代谢中，由葡萄糖生成的磷酸烯醇式丙酮酸比天冬氨酸优先合成谷氨酸。
谷氨酸合成过量时，谷氨酸抑制谷氨酸脱氢酶的活力和阻遏柠檬酸合成酶的合成，使代谢转向天冬氨酸的合成。
天冬氨酸合成过量后，反馈抑制磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的活力，停止草酰乙酸的合成。
所以，在正常情况下，谷氨酸并不积累。
谷氨酸生产菌由葡萄糖生物合成谷氨酸的途径见图5-7。
它包括糖酵解途径(EMP途径)、磷酸己糖途径(HMP途径)，三羧酸循环(TCA循环)、乙醛酸循环，伍德-沃克曼反应(CO的固定反应等)。
2由于谷氨酸生产菌生理方面有以下共同特征，体内的代谢控制平衡被打破，使谷氨酸得以积累。
? 谷氨酸生产菌大多为生物素缺陷型。
谷氨酸发酵时，糖酵解经过EMP及HMP两个途径进行。
生物素充足时，HMP途径所占比例是38%，控制生物素亚适量的结果，发酵产酸期，HMP途径所占比例下降到约为26%，EMP途径所占的比例得以提高。
通过控制生物素亚适量，更重要的是由生物素促进的脂肪酸及磷脂合成减少，谷氨酸向膜外漏出，引起代谢失调，使谷氨酸得以积累。
? 谷氨酸生产菌的CO固定反应酶系活力强，可通过羧化作用(更多地2供应固定CO生成苹果酸或草酰乙酸转化成柠檬酸。
2? 谷氨酸生产菌的异柠檬酸裂解酶活力欠缺或微弱，使进入谷氨酸生成期后的乙醛酸循环弱，使异柠檬酸更多地转化成α-酮戊二酸。
调味品工艺学 谷氨酸发酵工艺
（4）PH的影响：加酸到PH为5左右可快些，PH为5以下开始起晶时加 酸要慢，发现晶核要立即停止加酸，育晶2h，使晶核缓慢增大，到 PH3.22左右时，搅拌育晶。
4、 谷氨酸制味精流程图：
谷氨酸
水（或渣水） 碳酸钠
中和 硫化碱 沉淀 谷氨酸回调ph 活性炭脱色
脱色
活性炭
硫化碱
过滤
活性炭二次脱色
硫化碱
6、
二、实验原理：
1、谷氨酸生物发酵机制：
（1）谷氨酸生产菌应具备的生化特点：
1）α—酮戊二酸氧化能力弱
2）谷氨酸脱氢酶活化能力强
3）细胞膜对谷氨酸的通透性强：可采用生物素亚适量或添加表面活性剂或高级饱和脂 肪酸或者是采用油酸缺陷性等。 2、生物素对谷氨酸发酵的作用机理： （1）生物素对糖代谢的调节 1）生物素对糖酵解途径的影响：生物素充足，糖酵解加速，趋向形成乳酸。 2）生物素对CO2固定途径的影响：生物素是羧化酶辅酶。 3）生物素对一乙醛酸途径的影响：生物素亚适量，异柠檬酸裂解酶能力低，琥珀酸 氧化能力低。 （2）生物素对细胞膜合成的影响：控制磷脂的省
脱色
过滤
GH15颗粒活性炭脱色
晶种
流加母液
蒸馏水
浓缩结晶
离心分离
母液
小结晶
结晶味精
干燥
过筛
粒状
干燥
搅拌粉碎
粉状味精
（1）中和的原理：
COOH ︱ CH2 ︱ +Na3CO3→ COO∣ CH2 2 ∣ +CO2↑+H2O
HC—NH3+
︱ COO-
HC — NH3+
∣ COO-Na+
中和液的ph<7
谷氨酸发酵生产工艺及提取方法
微生物工程谷氨酸发酵实验报告
谷氨酸发酵实验报告前言：谷氨酸发酵试验是一个基础性的实验，但涉及的内容比较广泛，对学生意义很大。
该实验是第一次做，我们做是有了钱一组的少许经验，担仍有很多不足。
该实验报告将对其中的错误进行分析，同时分析实验结果，对实验提出意见和建议。
关键字：谷氨酸1、实验内容该实验是系列实验，包括以下七个小实验：实验一谷氨酸菌种的制备及扩大培养实验二发酵罐结构以及空消实验三发酵培养基制备及实消实验四谷氨酸发酵过程控制实验五谷氨酸发酵过程中还原糖的测定实验六发酵过程中谷氨酸含量的测定实验七谷氨酸的等电回收及结晶实验具体内容在课件中很详细，再次不详加说明。
2、试验中的误差及错误2.1设备引起的误差及错误微生物实验需要很好的设备，否则很难将实验做好，仪器将直接决定实验是否成功。
能否有产物生成，是否被污染等。
2.1.1仪器的气密性所用仪器的气密性还可以，保证在空消和实消时能够消毒彻底，保证实验过程中的调控。
2.1.2 PH计所用的仪器PH计不准不能实时测定和调节PH值。
只能在取液时做测定，不能做到及时调节。
对结果及军中的生长有影响。
2.1.3 搅拌机由于在实验中误将玻璃棒掉进了发酵罐中，使得不能用搅拌进行混匀，只能用气体混匀，所以过程中有很多气泡。
2.2 操作引起的误差2.2.1 配比时加水过多，在一定量的情况下由于实消时产生的水过多是体积过大，浓度过低。
对效果产生影响。
2.2.2实时监控对于发酵试验，一定要保证实验过程中的状态，PH、温度、压力、气泡的量等在一定的范围内。
3、实验数据及处理3.1还原糖还原糖的标准曲线制作：glc的含量mg 0 0.08 0.16 0.24 0.32 0.4OD值0 0.059 0.185 0.309 0.436 0.5543.2谷氨酸实验过程中Glu含量的测定值如下（忽高忽低）：4、实验结果分析5.1 对于葡萄糖标注曲线很准确，实时测定虽然有一定的波动，但是总体的趋势是正确的。
5.2对于谷氨酸的标准曲线，我深有体会，做了十几遍，但是仍有不足，还需要继续改正。
谷氨酸发酵
前言氨基酸是构成蛋白质的基本单位，是人体及动物的重要营养物质，氨基酸产品广泛应用于食品、饲料、医药、化学、农业等领域。
谷氨酸是一种重要的氨基酸，我们吃的味精就是以谷氨酸为原料生成的。
1957年以前，人们用酸法水解小麦面筋或大豆蛋白来制取L- 谷氨酸。
1957年，人们分离得到了产生谷氨酸的菌种，接着又进行了大量的研究工作，大规模发酵谷氨酸得以成功[1]。
谷氨酸发酵法的建立，对初级代谢产物微生物法生产的研究起到了极大的推动作用。
在谷氨酸发酵法成功的激励之下，各种研究项目得以展开。
谷氨酸单钠现已完全由发酵法生产，主要用于食品调味剂——味精的生产，其产量已超过400000吨。
味精的现状和前景味精近年来已成为人们普遍使用的一种调味品，其消费量在国内呈上升趋势。
味精产量增长较快。
2001年味精产量91.28万吨，2002年1--6月产量累计53.04万吨，比上年同期增长17.92%。
味精是一种强碱弱酸盐，它在水溶液中可以完全电离变成谷氨酸离子和钠离子。
谷氨酸是氨基酸的一种，氨基酸是构成蛋白质的基本单位，是人体和动物的重要营养物质。
谷氨酸一钠被人体吸收以后，同样也是电离成谷氨酸离子和钠离子而分别参加人体的代谢活动。
所以味精作为调味剂除了能增加食品的美味外，它在人体中具有特殊的生理作用。
（1）谷氨酸在人体内通过转氨酶的作用将其分子中的氨基转移给丙氨酮酸，形成丙氨酸。
（2）谷氨酸与血液中的氨形成无毒的谷氨酰氨，使血液中的氨的浓度下降，减少氨中毒的危险性。
（3）谷氨酸在体内与胱氨酸、甘氨酸结合形成谷胱甘肽。
这个化合物是一种很有效的抗氧化剂，对于延续衰老，促进疾病恢复均有好处。
能够分解体内代谢过程中所产生的过氧化物，避免肌体遭受过氧化物的侵害，有利于维持身体健康。
（4）谷氨酸在体内能够形成V-氨基丁酸，它是一种神经递质，帮助神经的传导；有人说，味精补脑，其道理恐怕就是基于这种物质的形成。
中国调味品行业在空前繁荣和发展的同时，也处在大转变、大整合和大发展时期。
谷氨酸摇瓶发酵
谷氨酸摇瓶发酵生物工程xxx xxx xxxxxxxxx摘要根据谷氨酸的发酵机理，本实验通过摇瓶补料发酵生产谷氨酸，并对发酵过程中产谷氨酸量、发酵液OD值、残糖量进行连续的测定。
试验结果表明：四瓶发酵培养基中，只有添加有玉米浆的发酵培养基产谷氨酸，另外3瓶以酵母膏代替玉米浆成分的发酵液都不产谷氨酸。
关键词：谷氨酸发酵摇瓶培养前言1.1 谷氨酸发酵机制在谷氨酸发酵中，生成谷氨酸的主要酶反应有三种：（1）谷氨酸脱氢酶（GHD）所催化的还原氨基化反应；（2）转氨酶（AT）催化的转氨反应；（3）谷氨酸合成酶（GS）催化的反应。
谷氨酸的合成主要途径是α—酮戊二酸的还原性氨基化，是通过谷氨酸脱氢酶完成的。
α—酮戊二酸是谷氨酸合成的直接前体，它来源于三羧酸循环，是三羧酸循环的一个中间代谢产物。
由葡萄糖生物合成谷氨酸的代谢途径如下图1所示，至少有16步酶促反应。
图1 由葡萄糖生物合成谷氨酸的代谢途径当生物素缺乏时，菌种生长十分缓慢；当生物素过量时，则转为乳酸发酵。
因此，一般将生物素控制在亚适量条件下，才能得到高产量的谷氨酸。
1.2 谷氨酸生产菌种的选择目前工业上应用的谷氨酸产生菌有谷氨酸棒状杆菌、乳糖发酵短杆菌、散枝短杆菌、黄色短杆菌、噬氨短杆菌等。
我国常用的菌种有北京棒状杆菌、纯齿棒状杆菌、天津短杆菌等。
为革兰氏阳性菌，菌体为球形、短杆状和棒状，不同形状芽孢，没有鞭毛，不能运动，需要生物素作为生长因子，在通气条件下才能生产谷氨酸。
本实验选择天津短杆菌来摇瓶发酵生产谷氨酸。
1.3谷氨酸发酵过程控制谷氨酸发酵过程中，产生菌种的特性、生物素、发酵温度、pH值、通风和发酵产生的泡沫都是影响谷氨酸积累的主要因素。
在实际生产中只有针对存在的问题，严格控制工艺条件，才能达到稳产、高产的目的。
发酵初期，菌体生长迟滞，约2～4h后即进入对数生长期，代谢旺盛，糖耗快，这时必须流加尿素以供给氮源并调节培养液的pH 值至7.5～8.0，同时保持温度为30～32℃。
谷氨酸发酵实验报告
谷氨酸发酵实验报告谷氨酸发酵实验报告篇一：实验二离子交换法提取谷氨酸实验二离子交换法提取谷氨酸一、实验目的掌握离子交换装置的结构和使用方法。
掌握离子交换法提取谷氨酸的工艺流程。
掌握等电点沉淀法提取谷氨酸。
了解认识离子交换树脂的处理和再生。
二、实验原理谷氨酸是两性电解质，是一种酸性氨基酸，等电点为，当pH＞时，羧基离解而带负电荷，能被阴离子交换树脂交换吸附；当pH＜时，氨基离解带正电荷，能被阳离子交换树脂交换吸附。
也就是说，谷氨酸可被阴离子交换树脂吸附也可以被阳离子交换树脂吸附。
由于谷氨酸是酸性氨基酸，被阴离子交换树脂的吸附能力强而被阳离子交换树脂的吸附能力弱，因此可选用弱碱性阴离子交换树脂或强酸性阳离子交换树脂来吸附氨基酸。
但是由于弱碱性阴离子交换树脂的机械强度和稳定性都比强酸性阳离子交换树脂差，价格又较贵，因此就都选强酸性阳离子交换树脂而不选用弱碱性阴离子交换树脂。
目前各味精厂均采用732#强酸性阳离子交换树脂，本实验就是采用732#树脂。
谷氨酸溶液中既含有谷氨酸也含有其他如蛋白质、残糖、色素等妨碍谷氨酸结晶的杂质存在，通过控制合适的交换条件，在根据树脂对谷氨酸以及对杂质吸附能力的差异，选择合适的洗脱剂和控制合适的洗脱条件，使谷氨酸和其他杂质分离，以达到浓缩提纯谷氨酸的目的。
三、实验装置1、离子交换装置本实验采用动态法固定床的单床式离子交换装置。
离子交换柱是有机玻璃柱，柱底用玻璃珠及玻璃碎片装填，以防树脂漏出。
2、树脂本实验用苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂，编号为732#，其性能如下表：732#树脂的主要性能常数3、树脂的处理对市售干树脂，先经水充分溶胀后，经浮选得到颗粒大小合适的树脂，然后加3倍量的2mol/L HCL溶液，在水浴中不断搅拌加热到80℃，30min后自水溶液中取出，倾去酸液，用蒸馏水洗至中性，然后用2mol/L NaOH溶液，同上洗树脂30min后，用蒸馏水洗至中性，这样用酸碱反复轮洗，直到溶液无黄色为止。
谷氨酸发酵
我国谷氨酸的菌种: 谷氨酸棒杆菌, 我国谷氨酸的菌种: 谷氨酸棒杆菌,乳糖发酵短 杆菌或黄色短菌杆,北京棒杆菌, 杆菌或黄色短菌杆,北京棒杆菌,钝齿棒杆菌 国内:产酸10-13%,转化率58国内:产酸10-13%,转化率58-62% 国际:产酸18-20%,转化率60国际:产酸18-20%,转化率60-65%
三.由于谷氨酸属于技术比较密 集型行业,投资较大, 集型行业,投资较大,一般厂家 不会投入.目前谷氨酸市场, 不会投入.目前谷氨酸市场,小 厂没有生产能力,只有7 厂没有生产能力,只有7,8家大 年产味精达50 型味精厂家如梅花(年产味精达50 万吨) 年产味精30万吨 万吨) 万吨),莲花(年产味精30万吨) , 阜丰,菱花,雪花, 阜丰,菱花,雪花,等才有配套 生产, 生产,它们基本上掌握了味精的 上游命脉. 上游命脉.
齐鲁味精(山东茌平齐鲁生态工业园) 六,齐鲁味精(山东茌平齐鲁生态工业园) 星湖味精(肇庆市工农北路67号 七,星湖味精(肇庆市工农北路67号) 三九味精( 八,三九味精(山东聊城) 味丹味精(台湾) 九,味丹味精(台湾) 福瑞味精(香港) 十,福瑞味精(香港) 十一,雪梅味精( 十一,雪梅味精(香港) 梅花味精( 附:梅花味精(总部位于河北省廊坊市 )
4. 目前国际上味精的生产巨头 味之素公司, 味之素公司,在东南亚和南美 的生产企业由于环保等各种因 素处于开工率不足状态,导致 国际市场的需求增加;同时由 国际市场的需求增加;同时由 于国际上饮食习惯的改变,味 精使用量也有所增加,进一步 刺激了出口,导致2009年味精 刺激了出口,导致2009年味精 出口量的大幅度增加.
添加表面活性剂
其他
添加表面活性剂(如吐温60)或 添加表面活性剂(如吐温60)或不饱和脂肪 酸(C16-18),也能造成细胞渗漏,积累谷氨酸. (C16-18),也能造成细胞渗漏,积累谷氨酸. 机理:两者在脂肪酸合成时对生物素有 机理:两者在脂肪酸合成时对生物素有拮抗 作用,导致磷脂合成不足, 作用,导致磷脂合成不足,形成不完整的细 胞膜. 胞膜. 关键: 关键:控制好脂肪酸或表面活性剂的时间和 浓度,必须在药剂加入后, 浓度,必须在药剂加入后,在这些药剂存在 下进行分裂,形成产酸型细胞. 下进行分裂,形成产酸型细胞.
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兰州大学生命科学学院发酵工程实验谷氨酸发酵实验摘要：谷氨酸棒杆菌在合适的培养基中经摇瓶培养能快速生长，为发酵实验准备菌种。
还原糖的消耗和谷氨酸的生成是衡量谷氨酸发酵是否正常的重要标志，所以在发酵过程中，要求每两个小时测定一次还原糖的含量，并据此作出发酵的糖耗曲线。
关键字：种子的制备、发酵罐、谷氨酸棒杆菌、PH的调节引言：了解发酵工业菌种制备工艺和质量控制，为发酵实验准备菌种。
了解发酵罐罐体构造和管道系统，掌握对发酵罐及其管道系统的灭菌方法。
了解发酵罐的操作，完成谷氨酸发酵的全过程。
还原糖的消耗和谷氨酸的生成是衡量谷氨酸发酵是否正常的重要标志，在发酵后期当还原糖降至1％以下时，表明谷氨酸发酵已经完成。
所以在发酵过程中，要定时测定还原糖的含量，要求每两个小时测定一次，并据此作出发酵的糖耗曲线。
掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
学习使用茚三酮比色法检测发酵液中谷氨酸浓度的方法。
谷氨酸棒杆菌通常在0-12小时为生长期，12小时后为产酸期，所以应该从12小时以后开始检测谷氨酸的含量，每两个小时取一次样。
原理:谷氨酸棒杆菌在合适的培养基中经摇瓶培养能快速生长，得到大量健壮的种子。
谷氨酸棒杆菌生长速度较快，接种量一般在1-2%。
谷氨酸发酵是有氧发酵，发酵罐由蒸汽管道、空气管道、加料出料管道等组成，在实验之前必须先对发酵罐进行空消。
谷氨酸产生菌是代谢异常化的菌种，对环境因素的变化很敏感，在适宜的培养条件下，谷氨酸产生菌能够将50％以上的糖转化成谷氨酸，而只有极少量的副产物。
如果培养条件不适宜，则几乎不产生谷氨酸，仅得到大量的菌体或者由发酵产生的乳酸、琥珀酸、а－酮戊二酸、丙氨酸、谷氨酰胺、乙酰谷氨酰胺等产物。
生产上的中间分析只测定一些主要数据，只能显示微生物代谢的一般概况而不能反映细微的生化变化。
因此，进一步完善生化分析项目，从生化角度对发酵进行控制，从而确定最适宜的工艺条件是提高发酵水平的重要课题之一。
在NaOH存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
L-氨基酸与茚三酮在加热下可发生特有的氨基酸显色反应，产物显示其特有的蓝紫色。
不同谷氨酸与茚三酮反应得到的显色产物的最大吸收波长不同，即λ不同；加之显色深浅不同,反应出相应氨基酸的不同含量。
以此为依据，可为ma x谷氨酸定性及定量。
在pH 5～6 范围内氨基酸的显色反应最灵敏。
器材与试剂：试管、三角瓶、高压灭菌锅、摇床、培养箱、显微镜、蒸汽发生器、生物发酵系统、空气压缩机、分光光度计，水浴锅，电炉，18mm×180mm试管。
3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：6.3g DNS和262ml 2M NaOH加到500ml 含有182g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g苯酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容至1000ml，贮于棕色瓶中。
葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖40mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为0.4mg/ml。
标准样品的制备：谷氨酸纯品稀释溶液：3mg/ml溶液，调节pH5. 5～6。
茚三酮试剂的制备：称取0. 5 g 茚三酮溶于100 mL丙酮中，避光。
pH 调节试剂的制备：① 2 mol/ L NaOH溶液：称取8 g NaOH 溶于100 mL 蒸馏水中；② 1 mol/ L HCl 溶液：量取36 mL 盐酸溶于64 mL蒸馏水中。
步骤:斜面种子的制备（教师制备）一级种子培养一级种的培养目的在于制备大量高活性的菌体，培养基配方如下：葡萄糖2.5％；尿素0.5％；硫酸镁0.04％；磷酸氢二钾0.1％；玉米浆3%；硫酸亚铁2ppm；硫酸锰2ppm。
1000mL三角瓶中装250mL培养基，每组3瓶，0.1MPa灭菌30分钟，冷却后接种，接种量为一支斜面接一瓶。
30～32℃摇床培养12小时，如用旋转式摇床，转速为170～190转/分；往复摇床，冲程7.6cm，频率为97次/分。
一级种子质量标准：种龄：12小时；pH：6.4+0.1；ΔOD（560nm光密度净增值）>0.5RG（残糖）0.5％以下。
二级种子培养二级种子的培养目的是制备和发酵罐体积及培养条件相称的高活性菌体。
1000ml 三角瓶装300ml培养基，每组3瓶，0.1Mpa灭菌10分钟，冷却后接种，摇床培养7～8小时。
培养基配方：葡萄糖 2.5％；尿素0.34％；磷酸氢二钾0.16％；糖蜜1.16％；硫酸镁0.043％；消泡剂0.01%；pH 7.0二级菌种质量标准：种龄7～8小时；pH7.2 ；ΔOD560>0.5；无菌检查阴性；噬菌体检查阴性。
学习发酵罐的构造并进行消毒1．准备阶段配料：按工艺要求配制发酵培养基，10升发酵罐定容6升，实际配料时，定容到4升，另40％体积为蒸汽冷凝水和种子液预留。
尿素配成40％浓度，装在1000mL瓶中，每一瓶装800mL。
分消备用。
消泡剂配成1%浓度，分消备用。
培养基：葡萄糖13％；硫酸镁0.06％；磷酸氢二钾0.1%；糖蜜0.3％；硫酸锰、FeSO4各2ppm；氢氧化钾0.04％；玉米粉0.125％；消泡剂0.5%。
调整pH为7.0。
2.空气过滤器及空气管路的消毒（1）关闭空气阀F11（蓝）；打开F12，F2（冷凝水），慢慢打开蒸汽阀阀门F3（红）排尽冷凝水后，F12调为微开。
蒸汽出口压力应在0.12—0.14MPa之间（空气过滤器压力表显示值）。
压力过低，灭菌不彻底；压力过高，仪器会损坏。
（2）微开F13（空气/蒸汽入罐的阀门，蓝），打开F14（发酵罐出气口阀门），使蒸汽经过空气过滤器及以后的空气管道进入发酵罐内，由出气口排出。
（3）消毒时间一般为30分钟。
到时间依次关闭蒸汽发生器，F13,F12,F2.,F3。
（4）开启空气压缩机，调节空气减压阀，使出口压力保持在0.20—0.25MPa之间（控制器上压力表上显示值）。
注意不要使空气压缩机超压工作。
（5）打开F11（空气入口阀），F12, F13,排去冷凝水后，再将F12, F13转为微开，吹空气过滤器。
（6）吹干过滤器一般需要20分钟左右（注意保持空气进口压力）。
然后关闭F12,F13.。
保持空气管道及空气过滤中是正压。
**注意：蒸汽灭菌完毕，关闭蒸汽入口阀。
应该在排去管道内的蒸汽后，再关闭F14。
3．空消（1）打开排水阀F33，排尽夹套中的水。
（2）打开F4（蒸汽阀，红），F22（出料口阀门），排尽蒸汽管中冷凝水后，将F22转为微开，稍开F21，微开F14。
使蒸汽徐徐进入发酵罐；对发酵罐进行空消。
（3）注意在升温过程中，关闭控制器，否则当温度设定值设定在培养温度时，会自动通冷却水，影响升温速度，同时也浪费蒸汽。
（4）在灭菌过程中，应当时刻注意罐压，并控制在0.11—0.12MPa 之内，请勿超压，可通过调节阀门F4和F14来控制罐压。
（5）空消时间一般为30分钟。
空消时间结束后，关闭F4 、F14 , 当罐温降至80℃以下方可完全打开F22，排尽发酵罐内的冷凝水后即可关闭F22，F21。
（6）当蒸汽阀F4关闭后，发酵罐内的压力会迅速下降，为防止发酵罐内产生负压，必须微开F13，并调节F14，使罐压保持在0.03—0.05MPa之间。
4．电极校正（1）DO电极的校准：配制Na2SO3饱和溶液，可以用碘量法测定溶液饱和度，此时校准溶氧电极为0%。
（2）PH电极的校准分别用PH4.0和PH7.0的标准也来校准PH电极。
（3）打开排气阀F13，卸去罐内压力；将校检好的PH ，DO电极装入发酵罐内。
（4）加胶圈。
（5）打开罐盖上的加料口，按培养基比例加入发酵罐内（参照淀粉的液化方案）。
（6）拧紧加料口螺母（注意不要拧太紧，否则会损坏密封圈）。
5．实消（1）检查夹套排水阀F33是否打开，夹套水是否排尽，加上防护罩。
（2）夹套预热：关闭F31, F34, F32, 打开蒸汽阀F3 、稍开排水阀F33。
（3）此时可开启搅拌，慢速搅动培养基；当发酵罐内的温度达到80℃左右时，打开F4，F22，排尽蒸汽管中的冷凝水后立即关闭F22；稍开F21，使蒸汽徐徐进入发酵罐；继续升温。
（4）此时应关闭进气阀F13，并将排气阀F15调为微开。
（5）当发酵罐内温度达到灭菌要求温度（118℃—121℃）时，关闭阀门F3；在灭菌过程中，应时刻注意罐压，并控制在0.1—0.11MPa之内，严禁超压。
罐压的控制通过调节阀门F4和F15来实现。
（6）注意在升温过程中不要开冷却水，否则当温度设定值设定在培养温度时，冷却水管会自动通冷却水，不仅会影响升温速度、浪费蒸汽，更重要的是会引起冷凝水过多，引起培养液浓度变化或不能达到灭菌温度。
实消时间10分钟。
到时间后，关闭F4、F15。
（7）灭菌结束后，先通空气维持罐压再冷却。
通冷却水进行冷却，操作如下：打开冷却水阀F31，进行手动冷却状态；或调整温度设定值，按冷却键至自动状态；此时起即进入控温状态。
（8）当蒸汽阀门关闭以及通冷却水后，发酵罐的罐压将迅速下降，当罐内压力降至0.03MPa 时，必须间隙开启进气阀F13，让空气进入发酵罐内，并保持内压力在0.03 —0.05MPa 之间。
（9）当罐内温度降至70℃，可稍开进气阀F13和调节排气阀F15，调节通气量，慢速搅动培养基，加快冷却时间；同时使罐压保持在0.03—0.05MPa之间。
（10）加初尿：发酵液冷却至40℃左右时，通过蠕动泵加第一次尿素，添加量为0.8～1.0％。
（11）取部分未培养的培养液备用。
6．接种将前次实验制备的二级种接入发酵罐。
接种时，先缓慢降低罐压，关闭进排气阀，在接种口上绕上酒精棉点燃，用钳子逐步打开接种阀，将菌种液倒入发酵罐内，盖上接种阀，旋紧。
DO电极的校准：在温度，PH，转速均已稳定在发酵所需值时校准，100%。
7．发酵过程的控制（1）发酵过程的温度控制：谷氨酸发酵0～12小时为长菌期，最适温度在30～32℃，发酵12小时后，进入产酸期，控制34～36℃。
由于发酵期代谢活跃，发酵罐要注意冷却，防止温度过高引起发酵迟缓。
（2）发酵过程pH控制：发酵过程中产物的积累导致pH的下降，而氮源的流加（氨水、尿素）导致pH的升高，发酵中，当pH降到7.0左右时，应及时流加氮源。
长菌期（0～12小时）控制pH在6.8～7.0；产酸期（12小时以后）控制pH在7.2左右；控制pH的手段主要有：①控制风量。
②控制流加氮源。
放罐：残糖在1％以下且糖耗缓慢（<0.15％/h）或残糖<0.5％后，及时放罐。