槐米中芦丁的提取分离与鉴定
槐米中芦丁的提取、分离和鉴定

槐⽶中芦丁的提取、分离和鉴定槐⽶中芦丁的提取、分离和鉴定张景清(⼴西科技⼤学⽣物与化学⼯程学院⼴西柳州545006)1.摘要:本实验以槐⽶为原料,采⽤碱提酸沉法从槐⽶中提取芦丁,使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体作⽅法,并了解如何对黄酮类化合物鉴定。
该⽅法提取率⾼达26.3%,对提取的芦丁做了薄板识别及紫外分析,并与标准品做对⽐,结果表明提取的芦丁与标准品的纯度⼤致相等。
2.引⾔芦丁,亦称芸⾹苷,⼴泛存在于植物界中,现已发现的含芦丁的植物有50种以上,其中以槐⽶和荞麦叶中含量最⾼,可作为⼤量提取芦丁的原料。
芦丁属于黄酮类化合物,在⼼脑⾎管疾病的治疗上起到了举⾜轻重的作⽤,具有VP样作⽤。
有助于保持⽑细⾎管正常弹性,同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作⽤。
其临床效果肯定,副作⽤少,同时也是⼀种植物原料药[1]。
黄酮类化合物的提取⽅法较多主要是依据其溶解性及酸性。
黄酮类化合物的提取⽅法⼀般有:①热⽔提取法②醇提法③碱提酸沉法④系统溶剂提取法本实验碱提酸沉法通过从槐⽶中提取芦丁,使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体操作⽅法,并了解如何对黄酮类化合物鉴定。
3.实验原理槐⽶中含芦丁、槲⽪素、皂苷、⽩桦、酯醇等多种成分。
芦丁是其主要成分,含量为16%-25%。
芦丁属于黄酮类化合物,结构中含有多个酚羟基,呈酸性,苷元为槲⽪素,糖基为芸⾹糖。
芦丁为浅黄⾊细⼩针状结晶,95-97℃脱⽔,熔点314℃,可溶于沸⼄醇、⽆⽔⼄醇、⼄酸⼄酯、丙酮,不溶于⽯油醚和⽔。
芦丁可溶于碱液中,呈黄⾊酸化后⼜析出,故可采⽤碱提酸沉法得到芦丁产品。
然后利⽤在冷⽔中不溶,在热⽔中微溶的溶解度差精制,可获得纯度⾼的微细针状结晶,最后利⽤芦丁、槲⽪素、及糖的性质予以鉴定。
4.实验部分4.1实验药品槐⽶(市售),氧化钙AR(西陇化⼯股份有限公司),盐酸AR(西陇科学有限公司),四硼酸钠AR(⼴东省台⼭市化⼯⼚),甲醇AR(天津市⼤茂化学试剂⼚),三氯甲烷AR(成都市科隆化学品有限公司),氯仿(分析纯,成都市科龙化⼯试剂⼚),⼄醇(分析纯)4.2实验仪器JJ200电⼦天平(常熟市双杰测试仪器⼚),SHZ-D(III)循环⽔式多⽤真空泵(河南爱博特科技发展有限公司),ZNLC-GS 130*60智能磁⼒搅拌器(河南爱博特科技发展有限公司),薄层⾊谱展开缸,紫外分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)4.3实验步骤4.3.1芦丁的提取⽅法⼀:称取槐⽶10.0g,在研钵中稍加研碎后,置于500ml烧杯中,加⼊250ml⽔,加热搅拌下添加⽯灰乳,保持PH=8-8.5。
槐米中芦丁及槲皮素提取分离及鉴定

实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定槐米为豆科植物槐(Sophora japonica L.)的未开放花蕾。
味苦性凉、具清热凉血、止血之功。
常用于治疗多种出血症:肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。
槐米常炒炭应用。
槐米的主要化学成分为芦丁,其含量可达12~16%,其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。
芦丁具有Vitp样作用,可降低毛细血管脆性和调节通透性。
临床上用作毛细血管脆性引起的出血症,常作为高血压症的辅助治疗药。
[目的要求]1.通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2.掌握槲皮素的制备原理及操作。
3.熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用4.通过芦丁的结构检识,了解苷类结构研究的一般程序和方法。
[实验原理]芦丁(rutin):C27H30O16·3H2O,浅黄色针状结晶,mp174~178℃(含三分子水);188℃(无水物)。
难溶于冷水(1:8000~10000),可溶于热水(1:180~200),热甲醇(1:10),冷甲醇(1:100),热乙醇(1:60),冷乙醇(1:650);难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等,易溶于碱液。
槲皮素(quercetin):C15H10O7·2H2O,黄色结晶,mp313~314℃(2分子结晶水),316℃(无水物)。
能溶于冷乙醇(1:290),易溶于沸乙醇(1:23),可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等;难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出,可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶热水、热乙醇,较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖,依此进行制备槲皮素。
通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。
[实验内容]一、芦丁的提取分离及精制方法⑴500ml 饱和石灰水,加热,并维持pH8~9滤液 药渣10分钟,维持pH8~9pH 至4 ~51:200的比例加水,方法⑵ 利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离。
槐米中芦丁的提取、水解和鉴定

槐米中芦丁的提取、水解和鉴定实验简介槐米系豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾。
能凉血止血,清肝泻火。
药理实验证明芦丁有调节毛细血管渗透作用,临床上可作为毛细血管脆弱引起的出血症,常作为高血压症的辅助治疗药。
其有效成分为芸香苷,又称芦丁(rutin),含量可高达12~20%。
芦丁为槲皮素-3-O-芸香糖苷,淡黄色粉末或细针状结晶,含3分子结晶水(C 27H 30O 16•3H2O ),mp.177~178℃,无水物mp.188~190℃。
溶解度:冷水中的溶解度为1﹕10000,沸水中1﹕200,冷乙醇1﹕650,沸乙醇1﹕60,沸甲醇中1﹕7,可溶于丙酮、乙酸乙酯、吡啶及碱液中,不溶于三氯甲烷、乙醚、苯及石油醚。
芦丁水解后得槲皮素,槲皮素为黄色针状结晶(稀乙醇),含2分子结晶水(C 15H 10O 7•3H2O ),mp.313~314℃(分解),无水物mp.316℃。
溶解度:热乙醇中1﹕23,冷乙醇中1﹕300,可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶与冰醋酸等,不溶于水、三氯甲烷、乙醚、苯与石油醚等。
本实验应用碱溶解酸沉淀法,重结晶法,酸水解法,纸色谱法,紫外光谱分析法对槐米中芦丁进行提取、水解和鉴定。
O O HO OH O OHOHO O OH OHOHH 2CO OH OH CH 3OH 3H 2O 芦丁 O HO OH OH OH 槲皮素实验原理1、提取精制的原理:芦丁分子中含有酚羟基,显弱酸性,能与碱成盐而溶于碱液中,加酸酸化后又可沉淀析出,因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。
芦丁的精制可根据其在冷、热水(或冷、热乙醇)中溶解度相差悬殊的性质进行。
2、鉴定的原理:利用纸色谱的吸附分配原理,将样品和对照品在同一条件下展开显色,判断芦丁和槲皮素的Rf值,达到鉴定的目的。
利用紫外吸收光谱,测定黄酮化合物在加入各种电解质或络合剂后吸收峰的位移,根据位移的情况,以判断化合物羟基的位置。
槐米中芦丁的提取分离与鉴定

2.实验方法
芦丁粗品
0.5g芦丁粗品
1g芦丁粗品
按1:200加水,煮沸溶 解,趁热抽滤 滤液
放置析晶
2%H2SO4 80ml,直火回 流,加热30min,抽滤
芦丁精品
沉淀
滤液(PC)
水洗至中性,95%EtOH重 结晶 滤液
槲皮素精品
芦丁的精制:取0.5g芦丁粗品,置500mL烧杯中,
按1:200加水,加热至沸,使之充分溶解。
趁热过滤,滤渣再加入300mL水,直火加热0.5h。
趁热过滤,合并两次滤液。
放置,析出沉淀,抽滤,干燥得淡黄色芦丁粗品。
二 芦丁的精制和水解
一 实验原理 1.芦丁的精制是根据芦丁在热水中溶解度大,冷水中溶解度小的性 质进行重结晶而获得芦丁粗品。
2.芦丁是黄酮苷类,可进行酸水解,苷键断裂生成苷元槲皮素,葡 萄糖和鼠李糖。
4.熔点测定:芦丁
熔点测定:槲皮素
THANKS
一,芦丁的提取
1.实验原理:芦丁在冷水中的溶解度为1:10000,在热水中的 溶解度为1:200,在冷乙醇中的溶解度为1:650.因此,采用 水煎法提取芦丁经济,效率高。
2.实验方法
槐米20g,研碎
药渣
滤液
300ml,煎煮0.5h,过滤 滤液
芦丁粗品
取20g槐米,研碎。
置于400mL沸水中,直火煎煮1h(需补充蒸发掉的水分)。
(2)因糖的极性差异造成Rf值,与对照品比较鉴定
(3)黄酮类的显色反应特异性较强,故可与聚酰胺产 生氢键缔合,常用于分离和鉴别。
1.糖的纸色谱(圆形滤纸)鉴定 取澄清的水解液20mL,加碳酸钡中和至中性,滤去生成的硫 酸钡沉淀,滤液浓缩至小体积1mL,供纸色谱点样用。
中药化学 实验 槐米中芦丁的提取、分离、鉴定及槲皮素的制备

槲皮素的制备
精品芦丁(0.2g)
放入150ml圆底烧瓶中,加入2%稀硫酸50ml, 空气冷 凝直火加热(电炉上放石棉网)40分钟,放冷抽滤。
沉淀
滤液
水洗至中性抽滤、干燥。 取10ml,加氢氧化钡约1g,调PH7.5,过滤。
沉淀
滤液 水浴浓缩至1~2ml
浓缩液(备检查糖用)
4、芦丁、槲皮素的鉴定
(1)试管定性反应: ①HCI-Mg粉反应
行酸水解得到槲皮素
[实验流程]
1、提取
槐米(20g)
加水煎煮两次,趁热过滤合并煎煮液
药渣
煎煮液
放置4~5h,抽滤
沉淀
自然干燥
粗品芦丁
2、精制
粗品芦丁
加甲醇15~20ml,水浴加热(空气冷凝) 溶解, 至无黄色物,趁热过滤。
沉淀
滤液
放置,待结晶析出,抽滤至干。
沉淀
干燥
精品芦丁
注意:
1、甲醇量可以适当增加。 2、注意控制回流温度。 3、回流时间以芦丁完全溶解为准。
取样品的乙醇溶液1ml加少许镁粉,再加浓 HCI 1~2滴,观察颜色。 ②FeCl3反应
取样品的乙醇溶液1ml加1%的FeCl3乙醇溶 液2~3滴,观察颜色。 ③中性醋酸铅反应
取样品的乙醇溶液1ml加5%的中性醋酸铅溶 液1~2滴,观察现象。
④α-萘酚、浓H2SO4反应 取样品的乙醇溶液1ml加α-萘酚试液1~ 2滴
实验
槐米中芦丁的提取、分离、鉴定及槲皮素的制备
[实验目的]
1.掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、 苷元的结构研究的一般方法;
2.熟悉根光谱的测定方法。
实验原理
➢提取原理:芦丁在冷热水中的溶解度差异; ➢纯化原理:芦丁在冷热甲醇中的溶解度差异 ➢制备原理:槲皮素为芦丁的苷元,因此可进
槐米中芦丁(芸香苷)的提取分离及检识

结晶
静置液减压抽滤在 60-70温度下烘干 得粗品芸香苷 置于300ml蒸馏水 煮沸至芸香苷全部溶解 趁热抽滤 滤液放冷析晶
天然产物化学
水解 取精制芸香苷1g 置250ml圆底烧瓶中 加2%H2SO4溶液80ml 加热回流30分钟至1小时, 开始加热10分钟为澄清液,逐渐析出黄色小针状结晶, 即为槲皮素。放冷抽滤 沉淀物用蒸馏水洗至中性, 抽干水份,晾干称重,得粗制槲皮素
天然产物化学
提取
碱溶酸沉法
芸香苷分子中含有酚羟基,显弱酸性,能与 碱成盐而溶于碱液中加酸酸化后又可以沉淀 析出,因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。
天然产物化学
实验步骤
重复以上操作, 硼砂水150ml,时 间20min
加0.4%硼砂水200ml 加热微沸30min,用石 灰乳保持pH8-9
结晶
天然产物化学
天然产物化学
聚酰胺薄层色谱检识
点 样:(1)自制1%芸香苷乙醇溶液 (2)自制1%槲皮素乙醇溶液 对照品:1%芸香苷对照品乙醇溶液乙酯(3∶1∶0.5)
显色:(1)先在可见光下观察斑点颜色,然后在紫 外灯下观察斑点颜色 (2)用氨水熏,记录斑点颜色和位置 结果:记录图谱,斑点颜色,计算芸香苷和槲皮素 Rf
天然产物化学
槐米中芦丁(芸香苷)的提取、分离和检识
天然产物化学
芦 丁
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含 有三分子的结晶水,熔点为174~178℃, 无水物188~190℃。 溶解度:冷水中为1:10000;热水中1:200; 冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。 微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙醚、 氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。
天然产物化学
化学检识
• 取芸香苷和槲皮素约10mg,各用5ml乙醇溶解,制成样 品溶液,按下列方法进行试验,比较苷元和苷的反应情况。 • (1)Molish反应 取样品溶液1ml,加10%α-萘酚溶液 1ml,振摇后斜置试管,沿管壁滴加0.5ml浓硫酸,静置, 观察并记录液面交界处颜色变化。 • (2)盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管 中,加入金属镁粉少许,浓盐酸2~3滴,观察并记录颜色 变化。
槐米中芦丁的提取、分离和鉴定

滤液
沉淀
(保留作糖的纸色谱鉴定)
水洗至中性,
用乙醇-水(1:1)30ml混合溶剂
重结晶; 加热溶解,趁热抽滤,
放置 析晶,抽干,干燥 ,
苷元(槲皮素)(测定熔点、1HNMR) 13
实验注意事项
芦丁粉碎不可过细,以免过滤时速度过慢; 加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的,还
可以除去槐花米中含有的大量多糖类粘液质,但 pH值不能过高,否则钙能与芦丁形成螯合物而沉 淀析出; pH值过低会使芦丁形成烊盐重新溶解,降低收率 (最佳pH值为4-5)
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思考题
苷类结构的检识大体程序如何? 苷类水解的方法? 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮
素3-OH上? 苷元的结构怎样确定? 怎样确定苷键的构型?
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实验课后总结与讨论
芦丁提取 芦丁的分离纯化 芦丁的理化鉴别 芦丁的苷元-槲皮素的制备 芦丁与槲皮素的波谱鉴定
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芦丁分子中具有较多酚羟基,显弱酸性, 易溶于碱液中,酸化后又可析出,因此可 以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
6
三、实验过程
1、提取分离 槐米粉末
加约6倍量水①,煮沸, 在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH8~9②。 在保持该pH条件下③,微沸20~30分钟, 随时补充失去的水份④, 趁热抽滤⑤, 药渣加 4倍量水⑥,同法再提2次
样品:①自制芦丁乙醇液; ②自制槲皮素乙醇液。
对照品:①芦丁对照品乙醇液; ②槲皮素对照品乙醇液。
吸附剂:聚酰胺薄膜。 展开剂:①氯仿—甲醇—甲酸(15:5:1);
②醋酸乙酯—甲酸—水(8:1:1)。 显色剂:①喷三氯化铝试液,待乙醇挥干
后,置紫外灯(365nm)下观察。
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5、芦丁的IR、1HNMR鉴定
实验 槐米中芦丁的提取、分离与鉴别

实验一槐米中芦丁的提取、分离与鉴别一、实验目的(1)掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。
(2)掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。
二、实验原理芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude),广泛存在于植物界中。
现已发现含芦丁的植物约有70余种,如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。
尤以槐花米和荞麦叶中含量最高,可作为提取芦丁的原料,使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾,所含主要成分为芦丁,含量可达23.5%,槐花开放后降至13.0%,其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。
芦丁具有维生素P样作用,可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性,临床上用于毛细血管脆性引起的出血症,并常作高血压症的辅助治疗药。
芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶,mp.174℃~178℃(含三分子结晶),188℃(无水物)。
溶解度情况如下:水:1:10000(冷),1:200(热)甲醇:1:100(冷),1:9(热)乙醇:1:300(冷),1:30(热)吡啶:1:11.7(冷),易溶(热)不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂,易溶于碱液中呈黄色,酸化后复析出。
可溶于浓硫酸、浓盐酸,加水稀释复析出。
芦丁可溶于热水,难溶于冷水,其分子结构中具有较多的酚羟基,显弱酸性,在碱液中易溶解,而在酸性条件下,易析出沉淀,故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。
再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。
利用芦丁可被稀酸水解,生成苷元和糖,通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。
三、实验内容(一)芦丁(芸香苷)的提取1. 取1.5g石灰粉(CaO),置于干净的小研钵中,加入10mL水研成乳液备用。
称取槐米20g,于1000m1烧杯中,加0.4%硼砂水溶液200mL,在搅拌下小心加入石灰乳调至pH 8~9,加热至微沸,维持pH值20-30分钟,趁热抽滤,弃去滤渣,冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5,放置过夜,减压过滤,得粗芦丁(滤饼用水洗3-4次),干燥后得粗品。
槐米中芦丁的提取、分离和检识

黄酮母核
定 性 反 应
将样品溶于1ml乙醇, 将样品溶于1ml乙醇,加入少许镁粉振 1ml乙醇 滴加几滴浓盐酸, 2min内 摇,滴加几滴浓盐酸,1-2min内,观察颜 色变化。 色变化。
Molish反应 Molish反应
苷类
将样品溶于1ml乙醇,加入等体积10%α 将样品溶于1ml乙醇,加入等体积10%α1ml乙醇 10% 萘酚溶液,倾斜试管,摇匀, 萘酚溶液,倾斜试管,摇匀,沿管壁滴加浓 硫酸,注意观察两界面产生的变化。 硫酸,注意观察两界面产生的变化。
样品:少量芦丁、 样品:少量芦丁、槲皮素
盐酸盐酸-镁粉反应 黄酮母核
定 性 反 应
将样品溶于1ml乙醇,加入少许镁粉振 将样品溶于1ml乙醇, 1ml乙醇 滴加几滴浓盐酸, 2min内 摇,滴加几滴浓盐酸,1-2min内,观察颜 色变化。 色变化。
Molish反应 Molish反应
苷类
将样品溶于1ml乙醇,加入等体积10%α 将样品溶于1ml乙醇,加入等体积10%α1ml乙醇 10% 萘酚溶液,倾斜试管,摇匀, 萘酚溶液,倾斜试管,摇匀,沿管壁滴加浓 硫酸,注意观察两界面产生的变化。 硫酸,注意观察两界面产生的变化。
搅拌下加 入饱和石 灰水 调节 pH8pH8-9 保持微 沸30min
直火/ 直火/电炉加热
双层滤纸或棉 花趁热抽滤
滤液 残渣
60-70度下 度下, 在60-70度下,用 浓盐酸调pH4 pH4浓盐酸调pH4-5
静置1h 静置1h
60-70℃下干燥 60-70℃下干燥 芦丁粗品
抽滤
天然产物化学
盐酸盐酸-镁粉反应
天然产物化学
3、实验试剂和仪器 、
试剂
槐米、 石灰乳、 槐米、 石灰乳、HCl、硫酸、镁粉、乙 、硫酸、镁粉、 醇、 α-萘酚 萘酚 仪器
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定

槐花米中芦丁的提取分离与鉴定实验一预试;苷的碱提取,酸沉淀;薄层层析铺板。
实验二产品的精制:重结晶;苷的水解。
实验三苷、苷元的定性鉴定;甙、甙元的TLC 鉴定;糖的纸层析鉴定。
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定(一)预试;苷的碱提取,酸沉淀;薄层层析铺板。
(二)产品的精制:重结晶;苷的水解。
(三)苷、苷元的定性鉴定;甙、甙元的TLC鉴定;糖的纸层析鉴定。
教学目的:1 •掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法。
2 •掌握化学鉴别试验、苷水解、薄层层检查等手段在苷类结构鉴定上的作用。
已知重要成分及其性质1. 芦丁(芸香苷,rutin )淡黄色针晶,水中结晶者含3分结晶水,C27H30O16 3H2O lOOmmHg和11O C 加热12小时后,变为无水物,无水物于25C变棕,115〜7C软化,214〜5C发泡分解,1g芦丁溶于约300ml冷水,200ml沸水,7ml沸甲醇,溶吡啶,甲酰胺和碱液,微溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯,不溶于氯仿,二硫化碳、乙醚、苯和石油醚。
2. 槲皮素(Guereetin )为芦丁的苷元,C15H10O7,MW302.23 ;含二分子结晶水为黄色针晶,(稀乙醇),5〜7C失水,314C解,1g溶于290ml无水乙醇、23ml沸乙醇,溶于冰醋般在碱水中溶解显黄色,几不溶于水R=一glu—rha 芦丁R= — 0H 槲皮素3. 皂苷(Saponin)粗品为白色粉末,mp 210C〜20C(dec)。
易溶于吡啶。
能溶于200倍的甲醇,酸水解得下列两种苷元及糖。
糖为葡萄糖,葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。
(1)白桦酯醇(Betulin)无色针晶,mp215〜2C,能溶于醋酸,丙酮、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯等;难溶于石油醚和水(2)槐花二醇(Sophoradiol)无色针晶, 醚、苯、丙酮、甲醇、难溶于水。
整套实验的过程:预试一一提取分离一一鉴定实验一预试;甙的碱提取,酸沉淀实验目的通过系统预试,了解检品中含有哪些类型的成分,可能含有哪些化学类型的成分,为进一步提取分离有效成分提供线索。
槐米中芦丁的提取与分离(建大)

槐米中芦丁的提取与鉴定一、摘要:芦丁是一种分布广泛的黄酮类化合物。
目前主要用于治疗毛细血管脆性减弱和渗透性增强所致的出血,芦丁还可降低人体血脂和胆固醇并具有抗菌和抗放射作用。
国外主要用作食品、化妆品的添加剂和着色剂。
文献报道的槐米中提取芦丁的方法较多。
本实验通过煮沸槐米与水的混合物得到粗芦丁的水溶液,然后利用硅胶色谱柱法得到产物芦丁。
关键词:槐米芦丁硅胶色谱柱层板二、引言芦丁(Rutin)又称芸香苷,广泛存在于植物界中,现已发现含芦丁的植物至少在70种以上,如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。
尤以槐花米(为植物Sophora japonicaL的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高(含量可达12-16%),可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由斛皮素(Quercetin)3位上的羟基与芸香糖(Rutinose)〔葡萄糖(Glucose)与鼠李糖(Rhamnose)组成的双糖〕脱水形成的苷。
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含有3分子的结晶水,熔点为174~178℃,无水物188~190℃。
溶解度:冷水中为1:10 000;沸水中1:200;冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。
芦丁分子中具有较多酚羟基,显弱酸性,易溶于碱液,酸化后又可析出,因此,本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。
芦丁具有维生素P样作用。
能维持血管的正常通透性,减低血管的脆性,缩短流血时间,可作为高血压病的辅助治疗剂。
亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。
三、实验仪器与试剂【仪器】紫外灯蒸馏装置一套 250ml烧杯(一只) 500ml烧杯(两只)100ml三角瓶(一只)纱布色谱柱(Ф1.5×30cm)玻璃板(5×20cm 3片 2.5×7.5 8片)【试剂】硅胶层析用聚酰胺(60~100目)甲醇 70%工业乙醇槐米芦丁标准样四、实验内容与步骤1.芦丁的提取将粉碎好的槐米12g倒入500ml烧杯中,加沸水150ml,煮沸1h(在煮沸的过程中,可补加水),趁热用纱布过滤,残渣中加入100ml水,再煮沸30min,共进行两次,将两次滤液合并,放置,冷却。
槐米中芦丁的提取与鉴定实验报告

槐米中芦丁的提取与鉴定实验报告
讨论与建议
尽管本次实验取得了较为满意的成果,但仍存在一些不足之处。例如,在提取过程中,我 们采用的是乙醇作为溶剂,但乙醇的溶解度有限,可能会影响提取效率。未来可以考虑采 用其他溶剂或混合溶剂进行提取,以提高提取效率
槐米中芦丁的提取与鉴定实 验报告
汇报人:xxx
目录
CONTENTS
-
PART 01 PART 02 PART 03 PART 04 PART 05 PART 06 PART 07
实验目的 实验原理 实验步骤 实验结果与数据分析 图表展示 实验结论 讨论与建议
槐米中芦丁的提取与鉴定实验报告
实验目的
-
20XX 感谢聆听 批评指导 THANK YOU TO LISTEN TO CRITICISM GUIDANCE
此外,在鉴定实验中,我们采用了高效液相色谱仪进行分子量测定和可见紫外分光光 度计进行光谱分析,但这些方法并不能完全确定芦丁的结构。未来可以考虑采用更多 先进的仪器和方法,如核磁共振仪、质谱仪等,对芦丁的结构进行更深入的研究
最后,槐米作为一种常见的中药材,其药用价值受到了广泛关注。然而,仍有许多其他的 中药材和植物资源有待开发研究。未来可以进一步拓展中药材的化学成分研究和药理作用 研究,为中药材的现代化和国际化提供更多科学依据
槐米中芦丁的提取与鉴定实验报告
采用高效液相色谱仪进行芦丁的分子量测定;通过可 见紫外分光光度计进行光谱分析;利用核磁共振仪进 行结构鉴定
槐米中芦丁的提取与鉴定实验报告
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定

※实验三槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定芦丁(Rutin)广泛存在于植物界中,现已发现含芦丁的植物至少在70种以上,如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。
尤以槐花米(为植物Sophora japonica的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。
槐花米为豆科植物槐花的未开放花蕾。
味苦性凉,具清热、凉血、止血之功。
槐花的主要化学成分为芦丁,又名芸香甙,含量可达12-16%。
芦丁是由槲皮素(Quercetin)3位上的羟基与芸香糖(Rutinose)〔为葡萄糖(Glucose)与鼠李糖(Rhamnose)组成的双糖〕脱水合成的苷。
为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含有三分子的结晶水,熔点为174~178℃,无水物188~190℃。
溶解度:冷水中为1:10000;热水中1:200;冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。
芦丁具有维生素P样作用。
可降低毛细管前壁的脆性和调节渗透性,有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性,临床上用作毛细管脆性引起的出血症,并常用作防治高血压病的辅助治疗剂。
现在国处也常用芦丁作食品及饮料的染色剂。
一、实验目的1.通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2.掌握芦丁的一种提取、精制方法及提制过程中防止甙水解的方法。
3. 掌握黄酮甙水解生成甙元的方法及二者之间的分离。
4.熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方法。
二、实验原理本实验主要是利用芸香苷中含有较多的酚羟基,可溶于碱中,加酸酸化后又可析出芸香苷结晶的性质,采用碱溶酸沉法提取,并用芸香苷对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
芦丁可被稀酸水解,生成槲皮素及葡萄糖、李糖,并能通过纸层析鉴定。
芦丁及槲皮素还可通过化学反应及紫外光谱鉴定。
三、实验材料槐米、石灰乳、0.4%硼砂水溶液、2%的硫酸溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、1%的氢氧化钠溶液、1%的三氯化铝乙醇溶液、1%的葡萄糖溶液、1%的鼠李糖溶液、1%芸香苷乙醇溶液、1%槲皮素乙醇溶液、95%乙醇、碳酸钡、广泛pH试纸、中速层析滤纸等。
槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定

槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定槐花米中芦丁的提取与鉴定背景知识芦丁(Rutin)又称芸香苷,广泛存在于植物界中,现已发现含芦丁的植物至少在70种以上,如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。
尤以槐花米(为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾)和荞麦中含量最高(含量可达12-16%),可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由斛皮素(Quercetin)3位上的羟基与芸香糖(Rutinose)〔葡萄糖(Glucose)与鼠李糖(Rhamnose)组成的双糖〕脱水形成的苷。
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含有3分子的结晶水,熔点为174~178℃,无水物188~190℃。
溶解度:冷水中为1:10 000;沸水中1:200;冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。
芦丁分子中具有较多酚羟基,显弱酸性,易溶于碱液,酸化后又可析出,因此,本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。
芦丁具有维生素P样作用。
能维持血管的正常通透性,减低血管的脆性,缩短流血时间,可作为高血压病的辅助治疗剂。
亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。
一、实验目的通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作;熟悉芦丁、槲皮素的结构性质和检识方法。
二、实验要求独立完成实验,从槐花米中提取出芦丁并进行鉴定。
三、实验原理芦丁属黄酮类化合物,分子中有较多酚羟基,具弱酸性,易溶于热碱中,酸化后又析出,因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁,又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。
四、实验材料和器皿【器皿】烧杯(500ml)2个,试管2个,布氏漏斗1个,玻璃棒1根,抽滤瓶1个,滴管,移液管(10ml)1根,洗耳球1个,滤纸,pH试纸,电热炉,真空抽滤机。
【材料】槐米花30 g,饱和石灰水,0.4%硼砂水溶液,镁粉,pH试纸,浓盐酸,95%乙醇,10% α萘酚乙醇溶液,浓硫酸,蒸馏水。
实验槐米中芦丁的提取分离和鉴定

实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定一、概述槐米系豆科植物槐树(Sophora japonica L.)的花蕾(槐米)。
具有清热、凉血、止血的功效,用于治疗便血、痔血,尿血、血淋,崩漏,赤血痢下,风热目赤,痛疽疮毒,还可用于预防中风。
近年来被用作治疗高血压的辅助药物。
药理实验证明,槐花米具有调节毛细血管的渗透作用,抗炎作用,解痉、抗渍疡作用,影响脂质代谢,抗菌等多种生物活性。
槐花米中主要含有黄酮苷,皂苷、甾醇和鞣质等成分,其中芦丁(Rutin)含量最高,达12~20%。
主要化学成分的结构及理化性质:芦丁(rutin):C27H30O16·3H2O,浅黄色针状结晶,mp174~178℃(含三分子水);188℃(无水物)。
难溶于冷水(1:8000~10000),可溶于热水(1:180~200),热甲醇(1:10),冷甲醇(1:100),热乙醇(1:60),冷乙醇(1:650);难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等,易溶于碱液。
槲皮素(quercetin):C15H10O7·2H2O,黄色结晶,mp313~314℃(2分子结晶水),316℃(无水物)。
能溶于冷乙醇(1:290),易溶于沸乙醇(1:23),可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等;难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
二、实验部分(一)实验目的1、通过芦丁的制备,掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。
2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。
3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法,聚酰胺薄膜的操作方法,电子天平的使用方法。
(二)实验原理1、芦丁的提取原理:芦丁中含有多个酚羟基,具有酸性,故用碱提酸沉法。
2、芦丁的分离原理:芦丁在沸水中溶解,在冷水中析出。
3、芦丁的鉴定原理:芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元,用Molish反应可以进行鉴别,也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析,Rf值也应不同。
(三)实验药材、仪器与试剂1、药材:槐米50g(每组)。
槐米中芦丁的提取、分离与鉴定

槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(一)一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、通过芦丁结构的鉴定,了解苷类结构研究的一般程序和方法。
二、实验原理芦丁:浅黄色针状结晶,mp174℃-178℃。
溶解度:1:8000;热水1:200;冷乙醇1:300;热乙醇1:30;冷甲醇1:100;热甲醇1:10.槲皮素:黄色结晶,mp313℃-314℃(2分子结晶水),能溶解于冷乙醇(1:650),易溶于沸乙醇(1:60),可溶于甲醇、乙酸乙酯等;难溶于水,实验室以稀硫酸水解,乙醇重结晶制得。
本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基,显弱酸性,可溶于碱中,加酸酸化后又可析出结晶的性质,采用碱溶酸沉法提取,并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
三、药品材料槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸四、实验操作芦丁的的提取和精制芦丁的提取:取槐米20g置500ml烧杯中,加入沸水400ml及1g硼砂,搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟(注意保持PH8-9),并随时补充蒸发掉的水分,趁热用双层纱布滤过,收集滤液,药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟,合并两次滤液。
浓缩至1/2体积,滤液在60℃-70℃再用盐酸调至PH4-5,静置一周,析出芦丁。
五、实验说明及注意事项1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁,收率稳定,且操作简便。
在提取前应注意将槐米捣碎,使芦丁易于被热水溶出。
槐花中含有大量粘液质,加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。
PH应严格控制8-9,不得超过10,。
因为在强碱条件下煮沸,时间稍长可促使芦丁水解破坏,使提取率明显下降。
酸沉淀时PH4-5,不宜过低,否则会使芸香苷成烊盐溶于水,降低了收率。
2、提取过程中加入硼砂作用:保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化,亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合,使芦丁不受损失。
槐米中芦丁的提取、分离与鉴定(二)一、实验目的1、掌握芦丁水解生成苷元的方法及二者之间的分离。
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O
O CH2O
O OH
OH
HO 7 5
OH 3'
4' O
3 OH
OH
O
槲皮素
OH OH
OH OH
芦丁
项目一 芦丁的提取分离与鉴定
v 子项目一 槐米中芦丁的提取 v 子项目二 槐米中芦丁的精制 v 子项目三 水解芦丁得到槲皮素 v 子项目四 芦丁和槲皮素的鉴别
槐花
相关内容介绍
芦丁的提取分离与鉴定
槐米
天然药物化学实训
项目一 槐米中芦丁的提取分离
与鉴定
实训目的
v 能够运用碱溶酸沉法和结晶法的操作技术对 槐米中的芦丁进行提取分离
v 能够运用酸水解的操作技术对槐米中芦丁进 行水解
v 能够运用纸色谱、薄层色谱法和化学法鉴别 芦丁、槲皮素和糖类化合物
实训结果
得到两个单体化合物
OH OH
HO
O
OH OH O
自的原理有什么不同? 4、黄酮类薄层色谱中常用到AlCl3乙醇溶液显色?显色
后一般呈什么颜色? 5、薄层色谱的操作要点有哪些?
子项目三 芦丁 和槲皮素的鉴别
糖 的 鉴 定
残渣
芦丁的提取分离与鉴定
水解所得滤液20ml
用饱和Ba(OH)2调PH值至中 性,折叠滤纸过滤
滤液 蒸干,放冷 加2-3ml乙醇溶解
试剂
盐酸-镁粉反应 Molish反应 FeCl3反应
试验记录
试验现象 芦丁
黄酮母核
性
将样品溶液1ml,加入少许镁粉振摇,滴加几
反 滴浓盐酸,1-2min内,观察颜色变化。
应
Molish反应
苷类
将样品溶液1ml,加入等体积10%α-萘酚溶 液,倾斜试管,摇匀,沿管壁滴加浓硫酸,注意 观察两界面产生的变化。
芦丁的提取分离与鉴定
子项目一 槐米中芦丁的提取
提
取
槐花米 (30g)
加0.4%硼砂沸 水200ml
搅拌下加 入石灰乳
调节 pH8-9
加热
保持微 沸20min
补充水 分,保证 pH值
趁热用棉花
在60-70度下,用
滤过
浓盐酸调pH3-4
滤液
静置
残渣
子项目二 槐米中芦丁的精制
思考问题
1、以热水重结晶法精制芦丁的依据是什么? 2、重结晶的操作要点有哪些?
打破玻璃器皿和试备 要赔偿!
实验规则
5、保持室内整洁:学生进入实验室必须穿戴工作衣 帽。实验完毕应将本组实验台、实验架等整理洁净方 可离开。实验小组轮流值日,主要负责实验室内、走 廊地面、门窗的卫生整洁,以及废物缸的清倒工作, 将水、电门窗关好,经指导教师验收后再离开实验 室。 6、写好实验报告:实验报告是考查学生分析总结实验 资料能力和写作能力的重要方面,亦是评定实验成绩 的主要依据
苷元成分?
芦丁的提取分离与鉴定
子项目三 水解芦丁得到槲皮素
注意观察整个过程的现 象!为什么为出现这种 情况?
精制芦丁1.5g
加入2%硫酸100ml, 加热回流30min,放 冷静置,抽滤
滤液 作糖的检识用
沉淀 粗品槲皮素
子项目四 芦丁和槲皮素的鉴别
思考问题
1、纸色谱的原理及操作要点? 2、黄酮类化合物有哪些显色方法,各针对哪类黄酮? 3、黄酮类薄层色谱中,经常用到的吸附剂有哪几类?各
实验规则
3、杜绝差错事故:称取药品时,要在拿取、称量和 放回时进行核对。称量完毕应盖好瓶塞,放回原 处。实验成品应写明名称、规格、配制者、配制时 间及班组号,交实验指导教师验收。
实验规则
4、爱护仪器药品:实验仪器、药品应妥善保管、存 放和使用。如有破损缺少,必须立即报告实验指导 教师,并填写仪器药品报损表,然后到准备室补 领。实验小组合用的仪器药品,每次实验前应检查 核对后再取用。实验指导教师对破损缺少的仪器药 品应查明原因,按本院校对仪器药品破损处理办法 提出处理意见。
芦丁的提取分离与鉴定
相关内容介绍
OH
OH
HO
O
OH OH O
O
O CH2O
O OH
用于治疗毛细管脆弱引 起的出血病,并用作高 血压的辅助治疗剂。
OH OH
OH OH
芦丁
相关内容介绍
芦丁的提取分离与鉴定
OH
OH
3' 4'
HO
O
性状:黄色针状结晶(稀乙醇)。
7
溶解度:冷乙醇中1:300,热乙醇中
5
3
实训报告格式
参照书P139和P216页, 具体要求老师再规定!
提
取
与
精
制
滤液
芦丁的提取分离与鉴定
第一次实验所得滤液
抽滤,少量水洗涤沉淀 沉淀(粗品芦丁)
重结晶
取粗制芦丁3g,加蒸馏水 400ml,煮沸10分钟后,趁热 抽滤
残渣
滤液 冷却,静置
精制芦丁(备用)
减压抽滤装置
子项目三 水解芦丁得到槲皮素
思考问题
1、影响酸水解速度的因素有哪些? 2、如何进行苷类酸水解操作,如何分离得到
OH
1:23。可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙 酯、冰乙酸、吡啶,不溶于水、氯
OH O
仿、乙醚、苯和石油醚等。
槲皮素
子项目一 槐米中芦丁的提取
思考问题
1、加入硼砂目的是什么? 2、为什么要加入石灰水,在芦丁的提取中能
起到什么作用? 3、酸沉pH值为什么不宜过低? 4、以热水重结晶法精制芦丁的依据是什么? 5、重结晶的操作要点有哪些?
样品
颜色
芦丁 槲皮素
实验记录
直接观察
日光
UV
AlCl3 喷雾 日光 UV
Rf值
实验规则
1、预习实验内容:要明确实验目的与要求。对处方 中药物性质、配制原理、操作步骤、操作关键 等,做到“心中有数”,并合理安排实验时间。
2、遵守实验纪律:应保持实验室内肃静,不得无故 迟到或早退,不得擅离实验操作岗位,甚至高声 谈笑。如发生差错事故或异常现象,应随时报告 指导教师,查明原因,及时解释。注意安全,严 防火灾、烧伤或中毒事故发生。
FeCl3反应
酚羟基
将样品溶液1ml,加入1~2滴2%Fecl3溶液, 观察现象。
芦丁的提取与定性反应
薄 样品:分别取精制的芦丁、槲皮素适量,加95%乙 层 醇溶解成每1ml含1mg的溶液,备用。 色 谱 展开剂:醋酸乙酯-甲酸-水(8:1:1) 鉴 显色剂:2%AlCl3乙醇溶液,105℃加热至斑点 别 清晰,置紫外灯(365nm)下观察。
槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥 花及花蕾
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芦丁的提取分离与鉴定
v 性能:苦,性微寒。 v 功效:凉血止血、清肝泻火
v 应用:用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、 衄血、肝热目赤、头痛眩晕等。
主要含有芦丁、槲皮素,还含少量皂苷类及多 糖、粘液质等。近代研究表明槐米含芦丁可高 达23.5%,槐花开放后降至13.0%。
供试品溶液 纸色谱
芦丁的提取分离与鉴定
糖
标准品:葡萄糖、鼠李糖
的
展开剂:正丁醇-乙酸-水(4:1:5)上层液
纸
显色剂:苯胺—邻苯二甲酸试剂。
色 谱
105℃烘10min显色(显棕色或棕红色斑点)
鉴
定
标本缸
新华一号滤纸
芦丁的提取分离与鉴定
糖 标准品:葡萄糖、鼠李糖
的 纸 色
展开剂:正丁醇-乙酸-水(4:1:5)上层液 显色剂:苯胺—邻苯二甲酸试剂。
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OH OH
芦丁的提取分离与鉴定
HO
O
OH OH O
O
O CH2O
O OH
OH OH
OH OH
芦丁
性状:浅黄色粉末或极细微淡黄色针 状结晶。 溶解度:在冷水中1:10000,沸水中 1:200;冷乙醇中1:200,沸乙醇中 1:60。沸甲醇中1:7。 酸碱性:芦丁分子中具有较多酚羟 基,显弱酸性,易溶于碱液中,酸化 后又可析出。
谱
105℃烘10min显色(显棕色或棕红色斑点)
鉴
定 试验记录:
粘附纸色谱,并计 算斑点的Rf值
12
3
芦丁的提取分离与鉴定
定 性 芦丁供试品溶液:取精制芦丁约5mg,用5ml甲醇 反 使溶液,备用。 应 槲皮素供试品溶液:取粗槲皮素约5mg,用5ml甲
醇使溶液,备用。
其余试剂:镁粉、浓盐酸、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、2% 三氯化铁乙醇溶液