电泳分离的基本原理32页PPT
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质粒的酶切—琼脂糖凝胶电泳分离DNAppt课件
实验二 质粒的酶切、琼脂糖凝 胶电泳分离DNA
1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果及讨论
实验目的
限制性内切酶切割出目的DNA
了解琼脂糖凝胶电泳的原理
掌握琼脂糖凝胶的制作及进行电泳的方 法
实验原理
利用限制性内切酶具有特定的识别及切割位 点，定点切割环状质粒DNA。
Tris 242g 冰醋酸 57.1ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 100ml 3. 溴化乙锭溶液 10mg/ml水溶液，室温，棕色瓶或铝 铂纸包装保存。 4. 10×DN切体系
调制酶切体系如下: (共 20μL)
无菌水 6μL，
质粒
10 μL
Buffer K 2μL,
EcoR I 1μL,
BamH I 1 μL
37℃酶切1.5小时。
琼脂糖凝胶制备
1. 洗净电泳槽、制胶槽、梳子、挡板，晾干。 2. 插好挡板、梳子。 3. 根据实验所需称取0.4克琼脂糖，放入制胶
的容器中（一般用三角瓶），然后加入40ml电 泳缓冲液（1×TAE）。 4. 加热煮沸，使琼脂糖完全溶解。 5. 溶液冷至约60℃时，加入溴化乙锭4 μL (终浓 度为0.1 g/l)，轻轻摇匀，倒入制胶槽上，检查 有无气泡。
纯度；DNA的甲基化程度；温度；缓冲液成分 （DDT，BSA）等。
使用3 mg的DNA Marker DL 2,000（500 ng/条带）进行1% 的琼脂糖凝胶电泳后，各DNA条带自上至下分别为2kb，1Kb， 750bp，500bp，250bp，100bp。
9.用移液器吸起离心管中溶液，移入凝胶的梳孔中。
10.插上导线，打开电泳仪电源，按照需要调节 电压至120V，电泳开始，观察电流情况或电泳 槽中负极的铂金丝是否有气泡出现。
1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果及讨论
实验目的
限制性内切酶切割出目的DNA
了解琼脂糖凝胶电泳的原理
掌握琼脂糖凝胶的制作及进行电泳的方 法
实验原理
利用限制性内切酶具有特定的识别及切割位 点，定点切割环状质粒DNA。
Tris 242g 冰醋酸 57.1ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 100ml 3. 溴化乙锭溶液 10mg/ml水溶液，室温，棕色瓶或铝 铂纸包装保存。 4. 10×DN切体系
调制酶切体系如下: (共 20μL)
无菌水 6μL，
质粒
10 μL
Buffer K 2μL,
EcoR I 1μL,
BamH I 1 μL
37℃酶切1.5小时。
琼脂糖凝胶制备
1. 洗净电泳槽、制胶槽、梳子、挡板，晾干。 2. 插好挡板、梳子。 3. 根据实验所需称取0.4克琼脂糖，放入制胶
的容器中（一般用三角瓶），然后加入40ml电 泳缓冲液（1×TAE）。 4. 加热煮沸，使琼脂糖完全溶解。 5. 溶液冷至约60℃时，加入溴化乙锭4 μL (终浓 度为0.1 g/l)，轻轻摇匀，倒入制胶槽上，检查 有无气泡。
纯度；DNA的甲基化程度；温度；缓冲液成分 （DDT，BSA）等。
使用3 mg的DNA Marker DL 2,000（500 ng/条带）进行1% 的琼脂糖凝胶电泳后，各DNA条带自上至下分别为2kb，1Kb， 750bp，500bp，250bp，100bp。
9.用移液器吸起离心管中溶液，移入凝胶的梳孔中。
10.插上导线，打开电泳仪电源，按照需要调节 电压至120V，电泳开始，观察电流情况或电泳 槽中负极的铂金丝是否有气泡出现。
电泳技术(共21张PPT)
5 显色及分析 机械强度好，透明有弹性，稳定，无吸附作用和电渗作用，可制成不同孔径的凝胶。
优点：分辨率高，区带清晰、窄，加样部位自由，重现性好，可测定P或多肽的等电点。
蛋白：溴酚兰、氨黑10B、偶氮胭脂红B 根据要分离物质的相对分子质量选择合适的单体浓度。
机械强度好，透明有弹性，稳定，无吸附作用和电渗作用，可制成不同孔径的凝胶。
第4页，共21页。
2 滤纸的选择与处理 层析用滤纸，纸宽2～3cm/样品组分，长短影响电场强度。
3 点样
分1 电离泳胶：：带小电孔粒径点子，在p圆H电8场.点中向（着与量其本少身电）荷相、反的点电极条移动状的过（程。一般），点中间（未知样品）、 点一边（已知样品） 点圆点（量少）、点条状（一般），点中间（未知样品）、点一边（已知样品）
凝胶（如聚丙烯酰胺凝胶） 4 操作要点
pH梯度支持介质的制备
聚焦电泳 检测 两性电解质载体的除去
第20页，共21页。
电泳技术思考题
1名词解释
电泳、电泳分离技术、泳动度、电渗、区带电泳、 相对迁移率、不连续凝胶电泳
2 影响泳动度的主要因素有哪些？
3 区带电泳的操作步骤一般有哪些？
4 如何制备聚丙烯酰胺凝胶？
CH2(NH2)COOH → (样品胶、浓缩胶pH6.7~6.8） →
CH2(NH2)COO－（0.1％～1.0％）泳动速度最慢（慢离子） 蛋白质（P）泳动速度介于快慢离子之间 电泳时， Cl －超过P走在最前面，其后形成一个离子浓度较
低的低电导区→较高电位梯度→P和慢离子加速移动→P 压缩成层
Aa：茚三酮、靛红
干法、湿法 分类：垂直管型盘状电泳、垂直板型电泳；
1 电泳：带电粒子在电场中向着与其本身电荷相反的电极移动的过程。
优点：分辨率高，区带清晰、窄，加样部位自由，重现性好，可测定P或多肽的等电点。
蛋白：溴酚兰、氨黑10B、偶氮胭脂红B 根据要分离物质的相对分子质量选择合适的单体浓度。
机械强度好，透明有弹性，稳定，无吸附作用和电渗作用，可制成不同孔径的凝胶。
第4页，共21页。
2 滤纸的选择与处理 层析用滤纸，纸宽2～3cm/样品组分，长短影响电场强度。
3 点样
分1 电离泳胶：：带小电孔粒径点子，在p圆H电8场.点中向（着与量其本少身电）荷相、反的点电极条移动状的过（程。一般），点中间（未知样品）、 点一边（已知样品） 点圆点（量少）、点条状（一般），点中间（未知样品）、点一边（已知样品）
凝胶（如聚丙烯酰胺凝胶） 4 操作要点
pH梯度支持介质的制备
聚焦电泳 检测 两性电解质载体的除去
第20页，共21页。
电泳技术思考题
1名词解释
电泳、电泳分离技术、泳动度、电渗、区带电泳、 相对迁移率、不连续凝胶电泳
2 影响泳动度的主要因素有哪些？
3 区带电泳的操作步骤一般有哪些？
4 如何制备聚丙烯酰胺凝胶？
CH2(NH2)COOH → (样品胶、浓缩胶pH6.7~6.8） →
CH2(NH2)COO－（0.1％～1.0％）泳动速度最慢（慢离子） 蛋白质（P）泳动速度介于快慢离子之间 电泳时， Cl －超过P走在最前面，其后形成一个离子浓度较
低的低电导区→较高电位梯度→P和慢离子加速移动→P 压缩成层
Aa：茚三酮、靛红
干法、湿法 分类：垂直管型盘状电泳、垂直板型电泳；
1 电泳：带电粒子在电场中向着与其本身电荷相反的电极移动的过程。
电泳分离技术
谢谢
THANKS
样本分析。
电场不均匀性
电泳过程中电场的不均匀性可 能导致分离效果不佳。
高成本
电泳分离技术所需的设备和试 剂成本较高，增加了实验成本
。
操作复杂度
电泳分离技术的操作相对复杂 ，需要专业人员进行操作和维
护。
05 电泳分离技术的发展趋势和未来展望
CHAPTER
技术创新和改进
高效电泳分离技术的研发
通过改进电泳分离技术的原理和工艺，提高分离效率和准确性，降低能耗和成本。
21世纪
随着生物技术的快速发展，电泳分离技术在基因组学、蛋白质组学等 领域的应用越来越广泛，成为生命科学研究的重要手段之一。
02 电泳分离技术的基本原理
CHAPTER
电泳现象
定义
电泳现象是指带电粒子在电场中受到电场力的作用而发生迁移的 现象。
原理
带电粒子在电场中受到电场力的作用，产生定向移动，使得粒子在 电场中分布不均，从而实现分离。
细胞分离
利用电泳分离技术可以分离不同种类的细胞，如淋巴细胞 分型、干细胞分离等，为细胞治疗和药物筛选提供支持。
在化学和环境科学领域的应用
有机物分离
电泳分离技术可用于有机物的分 离和纯化，如氨基酸、肽类、糖 类等，在化学合成和药物制备中 具有重要应用。
环境监测
电泳分离技术可用于环境样品中 污染物的分离和检测，如重金属 离子、有机污染物等，为环境监 测和治理提供技术支持。
电泳分离技术
目录
CONTENTS
• 引言 • 电泳分离技术的基本原理 • 电泳分离技术的应用 • 电泳分离技术的优缺点 • 电泳分离技术的发展趋势和未来展望 • 结论
01 引言
蛋白质电泳分析PPT课件
蛋白质组学研究
蛋白质电泳分析在蛋白质组学研 究中具有重要作用，可用于分离 和鉴定蛋白质，揭示蛋白质的表
达模式和功能。
生物标志物发现
通过蛋白质电泳分析，可以发现 与疾病相关的生物标志物，有助
于疾病的早期诊用于药物靶点 的筛选和验证，以及药物作用机
制的研究，有助于新药研发。
绝对定量
通过灰度扫描电泳图谱中蛋白质条带， 可以计算出各蛋白质条带的相对含量。
通过标准品或已知浓度的蛋白质样品， 可以建立标准曲线，从而对未知浓度 的蛋白质样品进行绝对定量分析。
相对定量
通过比较不同样品中蛋白质条带的灰 度值或亮度，可以计算出各蛋白质的 相对表达量。
04
蛋白质电泳分析的优缺点
优点
03
蛋白质电泳分析结果解读
电泳图谱的解读
01
02
03
蛋白质分子量标准
电泳图谱中通常会有一条 蛋白质分子量标准，用于 参考和标定蛋白质的分子 量。
蛋白质条带位置
通过观察电泳图谱中蛋白 质条带的位置，可以判断 蛋白质的迁移率和分子量 大小。
蛋白质表达量
通过比较不同样品中蛋白 质条带的亮度或密度，可 以判断蛋白质的表达量。
在食品安全和检测领域的应用前景
食品成分分析
蛋白质电泳分析可用于食品中蛋白质的鉴定和含 量测定，确保食品质量和安全。
污染物检测
蛋白质电泳分析可以检测食品中的有害物质和污 染物，如农药残留、重金属等。
转基因食品检测
通过蛋白质电泳分析，可以检测转基因食品中的 外源蛋白质，保障消费者权益。
THANKS
感谢观看
蛋白质电泳分析PPT 课件
目录
• 蛋白质电泳分析概述 • 蛋白质电泳分析实验操作 • 蛋白质电泳分析结果解读 • 蛋白质电泳分析的优缺点 • 蛋白质电泳分析展望
实验六.LDH同工酶的电泳分离.ppt
心 35~70 28~45 2~16 0~6 0~5
肝
0~8
2~10
3~33 6~27 30~8
骨骼肌 1~10 4~18
8~38 9~36 40~97
正常血清 27.1±2.8 34.7 ± 4.3 20.9 ± 2.4 11.7 ± 3.3 5.7 ± 2.9
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
a
2
12
b
酶活性 酶活性
3
1 4 5
量少肉眼观察不到
LDH 4 3.9%
LDH 3 18.5%
LDH 2 42.8%
LDH 1 33.4%
溴酚蓝电 泳指示剂
+
hhhhhhhhhhhhhhmmhhhhmmmmhhmmmmmmmmmmmmmmldhldh11hh44ldhldh22hh33mmldhldh33hh22mm22ldhldh44hmhm33ldhldh55mm44乳酸脱氢酶的同工酶乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶ldhldh11ldhldh55人体心肝和骨骼肌ldh同工酶谱组织器官ldh1ldh2ldh3ldh4ldh5占总ldh活性的百分比28452160605心肝357008210333627308骨骼肌正常血清271283474320924117335729110418838936409712345酶活性迁移位置酶活性迁移位置abaldh同工酶电泳图谱ba正常人ldh同工酶电泳图谱b心肌梗塞病人血清ldh同工酶电泳图谱12345生理及临床意义生理及临床意义在代谢调节上起在代谢调节上起着重要的作用
2. 显色：电泳终止前10 min，将凝胶缓冲液：显 色液：0.5 M 乳酸钠溶液=67:53 :20(V:V:V)的比例 配置染色液。
电泳结束后，取出载玻片，放入培养皿中。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质ppt幻灯片
2.点样
1）用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸 干多余的缓冲液，然后平铺在桌子上（毛面朝 上）。
2）在一次性手套上滴一滴血清（3-5μl），用点样 器在血清上蘸一下，再将点样器轻印在CAM膜的 点样线上，待血清完全渗透到薄膜内后移开。
3.电泳
1）将加样后的薄膜，毛面向下，垂直架于电泳槽的游杆两 端，点样端置于负极，纱布将膜的两端与缓冲液连通 2）将电泳槽的正极和负极分别与电泳仪的正极、负极连接， 打开电源，低压，平衡5min。调节电压至90-150V (110V),稳压电泳45min。 3）待电泳区带展开约25-35mm后，关闭电源。
2.M蛋白血症 单克隆γ球蛋白（M蛋白）血症，主要见于多发性骨
髓瘤、巨球蛋白血症、重链病以及一些良性M蛋白增多症。在β和 γ球蛋白后区段的各部分出现一条致密浓集的M蛋白带。
3.蛋白缺乏症 主要包括a1抗胰蛋白酶缺乏症、γ球蛋白缺乏症等。
临床上较少见，电泳图表现为a1或γ球蛋白缺乏或显著降低。
谢谢观看！ 电各2内清2内在12内1将将电各1薄A这点1醋白这1在 β薄1将各β将将正A清蛋1A正电3电在AA在2内各也这电 在正在aa电电各将将M2内1将这也也脐在调电2内因场蛋醋白蛋a蛋5将5这电各醋白电M1β因场电1也 AM蛋正调cc） ） ） ） ）） ） ） ） ） ） ） ） ）） ） ）111---XXXXXX蛋蛋蛋球球球泳组后蛋后β后染已泳组膜些样酸。些β膜漂组染染常蛋白常泳泳ββ后组可些泳β常β泳泳组染已后已些可染可带β节泳后血中白酸。白白已些泳组酸。泳血中泳可白常节mm---::::::球球球在在醋在将 将醋醋醋将待在在将 在醋将和和和和和和和各各各各各各白白白处处蛋 蛋 蛋： 分 移 白 移 移 色 经 ： 分 的 蛋 时 纤 蛋 的 洗 分 色 色 血 白 缺 血 ： ： 移 分 将 蛋 技血 技 时 分 色 经 移 经 蛋 将 色 将 血 电 槽 移 清 ， 缺 纤 缺 缺 经 蛋 装 分 纤 装 清 ， 槽 将缺 血 电蛋蛋蛋一一酸一加 加酸酸酸加电一一加 一酸加γγγγγγγ组 组组组组组血血 血，，白白白带蛋开开开过编带蛋浸白，维白浸好蛋过过清乏清带带开蛋各白术 清术应蛋过编开编白各过各清压置开中各乏维乏乏编白置蛋维置中各置各 乏清压球球 球球球球球白白白次次纤次样 样纤纤纤样泳次次样 次纤样分 分分分分分症症 症用用电白。。。的号电白润经应薄经润的白的的蛋症蛋电电。白蛋经:蛋:选白的号。号经蛋蛋、至于。各蛋症薄症症号经由白薄由各蛋于蛋 症蛋至蛋蛋蛋蛋蛋蛋蛋性性维性后 后维维维后区性利 利性后 性维后蛋 蛋蛋蛋蛋蛋直直粒%薄、粒%是过将膜过是C%薄薄白白粒粒%白过白择%薄、、过白薄白胎9水种白膜、过电%膜电种白水白 白9白白 白白白白白单单 单手手薄手的 的薄薄薄的带手手的 0手薄的0用 用主主主主主白 白白白白白A======尺尺子膜标子电染薄电染电膜膜电电子子区染电合膜标标染区膜区儿平蛋质电标染泳电泳蛋质平区771117后后 后后后后后--M克克 克11AAAAAA套套膜套薄 薄膜膜膜薄展套套薄 套膜薄--要--要要-要-要带 带光 光光光光光115551和和在依记在泳色膜泳色泳依依泳泳在在带色泳适依记记色带依带血台白的泳记色槽泳槽白的台带55区区 区区区区区XXXXXX薄隆隆 隆33...3上上的上膜 膜的的的膜开上上膜 上的膜包包包包包电 电00密 密密密密密//////铅铅电次的电成处表可处成次次一一电电剪处一的次的的处剪次剪清，质电可的处和可和质电，剪 一%%%A段A段 A段段A段段A段AVV膜γγγ滴滴准滴， ，准准准，约滴滴， 滴准，括括括括括粒 粒度 度度度度度TTTTTT笔笔球球 球场放场败理面将理败放放般般场场下理般电放理下放下、两的泳将理稳将稳的泳两下 般CCCC((的的 的的的的放11××××××一 一 备 一 毛毛 备 备 备 毛 一 一 毛一 备 毛a2aaaa子子值值值值值值AAAA11轻轻蛋蛋蛋中在中的，多血，的在在可可中中，，可压在，，在，部侧迁血，压血压迁侧，可pp各各 各各各各各151111置MMMM00111111滴滴滴面 面面滴滴面 滴面II在 在抗-抗抗抗抗值值划划白白 白VV向漂向关可余清可关漂漂分分向向分可分，漂可分漂分分注移清可电清电移注分 分3部部 部部部部部000000膜膜膜膜在血血血向 向向血血向 血向5电 电))000000胰胰胰胰胰不不一一（（ （,,本洗本键展的蛋展键洗洗为为本本别展为一洗展别洗别原入率蛋展源蛋源率入别 为55分分 分分分分分m以以以以滤%%%%%%稳稳清清清下 下下清清下 清下77场 场蛋蛋蛋蛋蛋同同横横MMMm身缸身之示缓白示之缸缸身身用示般缸示用缸用发等也白示两白两也等用5555出出 出出出出出--毛毛毛毛纸压压66（（（， ，，（（， （，条条条条中 中白白白白白蛋蛋 蛋后，，线线所所一出冲分出一所所一出稳出一一性量不分出部分部不量一1111188现现 现现现现现面面面面上电电垂 垂垂垂 垂,,,,,333区区3区33区%%移 移酶酶酶酶酶白白 白，22222在在，，带带。清液成清。带带定清压清定定肝的同成清分成分同的定一一 一一一一一------朝朝朝朝，泳泳,,,,,555555直 直直直 直带带带带动 动33333缺缺缺缺缺）） ）关同同做做电电晰用五晰电电量晰在晰量量癌巴。五晰组五组。巴量μμμμμμ条条 条条条条条下下下下吸中中中中中44架 架架架 架，，，，速 速llllll乏乏乏乏乏血血 血闭））））））55一一点点荷荷的滤条的荷荷的的为的的的血比条的成条成比的致致 致致致致致的的的的干漂漂漂漂漂mm于 于于于 于即即即即度 度症症症症症症症 症电，，，，，，pp样样相相蛋纸主蛋相相蛋蛋清妥主蛋，主，妥N1NNN密密 密密密密密ii方方方方水洗洗洗洗洗HHnn1电 电电电 电AAAA不 不、、、、、aaaa，， ，源用用用用用用标标。。反反白吸要白反反白白在缓要白两要两缓0浓浓 浓浓浓浓浓缓缓式式式式分llll，，，，，OOOObbbb泳 泳泳泳 泳同 同γγγγγ主主 主。点点点点点点V记记的的电去区电的的电电冲区电者区者冲A，，，，HHHH集集集集集集集冲冲球球球球球浸浸浸浸，每 每 每 每 每。槽 槽槽槽 槽而而l要要 要稀稀稀稀样样样样样样b，，电电泳，带泳电电泳泳液带泳之带之液αααα的的 的的的的的液液蛋蛋蛋蛋蛋入入入入放次次次次次和的 的的的 的达 达1111见见 见溶溶溶溶器器器器器器并并极极图但，图极极图图，，图间，间，MMMMMMM中中，，，，白白白白白巴巴巴巴入55555α游 游游游 游到 到于于 于液液液液在在在在在在用用蛋蛋 蛋蛋蛋蛋蛋移移谱不从谱移移谱谱使从谱有从有使1mmmmm带带αααα缺缺缺缺缺比比比比扫杆 杆杆杆 杆球分 分多多 多2222洗洗洗洗血血血血血血iiiii铅铅白白 白白白白白动动。宜正。动动。。其正。专正专其nnnnn电电乏乏乏乏乏妥妥妥妥描，，，，两 两两两 两蛋离 离发发 发脱脱脱脱清清清清清清笔笔带带 带带带带带的的太极的的在极门极门在荷荷症症症症症缓缓缓缓仪ββββ端 端端端 端白的 的性性 性，，，，上上上上上上,,,,标标。。 。。。。。现现干端现现同端的端的同量量γγγγ等等等等等冲冲冲冲中， ，，， ，之技 技球球球球骨骨 骨进进进进蘸蘸蘸蘸蘸蘸号号象象。起象象一起连起连一会会。。。。。液液液液进点 点点点 点间术 术蛋蛋蛋蛋髓髓 髓行行行行一一一一一一。。。。依。。水依线依线水有有中中中中行样 样样样 样可。 。白白白白瘤瘤 瘤比比比比下下下下下下次平次连次连平不不，，，，扫端 端端端 端增。。。。、、 、色色色色，，，，，，为面为接为接面同同浸浸浸浸描置 置置置 置加巨巨 巨，，，，再再再再再再清。清。清。。，，泡泡泡泡，于 于于于 于一球球 球测测测测将将将将将将蛋蛋蛋此此并3333负 负负负 负条蛋蛋 蛋出出出出0000点点点点点点白白白外外用极 极极极 极甲mmmm白白 白各各各各样样样样样样///，，软白白白iiii， ，，， ，胎nnnn血血 血蛋蛋蛋蛋器器器器器器各各件。。。。蛋蛋蛋纱 纱纱纱 纱蛋症症 症白白白白轻轻轻轻轻轻蛋蛋分白白白布 布布布 布白、、 、质质质质印印印印印印白白析AAA将 将将将 将带重重 重区区区区在在在在在在lll质质bbb各膜 膜膜膜 膜。链链 链，，，带带带带CCCCCC的的种AAAAAA的 的的的 的病病 病的的的的分分MMMMMM蛋ααα两 两两两 两以以 以相相相相111膜膜膜膜膜膜子 子白---端端 端 端端及及 及球球球对对对对的的的的的的大大质与 与与与 与一一 一蛋蛋蛋含含含含点点点点点点小小的缓 缓缓缓 缓些些 些白白白量量量量样样样样样样和和相冲 冲冲冲 冲良良 良，，，。。。。线线线线线线形形对液 液液液 液性性 性ααα上上上上上上状状含222连 连连连 连MMM---，，，，，，也也量球球球通 通通通 通蛋蛋 蛋待待待待待待不不。蛋蛋蛋白白 白血血血血血血一一白白白增增 增清清清清清清致致，，，多多 多完完完完完完，，βββ症症 症---全全全全全全所所球球球。。 。渗渗渗渗渗渗以以蛋蛋蛋透透透透透透在在白白白到到到到到到同同,,, γγγ薄薄薄薄薄薄一一---球球球膜膜膜膜膜膜电电蛋蛋蛋
_电泳分离
2、薄层电泳 、
将支持物与缓冲液调制成适当厚度的薄层 进行电泳的技术。 常用支持物：淀粉、琼脂、纤维素粉、硅 胶等 操作：
（1）缓冲液选择 （2）支持物处理 （3）薄层板制作 （4）加样 （5）电泳 （6）分析 离子强度较高的缓冲液 精制品 挖沟、混合样品、填埋 印染法
3、薄膜电泳(film electrophoresis) 薄膜电泳(film
带电物质在电场作用下，因其电荷性 带电物质在电场作用下，因其电荷性 电荷数量及分子量大小的不同而 质、电荷数量及分子量大小的不同而 泳动方向、 的不同， 产生的泳动方向 泳动速度的不同 产生的泳动方向、泳动速度的不同， 最终使混合物组分得以分离 的操作 单元称为电泳分离 电泳分离（ 单元称为电泳分离（electrophoresis separation 主要用于酶的纯度鉴定、酶分子量测定、 主要用于酶的纯度鉴定、酶分子量测定、 酶等电点测定及小批量酶的分离纯化。 酶等电点测定及小批量酶的分离纯化。
（2）两性电解质载体 ） 理想的两性电解质载体： 理想的两性电解质载体： a）在等电点处有足够的缓冲能力，保证 梯度稳 ） 等电点处有足够的缓冲能力，保证PH梯度稳 定。 b）在等电点处有足够的电导，允许一定的电流通 ） 等电点处有足够的电导， 过。 c）分子量要小，易于与被分离物质分开。 ）分子量要小，易于与被分离物质分开。 d）不与被分离物质发生反应或使之变性。 ）不与被分离物质发生反应或使之变性。
（5） 操作要点
pH梯度支持介质的制备 （自由电泳，凝胶支持系统） 聚焦电泳 分离组分的检测
（必要时可以在检测之前采用透析， 膜分离等方法除去两性电解质载体）
(3)等电聚焦操作关键是调配稳定的、连续的PH梯度。 等电聚焦操作关键是调配稳定的、连续的 梯度 梯度。 等电聚焦操作关键是调配稳定的 氨基酸混合物或 一般用氨基酸混合物 聚氨基羧酸（多氨基、 一般用氨基酸混合物或聚氨基羧酸（多氨基、多 梯度。 羧基）的缓冲溶液调配PH梯度 羧基）的缓冲溶液调配 梯度。 (4)PH梯度支持介质：聚丙烯酰胺凝胶最常用， (4)PH梯度支持介质：聚丙烯酰胺凝胶最常用，其次 梯度支持介质 最常用 是琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶。 琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶。