总糖的测定蒽酮比色方法

总糖测定——蒽酮比色法

一、原理：

单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。

二、试剂：

1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、

2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。

2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。

3、72%硫酸溶液。

三、测定方法：

（一）样品处理：

称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。

（二）测定

吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。

四、结果计算：

总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4

式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；

10-4：将ppm换算为%的系数

五、说明与讨论

1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。

2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。

3、反应液中硫酸的浓度高达60%以上，在此高酸度条件下，在沸水浴中加热，可使双糖、淀粉等发生水解，再与蒽酮发生显色反应。因此测定结果是样液中单糖、双糖和淀粉的总量。如要求测定结果不包括淀粉，应该用80%乙醇作提取剂，以避免淀粉和糊精溶出。此外，在测定条件下，纤维素也会与蒽酮试剂发生一定程度的反应，因此应避免样液中含有纤维素。

4、蒽酮试剂不稳定,易被氧化变为褐色，一般应当天配制，添加稳定剂硫脲后，在冷暗处可保存48小时。

5、此法要求样液必须清澈透明，加热后不应有蛋白质沉淀，如样液色泽较深，可用活性炭脱色。