总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定
总糖测定
一、总糖标准曲线的绘制
1.蒽酮配制：取2g蒽酮溶解到体积分数98% H2SO4中，以98%H2SO4定容到1000ml，当日配
制使用。
2.取7支比色管，按下表数据0.1 mg/mL的木糖标准溶液和蒸馏水。
表2木糖标准溶液配制
编号蒸馏水（ml）木糖标准液（ml）木糖含量（μg）
0（空白对照） 2 0 0
1 1.8 0.
2 20
2 1.6 0.4 40
3 1.
4 0.6 60
4 1.2 0.8 80
5 0.8 1.2 120
6 0.4 1.6 160
3.在每一支试管中立即加入蒽酮试剂8 mL，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸10 min取出，迅速用流动水冷却至室温，在480 nm波长下以2.0 mL蒸馏水代替木糖标准液作为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准木糖含量（μg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作标准曲线。
二、样液总糖测定
吸取待测的溶液2 mL，加入蒽酮试剂8 mL，在100 ℃水浴中放置10 min，用自来水冷却至室温，用相同量的蒸馏水和蒽酮试剂作参比液，在480 nm 处测定吸光度，根据标准曲线计算所测木聚糖中总糖的含量。
三、计算
①总糖（μg）=查曲线所得总糖含量（μg）×（提取液总体积/测定时取用体积）
②总糖=查曲线所得总糖含量（μg）×（提取液总体积/测定时取用体积）/样品质量×100%。
学习指南2-1 植物组织中可溶性总糖的提取及蒽酮比色定糖法
植物组织中可溶性总糖的提取及蒽酮比色定糖法——学习指南
l 学习重点 1. 学习植物样本中可溶性总糖的提取方法。
2. 掌握蒽酮比色法定糖的原理和操作。
l 知识要点
蒽酮比色定糖法：糖在浓硫酸作用下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在620nm 处有最大吸收，可通过比色法进行糖的定量。
蒽酮比色法快速、简便，几乎可以测定所有的糖类物质，包括单糖、寡糖和多糖。
比色法和标准曲线制作参考《面粉中总糖和还原糖的提取及3,5-二硝基水杨酸定糖法》。
l 试剂 1. 0.1mg/ml 标准葡萄糖溶液。
2. 蒽酮试剂。
l 材料
新鲜植物叶片
l 仪器
电子天平、研钵、电磁炉、旋涡混合仪、循环水泵、抽滤瓶、紫外可见分光光度计 l 操作
l 注意事项
1. 蒽酮试剂中硫酸的浓度为80%，由于蒽酮不溶于水，因此测定样品中含水量不能多，试管应干燥无水，否则蒽酮会在测定液中析出而影响测定。
2. 蒽酮试剂
中有浓硫酸，操作时要小心，注意安全。
蒽酮法测还原糖
总糖的含量的测定（蒽酮法）一、实验目的掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。
二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm 处有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。
对于以上特定的糖类反应较稳定。
三、实验器材1.吸管2.试管3.分光光度计4.水浴锅5.电炉6.电子分析天平四、实验试剂1．蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用。
2．标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。
3． 6 mol/l HCl溶液。
4．10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml。
五、实验操作1.制作标准曲线取干净试管7支，按下表进行操作。
表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作2.样品的处理（见实验四）取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。
测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。
样品中糖含量的计算：w —糖的质量分数（%）；C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)； V —样品稀释后的体积（ml ）；m —样品的质量（mg ）。
ｗ＝ CVｍ ×100%。
总糖含量的测定
实验二总糖含量的测定一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：淀粉四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（µg）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中总糖的提取：精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。
取10ml滤液定容至100ml3.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。
实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)
实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)实验目的：2. 了解可溶性总糖在不同食品中的含量。
实验原理：蒽酮法测定可溶性总糖的原理是：原理是将待测样品中的可溶性总糖利用酸性条件水解成葡萄糖，再将葡萄糖与蒽酮在酸性条件下反应生成红色产物，在545nm处比色，通过测量产物的吸光度计算出样品中可溶性总糖的含量。
实验步骤：1. 预处理样品称取25g待测样品，加入100mL蒸馏水，加热煮沸5min，冷却至室温，定容到500mL。
2. 酸水解取10mL待测样品，加热至沸腾，加入10mL 0.6mol/L HCl，再加入2mL 66% L-酒精溶液，沸腾10分钟，冷却至室温。
3. 测定葡萄糖含量取上述溶液10mL，加入20mL 蒸馏水，加入0.5g硫代硫酸钠，加1mL4%酚酞酸指示剂，用0.5mol/L NaOH标准溶液滴定至颜色从紫红色变成淡黄色，观察指示剂颜色变化，记下滴定所需的NaOH体积V1。
4. 去色取剩余的水解溶液(约50mL)，加45mL蒸馏水，加入0.5g氯化钠，用3.48×10^-3mol/L 二硫代磺酸钠溶液滴定至橙色转变为淡黄色(V2)。
5. 比色取2mL去色溶液，加0.50mL 1%蒽酮溶液，加0.50mL 4%氢氧化钠溶液，加入烧杯中，隔水加热沸腾5分钟，冷却后用0.5mol/L HCl标准溶液掉定至颜色由深红色变成粉色(V3)。
6. 计算结果计算样品中可溶性总糖的含量(y)：y=(V1-V2)×1000/6.9×V3 (单位：g/100g或mg/L)实验提示：1. 为了减小误差，应使用称量精度较高的电子天平。
2. 滴定时应慢慢加入标准溶液，用玻璃棒搅拌均匀，直到指示剂颜色变化停止。
3. 比色前需要将产物稳定，此步骤是较关键的实验步骤之一，需要加热沸腾不超过5分钟，并且不要在加热沸腾时将实验管口对准自己。
实验结果：利用蒽酮法测定了不同食品中的可溶性总糖的含量，样品1(西瓜)为0.58g/100g，样品2(草莓)为0.67g/100g，样品3(苹果)为0.49g/100g，样品4(香蕉)为0.59g/100g。
总糖含量的测定
实验二总糖含量的测定一、目的：1. 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2. 学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H0O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 pg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30⑥左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1. 仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2. 试剂：(1) 葡萄糖标准液：100 Q/ml(2) 浓硫酸(3) 蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓H2SQ中。
当日配制使用。
3. 材料：淀粉四、操作步骤1. 葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1,迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸10 min 取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（pg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2. 植物样品中总糖的提取：精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 ml,盐酸10ml,沸水浴20min, 定容至100ml，得提取液。
取10ml滤液定容至100ml3. 测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入 4.0 ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。
以下操作同标准曲线制作。
根据A?。
平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（p g）。
五、结果处理C X V 总X D样品含糖量（%）= --------------------------------- 0W X V 测X 106其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（⑷），V总——提取液总体积（ml ），V测——测定时取用体积（ml ），D -- 稀释倍数，W样品重量（g ），106——样品重量单位由g 换算成p g 的倍数六、注意事项：该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
蒽酮比色法测定棉花成熟纤维中水溶性总糖含量_郭玉华
２． ５ 提取条件的确定 准确称取棉花纤维 ， 按表 １ 的提 取 条 件 提 取 棉 采用 １． 花纤维中的水溶性总糖 ， ３． ６ 方法 测 定 总 糖 含量 ， 结果见表 ２。 由表 ２ 可见 ， 影响 总 糖 含 量 的 提 取 条 件 主 次 关 其 系为提取时间 ＞ 盐酸浓度 ＞ 料 液 比 ＞ 水 解 时 间 ， 中提取时间对提取效果影 响 最 明 显 ， 盐酸浓度和料 ， 实验最佳提取条件为料液比 １∶３ 盐酸 液比其次 ， ０ １ － ·Ｌ ， ， 。 浓度 ５ｍ 水解时间３ 提取时间６ ｏ ｌ ０ｍ ｉ ｎ ０ｍ ｉ ｎ ２． ６ 提取液显色稳定性 按 ２． 取 ５ 项最佳条件提取棉花纤 维 中 的 总 糖 ， ， 提取液 后 ， 按 １． 方 法 操 作 分 别 在 显 色 后 ３． ６ １ ０ ， ， ， ｍ ｉ ｎ， ２ ０ｍ ｉ ｎ ３ ０ｍ ｉ ｎ ６ ０ｍ ｉ ｎ， ９ ０ｍ ｉ ｎ １ ２ ０ｍ ｉ ｎ内测 定吸光度 ， 结果见图 ４。 由图 ４ 可知 ， 吸光度在３ ０～ ， 。 ６ ０ｍ ｉ ｎ 内最大且稳定 以后随着时间推移下降 因 此， 要在提取液显色后 ３ ０～６ ０ｍ ｉ ｎ 内 测 定 吸 光 度， 以减少误差 。
１ －
提取时间／ ｍ ｉ ｎ ３ ０ ６ ０ ９ ０
水解时间／ ３． ５水 溶 性 总 糖 的 提 取 。 取 ０． ５ｇ 棉 花 纤 维 于 加入 ３ 在沸水浴 １ ５ ０ｍ Ｌ 圆底烧瓶中 ， ０ｍ Ｌ 蒸馏水 ， 中加热 ６ 滤出提取液２ ０ｍ ｉ ｎ， ０ｍ Ｌ 于５ ０ｍ Ｌ 烧瓶
１ － 葡萄糖标准液和 蒸 馏 水 的 用 量 ， 再分别加入９ ｍ Ｌ
进行显色测定 。 ｍ Ｌ 显色剂 ， 考 １． ３． ４正交试验 确 定 提 取 条 件 。 采 用 正 交 试 验 ， 查４ 个 影 响 因 素 （ 料 液 比、 盐 酸 浓 度、 提 取 时 间、 水 解时间 ） 对实验的影响 ， 因素水平见表 １。 ·２ ３·
蒽酮比色法测总糖
蒽酮比色法测总糖：
实验步骤：
1、可溶性糖的提取：准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80℃水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。
2、总糖的测定：取提取液1毫升（或0.5毫升，视情况而定）于试管中（空白中用1毫升蒸馏水代替），加入蒽酮试剂5毫升，摇匀，于
，冷却后在620nm波长处比色。
蒽酮试剂：1克蒽酮溶于72%的H2SO41000ml(98%的H2SO4+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱保存2~3周。
3、标准曲线的绘制：取干洁试管6支，依次加入葡萄糖标准液（100μg/ml）0、0.2、0.
4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，绘出标准曲线。
4、计算：C=AN/W
C—样品总糖含量（μg/g）
W—样品重量（g）
A—标准曲线查得的糖量（μg）
N—样品提取液占样品反应液的倍数。
蒽酮比色法测总糖
[1]姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量简化研究[J]. 食品工业992,03:40-42.1. 2试剂0. 1 mg / mL, 1葡萄糖标准溶液:准确称取10mg葡萄糖标准品溶于少量蒸馏水中，溶解后转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL.蒽酮硫酸溶液:准确称取蕙酮50 mg于100mL二烧杯中，加入蒸馏水25 mL,，缓慢加入98%质量分数)浓硫酸75 mL,，边加边搅(于冰水浴中完成)，直至蕙酮溶解，冷却至室温后使用(临用新配)。
浓盐酸、浓硫酸、NaOH，以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
1. 3方法1. 3. 1显色剂（蒽酮硫醇溶液）用量选择。
向试管中加入0. 1 mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL,，并加入蒸馏水至1m L,，分别加入不同量显色剂显色测定，以0. 1 mL,蒸馏水为空白对照。
1.3.2显色时间选择。
向10 mL二试管中加入0. 1mg / mL葡萄糖标液0. 1 mL二并加入蒸馏水至1mL,，在冰水浴中缓慢加入9 mL显色剂摇匀，改变沸水浴时问，冷却至室温后测体系吸光度。
1.3.3葡萄搪标准曲线绘制。
改变0. 1 mgmL 葡萄糖标准液和蒸馏水用量，再分别加入9mL显色剂，进行显色测定。
1.3.4正交试验确定提取条件。
采用正交试验，考查4个影响因素(料液比、盐酸浓度、提取时间、水解时问)对实验影响，因素水平见表1.1.3.5水溶性总搪提取。
取0. 5 g棉花纤维于150 mL圆底烧瓶中，加入30 mL,蒸馏水，在沸水浴中加热60 mLn,滤出提取液20 mL于50 mL 烧瓶中，加5 mol / L 盐酸5 mL继续在沸水浴中加热30 mLn，冷却后，滴加一滴酚酞，用5 mol / L, 1氧氧化钠中和至中性。
1. 3. 6水溶性总搪测定。
取提取液1 mL于10mL试管中，在冰水浴中缓慢加入9 mL,蕙酮硫酸溶液摇匀，在沸水浴中加热9 mLn，冷却后放置30min测定吸光度。
动物多糖--总糖的测定
1.硫酸蒽酮法（1）样品处理：称取0.1g样品（动物），以E/S比为1/25的比例，加入0.004g酸性蛋白酶定容至10mL容量瓶中，在pH=2,温度在37℃下，进行水解5h，水解后在100℃灭酶3min。
将经酶处理过的样品用5mL注射器经0.45um针孔滤膜过滤，收集滤液，并取1mL 滤液定容至50mL容量瓶中待用。
（2）紫外分光检测：准确称取0.1g葡萄糖（分析纯），溶解并用蒸馏水定容到100ml后，分别取出1ml、2ml、3ml、4ml、5ml分别加入到50的容量瓶中，并用蒸馏水定容到50ml,配成了浓度分别为20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml 、80ug/ml、100 g/ml, 以蒸馏水做对照空白，各取1ml于试管中，再加入4ml蒽酮试剂，迅速浸入冰水中冷却，待几只试管均匀加完后，一起浸入100℃恒温水浴锅中，为防止水分蒸发，应在试管口上加塞。
自温度重新升至100℃起计时，准确保温10min后取出，用流动水冷却。
然后，于室温中平衡片刻（约10min左右），再在分光光度计上，进行光谱扫描，检测在波长620nm有最大吸收峰，选择620nm紫外检测波长，用0.5cm厚度的比色杯进行比色。
其标准曲线制作如表1.1 所示：表1.1 葡萄糖标准曲线结果标样号浓度（ug/ml）吸光度(ABS)1 20.000 0.067282 40.000 0.257233 60.000 0.438604 80.000 0.589235 100.000 0.74802多糖含量（%）=（样品浓度×稀释倍数×样品体积）/式样称重量×100%。
2．苯酚-硫酸法（1）标准曲线的制备: 准确称量干燥至恒重的葡萄糖标准品0.020g,置于体积500mL的容量瓶中定容并摇匀,得到葡萄糖的标准溶液。
以2.0mL蒸馏水作为空白样,依次取0.4mL, 0.6mL, 0.8mL, l.0mL, 1.2mL,1.4mL, 1.6mL,1.8mL 葡萄糖标准溶液,用蒸馏水补足至2.0mL,在每个样品中按顺序加入浓度为6%的苯酚溶液l.0mL,98%的浓硫酸5.0mL,静置10min后摇匀,室温下放置20min,再在分光光度计上，进行光谱扫描，检测在波长490nm有最大吸收峰，选择490nm紫外检测波长，用0.5cm厚度的比色杯进行比色，测得吸光值。
总糖的测定蒽酮比色法
植物组织中总糖和还原糖含量的测定（蒽酮比色法）2010-5-24一、实验目的掌握蒽酮比色法测定总糖和还原糖含量的原理和方法，学会正确使用分光光度计。
二、实验原理游离的己糖或多糖中的己糖基、戊糠醛及己糖醛酸在浓硫酸的作用下脱水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物与蒽酮缩合成蓝色的化合物，在620nm处有最大吸收，在一定糖浓度范围内（200ug/ml），溶液吸光度值与糖溶液的浓度成线性关系。
用酸将植物组织中没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，或直接提取植物组织中的还原糖，即可对植物组织中的总糖和还原糖进行定量测定。
三、实验材料1．可见分光光度计、电子天平(1/100)、粉碎机、水浴锅、电炉。
2．研钵、量筒、三角烧瓶、烧杯、容量瓶、玻璃漏斗、试管1.5cm×15cm、刻度吸管、胶头滴管、pH试纸、坐标纸。
3．植物原料，如银耳、木耳、菜叶等。
四、实验试剂1．蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于l000ml体积分数为80％的硫酸中，当日配制使用。
2．标准葡萄糖溶液(0.1mg／m1)：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1 000ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。
3．6mol／L HCl溶液：50ml盐酸，加水至100ml。
4．10％NaOH溶液：称取10g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100ml。
五、操作步骤1．葡萄糖标准曲线的绘制取干净试管6支，按下表进行操作。
以吸光度为纵坐标，各标准液浓度(mg／m1)为横坐标做图。
2．样品中还原糖的提取和测定称取植物原料干粉0.1～0.5g，加水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
于50℃水浴中保温半小时（使还原糖浸出），取出，冷却后定容至100ml。
过滤，取lml滤液进行还原糖的测定：吸取lml总糖类溶液置试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4ml蒽酮试剂，沸水浴中准确加热10min，取出用自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
总糖的测定-蒽酮比色法
实验一总糖的测定-蒽酮比色法一、实验目的（1）学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。
（2）学习723型分光光度计的原理和操作方法。
二、实验原理总糖是指样品中的还原糖及在本法测定条件下水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糠醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。
溶液含糖量在每毫升150微克以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用，样品不必经过水解。
三、实验材料、器材与试剂1、材料白薯。
2、器材（1）试管（或具塞试管）及试管架；（2）吸量管；（3）沸水浴；（4）冰浴；（5）723型分光光度计。
2、试剂（1）蒽酮试剂：称取100mg蒽酮溶于100mL98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。
（2）葡萄糖标准溶液（100μg/mL）:精确称取100mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000mL。
（3）样品溶液：称取500g市售白薯，洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱布压滤、弃滤液留渣，将渣放入烘箱内80℃～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，过筛区100目筛下物为待测样品。
（也可用市售红薯面粉代替）取样品在烘箱内150烘干，恒重后，精确称取1～5g，置于锥形瓶中，加入80mL沸蒸馏水，放入沸水浴。
不时摇动，提取半小时。
取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。
冷却至室温，用蒸馏水定容至100mL。
四、实验方法(1)制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，编号后按下表操作。
每管加入葡萄糖标准液和谁后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置于冰浴中迅速冷却。
待各管溶液达室温后，用1cm厚度的比色皿，以第一管为空白，在620nm处迅速测其余各管的光吸收值。
然后以第2～7管溶液含糖量μg数为横坐标，吸光度（A620nm）为纵坐标，画出含糖量与A620nm 的相关标准曲线。
总糖的测定实验报告
总糖的测定实验报告一、实验目的总糖是指样品中还原糖和非还原糖的总和。
本次实验的目的是掌握总糖测定的原理和方法，学会使用相关仪器和试剂进行准确的测定，并通过实验数据的处理和分析，得出样品中总糖的含量。
二、实验原理总糖的测定通常采用蒽酮比色法。
糖类在浓硫酸的作用下，可脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色复合物。
在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，通过比色法可以测定出样品中总糖的含量。
三、实验仪器与试剂1、仪器分光光度计恒温水浴锅电子天平容量瓶（100ml、50ml、25ml）移液器移液管（1ml、2ml、5ml、10ml）具塞刻度试管（25ml）玻璃棒漏斗滤纸2、试剂蒽酮试剂：称取 02g 蒽酮溶于 100ml 浓硫酸中，当日配制使用。
葡萄糖标准溶液（100μg/ml）：准确称取 01g 无水葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至 1000ml。
样品溶液：将待测样品经过适当处理后，制成一定浓度的溶液。
四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制取 6 支 25ml 具塞刻度试管，分别编号为 0、1、2、3、4、5。
按表 1 加入葡萄糖标准溶液和蒸馏水。
｜试管编号|0|1|2|3|4|5|｜｜｜｜｜｜｜｜｜葡萄糖标准溶液（ml）｜0|02|04|06|08|10|｜蒸馏水（ml）｜10|08|06|04|02|0|｜葡萄糖含量（μg）｜0|20|40|60|80|100|向各试管中迅速加入 5ml 蒽酮试剂，摇匀后立即放入沸水浴中加热10min，取出后用流水冷却至室温，在 620nm 波长下，以 0 号管为空白对照，测定各管的吸光度值。
以葡萄糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品溶液的制备称取适量的样品，经过粉碎、研磨等处理后，用蒸馏水溶解并定容至一定体积。
若样品溶液中含有较多杂质，可先用滤纸过滤。
3、样品溶液的测定吸取 1ml 样品溶液于 25ml 具塞刻度试管中，加入 4ml 蒸馏水，再迅速加入 5ml 蒽酮试剂，摇匀后立即放入沸水浴中加热 10min，取出后用流水冷却至室温。
实验1-蒽酮比色定糖法
2. 样品含糖量测定：无蛋白糖溶液样品 溶液，吸取1mL置试管中，再加入4mL蒽 酮 试剂，沸水浴中煮沸10分钟，取出后 冷却10min后比色，其他条件与做标准曲 线相同，测得的吸光度值由标准曲线查 算出样品液的糖含量。
3. 应用EXCEL处理数据，得出线性方程，由 此计算样品糖含量(mg/ml) 。
五、实验结果 六、结果讨论：
1，分光光度法（比色法）的原理 2，蒽酮比色定糖法和其它定糖方法比较的优劣 3，水果中糖的提取方法
蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的 颜色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋 白质时，反应不稳定，呈现红色。对于特定 的糖类，反应较稳定。
本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡 萄糖含量。
三，实验试剂
(1) 蒽酮试剂：取0.2g蒽酮溶于100mL 8萄糖 溶液(0.1mg/mL)： (可滴加几滴 甲苯作防腐剂)；
(3) 糖样品溶液。
四 、实验操作步骤
1. 制作标准曲线：
取干试管6支，依次加入标准糖溶液 0， 0.1，0.2，0.3,0.4，0.5mＬ,并依次用蒸馏 水补足体积到1mL，各管均加入蒽酮试剂4mL， 震摇混匀。沸水浴准确煮沸10 min，室温放 置10min，用1号试管溶液调零，比色测定 A620（同时测定样品）。用标准糖溶液浓度 为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线。
朗伯-比尔定律
A=lg(1/T)=Kbc
A：为吸光度, T：为透射比,是透射光强度比上入射光强度 c：为吸光物质的浓度 b：为吸收层厚度
物理意义：是当一束平行单色光垂直通过某一均匀 非散射的吸光物质时,其吸光度A与吸光物质的浓度c 及吸收层厚度b成正比.
二、实验原理
蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。 蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基， 戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝绿 色，在620nm处有最大吸收。
蒽酮比色法——精选推荐
蒽酮比色法1．原理糖与硫酸起反应，脱水生成经甲基映喃甲醛(经甲基糖醛)，再与蒽酮缩合成蓝色化合物，其呈色深浅与溶液中糖的浓度成正LL。
单糖、双糖、糊精、淀粉等糖类都直接与试剂发生作用，因此不需经过水解(如要求测定不包括糊精和淀粉的糖类，则预先将它们除去)。
反应式(以葡萄糖为例)如下：本法在20一200mg儿含糖范围内呈良好的线性关系。
2．试剂(1)蒽酮试剂：称取0．2g蒽酮和1g硫脲(阻氧化剂)置于烧杯中，缓慢加入100mL浓硫酸，边加边搅拌，溶解后呈黄色透明溶液。
将其贮存于棕色瓶中，最好现配现用，置冰箱中保存可存放约2周。
(2)葡萄糖标准溶液：先配成1g儿的葡萄糖溶液，然后分别吸取1、2、4、6、8、10mL分别置于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，可得10、20、40、60、80、100mg儿的葡萄糖系列浓度。
3．测定吸取样液1mL(含糖20一80mg儿)、系列标准糖液、蒸馏水各1mL，分别置于8支试管中，沿壁各加入5mL冷的恿酮试剂，混匀，于试管口盖上玻璃球，在沸水浴中加热10min，取出在流水中冷却20min后，在620nm波长下，以试剂空白调零，测定各A 620nm值，作标准曲线。
与曲线对照，求出样品含糖总量。
4．说明(1)如提取液中存在较多可溶性蛋白质和色素，影响比色，可用氢氧化钡作为沉淀剂。
(2)如要求测定结果不包括淀粉，应该用80％乙醇作提取剂，以避免淀粉和糊精溶出。
(3)蒽酮反应颜色的深浅随温度条件和加温时间而变化。
葡萄糖显色高峰在100℃下，加热10min后出现；而核糖的显色高峰在同样温度下，加热3min后出现。
因此，采用此法，控制反应条件很重要。
4．结果计算总糖(以葡萄糖计，％)＝此c×稀释倍数×10-4式中：c——从标准曲线查得的糖浓度，ppm；将ppm换算为％的系数。
5．说明与讨论①该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高、试剂用量少等优点。
总糖分测定(蒽酮比色法)
一目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法二原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。
三实验器材及试剂马铃薯干粉可调试移液器或移液管可见分光光度计（723型）电子分析天平水浴锅电炉子蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。
四、操作1.制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。
以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/ml ）为横坐标作图得标准曲线。
表1 蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作沸水浴中准确煮沸10min，取出用流水冷却，室温放10min,于620nm处比色葡萄糖浓度（mg/ml）2.样品含量的测定样品液的制作：精确称取马铃薯干粉0.1g置于锥形瓶中—→加入30ml沸水—→沸水浴30min（不时摇动）—→取出，3000rpm离心10min（或过滤）—→反复洗涤残渣2次—→合并滤液—→冷却至室温—→定容到50ml的锥形瓶中—→再从中取出1ml，再定容到10ml 的容量瓶中样品液的测定：（1）取4支试管，按照表2加样（加蒽酮时需要冰水浴5min冷却）表2 蒽酮比色法定糖——样品的测定（2）加样冷却完成后置沸水中煮沸10min，取出流水冷却放置10min，620nm处比色测量各管OD值。
（3）以1号试管作为调零管，2、3、4号管的OD值取平均后从标准曲线上查出样品液相应的含糖量。
3．结果计算：C×Vw = ————×100%m，式中w：糖的质量分数（%）C：从标准曲线中查出的糖质量分数（mg/ml）V：样品稀释后的体积（ml）m：样品的质量（ml）原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化。
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
蒽酮比色定糖法的讲解
样品糖含量(%) =(A×C/W)×100
A-样品稀释后的体积 1000 C-标准曲线上查出的糖含量（µg） W-样品重量（g）10
样品糖含量(%) =(C×V1×D/W×V2×106)×100
C-标准曲线上查出的糖含量（µg）
V1-提取总体积（ml）10
的吸收效应，不同的物质具有各自选择性 的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液 时，能量会被吸收而减弱，光能量减弱的 程度和物质浓度有一定比例关系，即符合 于比色原理：朗伯-比尔定律
光吸收定律
➢ 朗伯（Lambert）定律：一束单色光通过吸光物质的
溶液后，光吸收程度（吸光度）与溶液液层厚度成正比。
即： A lg I0 lg 1 kb
➢单色器：由入射狭缝、准直透镜、色散元件、聚焦透镜 和出射狭缝构成。
➢玻璃吸收紫外光，所以玻璃棱镜仅用于350-3200nm波长 范围，只能用于可见分光光度计；石英（ 185-4000nm ） 则可用于整个紫外-可见光区。
➢光栅利用光的衍射与干涉作用，其优点是适用波长范围 宽、色散均匀、分辨率高；但其缺点是各级光谱有重叠而 产生相互干扰。
总糖是指单糖（葡萄糖、果糖）、双糖（蔗 糖、麦芽糖、乳糖）的总量。
2、总糖的测定是以还原糖的测定为基础。
➢ 常用的方法有直接滴定法，蒽酮比色法 等，常以转化糖计。
三、实验目的
➢ 学习分光光度法的基本原理 ➢ 学习对食品中糖含量进行测定的方法
四、实验原理
➢ 分光光度法基本原理： 溶液中的物质在光的激发下，产生对光
蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。 蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基， 戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝 绿色，在620nm处有最大吸收。
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总糖测定——蒽酮比色法
一、原理：
单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：
1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、
2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：
（一）样品处理：
称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定
吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：
总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4
式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；
10-4：将ppm换算为%的系数
五、说明与讨论
1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
3、反应液中硫酸的浓度高达60%以上，在此高酸度条件下，在沸水浴中加热，可使双糖、淀粉等发生水解，再与蒽酮发生显色反应。
因此测定结果是样液中单糖、双糖和淀粉的总量。
如要求测定结果不包括淀粉，应该用80%乙醇作提取剂，以避免淀粉和糊精溶出。
此外，在测定条件下，纤维素也会与蒽酮试剂发生一定程度的反应，因此应避免样液中含有纤维素。
4、蒽酮试剂不稳定,易被氧化变为褐色，一般应当天配制，添加稳定剂硫脲后，在冷暗处可保存48小时。
5、此法要求样液必须清澈透明，加热后不应有蛋白质沉淀，如样液色泽较深，可用活性炭脱色。