药代动力学实验 ppt
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M inutes
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标准加入法举例 • 废水样品中五氯苯(PCP)的分析
PCP
4 ppm 3 ppm 2 ppm 1 ppm
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色谱柱的存放
• 存放前的处理
– 除去杂质、盐
• 合适的存放溶剂 • 避免色谱柱床的干枯 • 避免机械震动 • 防止细菌生长 • 注意存放的温度
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液相色谱对流动相的要求
• 除色谱柱对流动相对的要求外,还有∶
– 与检测器匹配 – 脱气 – 避免卤素离子(不锈钢系统) – 溶剂的粘度 –
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• 抽真空
– 同上,一般在溶剂抽滤的同时,也有脱气的效果
• 超声波
– 简单,但效果不理想。
• 通惰性气体(一般用氦气)
– 可保持连续脱气,多用于低压梯度
• 脱气机
– 可保持连续脱气,多用于低压梯度
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色谱峰定性
• 鉴别每个色谱峰
– 通过比较保留值(通常是保留时间)的方法,找 到各色谱峰所对应的组份
– 碳十八、碳八、胺基等基团 – 反相色谱固定相多为键合相
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Байду номын сангаас
10
对HPLC柱的了解
• 色谱柱分类 • 填料,含碳量,基质,粒径 • 色谱柱的应用 • 正相柱,反相柱,预处理柱 • 色谱柱的规格 • 岛津 Shimadzu VP-ODS; 150L×2.0; 5μm;
柱号 8082693.
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键合相色谱柱
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常用的定量方法
• 峰面积百分比法
– 由于检测技术的影响,在液相色谱中不常用
• 外标法
– 在液相色谱中用的最多
• 内标法
– 准确,但是麻烦 – 在标准方法中用的最多
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外标法定量 • 配制一系列已知浓度的标样
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外标法定量(二) • 实际色谱图
5,000
4,000
响应值 (峰面积)
3,000 2,000
静注加替沙星在家兔体内的药代动力学研究
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4
HPLC原理与标准操作规程(SOP)
1.HPLC的组成 2.分配色谱的原理 3.色谱柱 4.流动相 5.定性与定量方法 6.样品的预处理 7.反相色谱分析方法的开发
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5
High Performance Liquid Chromatography
HPLC 的组成
• 以硅胶为基质,通过化学键合方式把碳十八、碳 八、胺基等基团联在基质上,作为固定相。
• 优点∶
– 固定相稳定,不易流失 – 应用广泛,可使用多种溶剂 – 消除硅羟基的不良影响
• 缺点∶
– pH值不能小于3 – 同样填料,各种牌号色谱柱不尽相同
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反相C18色谱柱的活化
• 步骤一: • 90%甲醇1mL/min流速冲洗30min • 步骤二: • 10%甲醇1mL/min流速冲洗30min • 步骤三: • 90%甲醇1mL/min流速冲洗60min
• Pump 泵 • Injector/Autosampler 进样器/自动进样器 • Column 色谱柱 • Detector 检测器 • Data System/Integrator 数据系统/积分仪表
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6
高效液相色谱系统
色谱泵 进样器
数据处理 检测器
色谱柱
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高效液相色谱系统
SHIMADZU LCMS-2010EV
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LC-MS/MS Thermo TSQ Quantum Access
分配色谱的分离机理
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9
分配色谱概述
• 反相色谱的主要类型,基于分子的极性分离 • 洗脱次序:一般为反相,即极性高的先被洗脱 • 常用的流动相:
– 有机溶剂如甲醇、乙腈,水 – 应用添加剂,成为离子对、离子抑制方法
• 常用固定相:
Minutes
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Minutes
0.00 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00
流动相的脱气
• 流动相脱气的目的
– 使色谱泵的输液准确
• 输液均匀准确,并且脉动减小 • 保留时间及色谱峰面积的重现性提高
– 提高检测的性能
• 防止气泡引起的尖峰 • 基线稳定,信噪比增加 • 溶剂的紫外吸收本底降低
– 保护色谱柱
• 减少死体积 • 防止填料的氧化
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流动相脱气的方法
• 加热
– 简单,如同抽真空一起使用,其效果很好。但容易造成流动相组 成的变化
药物代谢动力学实验
赵娣 中国药科大学药代研究中心
2012年10月16日
神农尝百草
传说神农一生下来就是个 “水晶肚”,几乎是全透明的, 五脏六腑全都能看得见,还能 看得见吃进去的东西。那时候, 人们经常因乱吃东西而生病, 甚至丧命。神农为此决心尝遍 百草,能吃的放在身体左边的 袋子里,介绍给别人吃;不好 吃的就放在身体右边袋子里, 作药用。不能吃的就提醒人们 注意。
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2
药物代谢动力学
定量研究药物(包括外来化学物质)在生物体内吸收、分布、排泄和代谢(简 称体内过程)规律的一门学科。
• HPLC-UV ?
生物样品 常用测
定方法
•GC-MS ?
数据处理分析
•LC-MS/MS ?
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3
实验安排
• 1.HPLC原理与标准操作规程(SOP) • 2.实验设计与动物实验 • 3.样品处理与方法开发 • 4.定性定量与分析测定 • 5.数据处理与药动学参数计算 • 6.实验报告
– 大多数情况下用比较保留时间来定性
即所谓:
保留时间相同,可能是同样的组份 保留时间不同,肯定不是同样的组份
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用保留时间定性 • 用“标样”的保留值定出被测组份的位置
0 .4 0
E thylparaben
0 .3 5
0 .3 0
0 .2 5
AU
0 .2 0
0 .1 5
U racil
P ropylparaben