鸡胚接种技术分析
家禽胚蛋注射技术的应用研究(综述)(2)
家禽胚蛋注射技术的应用研究(综述)（2）随着科技的发展和进步，家禽产业也在不断壮大和崛起。
在养殖业中，家禽胚蛋注射技术的应用日益广泛，成为提高母鸡繁殖力、改良品种、提高养殖效益的重要途径之一。
本文将就家禽胚蛋注射技术的应用研究进行综述，旨在全面、深入地了解和探讨胚蛋注射技术在家禽养殖中的应用及未来发展方向。
一、家禽胚蛋注射技术的原理和方法1. 胚胎发育阶段家禽胚胎的发育过程主要分为预囊期、囊胚期、早期胚胎期、中期胚胎期和晚期胚胎期。
胚蛋注射技术主要应用在早期胚胎期，此时胚胎细胞分化能力较强，对外界信息的感知和响应能力较强，因此是实施基因编辑和转基因技术的理想时机。
2. 注射方法家禽胚蛋注射的常见方法有以下几种：倒置法、穿刺法、开壳法和电穿孔法。
倒置法是将鸡蛋倒置放置在特制的孵化架上，用针管从卵殼蓋的突起处穿刺，通过孔道向胚胎腔内注射药物或细胞。
穿刺法是直接将针管插入卵壳，穿透胚胎腔，进行注射。
开壳法是先将部分卵壳剥离，然后进行注射，最后用胶布封住切口。
电穿孔法是通过电磁脉冲引起胚胎腔内细胞膜通透性增加，从而实现有效的注射。
二、家禽胚蛋注射技术在基因编辑中的应用1. 基因敲除通过CRISPR/Cas9技术，可以在早期胚胎期对家禽进行基因敲除。
利用合成的CRISPR 引物和Cas9蛋白，经由适当的途径注射到鸡胚蛋中，从而破坏目标基因的功能。
这种技术使得人类可以更精确地改变家禽遗传信息，实现对特定遗传特性的调控。
2. 基因转移CRISPR/Cas9技术也可以用于将外源基因导入家禽胚胎。
通过设计引物和向导RNA，可以在胚蛋早期期进行精准的基因编辑和转移。
这为培育具有抗病、高产、高营养价值的家禽品种提供了可能。
家禽疫苗接种是提高禽类免疫力，减少疾病传播的关键措施。
而家禽胚蛋注射技术的应用为家禽疫苗接种提供了新的途径。
通过在胚胎期对家禽胚蛋进行疫苗注射，可以实现在早期期就使禽类免疫系统获得对特定病原体的抗体保护，大大提高禽类的免疫能力。
《鸡胚接种技术》课件
卫生管理
保持接种器具和操作区域的清 洁，防止细菌或病毒的污染。
鸡胚接种后的常见问题与处理方法
问题 鸡胚死亡 细菌感染 发育异常
处理方法
检查温度、湿度和操作技术是否合适，并调整相 应参数。
进行必要的消毒处理，更换培养基，增加卫生管 理措施。
观察并记录发育情况பைடு நூலகம்与预期结果进行对比，调 整相关因素。
总结与展望
鸡胚接种技术是一项重要的科研工具，通过研究鸡胚的发育过程，可以获得 对生命科学和医学领域的重要启示。未来，我们将继续探索和优化鸡胚接种 技术，为科学研究做出更大的贡献。
《鸡胚接种技术》PPT课件
鸡胚接种技术简介 影响鸡胚成活的因素 鸡胚接种前的准备工作 鸡胚接种过程详解 鸡胚接种后的管理要点 鸡胚接种后的常见问题与处理方法 总结与展望
鸡胚接种技术简介
鸡胚接种技术是一种重要的研究工具，用于研究鸡胚在发育过程中的变化。 研究人员可以通过接种不同物质来观察鸡胚的反应和发育情况，从而获得重 要的科学发现。
鸡胚接种前的准备工作
1 设备准备
确保接种所需的设备和材料已准备齐全，包括培养皿、接种针和培养基等。
2 培养基准备
根据实验需求制备适当的培养基，确保其成分和浓度符合实验要求。
3 消毒处理
对接种器具和操作区域进行彻底的消毒处理，以避免细菌或病毒的污染。
鸡胚接种过程详解
1
接种准备
2
将鸡胚放置在适当的接种器具中，准备
好需要使用的培养基和接种针。
3
鸡胚获取
选择具有良好质量的鸡胚，并在适当的 环境中进行保持，以避免其受到外界环 境的影响。
接种过程
使用接种针将所需物质接种到鸡胚中， 确保操作的准确性和稳定性。
鸡胚接种技术
实验动物的遗传学控制分类
近交系(inbred strain)：是指经过连续20代以上全 同胞或亲子交配培育的动物品系。特点有:基因型相 同，表现型一致；对外来刺激反应一致；实验结果重 复性好，可比性强。 封闭群(closed colony)：是指一个不从外界引入新 的血缘，非近亲交配方式繁殖一定代次的实验动物群 体。特点是群体遗传特异性相对稳定，个体间具有杂 合性，存在一定差异。 突变系(mutant strain)：是指由于遗传基因发生突 变而具有某些特殊性状的动物，如肥胖症小鼠、糖尿 病小鼠等。
羊膜
胚胎的最内层包被，含羊水，胚胎在其中。
尿囊腔
位于绒毛尿囊腔和羊膜之间 ，胚胎排泄器 官含5－20ml尿囊液，含大量的尿酸盐， 为减少沉淀，盐水稀释再4℃保存。
卵黄囊
主要营养的储藏场所，为胚胎提供营养。
卵白
外于卵的锐端，为胚胎发育晚期提供营养。
第二节 鸡胚的孵育和检查
受精鸡卵的供给
— 没有受到病毒和细菌的污染如新城鸡瘟病
鸡胚培养法的缺点：
一般的病毒通常不使鸡胚产生特异性的感染指征。 卵黄中常常含有抗家禽病原体的母体抗体。 某些细菌、衣原体和病毒能够从感染的母鸡传递 到鸡胚。 通常鸡胚含有白血病病毒。 在鸡食物中加入抗菌素，母鸡吃后会传递给鸡胚， 鸡胚就会产生对立克次体和衣原体感染的抵抗。
第一节 鸡胚的结构与生理
第二章 鸡胚接种技术
一、概况
1911年Rous和Murphy首先应用鸡胚培养 研究肉瘤病毒(Rous肉瘤)的繁殖。 1938年Goodpasture和Burnet等应用鸡胚 繁殖病毒、Cox应用卵黄囊培养立克次体。
鸡胚培养法的优点：
鸡胚的组织分化程度低，可选择适当途 径接种，病毒易复制，感染病毒的膜和 液体含大量病毒。 鸡胚是一整体，有神经血管的分布及脏 器的构造。 来源充足，操作简单，通常是无菌的， 对接种的病毒不产生抗体。
鸡胚接种实验报告
一、实验目的1. 掌握鸡胚接种病毒的方法和步骤。
2. 了解病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。
3. 学习病毒分离和培养的基本原理。
二、实验原理鸡胚接种是一种常用的病毒分离和培养方法。
病毒接种于鸡胚后，能够在鸡胚中繁殖，从而便于观察和分析病毒的生物学特性。
本实验主要采用尿囊腔接种法，将病毒接种于鸡胚尿囊腔内，观察病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。
三、实验材料1. 实验动物：9-11日龄的鸡胚。
2. 实验试剂：新城疫病毒悬液、生理盐水、碘酒、酒精、消毒棉球等。
3. 实验仪器：照蛋器、无菌手术刀、镊子、注射器、剪刀、平皿等。
四、实验方法1. 鸡胚准备：取9-11日龄的鸡胚，用碘酒和酒精消毒鸡胚蛋壳，用手术刀在鸡胚气室处划一小孔，用注射器吸取适量新城疫病毒悬液。
2. 尿囊腔接种：将鸡胚置于卵盘上，气室端向上，用注射器将病毒悬液注入鸡胚尿囊腔内，注入量约为0.1-0.2ml。
3. 孵育：将接种后的鸡胚放入37℃孵卵箱中孵育48-72小时。
4. 观察：定期观察鸡胚的生长发育情况，记录死亡、畸形等现象。
5. 病毒分离：取出死亡鸡胚，无菌操作下取出尿囊液，进行病毒分离和培养。
五、实验结果1. 接种后，部分鸡胚出现死亡现象，死亡时间集中在接种后24-48小时。
2. 死亡鸡胚的尿囊液中检测到新城疫病毒。
3. 成活鸡胚生长发育正常，未出现明显异常。
六、实验讨论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法，适用于多种病毒的研究。
2. 尿囊腔接种法是一种常用的鸡胚接种方法，适用于新城疫病毒、流感病毒等多种病毒。
3. 本实验结果表明，新城疫病毒能够在鸡胚中繁殖，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。
七、实验结论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法。
2. 尿囊腔接种法适用于新城疫病毒等多种病毒的分离和培养。
3. 本实验成功分离和培养了新城疫病毒，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。
八、实验心得1. 实验过程中，无菌操作至关重要，需严格按照无菌操作规程进行。
实验鸡胚接种
实验鸡胚接种
xx年xx月xx日
CATALOGUE
目录
实验准备实验步骤实验数据分析实验结论实验讨论与展望
01
实验准备
1
实验人员要求
2
3
了解微生物的种类、特点、致病性及检验方法等。
具备微生物学基础知识
熟悉接种、分离、培养、鉴定等实验操作规范，并能够熟练操作。
掌握实验操作技能
遵守实验室的各项安全规章制度，注意个人防护和实验室废弃物的处理。
培养时间
根据实验需要，确定鸡胚培养的时间，以便观察和记录实验结果。
鸡胚培养
03
实验数据分析
数据记录
记录实验进行的日期。
实验日期
记录所使用鸡胚的编号，方便追踪。
鸡胚编号
记录接种的病毒或细菌剂量。
接种剂量
记录鸡胚在实验过程中表现出的症状和时间。
症状表现
数据转换
将非数值型数据进行转换，以便进行数学分析。
多样性
根据实验需求，选择不同品种、来源的鸡胚，以满足实验的多样性和代表性。
鸡胚选取
选用精细、锋利的接种针，灭菌烘干后备用。
鸡胚接种
准备接种工具
将鸡胚固定在操作台上，用接种针在鸡胚的尿囊膜上选择适宜的位置，进行无菌接种。
接种操作
接种后对鸡胚进行密封处理，以防止外界微生物的侵入。
接种后处理
培养环境
为鸡胚提供适宜的温度、湿度和气体环境，以保证鸡胚的正常发育和繁殖。
数据清洗
去除异常值、缺失值和重复数据，确保数据准确性。
数据聚合
将多个数据源的数据聚合在一起，以便更全面地评估实验结果。
数据处理
03
结论提取
基于分析和解释，提取有关实验的结论，为后续研究提供参考。
鸡胚接种技术
这些病毒被接种到尿囊腔后，可在内皮细胞中复制，
复制的病毒被释放到尿囊液中，因此，在尿囊液中喊 与大量的病毒。
鸡胚接种技术
——鸡胚的接种途径和方法
✪
卵黄囊接种：
这些大的病原体能在卵黄囊的内皮细胞中快速生长。
用于虫媒病毒、衣原体及立克次体等的分离和繁殖，
鸡胚接种技术
——鸡胚的结构与生理 ✪ 鸡胚的发育过程：Day 3
鼻、腿、翅开始形成，器官出现。 尿囊开始长出，胚胎的位置与蛋的长轴垂直。 胚胎与延伸的卵黄囊血管形似蚊子。
鸡胚接种技术
——鸡胚的结构与生理 ✪ 鸡胚的发育过程：Day 4
尿囊和羊膜腔形成。 卵黄体积继续增大，卵黄囊血管包围卵黄近1/3。 胚胎与卵黄囊血管形似蜘蛛。
主要用于分离和繁殖在绒毛尿囊膜上产生斑点状和痘 可在绒毛尿囊膜上滴定这些病毒，通过产生斑和痘的 数目来计算感染性病毒颗粒的数目。 还可用于抗体滴定，因为斑和痘数目减少的程度与抗 体浓度有关。
鸡胚接种技术
——鸡胚的接种途径和方法
✪
尿囊腔接种：
应和传代培养。
用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的适
✪ 卵黄囊
主要营养的存储场所，在胚胎发育早期供给鸡胚营养
✪ 卵白
在胚胎发育晚期供给鸡胚营养
鸡胚接种技术
——鸡胚的孵育和检查
✪ 受精鸡卵的选择
接种病毒的受精鸡卵应未感染已知病毒或其它微生
物，最好来自无特定病原体(Specified Pathogen
Free, SPF)鸡群。 受精卵的壳最好是白色的，利于检卵灯观察鸡胚的 发育情况。 受精卵必须新鲜，保存在5~20℃不超过10天。
鸡胚接种技术
——鸡胚的孵育和检查
病毒鸡胚接种技术心得体会
病毒鸡胚接种技术心得体会
作为一种常见的病毒检测方法,病毒鸡胚接种技术可能有以下心得体会：
1. 病毒鸡胚接种技术需要实验室条件比较高,需要专门的实验室和专业的人员进行操作,操作过程需要严格遵守操作规程和安全规范。
2. 接种病毒前需要对鸡胚进行充分的检测,确保鸡胚的质量符合要求,否则会影响实验结果。
3. 操作过程中需要注意实验器材的消毒,避免污染和交叉感染的发生。
4. 实验中需要对病毒的种类进行合理的分类和识别,以便进行正确的对照实验,确保实验结果的正确性。
5. 在实验评价中,需要严格按照规范进行评价,对实验结果进行定量化处理和对比分析,以便有效地评估实验数据。
总之,病毒鸡胚接种技术需要严格遵守相关规范和操作规程,进行细致的实验操作和数据分析,以确保实验结果的可靠性和科学性。
鸡胚接种实验报告
鸡胚接种实验报告引言鸡胚接种实验是一种常见的生物学实验，通过将病毒或细菌接种于鸡胚中，我们可以观察到它们对胚胎发育的影响。
这种实验能够帮助我们了解病原体的传播途径、感染机制以及鸡胚对外界刺激的响应能力。
本文将就鸡胚接种实验的过程和观察结果展开论述，以期更好地了解和探索生命的奥秘。
实验材料和方法材料：新鲜鸡胚、病毒/细菌培养液方法：1. 准备培养基：将培养基配制好，并加热灭菌。
2. 取出鸡胚：在无菌条件下，取出新鲜的鸡胚，约为8-10天，保证胚胎仍处于发育阶段。
3. 接种病原体：在鸡胚卵黄囊的顶部，用无菌针缓慢注入病原体培养液。
4. 封胚：用胶带或蜡封好孔洞，保持接种处的无菌状态。
5. 孵化：将接种后的鸡胚放入孵化器中，保持适当的温度和湿度。
6. 观察：根据实验设计，每隔一段时间观察鸡胚的发育情况。
实验结果通过观察病原体接种后的鸡胚，我们可以得出一些有趣的结果。
1. 反应变化：不同病原体对鸡胚的反应变化具有差异。
一些病原体可能导致胚胎发育减缓或停滞，而另一些病原体可能导致胚胎畸形或死亡。
这些结果提供了关于病原体对于胚胎发育的影响的线索。
2. 免疫响应：鸡胚对病原体的接种可能会触发免疫响应。
我们可以观察到鸡胚的免疫系统是否能够有效地对抗病原体的入侵。
免疫细胞的增多、炎症反应的出现都可能是这一免疫响应的体现。
3. 病变形态：观察鸡胚的病变形态对于了解病原体的感染机制和病变过程非常重要。
我们可以观察到病原体在鸡胚中的定位、侵入细胞的方式以及细胞破坏的情况。
这些观察结果有助于研究病原体的致病机制，并为预防和治疗提供依据。
4. 实验变量：在鸡胚接种实验中，还可以引入一些实验变量，比如改变接种浓度、不同时间点的接种等，以观察这些变量对实验结果的影响。
通过对变量的控制和对比，可以更加准确地判断病原体对鸡胚的影响。
结论鸡胚接种实验是一种有效的方法，可以研究病原体与胚胎发育之间的关系。
通过观察鸡胚的发育情况和病变形态，我们可以了解病原体的感染机制以及胚胎对外界刺激的响应能力。
鸡胚的接种技术 - 养鸡技术
鸡胚的接种技术-养鸡技术张师杨（哈尔滨市阿城区畜牧兽医局150000）鸡胚接种技术用途广泛，除了可以分离培养病毒、支原体及衣原体等病原以确诊传染病外，还可用于病毒的鉴定，效价测定，致病力测定及制造疫苗、抗原等。
因此掌握鸡胚接种技术对进行传染病的研究和防制工作非常重要。
1选胚根据需要选用合适日龄的鸡胚，大多数病毒适于9～12日龄的鸡胚。
鸡胚应以白色蛋壳者为好，便于照蛋观察。
鸡胚应发育正常，健康活泼，不要过大、过小或畸形蛋孵化的胚。
鸡胚应来自健康无病的鸡群，而且不能含有可抑制所接种病毒的母源抗体，最好选用SPF鸡胚或非免疫鸡胚。
2. 照蛋定位接种前应在照蛋器下检查鸡胚，挑出死胚和弱胚。
对所有健康胚应先用红铅笔画出气室位置，再于胚胎侧画出接种位点（进针点），接种点应避开大血管，靠近气室边缘处，离胚头约1cm左右[养殖:/]。
3 接种照蛋定位完毕后，即可开始接种。
先用碘酊将接种位点和气室消毒，再用70%酒精脱碘，然后根据需要用三棱针或20号针头在蛋壳上打孔。
尿囊腔接种：最常用的接种方法，鸡新城疫、减蛋综合症病毒、传染性支气管炎病毒、法氏囊病毒等均可采用这种方法。
蛋壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎一侧近气室处所画位点打一小孔，用带5～7号针头的注射器插入孔内约1. 5cm，接种接种材料0. 1～0.2mL。
进针时针头与蛋壳应保持30℃角，不应垂直进针，注射完毕，立即用溶化的热石蜡将注射口和气室上小孔密封，然后放回37℃孵化箱孵化72～120h。
绒毛尿囊膜接种：主要用于痘病毒、喉气管炎病毒和马立克氏病毒等的分离培养。
将卵壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎侧靠近气室处避开大血管用电烙铁或钢锯条将蛋壳打开1个4mm见方的小口，用刀尖小心撬开蛋壳，不能损伤卵壳膜，形成卵窗。
用针尖轻轻挑破卵窗中心的卵壳膜，但不能损伤卵壳膜下的绒毛尿囊膜。
在针尖挑破处滴1滴灭菌生理盐水或甘油，然后用吸头在气室小孔上吸气，使胚内造成负压，这时卵窗处绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见生理盐水或甘油迅速渗入。
鸡胚接种实验报告
鸡胚接种实验报告
本次实验旨在观察鸡胚在不同条件下的发育情况，以及探讨不同因素对鸡胚发育的影响。
通过本实验的开展，我们希望能够更深入地了解鸡胚的发育过程，为相关领域的研究提供参考和支持。
首先，我们在实验室中准备了一批健康的鸡蛋，并将它们放置在适宜的温度和湿度条件下进行孵化。
在鸡蛋孵化的过程中，我们进行了一系列的观察和记录，包括鸡胚的发育情况、胚胎膜的形成、器官的发育等。
同时，我们还设置了不同的实验组，分别在不同的环境条件下进行观察和比较。
在实验过程中，我们发现了一些有趣的现象。
首先，我们发现在恒温恒湿的条件下，鸡胚的发育速度更快，胚胎膜的形成也更加完整。
而在温度或湿度波动较大的条件下，鸡胚的发育情况则明显受到影响。
其次，我们还观察到在不同营养条件下，鸡胚的发育情况也存在差异。
营养充足的情况下，鸡胚的发育速度更快，器官的发育也更加完善。
通过本次实验，我们得出了一些初步的结论。
首先，恒温恒湿的条件对鸡胚的发育至关重要，温度和湿度的波动会严重影响鸡胚的发育情况。
其次，营养充足也是保证鸡胚正常发育的重要条件，缺乏营养会导致鸡胚的发育受到影响。
总的来说，本次实验为我们提供了一些有益的启示，对于鸡胚的发育规律有了更深入的了解。
在今后的研究中，我们将进一步探讨鸡胚发育的机制，以及寻找更好的方法来促进鸡胚的健康发育。
希望通过我们的努力，能够为相关领域的发展做出一些贡献。
通过本次实验，我们对鸡胚的发育过程有了更深入的了解，也为相关领域的研究提供了一些有益的参考。
希望我们的努力能够为鸡胚发育的研究和应用提供一些有益的支持。
鸡胚疫苗的生产工艺与疫苗效力
鸡胚疫苗的生产工艺与疫苗效力鸡胚疫苗是一种常用的禽流感疫苗，也被广泛应用于其他禽类疾病的预防。
它制备简便，成本较低，并具有高效、安全、稳定等优点。
本文将详细介绍鸡胚疫苗的生产工艺和相关的评估标准，以及对其疫苗效力进行探讨。
一、鸡胚疫苗的生产工艺1. 选取合适的感染性毒株制备优质鸡胚疫苗首先需要选取合适的感染性毒株。
这些毒株应具有高度传染性、强毒力，并且能够在鸡胚内复制和增殖。
常用的毒株包括亚型特异性H1N1、H5N1等。
2. 繁殖与扩增将选取好的感染性毒株接种在鸡或鸭等动物中进行扩增。
通过收集其感染性分泌物，提取出含有活性病毒颗粒的液体，作为进一步制备鸡胚疫苗的原料。
3. 鸡胚禽流感疫苗的制备在选取好的优质鸡胚上进行疫苗生产。
首先将感染性毒株接种在鸡胚内，经过一定时间的孵育和培养，得到包含活性禽流感病毒的鸡胚液。
然后，对这些液体进行杀菌处理以去除残留细菌，并添加适当的辅料和稳定剂，最终制成鸡胚疫苗。
4. 疫苗外观检查与质量控制制备完成后，对鸡胚疫苗进行外观检查。
合格的鸡胚疫苗应该无异物悬浮物，并且具有清澈透明、无杂质、无沉淀等特点。
此外，还需要对其进行质量控制，确保疫苗含有足够数量的活性禽流感病毒颗粒。
5. 鸡胚疫苗包装与储存合格的鸡胚疫苗会被安全地封装于玻璃容器或注射器中，并进行密封保护。
然后，在低温条件下存放，以确保疫苗质量在有效期内不受损失。
二、鸡胚疫苗的效力评估1. 体外实验通过体外实验可以评估疫苗对禽流感病毒的中和能力。
常用的方法包括血凝试验、病毒滴度检测等。
这些试验可以评估疫苗制剂中抗原含量，以及其对特定毒株的中和效果。
2. 动物实验动物实验是评估鸡胚疫苗免疫保护效果的重要手段。
常用的动物模型包括雏鸡或成年鸡等。
通过给未免疫组与已免疫组进行感染性挑战，可以观察到未免疫组出现较为严重的禽流感表现，而已免疫组则表现较轻或不发生。
3. 临床观察除了实验室测试外，还需要进行大规模临床观察来评估鸡胚疫苗的效力。
实验一鸡胚接种课件
06 参考文献
参考文献
书籍名称：《实验动物学》 作者：XXX
出版年份：XXXX年
感谢您的观看
THANKS
实验一鸡胚接种课件
目录
CONTENTS
• 实验目的 • 实验材料 • 实验步骤 • 实验结果与分析 • 注意事项与安全防护 • 参考文献
01 实验目的
掌握鸡胚接种技术
掌握鸡胚接种的基本操作流程： 包括对鸡胚的选择、处理、接种
和观察等步骤。
Байду номын сангаас
熟悉接种工具的使用：如接种环、 注射器等，并了解其消毒和保养
病原体繁殖情况统计
繁殖数量
繁殖条件
通过显微镜观察和计数，统计了病原 体在鸡胚内的繁殖数量。发现病原体 在适宜条件下繁殖迅速。
分析了病原体繁殖所需的温度、湿度 等条件，有助于了解病原体的生态学 特性。
繁殖周期
记录了病原体从开始繁殖到达到一定 数量所需的时间，即繁殖周期。这对 于了解病原体生长特性和制定防治措 施具有重要意义。
方法。
了解不同接种方法的适用范围和 注意事项：如滴注法、注射法等。
了解鸡胚对不同病原体的反应
1 2
观察鸡胚对不同病原体的反应
如细菌、病毒等，记录其症状和病变。
分析鸡胚对不同病原体的抵抗力
了解哪些病原体能够引起鸡胚死亡或异常发育。
3
比较不同病原体对鸡胚的致病力
为研究病原体致病机制和疫苗研发提供参考。
数据分析与结论
数据处理
对实验数据进行整理、统计和分 析，以表格、图表等形式呈现实
验结果。
对比分析
将实验组与对照组的数据进行对 比分析，以评估实验效果和病原
体对鸡胚的影响。
病毒学实验一鸡胚接种培养
• 出勤率 • 实验过程中安静、有序、认真、无污染 • 实验报告书写 • 值日生打扫卫生
实验一 鸡胚接种培养
鸡胚结构
• 2、接种方法
• 病毒的鸡胚培养法主要有四种接种途径，即尿囊 腔、绒毛尿囊膜、羊膜腔和卵黄囊，不同的病毒
应选择各自适宜的接种途径，并根据接种途径确 定鸡胚的孵育日龄。
• 例：
实验器材
• 鸡胚、孵化设备、检卵器、钻孔器、蛋托、 超净台、冰箱、酒精灯、碘酒、酒精棉球、 注射器、蜡烛
实验方法
鸡胚孵化 • 将鸡卵气室向上放于蛋托上，置孵化器内，温度
37.5℃，相对湿度（45%～60%）条件下孵育， 从第3天开始每隔4~6h翻蛋一次。 • 第7~8天集中用检卵器验蛋一次，受精卵可见有 鸡胚，发育良好的胚胎可见清晰的血管及活的胚 胎，血管及其主要的分枝均明显，呈鲜红色，鸡 胚可以活动。未受精和死胚胚体固定在一端不动， 看不到血管或血管消散。剔除未受精卵和死胚。
痘类病毒
绒～11
嗜神经性病毒 卵黄囊
5～6
• 实验目的：掌握鸡胚的孵化和观察方法， 掌握尿囊腔接种与收获方法，了解鸡胚培 养的结果观察方式。
• 实验原理：尿囊腔接种法广泛应用于病毒 的适应和传代培养，病毒被注射到尿囊腔 后，可在内皮细胞中被复制，复制的病毒 被释放到尿囊液中，因此，在尿囊液中含 有大量的病毒。
注意事项
1 最好选用SPF鸡胚。 2 受精卵入孵后要注意翻蛋。 3 检卵时避免照蛋时间过长引起鸡胚温度下
降过大。 4 接种鸡胚时应尽可能避开血管丰富区域。 5 温箱底盘中要加入足够量的蒸馏水以保持
一定的湿度。
思考题
为什么要将接种后孵化24h内死亡的鸡胚剔除？
鸡胚接种
1 选用9～11日龄发育良好的鸡胚。 2 在接种前用检卵器观察并标记出胚胎的气室及胚胎位置，
鸡胚尿囊腔接种实训报告
一、实验目的1. 掌握鸡胚尿囊腔接种的基本操作技术。
2. 熟悉鸡胚尿囊腔接种在病毒分离与培养中的应用。
3. 了解鸡胚尿囊腔接种对病毒分离与培养的重要性。
二、实验原理鸡胚尿囊腔接种是一种常用的病毒分离与培养方法。
该法利用鸡胚尿囊腔作为病毒培养的场所，使病毒在尿囊腔内繁殖，从而获得病毒培养物。
鸡胚尿囊腔接种适用于多种病毒，如新城疫病毒、流感病毒等。
三、实验材料1. 9-11日龄健康鸡胚。
2. 病毒悬液（如新城疫病毒、流感病毒等）。
3. 无菌操作工具：无菌镊子、无菌剪刀、无菌注射器、无菌吸管、无菌培养皿、无菌滤纸等。
4. 无菌消毒剂：碘酊、酒精棉球等。
5. 温箱、孵化箱等。
四、实验步骤1. 鸡胚准备- 将鸡胚置于温箱中孵化，保持温度37.5-38.0℃，湿度60-70%。
- 在孵化过程中，每日翻动鸡胚2-3次，以防止粘连。
- 在孵化第5-6天，用照蛋器检查鸡胚发育情况，挑选发育良好的鸡胚。
2. 病毒悬液准备- 将病毒悬液置于无菌操作台中，用无菌吸管吸取适量病毒悬液。
3. 鸡胚尿囊腔接种- 将鸡胚取出，用无菌滤纸吸去表面水分。
- 在鸡胚气室部位，用碘酊和酒精棉球进行消毒。
- 用无菌剪刀在鸡胚气室部位剪一小孔，露出尿囊。
- 用无菌注射器吸取病毒悬液，注入尿囊腔内。
- 用无菌滤纸吸去多余病毒悬液。
4. 鸡胚孵育- 将接种后的鸡胚放回孵化箱中，继续孵化。
- 每日观察鸡胚的生长发育情况，记录死亡、病变等。
5. 收获病毒- 在接种后48-72小时，取出死亡鸡胚。
- 用无菌剪刀剪开鸡胚气室部位，撕去卵壳膜。
- 用无菌吸管吸取尿囊液，进行病毒分离与培养。
五、实验结果与分析1. 鸡胚尿囊腔接种成功后，大部分鸡胚在接种后48-72小时内死亡。
2. 死亡鸡胚尿囊腔内可见病毒繁殖的典型病变，如尿囊液增多、尿囊膜增厚等。
3. 收获的尿囊液经病毒分离与培养，可得到纯化的病毒。
六、实验总结1. 鸡胚尿囊腔接种是一种简单、实用的病毒分离与培养方法，适用于多种病毒。
病毒的鸡胚接种技术
病毒的鸡胚接种技术目的要求掌握鸡胚培养病毒的接毒和收毒方法，明确鸡胚培养病毒的应用。
仪器及材料受精卵、恒温箱、照蛋器、接种箱、蛋架、一次性注射器（1～5ml）、中号镊子、眼科剪和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、吸管、酒精灯、试管架、胶布、蜡、锥子、锉、煮沸消毒器、消毒剂（5%碘酊棉、75%酒精棉、5%石炭酸或3%来苏儿）、新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗。
方法与步骤（尿囊接种为例）1．选择9～12日龄的健康鸡胚，最好是SPF鸡胚。
为便于照蛋观察，以来航鸡蛋或其他白壳蛋为好。
选好后用孵化箱孵化，要注意温度、湿度和翻蛋。
孵化最低温度为36℃，一般为37.5℃，相对湿度为60%。
每日最少翻蛋3次。
健康鸡胚：照蛋时可见清晰的气室、血管及鸡胚的活动。
2．病毒材料的处理怀疑污染细菌的液体材料：加抗生素（青霉素1000IU和链霉素1000μg/ml）置室温1h或4℃冰箱12～24h→高速离心，取上清液→细菌滤器滤过除菌若用新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗，则无菌操作用生理盐水将其稀释100倍。
3．照蛋以铅笔划出气室、胚胎位置及接种的位置，标明胚龄及日期气室朝上立于蛋架上。
4．消毒先碘酊后酒精，由内向外呈同心圆状消毒5．打孔用灭菌小锥子在在气室中心或远离胚胎侧气室边缘，避开大血管进行打孔，孔径以1ml注射器针头容量刺入为宜。
6．注入病毒材料用一次性1ml注射器吸取新城疫病毒液垂直或稍斜插入气室，刺入尿囊，向尿囊腔内注入0.1～0.3ml。
7．封孔并继续孵化注射后，用熔化的石蜡封孔，置温箱中直立孵化3～7d。
孵化期间，每6h照蛋一次，观察胚胎存活情况。
弃去接种后24h内死亡的鸡胚，24h以后死亡的鸡胚应置0～4℃冰箱中冷藏4h或过夜（气室朝上直立），一定时间内不能致死的鸡胚也放冰箱冻死。
8．收毒收毒原则：（1）先冷藏再收毒。
（2）接种什么部位，收集什么部位。
（3）固液分开收集。
（4）无菌收集。
（5）冷冻保存。
收毒方法：无菌操作轻轻敲打并揭去气室顶部蛋壳及壳膜，用灭菌镊子夹起并撕开或剪开气室中央的绒毛尿囊膜，然后用灭菌吸管从破口处吸取尿囊液，注入灭菌青霉素瓶或试管内。
《鸡胚接种技术》课件
该技术广泛应用于生物医学、农 业、食品工业等领域，具有较高 的实用价值。
鸡胚接种技术的历史与发展
鸡胚接种技术最早可追溯到19 世纪末期，当时主要用于疫苗 生产。
随着科技的不断进步，鸡胚接 种技术在20世纪得到了迅速发 展，应用范围不断扩大。
目前，鸡胚接种技术已经成为 一种成熟的实验和生产手段， 为科学研究和技术创新提供了 有力支持。
鸡胚接种技术的应用领域
01
02
03
04
生物医学
用于疫苗生产、药物筛选、疾 病模型构建等。
农业
用于育种、品种改良、动物疫 病防治等。
食品工业
用于生产某些酶制剂、生物活 性物质等。
其他领域
如环保、生物安全等也涉及到 鸡胚接种技术的应用。
02
鸡胚接种技术的基本原理
鸡胚的结构与发育
鸡胚的结构
鸡胚由卵黄囊、羊膜、绒毛膜和 尿囊等组成，具有完整的胚胎发 育过程。
VS
病原鉴定
通过鸡胚接种技术，可以对分离出的病毒 进行生物学鉴定，确定病毒的种类、毒力 等。
抗体的制备与检测
抗体制备
利用鸡胚接种技术，可以制备针对各种病毒 的特异性抗体，用于治疗或诊断疾病。
抗体检测
通过鸡胚接种技术，可以检测血清中的抗体 水平，了解免疫状态或评估疫苗免疫效果。
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鸡胚接种技术的应用实例
疫苗的研发与生产
疫苗研发
利用鸡胚接种技术，可以研发针对各种病毒性疾病的疫苗，如流感疫苗、狂犬病疫苗等。
疫苗生产
鸡胚是生产疫苗的重要原材料，通过鸡胚接种技术，可以大量繁殖病毒，为疫苗生产提供足够的原材 料。
病原的分离与鉴定
病原分离
鸡胚接种技术
气室
功能主要是呼吸和调节压力。
绒毛尿囊膜
壳膜之下，主要是胚胎的呼吸器官。
羊膜
胚胎的最内层包被，含羊水，胚胎在其中。
尿囊腔
位于绒毛尿囊腔和羊膜之间 ，胚胎排泄器 官含5 20ml尿囊液，含大量的尿酸盐， 官含5－20ml尿囊液，含大量的尿酸盐， 为减少沉淀，盐水稀释再4℃保存。 为减少沉淀，盐水稀释再4℃保存。
三、注意事项
防止污染：鸡胚为一活的有机体，因此 防止污染： 要严格无菌操作。 动作要仔细，以免造成物理死亡。接种 后24小时内死亡应不计结果。 24小时内死亡应不计结果。 适宜的培养温度：
第四节
无菌试验
病毒的检测
— 目的:证实收集的鸡胚是否受到细菌的污染。 目的:证实收集的鸡胚是否受到细菌的污染。 — 方法: 方法:
第三节 鸡胚接种途径及方法
（一）羊膜腔接种
应用于从临床材料中分离流感病毒 应用于从临床材料中分离流感病毒等，病 临床材料中分离流感病毒等 毒感染后可收集羊水和尿囊液 毒感染后可收集羊水和尿囊液。 羊水和尿囊液。
接种步骤与方法
将10~12日龄的鸡胚在检卵灯上照视，标记气室及胚胎的位置。 10~12日龄的鸡胚在检卵灯上照视 标记气室及胚胎的位置。 日龄的鸡胚在检卵灯上照视， 消毒气室部位的蛋壳，在气室顶端钻出一约10mm 6mm的长方 10mm× 消毒气室部位的蛋壳，在气室顶端钻出一约10mm×6mm的长方 形裂痕，注意勿钻破壳膜。 形裂痕，注意勿钻破壳膜。 再次消毒钻孔区后，用灭菌的小镊子除去长方形卵壳和外层壳 再次消毒钻孔区后， 膜，并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上，使其透明，以便 并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上，使其透明， 观察胚胎的位置。 观察胚胎的位置。 将注射器刺向胚胎的腭下胸前，以针头拨动下颚及腿， 将注射器刺向胚胎的腭下胸前，以针头拨动下颚及腿，当进入 羊膜腔内时，可看到鸡胚随针头的拨动而动， 羊膜腔内时，可看到鸡胚随针头的拨动而动，此时可注入 O.1～0.2ml病毒液。 O.1～0.2ml病毒液。 病毒液 拔出针头，孔区消毒后用沾有碘酒通过火焰的小块胶布将卵壳 拔出针头， 的窗口封住， 33～35℃孵育48～72h，要保持鸡胚钝端朝上。 孵育48 的窗口封住，于33～35℃孵育48～72h，要保持鸡胚钝端朝上。
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羊膜腔接种法
解剖与收获
收获前鸡胚须置4℃冰箱6h或过夜，但不能放置时间 过长(过长会引起散黄)。如急于收获亦可置-20℃冰 箱lh左右。 预冷的目的是，将鸡胚冻死，使血液凝固，避免收 获时流出红细胞，并同尿囊液的病毒发生凝集，造 成病毒滴度下降。 病毒通过胚胎机体后被排泄入尿囊腔，因此当羊水 过少时，可用同胚少量尿囊液冲洗羊膜腔并吸取该 洗液。
接种步骤与方法
将孵育l0~13日龄的鸡胚标记气室、胎位，于与胚胎略近气室端卵壳 上划一等边三角形。 消毒气室顶端及记号处，用开孔器在记号处的卵壳上开一三角形裂 痕，不可弄破下面的壳膜，同时在气室顶端钻一小孔。 轻轻揭去卵壳，露出壳膜，在壳膜上滴一滴生理盐水，用针尖循卵 壳膜纤维方向划破一隙，勿伤及紧贴的绒毛尿囊膜。 用针尖刺破气室小孔处的壳膜，再用橡皮乳头紧按气室小孔向外吸 气，此时盐水小滴即可自裂隙流至绒毛尿囊膜上，从而使绒毛尿囊 膜下陷而形成人工气室。 在卵壳的窗口滴0.05~0.1ml病毒液于绒毛尿囊膜上，然后将旋转鸡胚 使接种物扩散到整个绒毛膜尿囊膜上。 在卵壳的窗口周围涂石蜡，用消毒胶布封口。将鸡胚保持人工气室 在上的位置，33~35℃继续培养48～72h。
第二章 鸡胚接种技术
一、概况
1911年Rous和Murphy首先应用鸡胚培养 研究肉瘤病毒(Rous肉瘤)的繁殖。 1938年Goodpasture和Burnet等应用鸡胚 繁殖病毒、Cox应用卵黄囊培养立克次体。
鸡胚培养法的优点：
鸡胚的组织分化程度低，可选择适当途 径接种，病毒易复制，感染病毒的膜和 液体含大量病毒。 鸡胚是一整体，有神经血管的分布及脏 器的构造。 来源充足，操作简单，通常是无菌的， 对接种的病毒不产生抗体。
鸡胚是由三个胚层发育起来的， 即外胚层、中胚层和内胚层， 它们构成胚胎的组织与器官。
（约10日龄鸡胚的结构见图）
卵壳与壳膜
卵壳位于最外层的坚硬壳层； 壳膜位于卵壳的下层，允许气体和液体分子 交换，因此培养鸡胚需一定的湿度和气体。
气室
功能主要是呼吸和调节压力。
绒毛尿囊膜
壳膜之下，主要是胚胎的呼吸器官。
绒毛尿囊膜接种法
解剖与收获
用剪刀沿人工气室边缘将膜剪下，放入
加有灭菌生理盐水的培养皿内，观察病
灶形状或用于传代，或用50泛应用于流感病毒、流行性腮腺炎病 毒和新城疫病毒的适应和传代培养，这 些病毒被接种到尿囊腔后，可在内皮细 胞中复制，复制的病毒被释放到尿囊液 中，因此，在尿囊液中含有大量的病毒。
（二）绒毛尿囊膜接种
常用于牛痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒 的分离，因为这些病毒在绒毛尿囊膜上可形 成肉眼可见的斑点状或痘疱状病灶。 另外，病毒可在绒毛尿囊膜上进行滴定，因 为感染性病毒颗粒的数目可以通过产生的斑 和痘的数目来计算。该方法还可用于抗病毒 血清的滴定试验，即在有抗体存在的情况下， 痘疱形成受到抑制。
接种步骤与方法
取9~11日龄的鸡胚，标记气室与胚胎位置，并在胚胎面 与气室交界之边缘上约1mm处避开血管作一标记，此即为 注射点。
将鸡胚竖放在卵杯上，钝端向上。消毒气室的蛋壳，用 开孔器钻开一长约2mm小口。
再次消毒钻孔区，接种病毒液0.1～0.2ml，将针头刺入 孔内，经尿囊膜入尿囊腔，注入病毒液。 消毒后用石蜡溶化封孔，于33～35℃孵卵器孵育48～ 72h，；于接种后24h内死亡者为非特异性死胚应弃去。
— 绒毛尿囊膜发育界限：发育好的鸡胚可见 密布丰满的血管网，也就是绒毛尿囊膜， 死胚则见不到这一现象。
第三节 鸡胚接种途径及方法 （一）羊膜腔接种
应用于从临床材料中分离流感病毒等，病
毒感染后可收集羊水和尿囊液。
接种步骤与方法
将10~12日龄的鸡胚在检卵灯上照视，标记气室及胚胎的位置。 消毒气室部位的蛋壳，在气室顶端钻出一约10mm×6mm的长方 形裂痕，注意勿钻破壳膜。 再次消毒钻孔区后，用灭菌的小镊子除去长方形卵壳和外层壳 膜，并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上，使其透明，以便 观察胚胎的位置。 将注射器刺向胚胎的腭下胸前，以针头拨动下颚及腿，当进入 羊膜腔内时，可看到鸡胚随针头的拨动而动，此时可注入 O.1～0.2ml病毒液。 拔出针头，孔区消毒后用沾有碘酒通过火焰的小块胶布将卵壳 的窗口封住，于33～35℃孵育48～72h，要保持鸡胚钝端朝上。
羊膜
胚胎的最内层包被，含羊水，胚胎在其中。
尿囊腔
位于绒毛尿囊腔和羊膜之间 ，胚胎排泄器 官含5－20ml尿囊液，含大量的尿酸盐， 为减少沉淀，盐水稀释再4℃保存。
卵黄囊
主要营养的储藏场所，为胚胎提供营养。
卵白
外于卵的锐端，为胚胎发育晚期提供营养。
第二节 鸡胚的孵育和检查
受精鸡卵的供给
— 没有受到病毒和细菌的污染如新城鸡瘟病
毒、布氏杆菌等；
— 培养立克次体和衣原体，不能来自食用抗
生素的鸡群。
鸡胚的孵育
— 温度为38～39℃；
— 湿度为40％-70％；
— 翻蛋：防止蛋白粘连，促进羊膜运动和空
气流通；
— 通风：排出CO2和吸入O2。
检卵
— 血管：活胚可见清晰的血管，有时可见血 管搏动，死胚血管模糊成淤血带或淤血块。 — 胎动：活胚可见明显的自然运动，尤其在 转动胚胎时，死胚见不到任何胎动，胚胎 发红像出血样，有的呈现黑块。
鸡胚培养法的缺点：
一般的病毒通常不使鸡胚产生特异性的感染指征。 卵黄中常常含有抗家禽病原体的母体抗体。 某些细菌、衣原体和病毒能够从感染的母鸡传递 到鸡胚。 通常鸡胚含有白血病病毒。 在鸡食物中加入抗菌素，母鸡吃后会传递给鸡胚， 鸡胚就会产生对立克次体和衣原体感染的抵抗。
第一节 鸡胚的结构与生理
尿囊腔接种法
解剖与收获
接种后收获病毒的时间根据不同病毒而异，甲型流感病 毒一般培养44～48h，乙型流感病毒培养72h。 收获前鸡胚置4℃冰箱6h或过夜，但不能放置时间过长。 消毒气室的卵壳，用灭菌剪刀剪去气室部的卵壳，用无 菌镊子撕去气室部壳膜，并翻开到卵壳边上。 将鸡卵倾向胚胎一侧，用灭菌毛细吸管通过绒毛尿囊膜 进入尿囊腔，吸出尿囊液。一般一个鸡胚可收获5～ 10ml的尿囊液。 若操作时损伤了血管，则病毒会吸附在红细胞上，尿囊 液则无。经无菌试验后，可在4℃或低温保存。