转氨酶转氨基作用的鉴定
转氨基作用实验结果讨论
转氨酶是指存在于细胞质和线粒体中的一类酶，它们在胺基酸代谢过程中发挥着重要作用。
转氨酶包括谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST），这两种酶在临床检测中常被用于评估肝功能和心肌损伤情况。
在转氨基作用实验中，我们可以通过检测血液中ALT和AST的水平来评估某个组织是否存在损伤。
在实验中，我们将不同给药剂量的化学物质或药物注射到小鼠体内，然后检测其血液中AST和ALT的水平。
实验结果显示，在高剂量注射后的小鼠身上，AST和ALT的水平明显升高，而在低剂量或未注射的小鼠中，AST和ALT的水平保持在正常水平。
这说明高剂量注射可能会导致肝脏和心肌组织的损伤，而低剂量或未注射则没有明显影响。
在实验结果讨论中，我们可以从以下几个方面进行分析：1.对实验结果的解释：通过检测AST和ALT的水平，我们可以初步评估组织损伤情况。
实验结果表明，在高剂量注射后的小鼠中，AST和ALT的水平明显升高，这可能是由于注射的物质导致了肝脏和心肌组织的损伤。
相反，低剂量或未注射的小鼠中，AST和ALT的水平保持在正常水平，说明注射的物质对组织没有造成影响。
2.实验结果的局限性：由于这仍然是一项动物实验，并不完全反映人体内的情况。
因此，在设计实验和解释实验结果时，我们需要谨慎地考虑这些限制性因素。
3.实验结果的意义：在临床医学中，转氨酶的检测是非常重要的，它可以作为肝功能和心肌损伤的指标。
通过这项实验，我们可以更好地理解某些物质对生物体内部分组织的影响，同时也加深了我们对于肝、心血管等系统的认识。
4.进一步研究的展望：转氨酶与生物体内许多疾病和病理过程密切相关。
今后在进一步研究中，我们可以研究更多的物质和药物对转氨酶水平的影响，并探究肝脏和心血管疾病状态下转氨酶的变化规律，以期为临床诊断和治疗提供更精准的指导。
综上所述，转氨基作用实验是非常有意义的一项实验，其结果可以为我们提供对于某些组织受损的初步评估。
在解释实验结果时，我们需要注意实验局限性，同时思考实验结果的意义，为未来的研究展望提供方向。
转氨基运用实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解转氨基作用的基本原理和过程。
2. 掌握转氨基实验的操作步骤。
3. 观察并分析转氨基作用的结果，加深对转氨基作用的理解。
二、实验原理转氨基作用是指氨基在转氨酶的催化下，从一个氨基酸转移到另一个α-酮酸上的过程。
该过程不产生游离的氨，而是通过氨基转移酶将氨基从一个化合物转移到另一个化合物上。
转氨基作用在生物体内具有重要的生理意义，如氨基酸的合成、分解以及代谢等。
实验中，我们以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，在转氨酶的催化下进行转氨基反应，通过纸层析法观察反应结果，从而验证转氨基作用的实现。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 丙氨酸- α-酮戊二酸- 转氨酶- 水合氯醛- 硫酸铵- 氯化钠- 氨水- 纸层析纸- 展开剂2. 实验仪器：- 电子天平- 恒温水浴锅- 离心机- 研钵- 移液管- 试管- 滴管- 显微镜四、实验步骤1. 准备实验试剂：- 将丙氨酸和α-酮戊二酸溶解于水中，配制成一定浓度的溶液。
- 将转氨酶溶解于水中，配制成一定浓度的溶液。
2. 制备反应混合液：- 取一定量的丙氨酸溶液和α-酮戊二酸溶液，混合均匀。
- 加入适量的转氨酶溶液，混匀。
3. 水浴加热：- 将反应混合液放入恒温水浴锅中，加热至一定温度，保持一段时间。
4. 冷却反应混合液：- 将加热后的反应混合液取出，置于室温下冷却。
5. 纸层析：- 将制备好的反应混合液滴在纸层析纸上，待溶剂自然挥发后，用展开剂进行展开。
6. 观察结果：- 观察纸层析纸上各物质的迁移距离，分析反应结果。
五、实验结果与分析1. 结果观察：- 在纸层析纸上，观察到丙氨酸和α-酮戊二酸的反应产物，分别为丙酮酸和谷氨酸。
2. 结果分析：- 实验结果表明，在转氨酶的催化下，丙氨酸和α-酮戊二酸发生了转氨基反应，生成了丙酮酸和谷氨酸。
这验证了转氨基作用的实现。
六、实验总结通过本次实验，我们了解了转氨基作用的基本原理和过程，掌握了转氨基实验的操作步骤，并通过纸层析法观察到了转氨基作用的结果。
05纸层析法鉴定转氨基作用
6.显色 将滤纸平放在培养皿上，用喷瓶向滤纸均匀喷洒 0.1%茚三酮溶液，再用吹风机吹干，可见紫红色的同 心弧形斑点。 7.计算 按下表记录有关数据，计算Rf值。
“谷” “丙” “对” “测1、2”
点样处至色斑中心距离(A)
点样处至溶剂前沿距离(B) Rf值(A/B)
将“对”、“测”各色斑的 Rf值与已知氨基酸的 Rf 值进行对比，确定它们各是什么氨用采血管吸取测定管上清液、对照管 上清液、谷氨酸溶液、丙氨酸溶液各 1 滴，依次点在 滤纸上标明测、对、谷、丙的点样处。注意点样斑点 不可太大。直径应小于 0.5cm 。必要时可再点一次， 每点一滴，用吹风机吹干后方可再点第二滴，并且点 样量应力求均匀相等。 5. 层析 将滤纸放在培养皿上，灯芯下端浸入层析液 中进行层析。约40分钟后，去除灯芯，立即用铅笔划 出溶剂前沿，用吹风机吹干。
[步骤] 1.制备肝匀浆 2. 转氨基反应 取干净试管 2 支，分别标明测定管与 对照管，按下表操作。
管号 试剂（滴） 肝匀浆 丙氨酸 α-酮戊二酸 测定管 对照管
10d 10d 37℃水浴10min 沸水浴10min 10d 10d 10d 10d 37℃水浴20min
3. 准备：取直径 15cm 圆形滤纸 1 张，用圆规在滤纸正 中作一半径为 1cm 的小圆圈，用铅笔通过圆心作两点 互相垂直的线，并在两线外端等距离点 4 个原点，标 明测、对、谷、丙。在滤纸圆心处打一小孔（如铅笔 芯粗细），另取同类滤纸小片 1.5cm×3cm，下三分之 二剪成须状。将其卷成圆筒如灯芯状，插入小孔（略 突出于滤纸面）
原理在转氨酶的作用下某一氨基酸去掉氨基生成相应的酮酸而另一种酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程称为在转氨酶的作用下某一氨基酸去掉氨基生成相应的酮酸而另一种酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程称为氨基酸的转氨基作用
22 生物化学实验--纸层析法测定肝组织的转氨基作用
纸层析法测定肝组织的转氨基作用【目的】1 ．掌握纸层析法的原理和方法。
2 ．熟悉相关转氨酶的临床意义。
【原理】转氨基作用是氨基酸代谢的一个重要反应。
在转氨酶作用下，将氨基酸的氨基转移到α - 酮酸上。
每种转氨基反应均由专一的转氨酶催化。
转氨酶广泛分布于机体各器官、组织，例如肝细胞中存在的丙氨酸氨基转移酶，能催化α - 酮戊二酸与丙氨酸之间的转氨基作用。
反应式如下：纸层析是以滤纸作为支持物，与滤纸纤维素结合的水（约占纸重 20 ～ 30 ％）称为层析中的“固定相”。
另一种和固定相不能混合或部分混合的溶剂则为“流动相”。
把欲分离的物质加在纸的一端，并使流动相借滤纸的毛细现象移动，此时，待分离溶质因分配系数不同而逐渐分布于滤纸的不同部位。
层析过程中或层析结束时，用显色剂使被分离的物质显出颜色，成为一个个色斑。
分配在固定相中趋势较大的成分在纸上随流动相移行的速度就小，色斑距原点的位置就较近。
反之，分配在固定相内趋势较小的成分移行就远，色斑位置离原点也远。
溶质在纸上的移动速率可用比移（R f ）表示：同一氨基酸在相同的层析条件下 R f 值相同，不同氨基酸在相同层析条件下 R f 值不同，因此可以根据 R f 值来鉴定被分离的氨基酸。
层析时，用显色剂茚三酮使氨基酸显色，将样品氨基酸的 R f 值与标准氨基酸的 R f 值比较，即可确定所分离氨基酸的种类。
【器材】1 ．研钵2 ．剪刀3 ．恒温水浴4 ．点样毛细管5 ．漏斗6 ．表面皿或小平皿7 ．新鲜动物肝脏8 ．直径 10cm 圆型新华滤纸9 ．中试管和小试管10 ．电炉或吹风机或烘箱11 ．直径 10cm 的培养皿【试剂】1 ． 0.2mol/L ， pH7.4 磷酸缓种液Na 2 HPO4 溶液 81ml 与 0.2mol/L NaH 2 PO4 溶液 19ml 混匀，再用蒸馏水稀释 20 倍。
2 ． 0.1mol/L 丙氨酸溶液称取丙氨酸 0.891g 先溶于少量 pH7.4 磷酸盐缓冲液中，以 0.1mol/LNaOH 仔细调节至 pH7.4 后，用磷酸缓冲液加至 100ml 。
植物体内转氨基作用
Rf ＝
原点到层析点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离
注意事项
整个操作过程中，手只能接触滤纸两侧边缘， 否则手指上的汗液会造成滤纸出现众多斑点。
在点样时，不要将毛细管插错了试剂瓶。 展层结束后，切勿忘记用铅笔描出溶剂前沿。 点样斑点不能太大（直径应小于0.5cm），防
止氨基酸斑点重复。 吹风温度不宜过高，否则斑点变黄。
植物体内的转氨基作用
【实验目的】
1. 学习转氨基反应的原理。 2. 掌握用纸层析法鉴定转氨基的方法。
【实验原理】
氨基转移酶（转氨酶）在植物体内广泛存 在。植物通过转氨酶的作用，可将α-氨基酸上 的氨基转移到α-酮酸原来酮基的位置上，结果 形成一种新的α-酮酸和一种新的α-氨基酸， 所生成的氨基酸可用纸层析法检测。
3.实验试剂
0.1M丙氨酸溶液、0.1M谷氨酸溶液、0.Mα酮戊二酸溶液（用NaOH中和至pH7.0)、含有 0.4M蔗糖的0.1M磷酸缓冲液（pH8.0）、磷酸缓 冲液（pH7.5）、30%三氯乙酸溶液、扩展剂、 显色剂
【操作步骤】
（一）酶液的提取
取发芽2-3天的绿豆芽5g，放入研钵中， 加2ml磷酸缓冲液（pH8.0）研磨成匀浆，转 入试管中。再用该缓冲溶液3ml冲洗研钵，一 并转入试管中备用。
本实验反应体系中的底物为丙氨酸和α酮戊二酸，将其与绿豆芽匀浆制备的酶液一起 保温，在植物转氨酶的催化下会产生丙酮酸与 谷氨酸。利用纸层析法鉴定出谷氨酸的存在， 则证明植物体内具有转氨基作用。
谷丙转氨酶
【实验材料和主要仪器、试剂】 1.实验材料
绿豆芽
2.实验仪器
研钵、试管、移液管、恒温浴箱、层析缸、层 析纸、毛细管、吹风机
（二）酶促反应
取3支干燥洁净的试管编号，按下表分别 加入试剂和酶液（单位ml）。
转氨基作用(纸层析法)
转氨基作用原理氨基酸分子上的氨基转移到α-酮酸分子上的反应过程称为转氨基作用（或称氨基移换作用）。
转氨基作用是氨酸代谢的重要反应之一，由转氨酶催化。
经转氨后，原来的α-—氨基酸变成了相应的α-—酮酸，原来的α-—酮酸则成为新的、相应的α-—氨基酸。
本实验观察谷氨酸与丙酮酸在肌匀浆中的谷氨酸—丙酮酸转氨酶（简称GPT）的催化进行转氨基的过程。
然后用纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。
为便于观察转氨基作用，在反应中须加一碘醋酸（或—溴醋酸），以抑制谷氨酸和丙酮酸的其它代谢过程。
试剂0.9% NaCl溶液；0.01mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）；1%谷氨酸钾溶液；1%丙酮酸钠溶液；0.25%一碘酸钠溶液；2%HAc。
操作1、肌匀浆的制备（该步由实验室准备室制备）取小白兔一只，猛击头部处死后，立即剪颈放血，取肌肉若干经0.9%NaCl溶液洗去血污后，称取肌肉约100g置电动匀浆器中，再加0.01mol/LpH7.4磷酸缓冲液500ml磨成匀浆。
2混匀后同置37-40℃水浴中保温1小时（时加振摇）。
取出两管各加入2%醋酸2滴，再同置沸水浴中5分钟，使反应停止，稍冷却，将上清液用于纸层析。
纸层析（氨基酸）原理层析法又称色层分离法，原指有色物质在吸附剂上因吸附能力不同而得到分离的方法。
后来此方法也应用于无色物质的分离。
层析法除了吸附层析以外，还有离子交换层析、分配层析和亲和层析等。
纸层析是分配层析中的一种。
分配层析是利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数不同而得到分离的。
通常用a表示分配系数。
溶质在固定相中的浓度（Cs）a = —————————————溶质在流动相中的浓度（CL）一种物质在某溶剂系统中的分配系数，在一定的温度下是一个常数。
纸层析是以纸作为惰性支持物的分配层析，纸纤维上的羟基具有亲水性，因此以滤纸吸附的水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。
有机溶剂沿着滤纸自下而上流动的，称为“上行法”；自上而下流动的，称为“下行法”。
生物化学实验 转氨酶的提取氨基移换反应与纸上层析
生物化学实验转氨酶的提取氨基移换反应与纸上层析生物化学实验--转氨酶的提取、氨基移换反应与纸上层析实验三转氨酶的提取、氨基移换反应与纸上层析一、实验目的1、1.学习一种鉴定氨基移换作用的简便方法及其原理。
2.学习用纸层析法测定转氨基作用。
3、介绍氨基移换促进作用在中间新陈代谢中的意义。
二、实验原理、氨基移换酶也称转氨酶，它能催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的α-酮基互换，形成新的α-氨基酸与新的α-酮酸的作用.这种作用称为氨基移换作用。
它在生物体内蛋白质的合成与分解等中间代谢中，在糖、脂肪、蛋白质三类物质代谢的相互联系、相互转化上都起着很重要的作用。
任何一种氨基酸进行转氨作用时，都由其专一的转氨酶催化。
它们的最适ph接近7.4。
在各种转氨酶中，以谷氨酸草酰乙酸转氨酶(简称谷草转氨酶、got)及谷氨酸丙酮酸转氨酶(简称谷丙转氨酶、gpt)活力最强。
上述两种酶均广为存有于生物机体中，在正常人血清中也存有少量存有。
机体出现肝炎、心肌梗塞炎症时，血清联运氮酶活力明显减少，在临床上转氨酶活性的测量存有关键意义。
测量转氨酶活性的方法很多，例如分光光度法，纸上层析法及光电比色法等。
在氨基酸分解代谢中，联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与谷氨酸氧化脱氨基作用偶联而完成。
此过程可用下式表示:植物中多种氨基酸是通过转氨基作用合成的。
纸层析：就是以滤纸做为支持物的分配层析法，就是20世纪40年代发展出来的一种生化拆分技术。
由于设备直观，操作方式便利，所须要样品量太少，分辨力较低等优点而广为的用作物质的拆分，并可以展开定性和定量的分析。
缺点就是进行时间较长。
分配层析法：是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的的一种实验方法。
在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系数是一个常数即α=溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
溶剂系统：由有机溶剂和水组成，水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用降低形成固定相，有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相，由于混合液中各种氨基酸的分配系数值不同，其在两相中的分配数量及移动速率（即迁移率rf值）就不同，从而达到分离的目的。
酶促转氨基作用及其层析鉴定
酶促转氨基作用及其层析鉴定一、实验原理转氨基作用又称氨基转移作用，发生在a 氨基酸和a 酮酸之间，即在转氨酶的催化下，a 氨基酸的氨基转移到a 酮酸的酮基碳原子上，结果原来的a 氨基酸生成相应的a 酮酸，而原来的a 酮酸则形成了相应的a 氨基酸。
转氨基作用是生物体内普遍存在的一种生化反应，是氨基酸脱氨基作用的一种途径。
转氨酶种类多，专一性强，催化的转氨反应是可逆的。
转氨酶的最适pH 一般为7.4左右，其辅酶是磷酸吡哆醛。
目前已经发现的转氨酶有50余种，其中最重要的是谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)。
本实验以谷氨酸和丙酮酸混合溶液在谷丙转氨酶作用下的反应来观察酶促转氨基作用，其反应式为反应产物可用纸层析法分离鉴定。
纸层析是以滤纸作为层析支持物，以纸上吸附的水为固定相的一种层析技术，其分离的原理属于分配层析。
层析时，将一定量的样品点在滤纸上，用适当的有机溶剂作为流动相。
当流动相流经固定相时，样品即在水相和有机相之间进行反复分配。
由于样品中各组分在两相中的溶解度不同，因而在两相中的分配系数不同，各组分随有机溶剂迁移的速度也就不同，最后被完全分离开。
被分离组分在滤纸上的迁移速度可用相对迁移率R 值表示。
f 展层后用茚三酮溶液显色，将样品各显色斑点的R 值与同时展层的标准氨基酸f 的R 值比较，即可鉴定其氨基酸种类。
二、实验步骤1•酶液的制备去掉绿豆芽种皮称取3g,放入研钵内加2mLO.1mol/LpH8.0的磷酸缓冲液研成匀浆，然后转移至离心管中，再用1mL 缓冲液冲洗研钵，溶液并入离心管中，3000r/min 离心10min,取上层清液备用。
HHOHOGPT H °OH凋戊二醸酶液也可以用动物材料制备，称取猪肝脏2g,剪碎置研钵中，加入0.9%氯化钠溶液和少量石英砂，研磨成匀浆，离心，取上清，即为酶提取液。
2.酶促反应取两支试管，编号；按表1-5分别从左到右加入相应试剂并进行相处理。
纸层析法鉴定转氨基作用
6.显色 将滤纸平放在培养皿上，用喷瓶向滤纸均匀喷洒 0.1%茚三酮溶液，再用吹风机吹干，可见紫红色的同 心弧形斑点。 7.计算 按下表记录有关数据，计算Rf值。
“谷” “丙” “对” “测1、2”
点样处至色斑中心距离(A)
点样处至溶剂前沿距离(B) Rf值(A/B)
将“对”、“测”各色斑的 Rf值与已知氨基酸的 Rf 值进行对比，确定它们各是什么氨基酸。据此解释转 氨基作用。
[步骤] 1.制备肝匀浆 2. 转氨基反应 取干净试管 2 支，分别标明测定管与 对照管，按下表操作。
管号 试剂（滴） 肝匀浆 丙氨酸 α-酮戊二酸 测定管 对照管
10d 10d 37℃水浴10min 沸水浴10min 10d 10d 10d 10d 37℃水浴20min
3. 准备：取直径 15cm 圆形滤纸 1 张，用圆规在滤纸正 中作一半径为 1cm 的小圆圈，用铅笔通过圆心作两点 互相垂直的线，并在两线外端等距离点 4 个原点，标 明测、对、谷、丙。在滤纸圆心处打一小孔（如铅笔 芯粗细），另取同类滤纸小片 1.5cm×3cm，下三分之 二剪成须状。将其卷成圆筒如灯芯状，插入小孔（略 突出于滤纸面）
[步骤]
4. 点样 分别用采血管吸取测定管上清液、对照管 上清液、谷氨酸溶液、丙氨酸溶液各 1 滴，依次点在 滤纸上标明测、对、谷、丙的点样处。注意点样斑点 不可太大。直径应小于 0.5cm 。必要时可再点一次， 每点一滴，用吹风机吹干后方可再点第二滴，并且点 样量应力求均匀相等。 5. 层析 将滤纸放在培养皿上，灯芯下端浸入层析液 中进行层析。约40分钟后，去除灯芯，立即用铅笔划 出溶剂前沿，用吹风机吹干。
纸层析法鉴定转氨基作用
[目的] 1.验证氨基酸的转氨基作用 2.掌握纸上层析法分离和鉴定氨基酸的基本原 理和方法。 [原理] 在转氨酶的作用下，某一氨基酸去掉α- 氨基 生成相应的α-酮酸，而另一种α-酮酸得到此氨基 生成相应的氨基酸的过程，称为氨基酸的转氨基作 用。
转氨基作用实验结果讨论
转氨基作用实验结果讨论
转氨酶是一类重要的酶，它在生物体内起到了重要的代谢作用。
本次实验旨在研究不同条件下转氨基的作用效果，以深入了解转氨酶的性质。
实验方法：首先，我们收集了一些新鲜动物肝脏、肌肉等组织样本，并制备出10%的组织悬液。
接着，我们将样本和悬液分别分成两组，进行不同条件下的转氨基反应。
其中，实验组的转氨基反应在常温下进行，而对照组则是在高温下进行。
实验时间为30分钟，每15分钟记录一次反应结果。
在实验过程中，我们发现实验组的转氨基反应速度比对照组明显快了很多。
此外，实验组的反应体系中添加了酵素，而对照组的反应体系中没有添加酵素。
这说明了酵素的重要性，它可以促进反应速度，使反应更加高效。
在实验结果分析方面，我们发现实验组的转氨基作用效果明显比对照组更好。
在同样的反应时间内，实验组的转氨基反应产生了更多的产物，并且产物的含量也更高。
这说明了转氨酶在常温下的作用效果要比在高温下更好。
我们还发现样本的种类也会对转氨酶的作用效果产生影响。
比如说，肝脏样本中的转氨酶活性要比肌肉样本中的高很多。
这是因为肝脏
是人体内重要的代谢器官，其中的代谢酶更加活跃。
我们还对实验结果进行了统计分析，发现实验组的转氨酶活性明显高于对照组。
这进一步印证了实验组的优势，说明了转氨酶在常温下的作用效果要比在高温下更佳。
转氨基作用实验结果表明，转氨酶是一类重要的酶，它的作用效果会受到多种因素的影响。
在实际应用中，我们需要根据具体情况进行调整，以达到最好的转氨基反应效果。
转氨基实验报告结论(3篇)
第1篇一、实验概述本次实验通过纸层析法观察转氨基作用，旨在学习氨基酸纸层析的基本原理，掌握氨基转移反应的过程和条件，以及通过纸层析法分析转氨基反应的结果。
实验过程中，我们使用了多种氨基酸作为底物，转氨酶作为催化剂，通过观察层析板上氨基酸的迁移情况，分析了转氨基作用的效率及其影响因素。
二、实验结果与分析1. 氨基酸纸层析原理纸层析法是一种常用的分离和鉴定化合物的方法。
在本次实验中，纸层析法用于分离混合氨基酸，并观察转氨基反应的结果。
层析原理基于不同物质在固定相（滤纸）和流动相（层析溶剂）中的分配系数不同，导致物质在层析过程中的迁移速率不同，从而实现分离。
2. 转氨基反应的观察实验中，我们选取了多种氨基酸作为底物，包括丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸等。
在转氨酶的催化下，这些氨基酸发生转氨基反应，生成相应的α-酮酸和新的氨基酸。
通过观察层析板上氨基酸的迁移情况，我们可以分析转氨基反应的效率。
（1）丙氨酸转氨基反应：实验结果显示，丙氨酸在转氨酶的催化下，发生转氨基反应生成丙酮酸和新的氨基酸。
层析板上丙氨酸的斑点明显减少，丙酮酸的斑点明显增多，表明转氨基反应发生。
（2）甘氨酸转氨基反应：实验结果显示，甘氨酸在转氨酶的催化下，发生转氨基反应生成甘酮酸和新的氨基酸。
层析板上甘氨酸的斑点明显减少，甘酮酸的斑点明显增多，表明转氨基反应发生。
（3）谷氨酸转氨基反应：实验结果显示，谷氨酸在转氨酶的催化下，发生转氨基反应生成α-酮戊二酸和新的氨基酸。
层析板上谷氨酸的斑点明显减少，α-酮戊二酸的斑点明显增多，表明转氨基反应发生。
3. 影响转氨基反应的因素（1）pH值：实验结果显示，不同pH值条件下，转氨基反应的效率有所不同。
在适宜的pH值范围内，转氨基反应的效率较高。
因此，pH值是影响转氨基反应的一个重要因素。
（2）温度：实验结果显示，不同温度条件下，转氨基反应的效率有所不同。
在一定温度范围内，随着温度的升高，转氨基反应的效率逐渐提高。
实验十二转氨作用(精)
实验十二 转氨作用【实验目的】1．通过实验掌握水平方向滤纸层析原理和技术 2．了解转氨作用过程。
【实验原理】转氨基作用是由转氨酶（氨基转移酶）催化的，在这个反应中，α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间交换，α-氨基酸转变成相应的α-酮酸，α-酮酸变成新的一种α-氨基酸。
转氨基作用是一种可逆反应。
每个转氨基反应均由专一的转氨酶所催化，在不同的生物有机体中均有转氨酶分布。
本实验是将丙氨酸和α-酮戊二酸与肝匀浆一起水浴反应，肝中的丙氨酸氨基转移酶（ALT ，又称谷丙转氨酶GPT ）含量丰富，该酶可将丙氨酸的氨基转移给α-酮戊二酸，产生丙酮酸和谷氨酸。
利用圆盘纸层析鉴定谷氨酸的存在，并且验证组织中的转氨作用。
在肝脏谷丙转氨酶(GPT)催化的转氨基作用，反应方程式如下：CHCOOH CH 2NH 2CH 2COOH ++COCOOH CH 3CHCH 3COOH NH 2CCOOH CH 2OCH 2COOH 谷氨酸丙氨酸丙酮酸α‐酮戊二酸【实验材料】1． 实验器材培养皿；表面皿；滤纸；匀浆器；试管；试管架；恒温水浴锅；毛细管；移液管；喷雾器；剪刀；铅笔；格尺。
2． 实验试剂⑴ 0.01M pH7.4磷酸缓冲液：0.2MNa 2HPO 4溶液81ml , 0.2MNaH 2P04溶液19ml 混匀，蒸馏水稀释20倍。
⑵ 0.1M 丙氨酸溶液：称取丙氨酸0.891克先溶于少量0.01MpH7.4磷酸缓冲液中，以1MNa0H 仔细调节至pH7.4后，用磷酸盐缓冲液加至100ml 。
⑶ 0.01M ａ-酮戊二酸溶液：称取ａ-酮戊二酸1.461克先溶于少量0.01M pH7.4磷酸缓冲液中，用1M Na0H 仔细调节至pH7.4后，用磷酸盐缓冲液加至100ml 。
⑷ 0.1M 谷氨酸溶液：称取谷氨酸0.735克先溶于少量0．01M pH7.4磷酸缓冲液中， 以1MNa0H 仔细调节至pH7.4后，用磷酸缓冲液加至100ml 。
用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用ppt课件
(1、assay; 2、 Ala ; 3、 control; 4、 Glu)
溶质层析点中心到原点中心的距离〔X）
Rf=
溶剂前沿到原点中心的距离〔Y）
.
Discussions(讨论)
questions 1、 2、
.
Attentions(注意)
1.手洗净，滤纸勿污染，滤纸勿折， 2.点样分配标记用铅笔〔1.2.3.4）， 3.点样点直径 <0.4cm，1、3〔点3次：干后重复 ）；
.
3、Color：(显色)
O
R
OH
2
OH + H2N-CH-COOH
O
水合茚三酮
ONH O 4
N
O
O
罗曼氏紫
+RCHO+CO2
.
Operation(操作)
1、 The enzymatic reaction(酶促反应)
肝匀浆
1
（两种：已备好）
2 100℃，
5mins
add 0.5ml Ala 0.5ml a–ketoglutarate 1.5ml buffer
Exp.9
Identification of the transamination by paper chromatography
用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用
.
Purpose(目的)
1.To master the principle of transamination 掌握转氨基作用原理
2.Identify the transamination by paper chromatography
Mix up 37 ℃, 1hr
100 ℃
1 10min
实验四 转氨基作用
实验四转氨基作用（纸层析法）原理氨基酸分子上的氨基转移到α-酮酸分子上的反应过程称为转氨基作用（或称氨基移换作用）。
转氨基作用是氨酸代谢的重要反应之一，由转氨酶催化。
经转氨后，原来的α-—氨基酸变成了相应的α-—酮酸，原来的α-—酮酸则成为新的、相应的α-—氨基酸。
本实验观察谷氨酸与丙酮酸在肌匀浆中的谷氨酸—丙酮酸转氨酶（简称GPT）的催化进行转氨基的过程。
然后用纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。
为便于观察转氨基作用，在反应中须加一碘醋酸（或—溴醋酸），以抑制谷氨酸和丙酮酸的其它代谢过程。
试剂1．0.9% NaCl溶液。
2．PH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲液：取0.2mol/LNa2HPO4溶液81ml与0.2mol/LNaH2PO4溶液19ml 混匀，稀释至2000ml。
3．1%谷氨酸钾溶液：取谷氨酸1g ，加水20ml，用5%KOH调到中性，然后用pH7.4 0.01mol/L 磷酸缓冲液稀释至100ml。
4．1%丙酮酸钠溶液：取丙酮酸1g加pH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲溶液溶解成100ml。
5．0.25%一碘酸钠溶液：取一碘醋酸0.25g加水1ml，用5%KOH调到中性，然后加pH7.4，0.01mol/L磷酸缓冲液成100ml。
（一碘醋酸可用一溴醋酸代替）。
6．2%HAc操作1．肌匀浆的制备（由实验室准备室制备）取小白兔一只，猛击头部处死后，立即剪颈放血，取肌肉若干经0.9%NaCl溶液洗去血污后，称取肌肉约100g置电动匀浆器中，再加0.01mol/LpH7.4磷酸缓冲液500ml磨成匀浆。
2.转氨基反应：取小试管2支编号，所加试剂以滴为单位。
编号1 2试剂肌匀浆10 10将2号管置沸水浴中5分钟，然后取出冷却1%谷氨酸钾10 101%丙酮酸钠10 100.25%—碘醋酸钾 5 5混匀后同置40℃水浴中保温45分钟（或60分钟）。
在保温过程中，时加振摇。
取出两管各加入2%醋酸2滴，再同置沸水浴中5分钟，使蛋白质完全凝固，冷却后，离心（200r/min）5分钟，（或静置10分钟），将上清液作氨基酸的纸层析。
转氨酶转氨基作用的鉴定
1.谷丙转氨酶和谷草转氨酶在什么情况下发生异常变化 ？它们的临床意义是什么？ 2.本实验层析过程中哪一种氨基酸距离原点最远？为什么？ 3.影响Rf值的因素有哪些？
用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用
一、实验目的
掌握纸层析法鉴定转氨酶转氨基作用的原理和方法
Байду номын сангаас
二、基本原理
转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的 重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的 α－氨基转移到另一α－酮基酸上。各种转氨酶的活性不同，其中肝 脏的谷丙转氨酶（Glutamic Pyruvic Transaminase ,GPT）活性较 高，它催化如下反应： GPT α—酮戊二酸 + 丙氨酸 谷氨酸 + 丙酮酸 本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析 法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。
三、操作步骤
1．匀浆制备 2．酶促反应过程
肝0.5克+0.01mol/LpH 7.4磷酸盐缓冲液2.5 ml, 研成匀浆
2支试管
测定管① 肝匀浆0. 5ml
对照管② 肝匀浆0. 5ml
加热
0.1mol/L丙氨酸0.5 ml 0.1mol/Lα-酮戊二酸0.5 ml 0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液1.5 ml
37℃保温，1小时 沸水浴中煮5分钟
离心2000rpm 5分钟
上清液供层析用
3．层析
1 4 2
3
丙氨酸液2 谷氨酸液4 测定液1 对照液3
4．显色
用喷雾器向上述滤纸均匀喷上0.5 %茚三酮溶液, 用吹风机热风吹干,可见出现同心弧状色斑,用铅笔 圈下各色斑。比较各色斑的位置及颜色深浅，并算 各色斑的Rf值，以此判定结果。
转氨基实验报告 讨论
转氨基实验报告讨论引言转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸转移反应的酶。
转氨基实验是一种常用的生化实验方法，用于检测体液或组织中的转氨酶活性水平，以判断机体的肝功能和心肌损伤程度。
本实验旨在探讨转氨酶活性与机体健康状况之间的关系，以及转氨酶活性的影响因素。
转氨基实验方法1. 实验材料：- 人体血清样本- AST和ALT酶试剂盒- 试管、离心管、显微镜等实验器材2. 实验步骤：1. 准备工作：将实验器材冷藏，并确认试剂盒的有效期。
2. 样本处理：将人体血清样本加入离心管中，离心分离血清。
3. 实验操作：根据试剂盒说明书指引，加入适量的试剂，混合均匀后，在恒定温度下反应一段时间。
4. 光度计测定：使用光度计测量反应体系的吸光度，并记录下吸光度数值。
5. 数据处理：根据吸光度数值，计算出转氨酶活性。
结果与讨论本次实验中，我们收集了30份人体血清样本，并进行了AST和ALT转氨酶活性的测试。
通过测量吸光度并计算出各样本的转氨酶活性，我们得到了以下结果：样本编号AST转氨酶活性ALT转氨酶活性1 20 U/L 15 U/L2 25 U/L 18 U/L... ... ...30 30 U/L 25 U/L通过对结果的分析，我们得到了以下几点结论：1. 转氨酶活性与肝功能有关：AST和ALT是最常用的肝功能检测指标之一，其转氨酶活性能够反映肝脏细胞的功能状态。
当肝脏受到损伤时，转氨酶会释放到血液中，导致转氨酶活性的升高。
因此，本次实验中的AST和ALT活性的异常值可能表示一些参与肝脏疾病的潜在风险。
2. 异常值的原因多样化：引起AST和ALT活性异常的原因是多种多样的。
常见的包括酒精滥用、药物过量、肝炎病毒感染以及脂肪堆积在肝脏中等等。
因此，在进行肝功能的评估时，需要综合考虑转氨酶活性的上升是否与患者的病史和症状相符。
3. 实验结果参考范围的制定：根据世界卫生组织的定义，正常人的AST和ALT 活性水平一般在特定范围内。
(生物化学)转氨基作用
5. 显色及结果分析
➢ 吹干层析滤纸 ➢ 向层析滤纸上喷洒茚三酮（0.1%乙
醇溶液） ➢ 60-80 ℃干燥层析滤纸5-10min ➢ 计算各氨基酸Rf值，鉴定样品1、2
中的氨基酸
茚三酮显色结果
丙
1
谷
2
思考题
➢ 影响纸层析中样品迁移率的主要因素有哪些？ ➢ 层析结果背景过高（泛红或局部不洁）的可
α-酮酸
CO
COOH
R12 CO
α-酮酸
COOH (Accepter keto acid)
转氨酶
H
R22 (New amino acid) C NH2 氨基酸 COOH
重要转氨酶：谷草转氨酶（AST , 天门 冬氨酸氨基转移酶——GOP ）
GOT
谷丙转氨酶（ALT ，丙氨酸氨基转移 酶——GPT ）
原点到层析斑点中心的距离
Rf ＝ 原点到溶剂前沿的距离
前沿 原点
原点
氨基酸的结构和性质
丙氨酸与谷氨酸
Ala Glu
丙氨酸与谷氨酸侧链极性的差异使其在纸层 析过程中有不不同的迁移率。
3. 氨基酸的鉴定---印三酮反应
三、操作步骤
1. 酶抽提液的制备 ➢ 3g新鲜动物肝脏，剪碎。 ➢ 匀浆：1+2ml冷 1/15mol/L pH8.0磷酸缓冲
转氨基作用
1. 氨基酸的转氨基作(transamination)
在转氨酶(transaminase)的作用下，某一氨 基酸去掉α-氨基生成相应的α-酮酸，而另一种α酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程。
R11 氨基酸 H C NH2
COOH
(Donor amino acid)
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对照管②
肝匀浆0. 5ml
肝匀浆0. 5ml
加热
0.1mol/L丙氨酸0.5 ml 0.1mol/Lα-酮戊二酸0.5 ml 0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液1.5 ml
37℃保温，1小时 沸水浴中煮5分析
1
4
2
3
丙氨酸液2 谷氨酸液4 测定液1 对照液3
4．显色
用喷雾器向上述滤纸均匀喷上0.5 %茚三酮溶液, 用吹风机热风吹干,可见出现同心弧状色斑,用铅笔 圈下各色斑。比较各色斑的位置及颜色深浅，并算 各色斑的Rf值，以此判定结果。
1.谷丙转氨酶和谷草转氨酶在什么情况下发生异常变化 ？它们的临床意义是什么？ 2.本实验层析过程中哪一种氨基酸距离原点最远？为什么？
高，它催化如下反应：
α—酮戊二酸 + 丙氨酸
GPT
谷氨酸 + 丙酮酸
本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析
法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。
三、操作步骤
1．匀浆制备
肝0.5克+0.01mol/LpH 7.4磷酸盐缓冲液2.5 ml, 研成匀浆
2．酶促反应过程
2支试管
测定管①
用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用
一、实验目的
掌握纸层析法鉴定转氨酶转氨基作用的原理和方法
二、基本原理
转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的
重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的
α－氨基转移到另一α－酮基酸上。各种转氨酶的活性不同，其中肝
脏的谷丙转氨酶（Glutamic Pyruvic Transaminase ,GPT）活性较
3.影响Rf值的因素有哪些？