细胞凋亡检测方法的比较和选择(二)

细胞凋亡检测方法的比较和选择（二）关键词：细胞蛋白酶试剂标准物质北京标准物质网

一、PI-Annexin V

优点：细胞发生凋亡时，膜上的PS外露早于DNA断裂，因此Annexin V联合PI染色法检测早期细胞凋亡较TUNEL法更为灵敏，不需固定细胞，是目前最为理想的检测细胞凋亡的方法。

缺点：需要流式检测，设备要求高，操作难度高。

二、caspase-3

优点：①不同细胞在凋亡早期均出现caspase-3蛋白高表达，本方法具有普遍意义：②在蛋白酶级联切割过程中，caspase-3处于核心位置；③本法可用于各种培养细胞凋亡诱导研究，而且灵敏度高，特异性强，与其他已知的caspases 无交叉反应。

缺点：①在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降，因此本法对于凋亡晚期灵敏度较差；②本法对特定样本中的检测下限随凋亡过程的动力学、诱导凋亡的试剂，以及在细胞总数中受影响的细胞数而不同。

三、线粒体膜势能的检测

优点：①早期检测细胞凋亡；②可用来检测各种细胞类型包括单核细胞和神经细胞，以及完整组织和纯化的线粒体；③检测灵敏度强。

缺点：①操作步骤复杂，设备要求高，费用高；②不能说明细胞凋亡的机制，需结合其他凋亡检测方法进行综合分析(如caspase、形态学、生化)。

四、凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达和细胞定位分析

优点：在细胞凋亡早期均出现TFAR19蛋白高表达和核转位，荧光染色定位显示清晰，便于区分凋亡细胞和正常细胞，同时伴随细胞形态学的变化，并持续较长时间，为研究细胞凋亡期所发生的时间提供一项新型技术和指标。不同细胞在凋亡早期均会出现TFAR19蛋白高表达和核转位，因此可以广泛应用于检测不同种类的凋亡细胞，具有普遍意义。

缺点：细胞凋亡和坏死均有细胞内碎片增多，对于鉴别凋亡细胞与坏死细胞特异性较低，无法检测出早期凋亡细胞。

五、端粒酶检测

优点：应用广泛，扩增后可适用于不同分析法，结果可靠，可重复性强。90％以上的癌细胞或凋亡细胞都具有端粒酶的活性；端粒酶延伸产物的液体闪烁计数法是定量资料，可进行定量分析。

缺点：TRAP法操作步骤烦琐，该法以端粒酶延伸产物的PCR扩增为基础，影响PCR的因素都会影响到整个实验结果。标准的TRAP测定需要放射性同位素进行测定，另外这种检测方法也不专门针对细胞凋亡，检测结果也不单纯反映细胞凋亡的发生，需要液体闪烁计数。

在一个课题中，凋亡的检测可能不止选择一种方法，而是根据实验目的的需要，选择两种或两种以上的方法，通过不同的层面反映凋亡发生的情况。文中作者从形态学上观察到了明显的细胞凋亡，然后又检测了凋产相关基因caspase，从基因水平证实了凋亡的发生。