微生物标准操作规程9
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焉耆县人民医院检验科微生物室
标准操作文件文件编号:WSW-SOP-007
版本号:2007 第1次修改
编写者:肖振清 冶辉审核者:许时菲修订日期:2012年1月15日
页码:第 1 页 共 2页
M—H培养基配制标准操作规程
1.目的
规范M—H培养基配制操作规程,保证培养基质量。
2.原理
M—H培养基用Mueller-Hinton琼脂(水解酪蛋白琼脂)配制,淀粉为保护性胶体,能对抗细菌中的毒性物质,水解酪蛋白含多种氨基酸,牛肉浸膏能提供细菌氮源的主要营养物质。药敏试验中,为保证结果重复性及抑菌环的大小、清晰,因此培养基不含对抗生素及磺胺药物的拮抗剂。
3.用途
用于普通细菌的抗菌药物敏感试验。
4.配方
成品OXOIDM—H干粉38 g、蒸馏水1 000ml,pH 7.1~7.5。
5.操作步骤
将上述成分混合,校正pH。121~C高压灭菌15分钟。冷至50℃左右,无菌定量吸取25ml于直径9 cm的无菌平板内,凝固后冷藏备用。琼脂层厚4 mm。
6.储存条件
2~8℃冰箱。
7.有效期
实验室自行规定,确保培养基质量。
8.质量控制
8.1 质控频度 每次新配制时做质控。
8.2 质控方法及结果见表5—20。
表5—20配制M H培养基质最控制方法及结果
试验方法结果
无菌试验
<100块抽检5%,>100块随即抽取10块,35℃培
养24h
无细菌生长
质量检测在M-H培养基上涂布粪肠球菌ATCC29212,用甲氧卞啶/磺胺甲噁唑纸片进行药敏试验,35℃培
养24h 出现一个边缘清晰的抑菌圈,
直径应≥20mm
平行试验做质控时,取新旧批号的培养基同时做
9.注意事项
9.1 倾注琼脂量为25 ml,平板深度4 mm。若太薄,易产生假
敏感。若太厚,平皿中的抗生素往下扩散而使抑菌环变狭窄,产生假耐药性。
9.2 PH会影响某些抗生素的活性。试验时不可将平板培养
在CO2培养箱中,否则会在琼脂的潮湿表面产生碳酸而降低PH值,将影响各种抗生素的扩散速度、抑菌环大小。