第七章食品中常见病原菌微生物检验技术ppt
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最适生长温度37℃，最适pH 为7.4，对热抵抗力较强， 80℃30min才能被杀死。
可在10%-15%氯化钠和40% 胆汁中生长
生物学特性---培养特征
▪
大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到
浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，而且在单个菌株中
可能也有变化
▪
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲
基红反应阳性，VP反应弱阳性。
▪
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化
明胶。
素、红霉素等高度敏感。
致病性
金黄色葡萄球菌是人 类化脓感染中最常见的病 原菌，临床表现多种多样 ，可引起局部化脓感染， 也可引起肺炎、胃肠炎、 心包炎等，甚至败血症、 脓毒症等全身感染。
我国卫生部颁布的食品微生物指标有菌 落总数、大肠菌群和致病菌三项。
致病菌：能够引起人类发病的细菌。对不同 的食品和不同的场合，应该选择一定的参考 菌群进行检验。
-
第一节 沙门氏菌检验技术
一、生物学特性 是一大群在血清学上相关的革兰氏阴性杆菌，无芽孢、 无荚膜，周身鞭毛，能运动的需氧或兼性厌氧短杆菌。
36± 1℃ 6hr
报告结果
第一法
第二法 Baird-Parker平板法检验程序
定量检测 （平板法）
适用于检测金黄色 葡萄球菌数不小于 10/g（mL）的食品
-
定量
25g样品+ 225ml 生理盐水
检测
梯度稀释
（MPN法）
选三个连续梯度，每个梯度各取3mL加入3管胰酪胨大豆肉汤
36± 1℃ 4548hr
～48 h。
▪ （4）观察菌落形态
▪
Baird-Parker 平板、血平板上挑取可疑菌落。
▪
金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker 平板上，菌落直径
为 2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为 淡色，周
围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落
有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似
第二节 金黄色葡萄球菌检验技术
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌的流行病学
近年来，美国疾病控制中心报告， 由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位， 仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫 生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素 引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的 33%，加拿大则更多，占45%，我国每年
BP平板
适用于检测可能含 有少量金黄色葡萄 球菌，却带有大量 竞争菌的样品
36± 1℃ 45-48h
血浆凝固酶 实验
第三法 金黄色葡萄球菌MPN检验程序
查MPN表
报告结果
金黄色葡萄球菌的检测－－测定方法
➢ 国标方法注意事项
• 现象观察：染色镜检（形态、染色）
•
表面光滑的菌落，菌落色素不稳定，但多数为金黄色。
➢
Baird-Parker琼脂平板（BP平板） 、血平板 、血浆凝固
酶试验
➢ 多数产肠毒素的菌株在血琼脂平板上能形成溶血圈，并能产 生血浆凝固酶，这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。
四、操作方法
▪ 1.增菌培养法
▪ （1）检样处理 将25g（mL）检样加于225mL灭菌生 理盐水中的灭菌器内，制成1：10检样混悬液。
中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的
生理状态。
• 沙门氏菌检测中前增菌的目的是使沙门氏菌
恢复其活力。 • 检测经过加工的食品中的沙门氏菌需要前增
菌主要因为加工过程中沙门氏菌受到损伤而处于 濒死状态。
-
2.选择性增菌
在含选择性抑制剂的培养基中，样品进 一步增菌。
沙门沙门氏菌检测中增菌的目的是使沙门氏 菌以外的细菌（主要是艾希氏菌属）受到抑 制，而使沙门氏菌得到一定的增殖，提高沙 门氏菌的检出率。
▪ 所有这些实验不能作为鉴别其产毒与否的依据。
血浆凝固酶试验：
吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL，放入小试管中 ，再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤 培养物0.5 mL，振荡摇匀，置 36±1℃温箱或水 浴内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝块 ,即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为 阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。
▪ （2）增菌培养 吸取液体检样5ml，接种于50mL7．5 ％氯化钠肉汤50ml进行增菌。
▪ （3）分离培养 将上述培养物，分别划线接种到 BairdParker 平板和血平板。
▪ 血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。 ▪ Baird-Parker 平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h 或 45 h
金黄色葡萄球菌的致病性
致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引 起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固 ，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。 葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色 葡萄球菌； e.肠毒素：产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，现已鉴定出葡萄球菌肠毒素 有A、B、C1～C3、D、E、G、H共9种。肠毒素A是最常见的。
宋内氏菌最强，福氏菌次之，志贺氏菌最弱。一
般56-60℃经10分钟即被杀死。在37℃水中存活20
天，在冰块中存活96天，蝇肠内可存活9-10天，
对化学消毒剂敏感，1%石碳酸15-30分钟死亡。
最适生长温度为35 ℃ ～ 37 ℃，最适pH为7.2～7.4， 较抗寒，能耐受较高盐浓度。
沙门氏菌属(Salmonella)
目前至少有67种O抗原和2500个以上血清型, 根据其对宿主的致病性, 可分为 三类
伤寒杆菌 副伤寒杆菌 (甲、乙、丙)
人
肠热症
鼠伤寒杆菌 肠炎杆菌 猪霍乱杆菌
儿童伤寒 人、动物
-
HE琼脂上典型特征
-
4.生物化学试验筛选
挑取选择性琼脂平板上的可疑菌落 ，接种于三糖铁琼脂培养基中。
排除大多数非沙门氏菌。也提供了 沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。
TSI(三糖铁)培养基 大肠杆菌和沙门氏菌
-
沙门菌常用生化试验
尿素酶试验 阴性（黄）阳性（红）
-
靛基质
对照管 阴性(－) 阳性(＋)
▪ 【方法】 ▪ （1）玻片法 ▪ （2）试管法
▪ 【结果判断】 ▪ （1）玻片法：5～10s内出现凝集者为阳性。 ▪ （2）试管法：如有凝块或整管凝集出现为阳
性。4h后无上述现象出现，则放置过夜后再 观察。 ▪ 【应用】 ▪ 本试验仅用于致病性葡萄球菌的鉴定。
金黄色葡萄球菌肠毒素的检测
一、动物学试验 主要用幼猫和猴。 二、血清学试验 肠毒素作为抗原，可以 和特异性抗体发生结合性反应，产生可见沉淀 用血清学反应检验金黄色葡萄球菌肠毒素 方法主要有： 1.免疫琼脂扩散法 2.反向间接血凝试验 3.免疫荧光法 4.酶联免疫吸附法
-
-
• P150
• （1） A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、氰化钾和赖氨 酸脱羧酶3项中有1项异常，按表可判定为沙门氏菌属。如有2项 异常，为非沙门氏菌属。 （2）A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体 两项实验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。 （3）A3：补做ONPG。ONPG阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱 羧酶阳性，甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。 （4）必要时进行沙门氏菌生化群的鉴别。
-
3.选择性平板分离
划线接种于：
BS和XLD琼脂平板或HE琼脂平板各一个，于36+1℃ 分别培养18—24小时(XLD、HE)或40—48小时(BS)
。
这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提
供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。
-
亚硫酸铋琼脂(BS琼脂)上典型特征
-
木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼 脂上典型特征
第三节 志贺氏菌检验技术
▪ 志贺氏菌属（shigella）是人类细菌性痢疾最 为常见的病原菌，通称痢疾杆菌。 通常志贺氏杆 菌(Bacillus，shigae)仅指I型痢疾志贺氏菌。
▪ 志贺氏杆菌是日本志贺诘在1898年首次分离 得到的，因此而得名。
本属细菌对理化因素的抵抗力较其他肠道杆
菌为弱。对酸敏感，在外界环境中的抵抗力能以
-
醇发酵试验
-
邻硝基酚β－半乳糖苷酶试验（ONPG试验 ）
阳性（黄） 阴性
-
5.血清学分型鉴定
提供培养物菌种的鉴定。 用分离出的沙门氏菌与已知A-F多价O 血清及H因子进行玻片凝集试验。 1）抗原的准备 2）O抗原的鉴定 用A—F多价O血清做玻片凝集试验，以生理 盐水做对照。 3）H抗原的鉴定 4）Vi抗原的鉴定
▪
也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结
果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36 ℃±1 ℃培
养 18 h～48 h，重复试验。
检测步骤--鉴定
▪ 金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶，因此对其 鉴别的主要实验是测定其凝固酶。
▪ 对于凝固不完全的菌株，可以通过一些其他 实验来进一步确认，例如：厌氧葡萄糖发酵、溶 葡萄球菌酶敏感性实验、耐热核酸酶实验等。
葡萄球菌皮肤感染
二、检验所需培养基
10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤 7.5 %氯化钠肉汤 血琼脂平板 Baird-Parker 琼脂平板 脑心浸出液肉汤(BHI) 兔血浆 磷酸盐缓冲液 营养琼脂小斜面 革兰氏染色液 无菌生理盐水
三、检验程序
GB 4789.10-2010标准 第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验； 第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄
▪ 血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为 白色，大而突起，圆形，不透明，表面光 滑，有溶血圈。
血平板
▪ （5）革兰氏染色镜检
▪ （6）血浆凝固酶试验
▪
挑取Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别
接种到 5 mL BHI 和营养琼脂斜面，36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。
取新鲜配置兔血浆 0.5 mL，放入小试管中，再加入 BHI 培养物 0.2
mL～0.3 mL，振荡摇匀，置 36 ℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小
时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现
凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血
浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。
发生的此类中毒事件也非常多。
金黄色葡萄球 葡萄球菌 表皮葡萄球菌 属分类： 腐生葡萄球菌
金黄色葡萄球菌食物中毒系 毒素型食物中毒。是由于进食含 有一种或多种含葡萄球菌肠毒素 的食物所引起。常见的菌为金黄 色葡萄球菌。
一、生物学特性
革兰氏阳性需氧或兼性厌氧菌 ，为球菌，排列成葡萄状，无芽 孢、鞭毛，不运动；大多数无荚 膜。
金黄色葡萄球菌的抗原构造和分型
对分型进行简单的了解。 １、血清学分型：
金黄色葡萄球菌水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和 多糖抗原。
蛋白抗原主要为葡萄球菌A蛋白（SPA)，是一种表面抗 原，90%以上金黄色葡萄球菌有此抗原，无特异性。
多糖抗原为半抗原，有型特异性。 ２、噬菌体分型。 ３、根据肠毒素分型。 ４、根据血浆凝固酶分型。
急性胃肠炎
猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌 鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌
败血症
二、检验所需器材
三、检验程序
-
沙门氏菌检验程序2010
四、操作方法
分五个步骤：
1.前增菌 2.选择性增菌 3.选择性平板分离 4.生化实验 5.血清型分型鉴定
• <国标>检测沙门氏菌方法分5个步骤：
• 1.前增菌： 在含有营养的非选择性培养基
菌落；但无混浊带及透明圈。
▪
在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润
、 金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血
圈。
B-P平板
￥7（90mm)
Baird－Parker(BP培养基/贝尔德帕克平板) 用于凝固酶阳性葡萄球菌的分离和菌落计数用。
-
▪ 血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素， 因此在血平板上产生明显的溶血环。
色葡萄球菌的计数； 第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较
高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。
第一法
定性 检测
检样
25g样品+ 225ml 7.5%NaCl肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤
36± 1℃ 24hr
血平板
BP平板
36± 1℃ 24hr
镜检 营养肉汤
36± 1℃ 24hr
血浆凝固酶 实验
可在10%-15%氯化钠和40% 胆汁中生长
生物学特性---培养特征
▪
大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色到
浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，而且在单个菌株中
可能也有变化
▪
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲
基红反应阳性，VP反应弱阳性。
▪
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化
明胶。
素、红霉素等高度敏感。
致病性
金黄色葡萄球菌是人 类化脓感染中最常见的病 原菌，临床表现多种多样 ，可引起局部化脓感染， 也可引起肺炎、胃肠炎、 心包炎等，甚至败血症、 脓毒症等全身感染。
我国卫生部颁布的食品微生物指标有菌 落总数、大肠菌群和致病菌三项。
致病菌：能够引起人类发病的细菌。对不同 的食品和不同的场合，应该选择一定的参考 菌群进行检验。
-
第一节 沙门氏菌检验技术
一、生物学特性 是一大群在血清学上相关的革兰氏阴性杆菌，无芽孢、 无荚膜，周身鞭毛，能运动的需氧或兼性厌氧短杆菌。
36± 1℃ 6hr
报告结果
第一法
第二法 Baird-Parker平板法检验程序
定量检测 （平板法）
适用于检测金黄色 葡萄球菌数不小于 10/g（mL）的食品
-
定量
25g样品+ 225ml 生理盐水
检测
梯度稀释
（MPN法）
选三个连续梯度，每个梯度各取3mL加入3管胰酪胨大豆肉汤
36± 1℃ 4548hr
～48 h。
▪ （4）观察菌落形态
▪
Baird-Parker 平板、血平板上挑取可疑菌落。
▪
金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker 平板上，菌落直径
为 2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为 淡色，周
围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落
有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似
第二节 金黄色葡萄球菌检验技术
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌的流行病学
近年来，美国疾病控制中心报告， 由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位， 仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫 生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素 引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的 33%，加拿大则更多，占45%，我国每年
BP平板
适用于检测可能含 有少量金黄色葡萄 球菌，却带有大量 竞争菌的样品
36± 1℃ 45-48h
血浆凝固酶 实验
第三法 金黄色葡萄球菌MPN检验程序
查MPN表
报告结果
金黄色葡萄球菌的检测－－测定方法
➢ 国标方法注意事项
• 现象观察：染色镜检（形态、染色）
•
表面光滑的菌落，菌落色素不稳定，但多数为金黄色。
➢
Baird-Parker琼脂平板（BP平板） 、血平板 、血浆凝固
酶试验
➢ 多数产肠毒素的菌株在血琼脂平板上能形成溶血圈，并能产 生血浆凝固酶，这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。
四、操作方法
▪ 1.增菌培养法
▪ （1）检样处理 将25g（mL）检样加于225mL灭菌生 理盐水中的灭菌器内，制成1：10检样混悬液。
中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的
生理状态。
• 沙门氏菌检测中前增菌的目的是使沙门氏菌
恢复其活力。 • 检测经过加工的食品中的沙门氏菌需要前增
菌主要因为加工过程中沙门氏菌受到损伤而处于 濒死状态。
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2.选择性增菌
在含选择性抑制剂的培养基中，样品进 一步增菌。
沙门沙门氏菌检测中增菌的目的是使沙门氏 菌以外的细菌（主要是艾希氏菌属）受到抑 制，而使沙门氏菌得到一定的增殖，提高沙 门氏菌的检出率。
▪ 所有这些实验不能作为鉴别其产毒与否的依据。
血浆凝固酶试验：
吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL，放入小试管中 ，再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤 培养物0.5 mL，振荡摇匀，置 36±1℃温箱或水 浴内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝块 ,即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为 阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。
▪ （2）增菌培养 吸取液体检样5ml，接种于50mL7．5 ％氯化钠肉汤50ml进行增菌。
▪ （3）分离培养 将上述培养物，分别划线接种到 BairdParker 平板和血平板。
▪ 血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。 ▪ Baird-Parker 平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h 或 45 h
金黄色葡萄球菌的致病性
致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引 起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固 ，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。 葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色 葡萄球菌； e.肠毒素：产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，现已鉴定出葡萄球菌肠毒素 有A、B、C1～C3、D、E、G、H共9种。肠毒素A是最常见的。
宋内氏菌最强，福氏菌次之，志贺氏菌最弱。一
般56-60℃经10分钟即被杀死。在37℃水中存活20
天，在冰块中存活96天，蝇肠内可存活9-10天，
对化学消毒剂敏感，1%石碳酸15-30分钟死亡。
最适生长温度为35 ℃ ～ 37 ℃，最适pH为7.2～7.4， 较抗寒，能耐受较高盐浓度。
沙门氏菌属(Salmonella)
目前至少有67种O抗原和2500个以上血清型, 根据其对宿主的致病性, 可分为 三类
伤寒杆菌 副伤寒杆菌 (甲、乙、丙)
人
肠热症
鼠伤寒杆菌 肠炎杆菌 猪霍乱杆菌
儿童伤寒 人、动物
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HE琼脂上典型特征
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4.生物化学试验筛选
挑取选择性琼脂平板上的可疑菌落 ，接种于三糖铁琼脂培养基中。
排除大多数非沙门氏菌。也提供了 沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。
TSI(三糖铁)培养基 大肠杆菌和沙门氏菌
-
沙门菌常用生化试验
尿素酶试验 阴性（黄）阳性（红）
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靛基质
对照管 阴性(－) 阳性(＋)
▪ 【方法】 ▪ （1）玻片法 ▪ （2）试管法
▪ 【结果判断】 ▪ （1）玻片法：5～10s内出现凝集者为阳性。 ▪ （2）试管法：如有凝块或整管凝集出现为阳
性。4h后无上述现象出现，则放置过夜后再 观察。 ▪ 【应用】 ▪ 本试验仅用于致病性葡萄球菌的鉴定。
金黄色葡萄球菌肠毒素的检测
一、动物学试验 主要用幼猫和猴。 二、血清学试验 肠毒素作为抗原，可以 和特异性抗体发生结合性反应，产生可见沉淀 用血清学反应检验金黄色葡萄球菌肠毒素 方法主要有： 1.免疫琼脂扩散法 2.反向间接血凝试验 3.免疫荧光法 4.酶联免疫吸附法
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• P150
• （1） A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、氰化钾和赖氨 酸脱羧酶3项中有1项异常，按表可判定为沙门氏菌属。如有2项 异常，为非沙门氏菌属。 （2）A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体 两项实验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。 （3）A3：补做ONPG。ONPG阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱 羧酶阳性，甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。 （4）必要时进行沙门氏菌生化群的鉴别。
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3.选择性平板分离
划线接种于：
BS和XLD琼脂平板或HE琼脂平板各一个，于36+1℃ 分别培养18—24小时(XLD、HE)或40—48小时(BS)
。
这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提
供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。
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亚硫酸铋琼脂(BS琼脂)上典型特征
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木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼 脂上典型特征
第三节 志贺氏菌检验技术
▪ 志贺氏菌属（shigella）是人类细菌性痢疾最 为常见的病原菌，通称痢疾杆菌。 通常志贺氏杆 菌(Bacillus，shigae)仅指I型痢疾志贺氏菌。
▪ 志贺氏杆菌是日本志贺诘在1898年首次分离 得到的，因此而得名。
本属细菌对理化因素的抵抗力较其他肠道杆
菌为弱。对酸敏感，在外界环境中的抵抗力能以
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醇发酵试验
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邻硝基酚β－半乳糖苷酶试验（ONPG试验 ）
阳性（黄） 阴性
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5.血清学分型鉴定
提供培养物菌种的鉴定。 用分离出的沙门氏菌与已知A-F多价O 血清及H因子进行玻片凝集试验。 1）抗原的准备 2）O抗原的鉴定 用A—F多价O血清做玻片凝集试验，以生理 盐水做对照。 3）H抗原的鉴定 4）Vi抗原的鉴定
▪
也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结
果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36 ℃±1 ℃培
养 18 h～48 h，重复试验。
检测步骤--鉴定
▪ 金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶，因此对其 鉴别的主要实验是测定其凝固酶。
▪ 对于凝固不完全的菌株，可以通过一些其他 实验来进一步确认，例如：厌氧葡萄糖发酵、溶 葡萄球菌酶敏感性实验、耐热核酸酶实验等。
葡萄球菌皮肤感染
二、检验所需培养基
10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤 7.5 %氯化钠肉汤 血琼脂平板 Baird-Parker 琼脂平板 脑心浸出液肉汤(BHI) 兔血浆 磷酸盐缓冲液 营养琼脂小斜面 革兰氏染色液 无菌生理盐水
三、检验程序
GB 4789.10-2010标准 第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验； 第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄
▪ 血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为 白色，大而突起，圆形，不透明，表面光 滑，有溶血圈。
血平板
▪ （5）革兰氏染色镜检
▪ （6）血浆凝固酶试验
▪
挑取Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别
接种到 5 mL BHI 和营养琼脂斜面，36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。
取新鲜配置兔血浆 0.5 mL，放入小试管中，再加入 BHI 培养物 0.2
mL～0.3 mL，振荡摇匀，置 36 ℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小
时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现
凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血
浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。
发生的此类中毒事件也非常多。
金黄色葡萄球 葡萄球菌 表皮葡萄球菌 属分类： 腐生葡萄球菌
金黄色葡萄球菌食物中毒系 毒素型食物中毒。是由于进食含 有一种或多种含葡萄球菌肠毒素 的食物所引起。常见的菌为金黄 色葡萄球菌。
一、生物学特性
革兰氏阳性需氧或兼性厌氧菌 ，为球菌，排列成葡萄状，无芽 孢、鞭毛，不运动；大多数无荚 膜。
金黄色葡萄球菌的抗原构造和分型
对分型进行简单的了解。 １、血清学分型：
金黄色葡萄球菌水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和 多糖抗原。
蛋白抗原主要为葡萄球菌A蛋白（SPA)，是一种表面抗 原，90%以上金黄色葡萄球菌有此抗原，无特异性。
多糖抗原为半抗原，有型特异性。 ２、噬菌体分型。 ３、根据肠毒素分型。 ４、根据血浆凝固酶分型。
急性胃肠炎
猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌 鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌
败血症
二、检验所需器材
三、检验程序
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沙门氏菌检验程序2010
四、操作方法
分五个步骤：
1.前增菌 2.选择性增菌 3.选择性平板分离 4.生化实验 5.血清型分型鉴定
• <国标>检测沙门氏菌方法分5个步骤：
• 1.前增菌： 在含有营养的非选择性培养基
菌落；但无混浊带及透明圈。
▪
在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润
、 金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血
圈。
B-P平板
￥7（90mm)
Baird－Parker(BP培养基/贝尔德帕克平板) 用于凝固酶阳性葡萄球菌的分离和菌落计数用。
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▪ 血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素， 因此在血平板上产生明显的溶血环。
色葡萄球菌的计数； 第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较
高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。
第一法
定性 检测
检样
25g样品+ 225ml 7.5%NaCl肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤
36± 1℃ 24hr
血平板
BP平板
36± 1℃ 24hr
镜检 营养肉汤
36± 1℃ 24hr
血浆凝固酶 实验