毒物分析基础法医毒物分析
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两性毒物（吗啡）
改良Stats一Otto法
优点：系统分析（方向不明，目前常用于开棺检材） 缺点：检材用量大、过程繁琐、回收率低 改进：以此为基础的各种改良法 注意：分子量大的碱性物质在酸性下有可能
形成离子对，在氯仿中有一定溶解度， 不宜用氯仿萃取
3.固相萃取
（solid phase extraction,SPE)
三、体内检材与体外检材的比较
定义 类别 数量 毒物 性状
分布
毒物含量 检验结果意
义
体外检材
体内检材
体外，未经体内吸收、分布 体内，经体内吸收、分布
和代谢
和代谢
种类多而杂
种类相对固定
视情形而异
相差不大
大多具有药毒物原体 有的均匀，有的不均匀 相对较高，但不能反映总量
无原有表观性状，甚至转 化为代谢物
原理：利用待测物在互不相溶的两种溶剂之中的溶解度 差异，使待测物从一种溶剂转移至另一种溶剂中
（1）分配比（distribution coefficient)和萃取效率 分配比：D=C0/CA
D与溶质、溶剂、温度、溶质存在状态（浓度）有关
萃取率：fn=1-VAn/(VA+DV0)n 萃取原则：少量多次
第二章 毒物分析基础
第一节 检验材料及分类
法医毒物分析检材可大致分为： 体外检材 体内检材
一、体外检材
体外检材是指未经人体消化吸收的检验材料。
包括：1.侦查所得或现场搜集的可疑物
2.吞服不久的呕吐物或洗胃液 3.急死的胃内容（其中尚有未被消化吸收的药毒物）
特点：
体外检材中常尚有原形药毒物存在。 体外检材一般不能作为鉴定中毒的直接依据。
（2）萃取方法：先制成水溶液再萃取
水相：药毒物转移到水相并以有利萃取形式存在（pH） 注意需先沉淀蛋白、除油脂、调节酸碱度
有机相：沸点不高的溶解度大的单一或混合溶剂 萃取方式：
一次，多次或连续萃取 破乳：静置、盐析、加破乳剂、适当加热、高速离心 萃取液：脱水，无水硫酸钠
（3）改良Stats一Otto法
水解
CH3 N
HO
O
OH
morphine
CH3 N
CH3 N
OH O
O
OH O
OH O
OH
O O CCH3
6-acetyl-morphine-3-glucuronide
酶解
O
HO
O
O CCH3
6-acetyl-morphine
水解与酶解的比较
2.液—液萃取
(liquid-liquid extraction,LLE)
结合物的解离：
适于蛋白结合率较高或其它结合度高的药毒物。 酸水解：
药物易分解 合适酸碱度、温度、水解时间
酶水解： 药物较稳定 合适酸碱度、室温（体温） β-葡糖醛酸苷酶、硫酸脂酶等
CH3 N
OH O
O
OH O
OH O
OH
O O CCH3
6-acetyl-morphine-3-glucuronide
注意：
用来作为对照参比而采集的一些检材有别于体外检材， 应称之为对照检材或参比检材。
二、 体内检材
体内检材指取自活体或尸体的检验材料。 包括：1.尿、血、唾液和其他体液
2.各种内脏、毛发、肌肉、皮肤、骨骼等组织 3.取自已埋尸体的组织或腐泥等。
特点：体内检材中一般已无保持原有形态或性状的药毒物
存在，经代谢后成为其他化合状态，但也有原体药毒物存在。 药毒物或代谢产物在不同组织或体液中的量可有很大差别。
杀虫药 杀鼠药
气体毒物 挥发性毒物
金属 毒物
水浸出 无机毒
物
液-液萃取法 液-固萃取法
顶空法 蒸馏法 扩散法
有机质破 坏法等
透析法 （4）
（1）
驱气法 （2）
（3）
法医毒物分析中常用提取净化方法示意图
毒物分析中大多数化合物的前处理属于第（1）类， 其基本操作流程如下：
预处理 分离、净化
衍生化（必要时）
（或液固萃取，liquid-solid extraction）
酸化，3-5 倍 95%乙醇温浸 乙醇浸出液
水浴蒸发，3-5 倍无水乙醇浸出液过滤挥干，重复
无水乙醇浸提液 酸水溶解，过滤
酸性水溶液
乙醚萃取
乙醚 NaOH 水溶液反提
酸性水溶液 NaOH 碱化，乙醚萃取
乙醚液 中性毒物
碱水 酸化 乙醚萃取
乙醚液
酸性毒物
乙醚液 碱性毒物
碱水 pH8.5-9.3
有机溶剂萃取液
缀合物水解、酶解； 金属毒物硝化；沉淀 蛋白等
固相萃取
检材处理的基本步骤
1
使待测物 与大多数 杂质分开
wenku.baidu.com
2
分离后进 一步去除 干扰物
3
使分散在 大体积的 待测物分 散在小体 积中
4
将待测物溶 于一定量的 准确体积的 溶液中，便 于计量。
分离
净化
富集
定容
综合使用，没有严格区分
（三）方 法
毒物
合成毒物 天然药毒物
二、检材分离净化
（一）目的：纯化 （二）基本原理
1、利用形态分离 适于某些体外检材，采取分拣法。
2、根据理化性质分离
方 式
1）
利用比重不同
2）
分子或颗粒大小差异
离心、分液器
过滤、离心、超滤膜、 透析膜、分子筛、大 孔树脂等
3）
挥发性能不同
4）
溶解性能差异
5）
化学性质不同
6）
分子被吸附性能差异
水蒸汽蒸馏、解热 挥发等 沉淀、液液萃取或直 接萃取
浓缩-定容
1.预处理
（1）
固体:粉末 组织:匀浆
（2）
碱性毒物： pH>pKa 1-2；
酸性毒物: pH<pKa 1-2；
不稳定化合物: 缓冲液
（3）
加入蛋白 质沉淀剂 或者加热， 透析，超 滤
（4）
酸水解 酶水解
检材制备 调整pH值 去除蛋白质 结合物解离
常用蛋白质沉淀剂：
分子量较大的酸性阴离子（在酸侧沉淀）： 钨酸、磷钨酸、三氯醋酸、高氯酸等 钨酸适于酸中性毒物不适于生物碱 重金属盐（在碱侧沉淀） 高浓度中性盐（脱水盐析）硫酸铵只能用于 碱性毒物不能用于酸中性毒物 有机溶剂（变性沉淀）：适于新鲜检材
在某一检材内分布相对均 匀
含量较低，但可反映体内 总量
一般不能作为鉴定中毒的直 一般作为鉴定中毒的直接
接依据
依据
第二节 检材处理
一、检材处置
1、称量及标记
☺ 每一检材都必须称量并加标签标记 ☺ 实验过程中的留存物、废弃物及供试品等都应
标记，检验完全结束才能丢弃。
2、留样、选择及取用
➢保留样品量一般不得少于送验检材量的三分之一。 ➢不同检材不能随意混合。 ➢分取检材应能以局部检验结果代表全部，分取部 分就其外观状态、组成情况、均匀程度等尽可能与 同一检材的原有性状相同。 ➢依据分析检验方法的需要（如灵敏度、检测限）， 尽量节省检材。 ➢优先选择原则：疑点最大、可能得到线索最多、 估计含量较多、检验较易着手、检材量最多。
改良Stats一Otto法
优点：系统分析（方向不明，目前常用于开棺检材） 缺点：检材用量大、过程繁琐、回收率低 改进：以此为基础的各种改良法 注意：分子量大的碱性物质在酸性下有可能
形成离子对，在氯仿中有一定溶解度， 不宜用氯仿萃取
3.固相萃取
（solid phase extraction,SPE)
三、体内检材与体外检材的比较
定义 类别 数量 毒物 性状
分布
毒物含量 检验结果意
义
体外检材
体内检材
体外，未经体内吸收、分布 体内，经体内吸收、分布
和代谢
和代谢
种类多而杂
种类相对固定
视情形而异
相差不大
大多具有药毒物原体 有的均匀，有的不均匀 相对较高，但不能反映总量
无原有表观性状，甚至转 化为代谢物
原理：利用待测物在互不相溶的两种溶剂之中的溶解度 差异，使待测物从一种溶剂转移至另一种溶剂中
（1）分配比（distribution coefficient)和萃取效率 分配比：D=C0/CA
D与溶质、溶剂、温度、溶质存在状态（浓度）有关
萃取率：fn=1-VAn/(VA+DV0)n 萃取原则：少量多次
第二章 毒物分析基础
第一节 检验材料及分类
法医毒物分析检材可大致分为： 体外检材 体内检材
一、体外检材
体外检材是指未经人体消化吸收的检验材料。
包括：1.侦查所得或现场搜集的可疑物
2.吞服不久的呕吐物或洗胃液 3.急死的胃内容（其中尚有未被消化吸收的药毒物）
特点：
体外检材中常尚有原形药毒物存在。 体外检材一般不能作为鉴定中毒的直接依据。
（2）萃取方法：先制成水溶液再萃取
水相：药毒物转移到水相并以有利萃取形式存在（pH） 注意需先沉淀蛋白、除油脂、调节酸碱度
有机相：沸点不高的溶解度大的单一或混合溶剂 萃取方式：
一次，多次或连续萃取 破乳：静置、盐析、加破乳剂、适当加热、高速离心 萃取液：脱水，无水硫酸钠
（3）改良Stats一Otto法
水解
CH3 N
HO
O
OH
morphine
CH3 N
CH3 N
OH O
O
OH O
OH O
OH
O O CCH3
6-acetyl-morphine-3-glucuronide
酶解
O
HO
O
O CCH3
6-acetyl-morphine
水解与酶解的比较
2.液—液萃取
(liquid-liquid extraction,LLE)
结合物的解离：
适于蛋白结合率较高或其它结合度高的药毒物。 酸水解：
药物易分解 合适酸碱度、温度、水解时间
酶水解： 药物较稳定 合适酸碱度、室温（体温） β-葡糖醛酸苷酶、硫酸脂酶等
CH3 N
OH O
O
OH O
OH O
OH
O O CCH3
6-acetyl-morphine-3-glucuronide
注意：
用来作为对照参比而采集的一些检材有别于体外检材， 应称之为对照检材或参比检材。
二、 体内检材
体内检材指取自活体或尸体的检验材料。 包括：1.尿、血、唾液和其他体液
2.各种内脏、毛发、肌肉、皮肤、骨骼等组织 3.取自已埋尸体的组织或腐泥等。
特点：体内检材中一般已无保持原有形态或性状的药毒物
存在，经代谢后成为其他化合状态，但也有原体药毒物存在。 药毒物或代谢产物在不同组织或体液中的量可有很大差别。
杀虫药 杀鼠药
气体毒物 挥发性毒物
金属 毒物
水浸出 无机毒
物
液-液萃取法 液-固萃取法
顶空法 蒸馏法 扩散法
有机质破 坏法等
透析法 （4）
（1）
驱气法 （2）
（3）
法医毒物分析中常用提取净化方法示意图
毒物分析中大多数化合物的前处理属于第（1）类， 其基本操作流程如下：
预处理 分离、净化
衍生化（必要时）
（或液固萃取，liquid-solid extraction）
酸化，3-5 倍 95%乙醇温浸 乙醇浸出液
水浴蒸发，3-5 倍无水乙醇浸出液过滤挥干，重复
无水乙醇浸提液 酸水溶解，过滤
酸性水溶液
乙醚萃取
乙醚 NaOH 水溶液反提
酸性水溶液 NaOH 碱化，乙醚萃取
乙醚液 中性毒物
碱水 酸化 乙醚萃取
乙醚液
酸性毒物
乙醚液 碱性毒物
碱水 pH8.5-9.3
有机溶剂萃取液
缀合物水解、酶解； 金属毒物硝化；沉淀 蛋白等
固相萃取
检材处理的基本步骤
1
使待测物 与大多数 杂质分开
wenku.baidu.com
2
分离后进 一步去除 干扰物
3
使分散在 大体积的 待测物分 散在小体 积中
4
将待测物溶 于一定量的 准确体积的 溶液中，便 于计量。
分离
净化
富集
定容
综合使用，没有严格区分
（三）方 法
毒物
合成毒物 天然药毒物
二、检材分离净化
（一）目的：纯化 （二）基本原理
1、利用形态分离 适于某些体外检材，采取分拣法。
2、根据理化性质分离
方 式
1）
利用比重不同
2）
分子或颗粒大小差异
离心、分液器
过滤、离心、超滤膜、 透析膜、分子筛、大 孔树脂等
3）
挥发性能不同
4）
溶解性能差异
5）
化学性质不同
6）
分子被吸附性能差异
水蒸汽蒸馏、解热 挥发等 沉淀、液液萃取或直 接萃取
浓缩-定容
1.预处理
（1）
固体:粉末 组织:匀浆
（2）
碱性毒物： pH>pKa 1-2；
酸性毒物: pH<pKa 1-2；
不稳定化合物: 缓冲液
（3）
加入蛋白 质沉淀剂 或者加热， 透析，超 滤
（4）
酸水解 酶水解
检材制备 调整pH值 去除蛋白质 结合物解离
常用蛋白质沉淀剂：
分子量较大的酸性阴离子（在酸侧沉淀）： 钨酸、磷钨酸、三氯醋酸、高氯酸等 钨酸适于酸中性毒物不适于生物碱 重金属盐（在碱侧沉淀） 高浓度中性盐（脱水盐析）硫酸铵只能用于 碱性毒物不能用于酸中性毒物 有机溶剂（变性沉淀）：适于新鲜检材
在某一检材内分布相对均 匀
含量较低，但可反映体内 总量
一般不能作为鉴定中毒的直 一般作为鉴定中毒的直接
接依据
依据
第二节 检材处理
一、检材处置
1、称量及标记
☺ 每一检材都必须称量并加标签标记 ☺ 实验过程中的留存物、废弃物及供试品等都应
标记，检验完全结束才能丢弃。
2、留样、选择及取用
➢保留样品量一般不得少于送验检材量的三分之一。 ➢不同检材不能随意混合。 ➢分取检材应能以局部检验结果代表全部，分取部 分就其外观状态、组成情况、均匀程度等尽可能与 同一检材的原有性状相同。 ➢依据分析检验方法的需要（如灵敏度、检测限）， 尽量节省检材。 ➢优先选择原则：疑点最大、可能得到线索最多、 估计含量较多、检验较易着手、检材量最多。