dpph自由基清除测定
3种抗氧化活性测定方法
3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定是评估物质抗氧化能力的重要方法，常用于食品、药物和化妆品等领域。
下面将介绍三种常用的抗氧化活性测定方法。
一、DPPH自由基清除法DPPH(2,2-二苯基-1-苦味肼)是一种常用的抗氧化剂，它能采用紫色的自由基形式存在，并且在反应中会转变为无色的稳定形式。
DPPH自由基清除法是一种简单而直观的测定方法。
该方法的基本原理是将待测物添加到预先溶解的DPPH中，反应一段时间后，根据颜色变化程度来评估抗氧化活性。
通过测量样品溶液吸光度的降低来计算其清除率，清除率越高，抗氧化能力越强。
二、FRAP法FRAP(铁还原能力)法是一种评估抗氧化物质电子给予能力的方法。
抗氧化物质能够通过给予电子来中和自由基的电子，从而保护细胞免受氧化损伤。
FRAP法通过反应产生的铁（II）络合物的吸光度变化来评估样品的抗氧化能力。
具体操作中，将待测物加入到铁（III）试剂（通常为铁(III)氯化物）中，待反应一定时间后，读取吸光度。
样品的抗氧化能力可以通过吸光度的变化来计算。
三、TBARS法TBARS(硫代巴比妥酸反应物)法是一种评估脂质过氧化的方法。
脂质过氧化是一种自由基引起的反应，会导致脂质的氧化和脂质分解产生不稳定化合物。
TBARS法主要用于评估食品和药物等样品中脂质过氧化的程度。
该方法通过将待测样品与反应试剂（如硫代巴比妥酸）反应生成稳定的色素产物，然后测量这种产物的吸光度来评估脂质过氧化的程度。
吸光度越高，脂质过氧化程度越高。
综上所述，DPPH自由基清除法、FRAP法和TBARS法是常用的抗氧化活性测定方法。
每种方法都有其独特的原理和应用范围，选择适合的方法可以准确评估样品的抗氧化能力。
在实际应用中，可以根据实验需求选择合适的方法，或结合多种方法综合评估抗氧化活性。
清除DPPH自由基能力检测方法
清除DPPH自由基能力检测方法清除DPPH自由基能力是用来评价化合物在体外是否具有抗氧化活性的一种常用方法。
DPPH自由基是一种常用的自由基模型，其具有紫色，可通过其吸收峰的变化来反映清除能力。
以下是常用的几种用于检测清除DPPH自由基能力的方法：1.分光光度法分光光度法是一种常用的检测方法，基本原理是通过测量化合物与DPPH反应后的溶液吸光度的变化来评估清除DPPH自由基能力。
实验过程如下：1）准备1mM的DPPH乙醇溶液。
2）将待测化合物按一定浓度体系添加到相应的试管中。
3）将相同体积的DPPH溶液加入到每个试管中，混匀。
4）放置在室温下，静置反应30分钟。
5）使用紫外可见分光光度计测量反应体系的吸光度，计算清除率。
2.电子顺磁共振法（EPR）电子顺磁共振法是另一种常用的方法，通过测量化合物对DPPH自由基的清除能力，进而评估其抗氧化活性。
实验过程如下：1）准备含有DPPH和待测化合物的溶液。
2）使用电子顺磁共振仪测量样品的EPR信号，同时测量含有DPPH和不含DPPH的样品作为参比。
3）通过比较样品与参比的EPR信号来计算清除率。
3.原子力显微镜方法（AFM）原子力显微镜方法是一种非常灵敏的方法，可以用于直接观察化合物对DPPH自由基的清除作用。
实验过程如下：1）制备DPPH自由基薄膜。
2）将待测化合物沉积到DPPH自由基薄膜上。
3）使用原子力显微镜观察样品的表面形态变化。
4）通过观察DPPH颜色的变化和表面形态的变化来评估清除率。
4.荧光法荧光法是一种快速、灵敏且简便的检测方法，利用化合物与DPPH反应后荧光上转换的变化来评估清除DPPH自由基能力。
实验过程如下：1）制备DPPH乙醇溶液。
2）将待测化合物与DPPH溶液混合。
3）使用荧光光谱仪测量样品的荧光强度的变化。
4）通过荧光强度的变化来计算清除率。
总结：以上所述是几种常用于检测清除DPPH自由基能力的方法，分别基于吸光度、EPR、AFM和荧光等原理。
2024DPPH清除自由基方法
2024DPPH清除自由基方法2024年，一种新的清除自由基的方法被引入，该方法使用DPPH试剂。
DPPH（1,1-二苯基-2-三甲基-苦基-2-脒基），是一种广泛应用于生物医学研究中的人工氧化剂。
DPPH试剂呈紫色，并且可与捕获自由基反应后转变成无色。
因此，通过测量DPPH试剂的颜色变化，可以评估抗氧化物质对自由基的清除能力。
DPPH清除自由基方法是一种简单、快速且经济的方法。
它适用于各种类型的样品，包括天然产物、食品、药物和化妆品。
使用DPPH试剂测定抗氧化能力的方法主要有两种：溶液试剂法和固相试剂法。
溶液试剂法是最常用的DPPH清除自由基方法之一、在这种方法中，首先将DPPH试剂以适当浓度溶解在溶剂中，通常使用甲醇或乙醇。
然后，将样品与DPPH溶液混合，反应一定时间。
在反应过程中，DPPH试剂将与样品中的抗氧化物质反应，使DPPH试剂转变为无色。
通过测量反应溶液的吸收光谱或测定其吸光度的变化，可以计算出样品的清除自由基能力。
固相试剂法是一种近年来发展起来的新方法。
在这种方法中，固定DPPH试剂在固相载体上，通常使用硅胶或其他吸附剂。
样品溶液被滴加到载体上，自由基会与固相DPPH试剂发生反应，并转变成无色。
然后，通过测量吸附剂的颜色变化或对比吸附剂的吸光度，可以确定样品的清除自由基能力。
DPPH清除自由基方法的优点之一是它不需要复杂的仪器设备，因此可以应用于各种实验室条件。
此外，DPPH试剂的制备相对简单，价格也相对较低。
这使得DPPH清除自由基方法成为研究抗氧化剂的吸引人选择。
然而，DPPH清除自由基方法也存在一些限制。
首先，DPPH试剂只能评估清除自由基的能力，而不能提供有关抗氧化物质的详细信息。
此外，该方法不能区分不同类型的自由基，因此不能用于研究具体自由基类型的清除能力。
最后，溶液试剂法和固相试剂法都需要一定时间的反应才能得到准确的结果，这可能会造成实验中的误差。
总的来说，DPPH清除自由基方法是一种简单有效的方法，用于评估样品的抗氧化能力。
抗氧化活性测定方法
抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定方法在食品、药物、化妆品以及生物学研究中具有重要的应用价值。
抗氧化活性是指物质对自由基的清除能力，其测定方法可以评估物质的抗氧化性能和保护细胞免受氧化损伤的能力。
本文将介绍一些常用的抗氧化活性测定方法。
一、DPPH自由基清除法DPPH自由基清除法是目前应用最广泛的抗氧化活性测定方法之一、该方法基于DPPH自由基的紫色溶液，在受到氧化损伤时会褪色。
通过测定样品对DPPH自由基的清除能力，可以评估其抗氧化活性。
实验步骤：1.准备0.1mM的DPPH溶液。
2.取一定量的样品，加入适量的溶剂溶解。
3.取不同浓度的样品溶液，加入相同量的DPPH溶液。
4.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出样品的抗氧化活性。
二、还原能力测定法还原能力测定法是一种常用的抗氧化活性测定方法。
该方法基于物质对氧化剂的还原能力，通过测定还原剂浓度与吸光度之间的关系，评估样品的抗氧化活性。
实验步骤：1.准备一系列不同浓度的还原剂溶液。
2.取一定量的还原剂溶液，加入适量的氧化剂溶液。
3.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出还原剂的浓度与吸光度之间的关系。
4.根据吸光度与还原剂浓度的关系，评估样品的抗氧化活性。
三、总抗氧化能力测定法总抗氧化能力测定法是一种综合评估样品抗氧化活性的方法。
该方法基于样品的抗氧化剂含量和抗氧化活性，通过测定样品对氧自由基的清除能力，评估其总抗氧化能力。
实验步骤：1.准备一定浓度的氧自由基溶液。
2.取一定量的样品，加入适量的溶剂溶解。
3.取不同浓度的样品溶液，加入相同量的氧自由基溶液。
4.静置反应一定时间后，通过测量溶液的吸光度变化，计算出样品的抗氧化活性。
以上是常用的抗氧化活性测定方法，还有其他一些方法如ORAC法、TEAC法等也被广泛应用。
不同的方法适用于不同的样品和测定目的，选择适合的方法进行测定可以更准确地评估样品的抗氧化活性。
3种抗氧化活性测定方法
3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定方法是评估化合物或材料抗氧化性能的一种重要手段。
随着抗氧化活性的研究日益深入，目前已经发展出很多种测定方法。
以下将介绍三种常用的抗氧化活性测定方法：DPPH自由基清除法、Fe2+/Fe3+还原能力法和ABTS自由基清除法。
1.DPPH自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色的自由基，常用于评估化合物或材料的抗氧化活性。
该方法基于DPPH自由基与抗氧化物质发生反应后，颜色由紫色变为淡黄色或无色。
测定方法简单，操作方便。
其原理是待测样品与DPPH混合后，通过电子或氢的转移反应，DPPH自由基将被清除，溶液颜色由紫色转变为淡黄色。
根据吸光度变化可以计算出自由基清除率，进而评估抗氧化活性。
2.Fe2+/Fe3+还原能力法：该方法基于还原能力测定抗氧化物质对Fe3+离子的还原能力。
常用的试剂是FeCl3溶液和TPTZ（2,4,6-三聚吡啶甲酸）、酸性pH缓冲液。
其原理是待测样品能够还原Fe3+离子为Fe2+离子，Fe2+离子与TPTZ反应生成有颜色的络合物，通过分光光度计测定络合物的吸光度变化，进而计算出还原能力。
较高的吸光度变化表示较高的抗氧化活性。
3.ABTS自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基双(3-乙基苯并噻唑啉-6磺酸)）自由基是一种蓝绿色自由基，其浓度在紫外可见光区域有最大吸收。
该方法基于ABTS自由基清除率来评估抗氧化物质的抗氧化活性。
该方法较DPPH法和还原能力法更为灵敏。
其原理是待测样品与ABTS自由基反应后，ABTS自由基将被清除，溶液颜色由蓝绿色变为无色或浅黄色。
通过测定吸光度的变化，可以计算出自由基清除率，进而评估抗氧化活性。
除了上述常用的抗氧化活性测定方法外，还有很多其它方法也被广泛应用于抗氧化活性的评估，如氧化还原测定法、Fenton反应法、还原剂抑制能力法等。
每一种测定方法都有其独特的原理和适用范围，研究人员可以根据具体的研究目的和样品性质选择合适的测定方法。
A清除自由基实验方法
1、DPPH 自由基清除实验取0.2 mL 样品，加入4 mL 醋酸缓冲溶液、3.8 mL 乙醇和2 mLDPPH，混合均匀后室温避光放置30 min，测定在517 nm 处的吸光度A。
同理，取0.2 mL 样品、4mL 醋酸缓冲溶液和3.8 mL 乙醇，测定在517nm处的吸光度A b。
4 mL 醋酸缓冲溶液、4 mL 乙醇和2 mL DPPH，测定在517 nm 处的吸光度A0。
自由基的清除率=[A0-(A－Ab)]/A0。
2、ABTS 自由基清除实验20 mL 的7 mmol/L ABTS 和352 μL 的140 nmol/L 过硫酸钾混合，在室温、避光条件下静置过夜，形成ABTS＋自由基储备液。
该储备液在室温、避光的条件下稳定，使用前用无水乙醇稀释成工作液，要求其在30 ℃、734 nm 波长下的吸光度为0.7±0.02。
加入的提取液0.1 mL、ABTS 工作液5 mL，混合均匀后在室温下避光反应10 min 后，在734 nm 处测定吸光度At。
ABTS 溶液作空白吸光度为Ar，样品0.1 mL、乙醇5 mL 混合均匀吸光度为A0。
ABTS＋自由基清除率(%)＝[1-(At-A0)/Ar]×100式中：At 为样品的吸光值；Ar 为空白的吸光值。
3、超氧阴离子清除实验采用邻苯三酚自氧化法，取4 mL 0.1 mol/L pH8.2 Tris-HCl 缓冲溶液和蒸馏水2 mL，混匀后在25 ℃水浴中保温20min，然后加入样品溶液2 mL，取出后立即加入在25 ℃预热过的5 mmol/L 邻苯三酚0.5 mL(以10 mmol/L HCL 配制，空白管用10 mmol/L HCL 代替邻苯三酚的HCL 溶液)，摇匀后倒入比色皿，325 nm下每隔30 s 测定吸光度，连续测定4 min，计算线性范围内每分钟吸光度的增加。
在加入一定体积样品溶液时，减少蒸馏水的体积。
抗氧化活性研究方法
抗氧化活性研究方法引言：氧化反应是指分子或原子失去电子，而还原反应是指分子或原子获得电子。
由于氧化反应产生的自由基具有高度活性，能够对细胞结构和功能造成损害，导致多种疾病的发生。
因此，研究抗氧化活性及其机制对于预防和治疗这些疾病具有重要意义。
本文将介绍几种常用的抗氧化活性研究方法。
一、DPPH自由基清除能力测定法DPPH自由基清除能力测定法是一种常用的抗氧化活性测定方法。
DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色自由基，其颜色随着氧化程度的增加而减弱。
在该方法中，将待测样品与DPPH溶液混合，通过测定混合液的吸光度变化来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性强的样品能够清除DPPH自由基，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降。
二、还原能力测定法还原能力测定法是通过测定待测样品对还原剂的还原能力来评估其抗氧化活性。
常用的还原剂包括铁离子、铜离子等。
在该方法中，将待测样品与还原剂混合，通过测定混合液的吸光度变化或还原剂浓度的变化来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性强的样品能够还原还原剂，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降或还原剂浓度的降低。
三、氧化脂质抑制能力测定法氧化脂质抑制能力测定法是通过测定待测样品对氧化脂质的抑制能力来评估其抗氧化活性。
常用的氧化脂质包括脂肪酸、脂肪油等。
在该方法中，将待测样品与氧化脂质混合，通过测定混合液中脂质的氧化程度来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性强的样品能够有效抑制氧化脂质的形成。
四、超氧阴离子清除能力测定法超氧阴离子是一种常见的自由基，具有较高的活性。
超氧阴离子清除能力测定法是通过测定待测样品对超氧阴离子的清除能力来评估其抗氧化活性。
常用的超氧阴离子产生体系包括NBT（硝基蓝盐）-NADH（尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）体系、XTT（二苯基四唑盐）体系等。
在该方法中，将待测样品与超氧阴离子产生体系混合，通过测定混合液的吸光度变化来评估样品的抗氧化活性。
抗氧化活性强的样品能够有效清除超氧阴离子，使其浓度降低，从而导致吸光度的下降。
DPPH自由基清除实验教学(详细版)
DPPH实验步骤一、原理：DPPH是一种很稳定的氮中心的自由基，它的稳定性主要来自3个苯环的共振稳定作用及空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。
作为一种稳定的自由基，DPPH可以捕获("清除")其他的自由基。
因此通过加入DPPH后观察某一化学反应的速率是否减慢，来作为这一反应是否具有自由基反应本质的指标。
由于DPPH自由基在以520nm为中心处具有强烈的吸收，因此在溶液中呈现深紫色，并且在被中和之后会变为无色或浅黄色。
DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其醇溶液呈紫色，且需低温避光储藏，具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为517nm下具有最大吸收。
有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅，在最大光吸收波长处的吸光值下降，且下降程度呈线性关系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，从而以评价试验样品的抗氧化能力。
此抗氧化能力用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化性越强。
二、实验步骤：1.配制0.1mM的DPPH溶液：配两次，每次取0.002gDPPH溶于50mL乙醇，避光保存。
2.配制0.5mg/mL的Vc溶液，至少2mL（设为阳性对照，选择性做）3.配制一定浓度的样品溶液，至少2mL母液（也可以配制不同溶度梯度样品，计算IC50）4.上板（避光操作，上完板后，室温避光30分钟，测吸光度）96孔板，三组，每组设3个复孔，每孔加入量及96孔板分布如下：sample（样品组）：样品溶液100uL+ DPPH醇溶液100uL (每个浓度3个孔)blank（空白组）：样品溶液100uL+无水乙醇100uL （每个浓度3个孔）control（对照组）：DPPH 醇溶液100uL+水100uL （一块板可共用一个对照组,3个孔）样品VC浓度 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 sampleblankcontrol5.检测并计算清除率测517nm处的吸光度，取平均値，计算每个浓度的DPPH清除率，做出折线图。
3种抗氧化活性测定方法
3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性是指物质对氧化过程的抑制作用，能够减缓或阻断自由基对细胞和组织的损害。
目前，常用的抗氧化活性测定方法主要包括DPPH 自由基清除法、ABTS自由基清除法和铁还原能力测定法。
以下将对这三种方法进行详细介绍。
1.DPPH自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-若氧基-苯基-π-苦味噁唑）自由基清除法是一种常用的抗氧化活性测定方法。
该方法是通过测定样品对DPPH自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。
DPPH自由基是一种紫色稳定的自由基，在接触到氢供体（抗氧化剂）后，会发生颜色变化从紫色转变为黄色。
可以通过测定样品溶液的吸光度来评估其抗氧化能力。
吸光度的降低表明样品对DPPH自由基的清除能力较强。
2.ABTS自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基双（3-乙基苯并噻唑））自由基清除法也是一种常用的抗氧化活性测定方法。
ABTS自由基是一种无色可溶性自由基，其生成主要通过氧化剂与ABTS反应而产生。
测定方法是将ABTS与过氧化氢反应，生成蓝色自由基溶液，然后将样品加入到溶液中，通过测定吸光度的变化来评估样品的抗氧化活性。
吸光度的降低表明样品对ABTS自由基的清除能力较强。
3.铁还原能力测定法：铁还原能力测定法是一种评估抗氧化活性的常用方法，通过测定样品对Fe3+还原为Fe2+的能力来评估其抗氧化能力。
在这个方法中，还原剂（如抗氧化剂）会与Fe3+反应，生成Fe2+，并且Fe2+的浓度可以通过测量其吸光度来确定。
浓度越高，吸光度越高，表明样品的抗氧化能力越强。
这三种抗氧化活性测定方法各有其优势和适用范围。
DPPH自由基清除法适用于评估样品对自由基的清除能力，但其结果受其他化合物的影响较大；ABTS自由基清除法对于水溶性和脂溶性样品均适用，但其结果也受其他化合物的影响；铁还原能力测定法适用于样品中还原型物质的测定，可评估样品对金属离子的还原能力。
因此，在实际应用中，可以根据需要选择适合的方法来评估样品的抗氧化活性。
DPPH自由基清除测定
DPPH法测定黄芩黄酮的抗氧化活性抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。
目前对自由基清除剂的研究方法主要有2类，一类是体外模型，另一类是体内模型，其中DPPH法是体外模型中最常用的方法。
DPPH又称1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，他的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。
它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。
向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH·，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。
即通过在517nm波长处检测样品清除DPPH·的效果，来计算抗氧化能力。
实验研究表明，黄芩黄酮中清除DPPH自由基活性的主要成分是黄芩苷[1]，黄芩苷中含有羧羟基和酚羟基能与DPPH反应，反应式如下：N N+O2NO2NNO2H+N NHO2NO2NNO2 DPPH与抗氧化剂反应原理材料：DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）；无水乙醇；仪器：分光光度计1.DPPH贮备液的制备准确称取DPPH试剂3．5mg，用无水乙醇溶解，并定量转入10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，取2mL至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0178mmol／L DPPH贮备液，置于冰箱中冷藏备用。
2.试液的制备(只作参考)准确称取5.2mg干燥的黄酮提取物（32.75%）,用无水乙醇溶解，并定量转入50ml容量瓶中，用无水乙醇定量至刻度，取10ml至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0233mmol／L 试液。
3.DPPH·清除率的测定在10mL比色管中依次加入4.0mLDPPH溶液和黄酮提取液，再加入无水乙醇至刻度，混匀立即用1cm比色皿在517nm波长处测吸光值(A)，吸光值记为Ai，再在温室避光保存30min后测吸光值，记为Aj，对照试验为只加DPPH的乙醇溶液，其吸光值记为Ac。
DPPH自由基清除测定(完整word版) 以肾上腺素为例
DPPH自由基清除测定(完整word版) —以肾上腺素为例【仪器与试剂】1.仪器可见分光光度计；SB3200D超声波清洗机；电子天平（BS110S）；BIOHIT单道手动可调移液器（10-100μL、100-1000μL、1000-5000μL）；微量比色皿。
2.试剂肾上腺素（AR）、DPPH（AR）、无水乙醇（AR）；【原理】根据文献[1]可知，DPPH（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical）即1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，别名1,1-二苯基-2-苦肼基自由基，其分子中，存在多个吸电子的硝基-NO2，还有苯环的π66共轭大π键，所以它是一种稳定的氮自由基，溶液呈紫色。
图1. DPPH结构式图2. DPPH自由基分子模型(基于chem3D,MM2优化）随着DPPH自由基减少，其溶液在它的最大吸收519nm处吸收会减少，其溶液的颜色也会变浅。
因为DPPH溶液吸光度和自由基浓度之间存在着正比关系，所以可以通过吸光度来计算自由基清除率。
因此DPPH自由基清除实验常用来检测抗氧化剂在体外清除自由基能力的强弱。
【实验对象】图3. 肾上腺素结构式图4. 肾上腺素分子模型（基于Chem3D,MM2优化）肾上腺素(adrenaline，epinephrine，AD，EP)是由肾上腺髓质分泌的一种激素，都属儿茶酚胺类激素，又称副肾素，分子式为C9H13O3N，化学成分为1-(3,4-二羟基苯基)-2-甲氨基乙醇或3,4-二羟基-α-(甲氨基甲基)苄醇，其结构式如图3所示。
为白色或类白色结晶性粉末，无臭，味苦。
遇日光和接触空气易氧化变质，由淡粉红色变成棕色。
在中性或碱性水溶液中不稳定，饱和水溶液显弱碱性反应。
极微溶于水，不溶于乙醇、氯仿、乙醚、脂肪油或挥发油，易溶于矿酸或氢氧化钠溶液，不溶于氨溶液或碳酸钠溶液。
常用其盐酸盐，易溶于水，0.1%水溶液pH为2.5～5。
【实验操作】清除DPPH能力检测本实验采用文献[1]的方法，并视情况改动。
dpph自由基清除实验-实验流程图-操作图解-李熙灿-Xican Li
dpph自由基清除实验-实验流程图-操作图解-李熙灿-
Xican Li
dpph自由基清除实验:实验流程图2017.10
【前言】DPPH自由基的甲醇或乙醇溶液呈深紫红色，并在519 nm范围有最大吸收峰。
其结构中含有3个苯环，1个N原子上有一个成单电子。
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NH
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DPPH自由基结构式 DPPH自由基模型图
当向DPPH自由基溶液中加入自由基清除剂(抗氧化剂)时，成单被配对，深紫色的DPPH自由基被还原成黄色DPPH-H分子，其褪色程度与所接受的电子数量成定量关系，因而可以通过吸光度的变化进行定量分析。
清除DPPH自由基是DPPH法的根据，当DPPH自由基与抗氧化剂反应后，519nm波长处的吸收值降低，其降低的程度与接收的电子(抗氧化剂清除自由基活性)呈定量关系，反应进程很容易通过分光光度计测定。
【文献】Jing Lin, Xican Li, Li Chen, Weizhao Lu, Xianwen Chen, Lu Han, Dongfeng Chen. Protective effect against hydroxyl radical-induced DNA damage and antioxidant mechanism of
[6]-gingerol: A Chemical Study. Bulletin of the Korean Chemical Society, 2014, 35(6), 1633-1638.
【实验流程图】
1
2。
抗氧化活性测定方法的比较
抗氧化活性测定方法的比较1.DPPH自由基清除法：DPPH是一种紫色自由基，具有很强的吸收特性。
该方法通过测定样品对DPPH自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。
这种方法简单、快速，广泛用于抗氧化活性的初步筛选。
但是该方法只能反映样品对一种自由基的清除能力，不能全面评估其抗氧化性能。
2.ABTS自由基清除法：ABTS是一种蓝色自由基，其吸收波长与DPPH不同，具有更广的吸收范围。
该方法通过测定样品对ABTS自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。
与DPPH法相比，ABTS法可以更全面地评估样品的抗氧化性能。
但是该方法需要较长时间才能得到准确结果。
3.过氧化氢清除法：该方法通过测定样品对过氧化氢的清除能力来评估其抗氧化活性。
过氧化氢是一种常见的氧化剂，可以导致细胞损伤。
该方法简单、快速，适用于多种样品的抗氧化活性测定。
但是过氧化氢法只能评估样品对过氧化氢的清除能力，不能反映其对其他自由基的清除能力。
4.铁离子还原能力法：该方法通过测定样品对Fe3+的还原能力来评估其抗氧化活性。
Fe3+是一种常见的氧化剂，可以与还原剂发生反应，形成Fe2+。
该方法简单、快速，适用于多种样品的抗氧化活性测定。
但是铁离子还原能力法只能评估样品对Fe3+的还原能力，不能全面评估其抗氧化性能。
5.脂质过氧化抑制能力法：该方法通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力来评估其抗氧化活性。
脂质过氧化是一种常见的氧化反应，可以导致脂质的氧化损伤。
该方法能够全面评估样品的抗氧化性能，适用于多种样品的抗氧化活性测定。
但是该方法操作繁琐，需要较长时间才能得到准确结果。
总体来说，不同的抗氧化活性测定方法各有优劣。
在实际应用中，可以根据需要选择适合的方法进行测定。
此外，多种方法的综合比较可以更全面地评估样品的抗氧化性能。
体外抗氧化实验方案
一、DPPH自由基清除法[原理] DPPH（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical）即1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基。
分子中，由于存在多个吸电子的-NO2和苯环的大π键，所以，氮自由基能稳定存在。
N22当DPPH自由基被清除，其最大吸收波长519nm处的吸光度A值随之减小。
DPPH这种稳定的自由基为清除自由基活性的检测提供了一个理想而又简单的药理模型。
[实验步骤]1.1 DPPH测试液的配制 6.25ｘ10ˉ5M取DPPH 0.0246g溶于约100mL溶剂甲醇中，超声5min，充分振摇，务使上下各部分均匀。
取1mL 该DPPH溶液，在519nm处测A值，使A＝1.2-1.3之间最佳。
该DPPH溶液最好避光保存，3.5小时内用完。
1.2 样品液的配制Vc溶液（0.25mg/ml）称取Vc 0.01125g 溶于45mL乙醇溶液1.3 预试取DPPH溶液2mL，往其中加少量样品液，加样时，先少后多渐加，边加边混合，并观察溶液的褪色m情况，当溶液颜色基本褪去时，记下样品的加样量。
此加样量即为样品的最大用量，在此最大用量的基础上，往前设置5个用量，使之成等差数列。
【如】在预试过程中，发现加样到200μL时，DPPH溶液颜色基本褪去，则200μL为该样品液的最大用量。
其用量梯度宜设为40、80、120 、160、200μL。
浓度梯度mg/ml为0.0025、0.0050、0.0100、0.0200、0.0400μg/ml 2.5、5、10、20、401.4测量A0值的测量：取DPPH溶液2 mL加入到小试管（或玻璃瓶）中，加95甲醇1mL，充分混合，测A 值（517nm），此A值为A0（A0多在0.7-0.9之间）。
A值的测量：取DPPH溶液2mL加入到小试管（或玻璃瓶）中，加样品液xμL （x是根据1.3 预试结果确定样品液的用量），再加（1000 -x）μL 甲醇，混合，静置30分钟后，测A值（517nm）。
DPPH氮自由基清除能力测试试剂盒酶标板法
DPPH氮自由基清除能力测试试剂盒酶标板法氮自由基（DPPH）清除能力测试试剂盒---酶标板法一、测定原理DPPH自由基是一种较稳定的含氮自由基，有一个单电子，在517nm下有强吸收，如果有其他物质提供一个电子使此单电子配对，其吸收会消失褪色，褪色程度与接受电子的量呈正比。
即反应物清除氮自由基的能力与试剂在517nm的吸光值成反比。
二、试剂组成试剂一：DPPH试剂100μL支试剂二：100μg/mL 维生素C标准溶液 1ml×1支三、储存条件及有效期试剂盒-20℃可保存6个月。
四、试剂的配制试剂一：37℃平衡20min以上，待试剂融化后，在试剂瓶中加入10ml 95%乙醇或无水乙醇，剧烈震荡使试剂充分溶解。
注意：溶解一定要充分，如有条件可采用超声波助溶。
试剂二应用液：根据是否需要制作阳性对照标准曲线有两种配制方法。
1. 如仅需要将维生素C作为质控品，可取100μL 试剂二，加入900μL样品稀释液，充分混匀，配制成10μg/mL 维生素C；2. 如需测定维生素C的IC50，可分别移取0，2，5，10，15，20，25，30，40，50μL 试剂二于空离心管中，再依次加入100，98，95，90，85，80，75，70，60，50 μL样品稀释液，充分混匀。
配制成0，2，5，10，15，25，30，40，50 μg/mL 维生素C样品。
五、操作步骤空白孔1测定孔对照孔2质控孔试剂一（μL）1001000100样品溶液（μL）100100试剂二应用液（μL）100样品稀释液（μL）100充分混匀，室温避光静置30min使之充分反应。
517nm处采用酶标仪测定吸光值。
1空白管很重要，建议做3个以上平行；2如样品颜色较浅可不做对照管六、计算公式注：1 如未做对照孔，可以将其视作为0；2 质控孔求值时将其视作测定孔进行计算即可。
七、注意事项1. 如样品中色素物质不是分析对象，建议先通过SEP C18柱进行脱色处理，处理后样品可不做对照孔；2. 如不确定样品的氮自由基清除能力，可先做不同浓度的稀释液进行摸索，并选择适宜浓度进行测定，高浓度下，浓度与清除率间并不线性相关。
dpph自由基清除实验
DPPH自由基清除实验引言自由基是一类具有不成对电子的化学物质，它们高度活跃且能够引发细胞氧化损伤。
因此，寻找有效的抗氧化剂来清除自由基对细胞和健康的影响至关重要。
DPPH（2，2-二苯基-1-苦味肼）是一种常用的化学试剂，被广泛用于评估抗氧化剂的活性。
本实验旨在使用DPPH自由基清除实验来评估抗氧化剂的抗氧化性能。
实验步骤1.准备实验样品，可以选择不同的抗氧化剂，如维生素C、维生素E等。
2.准备DPPH溶液，将适量的DPPH溶解在乙醇中，摇匀使其充分溶解，最后得到0.1 mM的DPPH溶液。
3.取一定量的DPPH溶液（如2 mL），加入试管中。
4.分别将不同浓度的抗氧化剂溶液（如0.1 mM，0.2mM，0.3 mM等）加入不同的试管中。
5.快速摇匀试管，使DPPH和抗氧化剂充分接触。
6.将试管放置在室温下静置15分钟，使反应充分进行。
7.使用分光光度计测定每个试管中溶液的吸光度，记录下数值。
数据处理1.计算抗氧化剂的清除率，清除率的计算公式为：（A₀ - A₁）/ A₀ × 100%。
其中，A₀为对照组（只有DPPH 溶液）的吸光度，A₁为实验组的吸光度。
2.绘制抗氧化剂浓度与清除率之间的曲线图，以展示不同浓度下清除率的变化趋势。
结果与讨论根据实验数据绘制的曲线图，可以看出抗氧化剂的清除率随着浓度的增加而增加。
这说明抗氧化剂对DPPH自由基具有较好的清除能力。
其中，浓度为0.3 mM的抗氧化剂表现出最大的清除率，清除率超过90%。
而浓度较低的抗氧化剂，如0.1 mM的清除率较低，仅为50%左右。
通过本实验可以初步评估抗氧化剂的抗氧化性能。
然而，需要注意的是实验中使用的DPPH自由基只是模拟体内自由基的一种方式，实际中还需要进一步研究抗氧化剂在体内的表现和效果。
结论本实验使用DPPH自由基清除实验评估了不同浓度抗氧化剂的抗氧化性能。
结果表明抗氧化剂的清除率随浓度的增加而增加，0.3 mM浓度的抗氧化剂表现出最佳的清除能力。
dpph自由基清除原理
dpph自由基清除原理
DPPH自由基清除原理是一种常用的方法，用于评估物质的抗
氧化能力。
DPPH（2,2-二苯基-1-苦味酮肼）是一种紫色自由基，具有不配对电子，可吸收紫外-可见光谱范围内的光线，
发生颜色褪变。
在清除DPPH自由基的过程中，如果物质具
有清除能力，会导致DPPH的颜色变浅，光吸收减弱。
DPPH自由基清除实验可通过光度计来测定。
在实验中，首先
将DPPH固体溶解在适当溶剂中，形成浓度适中的溶液。
随后，向DPPH溶液中加入测试物质。
当测试物质呈现清除DPPH自由基的能力时，DPPH的颜色由紫色逐渐变浅，光吸
收度下降。
DPPH自由基能被多种物质清除，包括天然产物如多酚类和类
黄酮等化合物，以及合成抗氧化剂（例如BHA和BHT）。
这
些物质中含有高的氢供体能力，能将自己的氢原子转移给DPPH自由基，从而中和DPPH的不配对电子。
DPPH自由基清除实验可以定量测定物质的抗氧化能力，常用
抗氧化指标包括DPPH清除率和半数清除浓度（IC50）。
DPPH清除率表示物质清除DPPH自由基的能力，清除率越高，抗氧化能力越强。
IC50值表示使DPPH清除率达到50%所需
的物质浓度，值越低，抗氧化能力越强。
总之，DPPH自由基清除实验是一种简便、快速、可靠的评估
物质抗氧化能力的方法，可用于筛选和比较不同物质的抗氧化活性。
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dpph自由基清除测定
DPPH法测定黄芩黄酮的抗氧化活性
抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。
目前对自由基清除剂的研究方法主要有2类，一类是体外模型，另一类是体内模型，其中DPPH法是体外模型中最常用的方法。
DPPH又称1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，他的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。
它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。
向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH?，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。
即通过在517nm波长处检测样品清除DPPH?的效果，来计算抗氧化能力。
[1]实验研究表明，黄芩黄酮中清除DPPH自由基活性的主要成分是黄芩苷，黄芩苷中含有羧羟基和酚羟基能与DPPH反应，反应式如下:
ONON22
+H+NNONNONNH22
NONO22
DPPH与抗氧化剂反应原理
材料:DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼);无水乙醇; 仪器:分光光度计
1.DPPH贮备液的制备
准确称取DPPH试剂3(5mg，用无水乙醇溶解，并定量转入10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，取2mL至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0178mmol,L DPPH贮备液，置于冰箱中冷藏备用。
2.试液的制备(只作参考)
准确称取5.2mg干燥的黄酮提取物(32.75%),用无水乙醇溶解，并定量转入
50ml容量瓶中，用无水乙醇定量至刻度，取10ml至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0233mmol,L试液。
3.DPPH?清除率的测定
在10mL比色管中依次加入4.0mLDPPH溶液和黄酮提取液，再加入无水乙醇至刻度，混匀立即用1cm比色皿在517nm波长处测吸光值(A)，吸光值记为Ai，再在温室避光保存30min后测吸光值，记为Aj，对照试验为只加DPPH的乙醇溶液，其吸光值记为Ac。
按下式计算自由基清除率(K):
K(%)=[1-(Ai-Aj)/Ac]*100%
试验重复三次，取其平均值作为最后结果。
[1].刘玉萍,Purusotam Basnet,小松かっ子,曹晖.黄芩清除自由基活性与黄芩苷含量的相关性研究[J].中国中药杂志,2002,27(8):575-579
药品:DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼);
推荐厂家:上海如吉生物科技发展有限公司; 北京诺博莱德科技有限公司;
报价:380元/瓶;500元/瓶;
规格:1g/瓶;
含量:99%;
产地:日本进口
DPPH稳定性不好，要用时,新鲜配制
DPPH浓度要根据样品的活性来定，一般在20-100μg/mL
添加DPPH量与样品量比例，是根据样品抗氧化能力，而定的～
DPPH分子量:394.321
样品+DPPH的读数太大，表明你加进去的样品的抗氧化活性较低，可考虑加大样液的浓度试试，
所测的值太大或太小，改变DPPH和黄酮的比例或者浓度。
绘制黄酮梯度浓度与DPPH清除曲线，计算IC50(软件)，表示其抗氧化活性。
IC50值为样品提取液抑制DPPH的吸光度50%时提取物的浓度。