安捷伦1260操作规程
安捷伦1260型高效液相色谱仪详细操作规程
安捷伦1260型高效液相色谱仪详细操作规程1.目的:规范Agilent 1260高效液相色谱仪维修、保养、校正操作。
2.适用范围:本公司化验室Agilent 1260高效液相色谱仪的维修、保养。
3.有关责任:化验室精密仪器室4.引用标准:仪器说明书及Agilent化学工作者现场操作培训教材5.规程内容:5.1开机前准备5.1.1根据实验要求配制流动相,须经0.45μm滤膜过滤,之后再进行脱气处理,使用前必须用超声波振荡l0-15min,按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A(装有洗盐装置,最好固定盛放无机盐水相)、B中;对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。
5.1.2若流动相中含有缓冲盐,则必须以每分钟2~3滴的速度虹吸10%的异丙醇水冲洗seal-wash,以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。
5.2.采样前准备5.2.1打开计算机,进入Windows 系统, 从上到下依次打开各模块电源。
5.2.2待各模块自检完成后,双击桌面上的“仪器1联机”图标,将自动进入化学工作站画面。
5.2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项,进入方法和运行控制窗口。
5.2.4打开Purge阀(逆时针),右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。
5.2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min ,A通道设到100%,单击“确定”。
5.2.6单击“泵”图标,出现参数设定菜单,单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge,直到管路内由溶剂瓶A到泵入口无气泡为止;切换B通道(B通道设到100%)继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。
(查看柱前压力,若大于10Bar,则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。
)5.2.7将泵的流量设到0.5ml/min,若使用双泵则应设定溶剂配比,如A=80%,B=20%;关闭排气阀(顺时针);再将流量设到0.8ml/min,2分钟后设定至方法所需流速,冲洗色谱柱20-30min。
安捷伦1260全自动高效液相操作规程
安捷伦1260全自动高效液相操作规程
1.样品的准备:最好使用流动相溶解样品;进样前样品需过滤膜,除去悬浮不溶杂质。
2.流动相的选择和处理:使用高纯度试剂,所有含盐或含水溶剂必须膜过滤,100%色谱纯有机试剂,滤膜过滤后方可使用;流动相现配现用,剩余的流动相(水相)及时清理,实验间隔>2天,建议倒掉;任何溶剂,如果有可见悬浮物、菌丝,不可使用;更换流动相之前,必须事先阅读色谱柱的说明书;除非有说明,反相柱不得使用100%水。
3.开机注意事项:先开HPLC仪器开关、脱气机、泵和紫外检测电源;等各电源开启后(30s),打开在线软件;冲柱子和平衡时,暂不开紫外灯;平衡完后,打开紫外灯,设置梯度和波长或引用方法。
4.实验结束:C18反相柱应用色谱甲醇保存,不能含任何酸、盐;用甲醇替换通道,四个过滤头均存放于有机溶剂瓶中,以防长菌;流速调零,再关闭软件,最后依次关闭脱气机、泵和紫外检测器的电源。
安捷伦HPLC1260操作流程
色谱峰 数据
色谱峰手动积分
报告→打印报告
主峰要求: 分离度﹥1.5 0.95≤对称因子≤ 1.05 塔板数8000以上 主峰数据
色谱峰实例
* D A D 1 A , S ig = 2 4 8 , 4 R e f = o f f ( V P A - T D M - 2 \ V P A - S C J 2 0 1 5 - 0 3 - 2 4 1 1 - 3 1 - 1 6 \ V P A - 2 0 1 5 0 3 2 4 0 0 1 . D )
流动相冷却
流动相在超声机中长时间超声后,由于水 分子振动摩擦,使水温上升,因此流动相瓶中 的溶剂也会被加热。加热后的流动相进入液相 系统和色谱柱后,会影响基线噪声的增加,使 平稳时间延长。
1260HPLC及化学工作站开机使用与关机
打开计算机
打开主机电源
点击仪器1联机进入工作站
关闭排气阀
调节流速与流动相比例
7 0
50
6 0
5 0
标准品
1 2
4 0
40
3 0
2 0
1 0
30
0 0 5 1 0 1 5 2 0 m in
1 环己烷羧酸
20 10
2 丙戊酸钠
0 5 10 15 20 m in
患者丙戊酸钠血药浓度检测色谱图
氘灯是易耗品,分析前应最后开灯,不分析样
品应及时关闭氘灯;
流动相不要使用多日存放的蒸馏水,一般不易
7 0
6 0
5 0
空白
4 0
70
3 0
2 0
1 0
60
0 m in
D A D 1 m A U 8 0
A , S ig = 2 4 8 , 4
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程资料
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程资料安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机(1)打开计算机,登陆windows操作系统。
(2)打开主机各模块电源(从上至下),待各模块完成自检后,再双击桌面“仪器1联机”图标,进入化学工作站,从视图菜单中选择“方法和运行控制”画面。
(3)进行仪器配置,点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-输入IP地址:192.168.254.11。
把各流动相放入相应的溶剂瓶中。
(4)编辑方法。
方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项(四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定,仪器参数默认),完成后,文件→方法另存为→编辑名称,保存方法。
(5)排气。
旋开排气阀(逆时针),右单击“四元泵”图标出现快捷键,点击“方法”设置泵流速,排气可设置1.2ml/min,l流量梯度100,也可5ml/min,流量梯度10。
一般冲洗3-5min,注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入管道才可使气体排出,观察管路中气体位置,以其排净为目的。
关泵,关闭排气阀(顺时针)。
(注意:先开排气阀,再开泵,先关泵,后关排气阀)。
(6)在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值,谨防空进。
将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。
(7)换流动相,待柱前压力基本稳定后,打开检测器,视图,在线信号,选择信号,观察基线情况。
二、数据采集信息编辑及进样(1)编辑样品信息:点“单次样品”小瓶,或点击运行信息-单次进样,设定操作者姓名,样品数据文件名,进样量等。
(2)编辑好样品信息后方可进样。
三、数据处理(1)打开桌面“仪器1脱机”,单击“数据分析”进入数据分析画面。
(2)从“文件”菜单中选择调用信号,选择您的数据文件名,单击确定。
(3)谱图优化。
从“图形”菜单中选择“信号选项”从范围中选择“自动量程”及合适的显示时间,或选择“自定义量程”调整,反复进行,直到图比例合适为止。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、仪器介绍二、前期准备1.打开仪器电源,待仪器自检完成后,确保所有指示灯都亮起。
2.检查溶剂瓶的液位,确保足够的溶剂供给。
3.清洁好色谱柱并连接到系统中。
三、仪器启动1.打开色谱软件,选择相应的方法。
2.点击“系统”菜单,选择“启动系统”命令,系统开始进行初始化。
3.在系统初始化完成后,点击“准备”菜单,选择“准备系统”命令,系统开始进行一系列的自动化准备工作,比如冲洗和平衡柱子。
4.检查系统的压力和温度,确保在正常范围。
四、样品进样1.准备好待测样品和标准品。
2.将样品装入进样瓶中,注意不要超过瓶口。
3.将进样瓶插入样品进样系统中,按照方法设置的条件进行进样。
4.点击软件界面上的“进样”按钮,开始进样。
五、色谱柱选择1.根据待测样品的性质和分离特点,选择合适的色谱柱。
2.将色谱柱连接到色谱仪系统中。
3.检查色谱柱的压力和温度,确保在正常范围。
六、色谱条件设置根据分析方法的要求,设置好色谱条件,包括流量、温度、柱温等参数。
七、检测器设置1.根据需要选择合适的检测器,比如紫外检测器、荧光检测器等。
2.设置检测器的工作参数,如波长、增益、基线噪声等。
八、开始分析1.在样品进样后,点击软件界面上的“开始”按钮,开始进行色谱分析。
2.监控检测器输出的信号,根据需要可以对信号进行放大或调整。
九、结果解析1.根据所用方法的要求,对分析结果进行解析。
2.可以通过软件导出结果并进行后续处理。
十、仪器关机1.关闭色谱仪软件。
2.关闭色谱柱进样系统。
3.关闭色谱仪电源。
此为安捷伦1260高效液相色谱仪的操作规程,希望能对使用者提供一定的参考和帮助。
在操作过程中,应严格按照安全操作规范进行,并及时进行维护和保养,以保证仪器的正常运行。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程资料
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程一、开机(1)打开计算机,登陆windows操作系统。
(2)打开主机各模块电源(从上至下),待各模块完成自检后,再双击桌面“仪器1联机”图标,进入化学工作站,从视图菜单中选择“方法和运行控制”画面。
(3)进行仪器配置,点仪器-仪器配置-选择所需模块-自动配置-输入IP地址:192.168.254.11。
把各流动相放入相应的溶剂瓶中。
(4)编辑方法。
方法-新建方法-方法-编辑完整方法-编辑各项(四元泵、TCC、VWD、仪器曲线参数设定,仪器参数默认),完成后,文件→方法另存为→编辑名称,保存方法。
(5)排气。
旋开排气阀(逆时针),右单击“四元泵”图标出现快捷键,点击“方法”设置泵流速,排气可设置1.2ml/min,l流量梯度100,也可5ml/min,流量梯度10。
一般冲洗3-5min,注意倾斜储液瓶使过滤头处的气体进入管道才可使气体排出,观察管路中气体位置,以其排净为目的。
关泵,关闭排气阀(顺时针)。
(注意:先开排气阀,再开泵,先关泵,后关排气阀)。
(6)在让液体进入柱子之前应将甁填充设置为实际值,谨防空进。
将泵流速设置1ml/min,用过渡液即缓冲液冲洗色谱柱20—30分钟。
(7)换流动相,待柱前压力基本稳定后,打开检测器,视图,在线信号,选择信号,观察基线情况。
二、数据采集信息编辑及进样(1)编辑样品信息:点“单次样品”小瓶,或点击运行信息-单次进样,设定操作者姓名,样品数据文件名,进样量等。
(2)编辑好样品信息后方可进样。
三、数据处理(1)打开桌面“仪器1脱机”,单击“数据分析”进入数据分析画面。
(2)从“文件”菜单中选择调用信号,选择您的数据文件名,单击确定。
(3)谱图优化。
从“图形”菜单中选择“信号选项”从范围中选择“自动量程”及合适的显示时间,或选择“自定义量程”调整,反复进行,直到图比例合适为止。
(4)积分。
从“积分”中选择“自动积分”,若积分结果不理想,从菜单中选“积分事件”,更改数据为合适的“斜率灵敏度、峰宽、最小峰面积、最小峰高”,从“积分”中选择积分选项,则数据被积分,如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止。
安捷伦1260操作规程
安捷伦1260操作规程安捷伦(Agilent)1260操作规程一、仪器概述安捷伦1260高效液相色谱仪是一种用于液相色谱分析的仪器,具有高灵敏度、高分辨率和高效率的特点。
该仪器由进样器、色谱柱、色谱泵、检测器等组成。
二、仪器准备1. 确保仪器的电源已连接并接通。
2. 检查进样器、色谱柱和检测器是否安装正确。
3. 检查液相色谱仪的液相系统是否已进行适当的液相填充,以及是否有足够的溶剂。
三、方法设置1. 打开色谱软件,并选择合适的方法模板。
2. 根据分析需求,在方法设置中输入样品信息、进样量、流速等参数。
3. 设置检测器的波长、增益和测量范围。
四、进样操作1. 打开进样器的盖子,将待测样品加入样品瓶中。
2. 点击软件中的进样按钮,设置样品名称和进样量。
3. 将样品瓶放入进样器,并关闭盖子。
4. 点击软件中的进样按钮,开始进样。
5. 进样完成后,从进样器中取出样品瓶,并将它放入垃圾桶中。
五、色谱柱操作1. 打开色谱柱的阀门,并将柱端与色谱柱连接。
2. 检查色谱柱是否没有泄漏,如果有泄漏,则需重新连接。
3. 检查色谱柱的温度,确保它处于合适的温度范围内。
六、液相泵操作1. 打开液相泵的电源,并连接到电脑上。
2. 设置合适的流速和梯度梯度。
3. 点击软件中的启动按钮,开始进行分析。
七、数据分析1. 使用色谱软件进行数据采集和分析。
2. 根据需要选择适当的数据处理方法,如峰面积计算、定量分析等。
3. 导出分析结果并保存。
八、仪器维护1. 分析结束后,关闭液相泵、进样器、色谱柱和检测器等设备的电源。
2. 清洗色谱柱和进样器,保持其清洁。
3. 定期检查仪器的连接线和电源线是否有松动或损坏。
九、安全操作1. 在操作仪器时,注意安全,避免接触到有害化学品。
2. 在操作过程中,严禁随意触摸仪器或移动连接线。
3. 在操作过程中,如遇到异常情况,请及时停止分析并向管理员报告。
通过以上操作规程,可以有效地使用安捷伦1260高效液相色谱仪进行样品分析。
安捷伦1260型HPLC使用操作
安捷伦1260型HPLC使用操作1.准备工作-打开高效液相色谱仪电源,并确保与计算机的连接稳定。
-打开色谱柱箱的前盖,并检查柱箱是否安装了所需的柱。
-检查并确认进样器和检测器的所有连接口均已连接到系统中。
-打开色谱仪控制软件,并确保与色谱仪的连接正常。
2.样品准备和进样-准备样品溶液,并使用过滤器将其过滤以去除悬浮物。
-选择适当的进样方式,可以是自动进样器、手动进样或在线进样。
-根据进样方式的不同,设置进样器参数,并将样品注入进样器。
-设置进样体积和进样流速。
3.设定色谱柱和流动相条件-选择合适的色谱柱,根据分析需要选择固定相材料和尺寸。
-设置所需的流动相条件,包括流动相组成、流速和梯度程序等。
-确保流动相的pH值适合分离物质的性质。
4.开始运行HPLC实验-在色谱仪软件中设置分析方法,包括运行时间、梯度程序和检测波长等参数。
-点击运行按钮,开始HPLC分析实验。
-监控进样、分离和检测过程,并保持对系统的稳定控制。
5.数据分析和结果解读-实时监测实验过程中的色谱图和峰形。
-根据标准品或已知样品进行定量分析,并计算所需的峰面积和浓度。
-使用色谱仪软件进行数据分析,并生成报告和结果图表。
-解读分析结果,如峰形和保留时间,确定分离物质的纯度和结构。
6.实验后处理-关闭色谱仪电源。
-清洗色谱柱和进样器,以及其他与样品接触的部件。
-将废液正确处理,并清理实验台面。
-存储和整理实验数据和结果文件,以备后续分析和参考之用。
以上是安捷伦1260型HPLC使用操作的基本步骤,根据具体的实验需求和样品特性,可能需要进行一些调整和优化。
熟悉和掌握这些操作步骤,可以提高实验的效率和结果的准确性。
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项一、操作规程? 开机1(把经过滤、脱气的各流动相装入贮液瓶中。
2(打开计算机,打开主机各模块电源(从上至下),再双击桌面“LC1260(联机)”图标,进入化学工作站。
3(旋开排气阀(逆时针),右键单击“四元泵”图标出现快捷键,点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量设为“5mL/min”,溶剂A设为“100%”,打开泵,排出管路中的气体,直到由贮液瓶到泵入口整个管路中无气泡为止,此过程约需要5min。
4(依次切换到溶剂B、C、D,分别排气。
? 数据采集1. 编辑样品信息:由“运行控制”进入“样品信息”,设定操作者姓名,样品数据,文件名等。
2. 编辑完整方法:从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项,单击“确定”进入“方法注释”,编辑好单击“确定”。
在“选择进样源”中选择“手动进样”单击“确定”,在“设置方法”中进行参数设定。
3. 四元泵参数设定:在“流速”处输入流量,如1mL/min,在“溶剂”处依据需要选中B、C、D并输入相应的百分数,在右侧注释栏中标明各溶剂的名称;设置“停止时间”和“后运行时间”,在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子,在“时间表”添加编辑梯度。
4. TCC(柱箱)参数设定:在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”,使柱箱的温度左右一致。
5. VWD检测器参数设定:在“波长”右侧的空白处输入所需的检测波长,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间,再设置“停止时间”和“后运行时间”。
6. 仪器曲线设置:默认即可。
7. 关闭排气阀(顺时针),冲洗色谱柱20~30min,待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯,观察基线情况。
8. 将进样器转动手柄逆时针转到LOAD位置,在环路全量进样时(定量环体积为20uL),用50~100 uL的液相进样针将2~5倍定量环体积的样品缓慢注入进样器中,再将进样器转动手柄顺时针方向迅速转到INJECT位置,将定量环中样品引入系统中。
安捷伦1260型HPLC使用操作
安捷伦1260型HPLC使用操作安捷伦1260型高效液相色谱仪(HPLC)是一种目前广泛应用于科研实验室和分析化验室的仪器,用于分离、鉴定和定量化学物质,尤其在药物研究、食品安全和环境监测等领域有着重要的应用价值。
下面将介绍如何使用安捷伦1260型HPLC进行操作。
1.准备工作-确保HPLC仪器和相关附件的电源已正常连接,并打开电源开关。
-检查溶剂瓶中的溶剂是否充足,并确保应用的溶剂完全溶解。
-测量并记录样品的重量或体积,并准备相应的样品溶液。
-在毛细管芯上安装合适的毛细管,确保毛细管没有损坏。
2.打开安捷伦1260型HPLC软件-打开计算机并登录HPLC软件。
-确保计算机与HPLC仪器连接正常,并与仪器建立通信。
-在软件界面上选择打开一个新的分析方法。
3.设置分析方法-在打开的分析方法中,设置适当的柱温、流速、柱压和波长等参数。
-根据样品的性质,选择合适的检测波长,以获得最佳的检测结果。
-设定进样器的进样体积和方法运行时间等参数,以获得期望的分析效果。
4.进样样品-使用自动进样器或手动进样器将待测样品进入HPLC系统中。
-设置进样器的洗涤方法,以确保不同样品的交叉污染风险降至最低。
-如果使用了自动进样器,将样品盘或样品架连接到进样器上,并设置自动进样的参数。
5.启动HPLC分析-在软件界面上,点击启动按钮,开始运行分析方法。
-监控仪器运行情况,确保流速、柱压等参数稳定在设定范围内。
-观察检测结果的峰形和峰高,并记录峰面积或峰高数据以便后续分析。
6.数据处理与结果分析-使用HPLC软件进行数据处理,可以进行峰识别、峰面积计算和浓度计算等操作。
-将结果数据导出并进行统计分析,如绘制色谱图、拟合曲线和计算浓度等。
-分析结果的可靠性和准确性需要通过质控样品或标准品进行验证。
7.仪器维护和清洁-定期对HPLC仪器进行维护,包括更换毛细管、清洗进样器和柱子,并检查其他配件的磨损情况。
-使用合适的溶剂进行清洗,以去除可能留在系统中的残留物。
安捷伦1260液相操作规程
安捷伦1260液相操作规程一开机1 打开计算机,登录windows操作系统。
2 打开主机各模块电源(从上至下),待各模块完成自检后,双击桌面“仪器1联机”图标,进入化学工作站,出现进样器,泵,检测器,柱温箱四个图标。
若没有出现,从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”选项。
二排气1 把各流动相放入溶剂瓶中2 旋开排气阀(逆时针),右单击“四元泵”图标出现快捷键,点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流速设到5ml/min,溶剂瓶A设到100%,开泵,排出管线的气体3分钟,柱压<10bar。
3 依次切换到B,C,D溶剂瓶排气,待排气结束,关泵。
4 将泵的流速设到1.0ml/min,将多元泵设置成做样时的溶剂配比,关闭排气阀(顺时针)。
5 开泵,待柱压稳定后,基线平衡后方可进样。
三设置方法和调用方法1 设置进样量,在“进样器”的模块中,点击鼠标右键,在“方法”中,设定进样量。
在进样模式中输入进样量。
“标准进针”——只能输入进样体积。
“针清洗后进样”——可以输入进样体积和洗瓶位置。
2 在“检测器”模块中,点击鼠标右键,点击“控制”,打开检测器的灯,点击“确认”。
3 在“检测器”模块中,点击鼠标右键,点击“方法”,一般选择“与泵,进样器一致”。
4 紫外检测器参数设定:在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长。
5 以上模块设置好后,从“方法”菜单中,选中“方法另存为”,输入方法名,点击“确认”。
6 从“方法”菜单中,选择“调用方法”,单击确认。
四设置序列和调用序列1 从“序列”菜单中,选中“序列参数”,选择数据文件路径和输入子目录名称,这样数据会自动保存在指定的文件夹中,方便查找。
2 从“序列”菜单中,选中“序列表”,在样品盘中依次放置好样品,命名样品的名称和批号,选择“方法”,点击“确认”。
3 从“序列”菜单中,选中“调用序列表”,把序列表改好后,点击保存当前序列模板。
点击“文件”,另存为序列模板。
4 点击“进样器”图标上的“序列”或者点击序列表中的“运行”,仪器进样。
安捷伦HPLC1260操作流程
安捷伦HPLC1260操作流程HPLC(高效液相色谱)是一种常用的分离和纯化化学物质的技术。
安捷伦HPLC1260系列是一款先进的高效液相色谱仪器,具有高精度、高灵敏度和高分辨率等优点。
下面是安捷伦HPLC1260的操作流程:1.准备工作a.打开色谱仪电源,并确认电源线已连接到稳定的电源插座。
b.打开色谱仪的仪器主机,等待一段时间,让仪器预热至工作温度。
c.确保溶剂瓶中的溶剂已经充足,且瓶盖已经拧紧。
d. 打开安捷伦 ChemStation 软件,点击“仪器控制”界面上的“打开仪器”按钮,连接仪器。
2.设置方法b.在“新建方法”界面上,填写方法名称、采样装置、检测器类型等信息。
c.在“进样”选项中设置进样体积、进样方式和进样流量。
d.在“柱温控制”选项中设置柱温度。
e.在“梯度程序”选项中设置梯度程序,包括流速、时间和浓度等参数。
f.在“检测器”选项中设置检测器的波长或其他相关参数。
g.设置完成后保存方法。
3.准备样品a.准备样品溶液,并使用过滤器过滤掉杂质。
b.将样品溶液定量注入样品瓶中。
4.进样a. 在 ChemStation 软件界面上点击“方法控制”按钮,选择之前设置好的方法。
b.将样品瓶与自动进样器连接,通过软件控制自动进样器进行进样。
c.等待自动进样器完成进样过程。
5.开始分析a. 在 ChemStation 软件界面上点击“仪器控制”按钮,然后点击“开始”按钮,开始分析。
b.软件会自动控制进样和梯度程序,进行样品分离。
6.结果分析a.在分析过程中,软件会实时显示色谱图和数据。
b.分析结束后,可以导出数据或生成报告。
7.清洗和保养a.在分析完成后,关闭仪器主机。
b.清洗色谱柱和进样器,使用对应的溶剂进行清洗。
c.定期检查仪器的运行状况,如进样量、流速等,进行维护和保养。
总结:。
agilent 1260高效液相色谱仪标准操作规程
标准操作规程STANDARD OPERATING PROCEDURE的准确性,特制定此规程。
2 范围:本规程适用于Agilent 1260高效液相色谱仪的使用、维护和保养。
3 责任者:化验员4 程序:4.1 开机4.1.1 打开计算机,输入用户名和密码,进入Windows 7画面。
4.1.2 打开1260 LC 各模块电源(不分先后)。
待各模块自检完成后,双击“仪器1联机”图标,化学工作站自动与1260 LC通讯,进入工作站。
(注意:在“仪器1脱机”关闭的情况下,“仪器1联机”方能打开。
)4.1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,来调用所需的界面,正常情况会默认进入此界面。
4.1.4 保对应溶剂瓶装入所要使用的流动相,左击“四元泵”模块下的“溶剂瓶”图标或右击“四元泵”下选择“瓶填充”,输入溶剂的实际体积和瓶总体积,可输入停泵的体积。
单击“确定”。
(注意:此操作很重要,以免气泡进入系统)。
4.1.5 轻轻旋开泵上的冲洗阀(缓缓旋开约1/4即可,不可用力太过)。
右击“四元泵”图标,出现参数设定菜单,单击“方法”选项,进入泵编辑画面。
设流量,从0 ml/min 逐渐变为3ml/min,溶剂A设到100%;单击“确定”。
右击“四元泵”图标,选择“控制”选项,选中“打开”,单击“确定”,则系统开始排气,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止;切换到通道同法继续排气,直到所有要用通道无气泡为止(只需排所用到的通道即可)。
4.1.6 右击“四元泵”图标,出现参数设定菜单,单击“方法”选项,进入泵编辑画面。
设流量为:0ml/min,单击“确定”,轻轻关闭排气阀(旋紧即可)。
4.2 数据采集方法、系列编辑:4.2.1 编辑完整方法:4.2.1.1 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项,选中除“数据分析”外的三项,单击“确定”,进入下一界面“方法注释”。
4.2.1.2 方法信息:在“方法注释”中写入方法的相关信息。
安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程
一、开机1、开机前准备:流动相使用前必须过0.45um的滤膜(有机相的流动相必须为色谱纯;水相必须用新鲜注射用水,不能使用超过3天的注射用水,以防止长菌或长藻类);把流动相放入溶剂瓶中。
A瓶:为水相B瓶:为有机相。
2、打开电脑,选Win 2000,进入Win 2000界面。
3、双击CAG Boodp server图标,放大CAG Boodp server小图标,出现窗口,5min 内打开液相各部件电源开关,等待1100广播信息后,表示通讯成功连接,关闭CAG Boodp serve窗口。
4、双击online图标,仪器自检,进入工作站。
该页面主要由以下几部分组成:——最上方为命令栏,依次为File,Run Control,Instrumen…等;——命令栏下方为快捷操作图标,如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等;——中部为工作站各部件的工作流程示意图;依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告;——中下部为动态监测信号;——右下部为色谱工作参数:进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。
4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。
二、编辑参数及方法1、开始编辑完整方法:从“Method”菜单中选择“New method”,出现DEF-LC.M,从“Method”菜单中选择“Edit entire method”,选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项,单击OK,进入下一画面。
2、方法信息:在“Method Comments”中加入方法的信息,如方法的用途等。
单击OK,进入下一画面。
3、泵参数设定:进入“Setup pump”画面,在“Flow” 处输入流量,如1ml/min;在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0,(A=100-B),也可在Insert 一行“Timetable”,编辑梯度;输入保留时间;在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。
安捷伦1260高效液相操作规程
安捷伦液相 1260 高效液相色谱操作规程1.前期工作查找资料(最好是外文文献)了解别人做该样品时常用的流动相和固定相。
如果还不清晰样品是什么物质,最起码也应该对其极性进行了解,为选择合适的流动相和固定相打好基础。
流动相选择注意事项:① 避免使用高粘度的溶剂作为流动相;② 所选用的流动相一定要与样品相溶;③ 各流动相之间可以很好的相溶;固定相选择注意事项:a. 正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或者其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对照固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
b. 反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
2.准备工作① 用于液相色谱分析的样品溶液使用前要经过0.15µm 过滤器过滤,必须达到均匀而无颗粒的状态;② 流动相一定要选用色谱级别的(最好是默克、飞世尔、时联等牌子的),并且在使用之前一定要使用0.4µm 过滤器过滤,再用超声波清洗仪脱气处理20-30min;③ 在连接柱子和色谱仪之前,阀件或者管路一定要清洗干净,(一般用异丙醇将管路清洗)3.仪器操作(一)将所选择的流动相加入相应的试剂瓶中:棕色瓶对应A 泵,该瓶中只能加双蒸水或者娃哈哈纯净水;B、C、D 泵根据需要添加。
Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作规程
Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作规程一、目的:建立Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作规程,保证正确使用。
二、适用范围:适用于Agilent 1260 LC型高效液相色谱仪标准操作。
三、职责:研发部对本标准的实施负责。
四、正文:1 仪器组成及电源:1.1 仪器组成:本仪器由四元泵、真空脱气机、DAD检测器、安捷伦化学工作站组成。
1.2 电源:泵为110V稳压电源,检测器为220V稳压电源,工作站为220V稳压电源。
1.3开机运行前,更换溶剂瓶中的流动相,若管道为第一次使用,先用针管排空各管道中的气泡。
2 仪器硬件开启:自上而下或自下而上顺序开启各模块(真空脱气机、四元泵、自动进样器、VWD检测器、荧光检测器),打开电源指示灯,指示灯亮,显“绿色”;状态指示灯指示当前的状态,各模块进行自检(自动进样器的门板必须关上)。
3安捷伦化学工作站的操作:3.1开机运行步骤3.1.1 待各模块自检完成后,双击“仪器1联机”图标,化学工作站自动与1260LC通讯,进入工作站画面,各模块的软件图标均为绿色。
3.1.2从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,点击”视图”菜单中的”样品视图”、”系统视图”、“命令行”,来调用所需界面(或直接从“视图”菜单中选择“全部菜单”来调用全部界面。
3.1.3把流动相放入溶剂瓶中。
3.1.4打开“Purge”阀,点击泵图标,点击“设置泵”,进入泵编辑画面,设置流速为3-5ml/min,点击“确定”,则系统开始排空管道内的气泡,切换通道继续排空,直至所有要用的通道无气泡为止。
3.1.5点击泵图标,选“控制”选项,选中“关闭”关泵,关闭“Purge”阀。
3.1.6点击泵图标,设置流速冲洗柱子。
3.1.7点击泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,点击“确定”。
3.2数据采集方法编辑3.2.1从“方法”菜单中选择“编辑完整菜单”项,选中除“数据分析”外三项,点击“确定”,进入下一画面。
标准安捷伦1260液相色谱仪操作规程
安捷伦1260液相色谱仪操作规程一、 仪器开机1、更换流动相(水需要超纯水,有机试剂需要色谱纯),其中水需要每次使用时更换,有机试剂长时间不用也需要更换2、开机:打开电脑、打开液相所有模块电源、点击电脑桌面上的工作站联机图标3、打开工作站上的所有电源,待其就绪(所有灯变绿)4、拧开排空阀,四元泵里设置流速5 ml/min,A 100%;3分钟后,设置B 100%;3分钟后设置流速至合适流速,关闭排空阀二、 运行样品1、新建方法或调用已有方法2、设置方法参数四元泵:设置流速、流动相比例、采集时间,若需梯度则设置梯度,确定自动进样器(ALS):设置进样量,确定柱温箱(TCC):设置柱子温度,确定紫外检测器(VWD):设置紫外波长,确定设置好后保存方法3、在线信号中点击“改变”,可添加泵的压力,以及VWD的信号4、等待系统平衡,所有灯变绿,泵的压力稳、VWD的信号稳定(约20分钟)5、进样:(1)单针进样:运行控制—样品信息,设置进样位置,保存路径等后运行方法(2)序列进样:序列—序列参数,编辑保存路径;序列—序列表,编辑序列表,然后运行序列6、待仪器自动停止分析(四元泵中已设置采集时间)或手动点击“停止”图标(四元泵中未设置采集时间)三、 关机1、冲柱流动相中含缓冲盐:先用10%甲醇、90%水冲30分钟,再用90%甲醇、10%水冲30分钟(四元泵里设置比例)后关机流动相中不含缓冲盐:用90%甲醇、10%水冲30分钟(四元泵里设置比例)后关机2、关机关闭各模块,关闭仪器电源,关闭工作站,关闭电脑四、 数据处理1、调用需要处理的信号2、自动积分,或者手动积分,删除不要的峰3、打印面积百分比结果,记录每个峰的峰面积、保留时间,在excel中用已知浓度(标准样品)的峰面积作工作曲线,得到工作曲线方程4、未知样品的峰面积来算得其浓度。
安捷伦1260液相色谱仪操作流程
安捷伦1260液相色谱仪操作流程及注意事项1、配制流动相,水相置于棕色玻璃瓶中,有机相置于相应无色玻璃瓶中。
水相和有机相必须过滤,滤膜选用0.45有机系滤膜(尼龙)。
注意:过夜的流动相必须重新过滤。
2、流动相过滤后,置超声仪中超声20min。
3、将已超声的流动相轻轻换上,动作不要太剧烈,会产生气泡,注意不要把有机相和水相换反了(A是有机相,B是水相)。
4、将色谱柱接上,注意:流动相的流动方向必须和色谱柱上的箭头方向一致。
5、打开计算机电源、显示器开关,并输入密码。
6、依次从上往下打开液相色谱仪上的所有开关。
7、打开液相色谱在线工作站(online),输入密码。
8、打开的液相工作站上分为四个小部分,依次为进样器、泵、柱温箱及检测器。
在第二个部分设置流动相的体积及溶剂瓶的总体积。
9、脱气:旋开purge阀开关,右击泵部分,选择“method”,选择B相100%,流速1ml/min,选择确定;右击泵部分,选择“control”,选择pump “on”,10秒后,调节流速为3ml/min,10秒后,调节流速5ml/min,开始水相脱气3min,水相脱气结束后,将流速按照5ml/min-3ml/min-1ml/min的流程往下调。
然后开始有机相脱气,步骤同上,注意流速不可一下子从1ml/min调到5ml/min,需慢慢调节。
流动相脱气结束后,旋紧purge阀开关。
10、建立样品的色谱方法:设置进样体积,选择洗针进样,注明洗针位置;设置流动相比例、流速及梯度洗脱条件,序列进样时设置样品运行时间和后运行时间;打开柱温箱,设置柱温;打开紫外检测灯,设置检测波长。
全部设置好后,保存方法,不要覆盖别人的方法。
11、谱图保存路径的设置:View—preferences—data path(第二个选项)—remove旧的文件夹,add自己的文件夹。
再打开Sequence—Sequence parameter—选择Data path为自己的文件夹即可。
1260操作规范及注意事项
安捷伦液相操作规程及注意事项一、开机1.接通电源,打开计算机,进入windows操作系统;2.检查色谱柱(型号是否正确及进出口有无接反);3.检查流动相(是否正确,溶剂是否够用);4.打开主机各模块,待其完成自检后,双击桌面联机系统(online),单击view,选择方法和运行控制画面;5.排气:逆时针旋转排气阀60-90°,右击“四元泵”图标出现快捷键,点击method选项进入泵编辑画面。
将泵流量设到5 mL/min,溶剂A设到100%,打开泵,排出管线中的气体2-3分钟,直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力(若大于10 bar,则应更换排气阀内过滤白头)。
依次切换到B、C、D管道分别排气;6.将泵流量设为0.5 mL/min,设定溶剂配比,关闭排气阀。
随后将泵流量设为0.8 mL/min,2 min后设为1 mL/min,冲洗柱子20-30 min;7.待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯,观察基线情况,待基线稳定后即可进样。
二、采集方法编辑1.编辑样品信息:由“运行控制”进入“样品信息”,设定操作者姓名,样品数据文件名及存储路径等;2.编辑方法信息:从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项。
选中项单击“确定”入下一画面“方法注释”,编辑好单击“确定”进入下一画面“选择进样源”,选中Als单击“确定”入下一画面“设置方法”进行参数设定。
最后保存方法;3.设置泵参数:在“流速”处输入流量,在“溶剂”处选中输入相应比例,在右面注释栏中标明各溶剂的名称;设置“stop time”和“post time”,在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子如:250 bar,在“时间表”添加编辑梯度;4.设定进样器参数:在进样模式中输入进样量。
标准进针:只能输入进样体积不能洗针。
针清洗后进样:可以输入进样体积和洗瓶位置,针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。
注意:洗针瓶不盖盖子,以免污染针外表面。
安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程
安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程一、开机1、开机前准备:流动相使用前必须过0.45um的滤膜(有机相的流动相必须为色谱纯;水相必须用新鲜注射用水,不能使用超过3天的注射用水,以防止长菌或长藻类);把流动相放入溶剂瓶中。
A瓶:为水相B瓶:为有机相。
2、打开电脑,选Win 2000,进入Win 2000界面。
3、双击CAG Boodp server图标,放大CAG Boodp server小图标,出现窗口,5min 内打开液相各部件电源开关,等待1100广播信息后,表示通讯成功连接,关闭CAG Boodp serve窗口。
4、双击online图标,仪器自检,进入工作站。
该页面主要由以下几部分组成:——最上方为命令栏,依次为File,Run Control,Instrumen…等;——命令栏下方为快捷操作图标,如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等;——中部为工作站各部件的工作流程示意图;依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告;——中下部为动态监测信号;——右下部为色谱工作参数:进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。
4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。
二、编辑参数及方法1、开始编辑完整方法:从“Method”菜单中选择“New method”,出现DEF-LC.M,从“Method”菜单中选择“Edit entire method”,选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项,单击OK,进入下一画面。
2、方法信息:在“Method Comments”中加入方法的信息,如方法的用途等。
单击OK,进入下一画面。
3、泵参数设定:进入“Setup pump”画面,在“Flow” 处输入流量,如1ml/min;在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0,(A=100-B),也可在Insert 一行“Timetable”,编辑梯度;输入保留时间;在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。
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安捷伦1260液相
操作规程
一、开机
1)打开计算机,登陆windows操作系统。
2)打开主机各模块电源(从上至下),待各模块完成自检后,再双击
桌面“仪器1联机”图标,进入化学工作站,从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。
3)把各流动相放入溶剂瓶中。
4)旋开排气阀(逆时针),右单击“四元泵”图标出现快捷键,点击
“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量设到5ml/min,溶剂A 设到100%,打开泵,排出管线中的气体2—3分钟,直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力(若大于10bar,则应更换排气阀内过滤白头)。
5)依此切换到B、C、D溶剂分别排气。
6)将泵的流量设到0.5ml/min,多元泵则再设定溶剂配比,如A=80%,
B=20%;关闭排气阀(顺时针)。
7)再将泵的流量设到0.8ml/min,2分钟后将泵的流量设到1ml/min,
冲洗色谱柱20—30分钟。
8)把缓冲液换成流动相,待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯,观
察基线情况。
二、数据采集方法编辑
1)编辑样品信息:由“运行控制”进入“样品信息”,设定操作者
姓名,样品数据文件名等。
2)编辑完整方法:从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项.选
中项单击“确定”入下一画面“方法注释”,编辑好单击“确定”
进入下一画面“选择进样源”,选中Als单击“确定”入下一画面“设置方法”进行参数设定。
3)四元泵参数设定:在“流速”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂”
处选中B输入80%(A=100-B-C-D),在右面注释栏中标明各溶剂的名称;设置“停止时间”和“后运行时间”,在“压力限值”
处输入柱子的最大耐高压以保护柱子如:250bar,在“时间表”
添加编辑梯度。
4)进样器参数设定:在进样模式中输入进样量xxul。
“标准进针”
——只能输入进样体积此方式无洗针功能。
“针清洗后进样”
——可以输入进样体积和洗瓶位置为xx,此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。
5)进样器进样程序参数设定:选中使用进样程序,在“函数”中
添加相应函数即可按程序进样。
6)TCC检测器参数设定:在“温度”左侧下面的方框内输入所需温
度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”——使柱温箱的温度左右一致。
7)VWD检测器参数设定:在“波长”下方的空白处输入所需的检测
波长,如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间,如>0.1min(2s),再设置“停止时间”和“后运行时间”。
8)仪器曲线设置:默认即可。
三、数据处理
1)从“视图”菜单中单击“数据分析”进入数据分析画面
2)从“文件”菜单选择“调用信号”选中您的数据文件名,单击“确
定”。
3)谱图优化,从“图形”菜单中选择“信号选项”从“范围”中选择
“自动量程”及合适的显示时间单击“确定”,或选择”自定义量程”调整,反复进行直到图的比例合适为止。
4)积分:从“积分”中选择“自动积分”,积分结果不理想,再从菜单
中选“积分事件”,选项选择合适的“斜率灵敏度,峰宽,最小峰面积,最小峰高”.从“积分”菜单中选择“积分”选项则数据被积分.如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止。
单击左边图标将积分参数存入方法。
5)校正表设计:点击“校正”菜单中的“校正设置”,给出各个参数:
点击“确定”;调出建立校正表所需的谱图并对谱图进行图形优化和积分优化;点击“校正”菜单中的“新建校正表;在“新建校正表”栏里选定“自动设定”点击“确定”;在“校正表”中给出正确的“化合物名”和“含量”;如需增加校正点数,给出第二校正点的“含量”,校正表建立完成后点击“确定“,点击“保存图标”将校正表存入方法中。
6)打印报告:从“报告”菜单中选择“设定报告”选项进入画面:单
击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角选中“百分比法”面积百分比其它选项不变单击“确定”.从“报告”菜单中选择“打印”则报告结果将打印到屏幕上如想输出到打印机上则单击“报告”底部的“打印”钮。
四、清洗关机
1)关机前,用95%水冲洗柱子和系统0.5—1小时,流量
0.5—1ml/min,再用100%有机溶剂冲0.5小时,然后关泵。
2)退出化学工作站,及其它窗口,关闭计算机(用shutdown关)。
3)关掉主机电源开关。
注意事项:
1)氘灯是易耗品,应最后开灯,不分析样品即关灯。
2)开机时,打开排气阀,100%水,泵流量5ml/min,若此时显示压
力>10bar,则应更换排气阀内玻璃料。
3)流动相使用前必须过滤,不要使用多日存放的蒸馏水(易长菌)。
4)流动相使用前必须进行脱气处理,可用超声波振荡10-15min。
5)配制90%水+10%异丙醇,以每分2—3滴的速度虹吸排出,进行
seal-wash,溶剂不能干涸。
6)当使用缓冲溶液时,要用水冲洗手动进样器进样口,同时搬动进
样阀数次,每次数毫升。
7)
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9)
10)
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