可见紫外外分光光度法
紫外可见分光光度法简介
紫外-可见分光光度法简介紫外-可见分光光度法(ultraviolet-visible spectrophotometry, UV-VIS)，它是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析, 所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。
按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外-可见分光光度法。
紫外--可见分光光度法：是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。
操作简单、准确度高、重现性好。
波长长（频率小）的光线能量小，波长短（频率大）的光线能量大。
分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。
吸收光谱描述物质分子对辐射吸收的程度随波长而变的函数关系曲线，称为吸收光谱或吸收曲线。
紫外-可见吸收光谱通常由一个或几个宽吸收谱带组成。
最大吸收波长（λmax）表示物质对辐射的特征吸收或选择吸收，它与分子中外层电子或价电子的结构（或成键、非键和反键电子）有关。
朗伯-比尔定律是分光光度法和比色法的基础。
这个定律表示：当一束具有I0强度的单色辐射照射到吸收层厚度为b，浓度为c的吸光物质时，辐射能的吸收依赖于该物质的浓度与吸收层的厚度。
其数学表达式为：式中的A 叫做吸光度；I0为入射辐射强度；I为透过吸收层的辐射强度；（I/I0）称紫藤为透射率T；ε是一个常数，叫做摩尔吸光系数，ε值愈大，分光光度法测定的灵敏度愈高。
紫外-可见分光光度计有稳定的、有足够输出功率的、能提供仪器使用波段的连续光谱，如钨灯、卤钨灯（波长范围350～2500纳米），氘灯或氢灯（180～460纳米），或可调谐染料激光光源等。
②单色器[1]。
它由入射、出射狭缝、透镜系统和色散元件（棱镜或光栅）组成，是用以产生高纯度单色光束的装置，其功能包括将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束。
可见和紫外分光光度法
Ir
I0
It
c b
Ia
I0= Ia+ It
T It I0
T：透光率
Ambert-Beer’s law
A= kbc
b：液层厚度，即吸收池厚度，单位 cm
c：溶液浓度
当单位为mol/L时，k为摩尔吸光系数，单位为：
L·mol-1·cm-1
E 当单位为g/ml时，k为比吸光系数，用 1% 表示，单
朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法定量测定 的理论基础
吸光度具有加和性：
总吸光度等于吸收介质内各吸光物质吸光度的总 和 A=A1+A2+A3+···=κ1bc1+κ2bc2+κ3bc3+ ···
第二节 可见－紫外分光光度法
一、可见及紫外分光光度计
光源
吸 收 单色器 池 检测器 信号显示系统
样品
性分析的依据。
③λmax几乎不随物质的浓度而变
④λmax附近，A最大，并与浓度c呈正
比关系 ——定量分析依据。
⑤ 远离λmax的光,物质几乎不吸收光 （A→0）,这些光的A与物质的c无
直接关系——不作定量分析依据。
三、吸光度和透光率（ absorbance and transmittance ）
可见和紫外分光光度法
第一节 分光光度法基本原理－吸收光谱和 朗伯－比尔定律
第二节 可见－紫外分光光度法
第一节 分光光度法基本原理－吸收 光谱和朗伯－比尔定律
分光光度法：利用物质的吸收光谱和光的吸收定律
对物质进行定性或定量的方法。
一、紫外光谱的产生
分子中外层电子跃迁产生紫外光谱
光与电磁波
可见-紫外分光光度法：研究物质在可见、紫
紫外-可见分光光度法测定
紫外-可见分光光度法测定1. 引言1.1 引言紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学方法，通常用于测定物质的浓度或测定物质的吸光度。
该方法利用紫外-可见光谱仪测量样品对紫外和可见光的吸收情况，从而推断样品中所含物质的浓度或结构。
在化学分析实验中，紫外-可见分光光度法具有灵敏度高、准确性高和简便易行的优点，因此被广泛应用于药物分析、环境监测、食品检测等领域。
本实验旨在通过该方法测定样品中目标物质的浓度，并探讨影响测定结果的因素。
通过对仪器原理、操作步骤、实验结果、数据分析和影响因素的详细讨论，我们将深入了解紫外-可见分光光度法的原理和应用，并为今后在相关领域的研究提供参考和借鉴。
希望本实验能够为我们提供更多关于分光光度法的实际操作经验，提升我们的实验技能和分析能力。
1.2 背景介绍紫外-可见分光光度法是一种广泛应用于化学分析领域的分析方法，通过测定物质在紫外-可见光区域的吸收特性，从而确定物质的浓度或者进行定性分析。
紫外-可见分光光度法具有操作简单、灵敏度高、选择性强的特点，被广泛应用于环境监测、食品安全检测、药品质量控制等领域。
随着科学技术的不断发展，紫外-可见分光光度法在实验室分析中扮演着越来越重要的角色。
通过测定物质在特定波长范围内的光吸收情况，我们可以获得关于物质性质的重要信息，如浓度、溶解度、稳定性等。
掌握紫外-可见分光光度法的原理和操作方法，对于提高实验准确性和效率具有重要意义。
在本文中，我们将介绍紫外-可见分光光度法的仪器原理、操作步骤、实验结果、数据分析和影响因素，希望能够为读者提供一份系统全面的紫外-可见分光光度法测定指南。
通过总结和展望，我们也希望能够进一步探讨该方法在化学分析领域的应用前景。
1.3 研究目的紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学技术，可以用于测定物质的吸光度，从而推断物质的浓度。
本实验的研究目的主要分为以下几点：1. 研究紫外-可见分光光度法在测定物质浓度方面的应用。
紫外可见分光光度法的应用现状及发展
紫外可见分光光度法的应用现状及发展紫外可见分光光度法是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
本文将深入探讨紫外可见分光光度法的应用现状以及未来的发展趋势。
一、紫外可见分光光度法的基本原理紫外可见分光光度法基于物质对可见光和紫外光的吸收特性进行分析。
它利用紫外可见分光光度计，将样品溶液或气体暴露于特定波长的光源下，测量经过样品后的光强变化，从而得出样品的吸光度值。
吸光度值与样品中被测试化合物的浓度成正比，可以通过比较吸光度值与标准曲线来确定样品中的化合物浓度。
二、紫外可见分光光度法在化学分析中的应用1. 无机化学分析：紫外可见分光光度法广泛应用于金属离子的测定、配位化合物稳定常数的测定等方面。
通过测量在一定波长下溶液中金属离子的吸光度，可以确定金属离子的含量。
2. 有机化学分析：紫外可见分光光度法在有机化合物的分析中也有重要应用。
可以用来测定有机色素的含量、有机酸的浓度等。
紫外可见分光光度法还可以用于有机物质的结构表征和质量控制分析。
3. 药物分析：药物分析常常依赖于紫外可见分光光度法，用于药物的含量测定、药物溶解度的研究、药代动力学的研究等。
紫外可见分光光度法具有快速、准确、灵敏度高等优点，对于药物分析具有重要意义。
4. 环境监测：紫外可见分光光度法在环境监测中也发挥了重要作用。
可以用来检测水质中各种有害物质的浓度，如重金属离子、有机污染物等。
紫外可见分光光度法还可以用于大气污染物的检测、土壤分析等。
三、紫外可见分光光度法的发展趋势1. 多重检测器的应用：为了提高紫外可见分光光度法的分析灵敏度和选择性，将多重检测器（如二极管阵列检测器）引入紫外可见分光光度法成为一种趋势。
多重检测器可以同时检测多个波长的吸光度信号，提高分析效率和准确性。
2. 微流控技术的应用：微流控技术结合紫外可见分光光度法可以实现样品预处理、反应和测量的集成，提高分析速度和样品处理容量。
3. 转向纳米材料的应用：纳米材料具有较大的比表面积和特殊的光学性质，可以用于增强样品的信号强度，提高分析的灵敏度。
紫外可见分光光度法
紫外可见分光光度法——光的吸收定律一. Lambert-Beer 定律——光吸收基本定律“ Lambert-Beer 定律” 是说明物质对单色光吸收的强弱与吸光物质的浓度（c）和液层厚度（b）间的关系的定律，是光吸收的基本定律，是紫外-可见光度法定量的基础。
Lambert定律——吸收与液层厚度（b）间的关系Beer 定律——吸收与物质的浓度（c）间的关系“ Lambert-Beer 定律”可简述如下：当一束平行的单色光通过含有均匀的吸光物质的吸收池（或气体、固体）时，光的一部分被溶液吸收，一部分透过溶液，一部分被吸收池表面反射；设：入射光强度为Io，吸收光强度为Ia，透过光强度为It，反射光强度为Ir，则它们之间的关系应为：Io = Ia + It + Ir (4)若吸收池的质量和厚度都相同，则Ir 基本不变，在具体测定操作时Ir 的影响可互相抵消（与吸光物质的c及 b 无关）上式可简化为： Io= Ia + It (5)实验证明：当一束强度为I0 的单色光通过浓度为c、液层厚度为 b 的溶液时，一部分光被溶液中的吸光物质吸收后透过光的强度为 It ，则它们之间的关系为：称为透光率，用T % 表示。
称为吸光度，用 A 表示则 A = -lgT = K · b ·c (7)此即Lambert-Beer 定律数学表达式。
L-B 定律可表述为：当一束平行的单色光通过溶液时，溶液的吸光度(A) 与溶液的浓度(C) 和厚度(b) 的乘积成正比。
它是分光光度法定量分析的依据。
二. 吸光度的加和性设某一波长（l ）的辐射通过几个相同厚度的不同溶液c1，c2...... c n，其透射光强度分别为I1，I2 ...... I n，根据吸光度定义：这一吸光体系的总吸光度为而各溶液的吸光度分别为：吸光度的和为：即几个（同厚度）溶液的吸光度等于各分层吸光度之和。
如果溶液中同时含有n 中吸光物质，只要各组分之间无相互作用（不因共存而改变本身的吸光特性），则：A=K1C1b1 + K2C2b2 + ⋯⋯K n C n b n = A1 + A2+ ⋯⋯ + A n (10)应用：①进行光度分析时，试剂或溶剂有吸收，则可由所测的总吸光度 A 中扣除，即以试剂或溶剂为空白的依据；②测定多组分混合物；③校正干扰。
紫外-可见分光光度法的基本原理
量子化能级，仅当照射光光子的能
量（ hυ ）与被照射物质粒子的基 态和激发态能量之差相当或为其整 数倍时才能发生吸收。不同的物质 微粒由于结构不同而具有不同的量 子化能级，其能量差也不相同。所 以物质对光的吸收具有选择性。
基态能级 激发态能级
E2
E1
E0
（3）吸收曲线（吸收光谱）
吸光度(A)--波长(λ)曲线称--。
，即分子中含有孤对电子和键同时存在时，才发生n→ ＊跃迁；
吸收波长为200～400nm，一般在近紫外区；吸收系数较低
O
H3C-C-CH3
例:丙酮有280nm左右的n→ ＊跃迁吸收峰（ =10~30 L· mol-1· cm-1 ）
→ ＊跃迁
所需能量较小，吸收波长处于远紫外区的近紫外端或 近紫外区 含有不饱和键的有机分子易发生这类跃迁 C=C C=C ; N=N ; C=O 属于强吸收，max >104L· mol-1· cm-1， 具有共轭双键的化合物 → ＊跃迁所需能量降低
光吸收程度最大处的波长叫 最大吸收波长，用λmax表示。 高锰酸钾的λmax=525nm。 浓度不同时，光吸收曲线形状不同，最大吸收波长不变，
只是相应的吸光度大小不同。
4、可见吸收光谱法的特点
（1）灵敏度高：常用于测定试样中1%-10-3 %的微量组分，
甚至可测定低至10-4 %-10-5 %的痕量组分。
圆 折 二 射 色 法 性 法
X 射 干 线 涉 衍 法 射 法
原 旋 子 光 吸 法 收 光 谱
原 子 发 射 光 谱
原 子 荧 光 光 谱
红 外 光 谱 法
分 子 荧 光 光 谱 法
分 子 磷 光 光 谱 法
简述紫外-可见分光光度法用于含量测定时的几种常用方法的适用类型和注意事项
简述紫外-可见分光光度法用于含量测定时的几种常用方法的适用类型和注意事项紫外-可见分光光度法是一种利用物质在紫外-可见波长范围内吸收和散射辐射能量的方法，可用于测试溶液中某种成分的浓度。
在实际应用中，常用的几种方法包括外标法、内标法和标准曲线法，下面将进行简述。
1. 外标法外标法是指将溶液中待测物质与已知浓度的标准溶液相比较，在一定的光程、波长和温度条件下，测量两者的吸光度，从而计算出待测物质的浓度。
该方法适用于分子量相同或接近、化学性质相似的物质。
但需要注意的是，在操作时应比较精确地控制外界因素的影响，以保证测量的准确性。
2. 内标法内标法是指在测量待测物质的浓度时，与待测物质化学性质相近的另一种物质被加入到溶液中，用作内部标准。
通过内部标准与待测物质的吸光度比较，可以消除试剂浓度、仪器灵敏度以及样品处理等外界因素的影响，提高测量结果的准确性。
内标法适用于测量含有许多杂质和干扰物的溶液中待测物质的浓度，例如血清和尿样等。
注意在进行内标法时应掌握内标物的正确选择方法和使用要求。
3. 标准曲线法标准曲线法是将系列的标准溶液分别测量吸光度，建立一个吸光度与浓度的标准曲线。
根据待测物质体系的吸收性质，选择适当的波长和光程，在标准曲线上找到待测物质吸光度对应的浓度，即可计算待测物质的浓度。
标准曲线法适用于测量许多复杂的和无法用外标或内标法测量的样品。
但需要注意的是，标准曲线法建立的标准曲线应具备一定的线性范围和稳定性。
总之，考虑到各种方法的优缺点以及适用范围，选取合适的测量方法非常重要。
在进行实验操作时，应根据不同的目的和方法进行操作，掌握实验操作技能，遵循操作规程，加强实验数据的校正和质量控制，以保证结果的准确和可靠性。
参考内容：1. 谢幸子.化学分析实验教程[M]. 北京: 高等教育出版社版,2006.2. 刘新军, 朱小林. 某些物质的紫外分光光度法测定[J]. 化学教育, 2010(6): 51-54.3. 熊文祥, 栾慧, 高超. 内标法在紫外分光光度法测定药物样品中的应用[J]. 四川化工, 2012(1): 64-67.。
4紫外-可见分光光度法
• 2.参比溶液的选择原则：
• (1)溶剂参比：试样组成简单、共存组份少（基体干扰少）、显色剂 不吸收时，直接采用溶剂（多为蒸馏水）为参比；
• (2) 试样参比：如试样基体在测定波长处有吸收，但不与显色剂反 应时，可以试样作参比（不能加显色剂）。
紫外-可见分光光度法
紫外-可见分光光度法
一、紫外-可见分光光度法原理 二、紫外-可见分光光度计 三、紫外-可见分光光度法应用
紫外-可见分光光度法
分子的能量变化E为各种形式能量变化的总和：
ΔΕ ΔΕe ΔΕv ΔΕr
电子能级间隔比振动能级和转 动能级间隔大1~2个数量级， 在发生电子能级跃迁时，伴有 振-转能级的跃迁，形成所谓的 带状光谱。
第一节 基本原理
二 Lambert- Beer 定律
Lambert-Beer 定律适用范围： ①入射光为单色光，适用于可见、红外、紫外光。 ②均匀、无散射溶液、固体、气体。
吸光度具有加和性：
不仅适用于紫外光、可见光，也适用红外光；在同一波长下， 各组分吸光度具有加和性
A=A1+A2++An
（1）入射光必须为单色光 （2）被测样品必须是均匀介质 （3）在吸收过程中吸收物质之间不能发生相
偏离Lambert-Beer 定律的因素 1. 样品性质影响
1）待测物高浓度--吸收质点间隔变小—质点间相互作用—对特定辐射的吸收 能力发生变化--- 变化；
2）溶剂的影响：对待测物生色团吸收峰强度及位置产生影响； 3）被测溶液不均匀导致的偏离
第一节 基本原理
二 Lambert- Beer 定律
紫外分光光度法
20
五、测定法
1.吸收系数测定(性状项下):按各品种项下规 定的方法配制供试品溶液,在规定的波长下测 定其吸光度,计算吸收系数,应符合规定.如吲 哚美辛320nm,E为185-200.（干燥品计算） 2.鉴别：按各论规定进行，测定最大吸收及最 小吸收的峰位，可用扫描或在规定的波长附近， 每隔0.5nm多测定几点确定。注意仪器的“滞 后现象”，有时可能还规定2个或几个波长的 吸光度比值。由于紫外-可见光属于电子光谱， 仅规定一个最大吸收波长的专属性较差
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五、测定法
E（供试品）＝
供试品的吸光度 供试品的百分浓度 光路长度
测定时的光路长度通常为1；百分浓度即 100ml中所含的待测定物质的g数。 再与规定的吸收系数比较，求含量： 供试品含量％＝（E（供试品） / E（标 准））×100％
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五、测定法
例：已知某化合物的溶液浓度0.0030%，在 297nm处，用1cm的石英池，测得吸光度为 0.6139，求E1%cm值。
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表3
试剂 碘化钠
杂散光检查
浓度/% （g/ml) 1.00 测定用波 长（nm） 220 透光率 （ %） ＜0.8
亚硝酸钠
5.00
340
＜0.8
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四、仪器的检定和校正
5、吸收池配对：取洗净的石英吸收池盛水，在 220nm处，以其中一只调透光率为100%，再分别 更换其它吸收池，测T%，凡误差在规定范围内的， 再分别装入0.006%重铬酸钾0.005mol/L硫酸溶液， 在350nm处，以其中一只调透光率为100%，再分 别更换其它吸收池，测T%，凡透光率误差均在规 定范围内的，即可配对。 玻璃：660nm（水）、400nm（重铬酸钾） 技术要求：≤0.5%
紫外可见分光光度法名词解释
紫外可见分光光度法名词解释
紫外-可见分光光度法（UV-Vis）是一种测试物质吸收、透射和反射光的方法，它包括紫外光（200-400纳米波长）和可见光（400-800纳米波长）范围。
这项技术用于定量分析物质的浓度，因为物质特定波长的吸收特性可以与其浓度成正比。
吸收光谱由吸光度（A）表示，其中A与光通过溶液时被吸收的光量成正比。
紫外-可见分光光度法可以广泛应用于许多领域，如生物化学、生物医学、环境科学、食品和饮料分析等。
它可以用于定量分析和质量控制，检测溶液中的有机和无机物质，分析颜料和染料的浓度，以及研究溶液中的化学反应和光化学过程。
在实验中，通常使用紫外-可见分光光度计来测量样品溶液在不同波长的吸光度。
通过与空白溶液进行比较，可以确定吸光度与浓度之间的关系，并计算出样品的浓度。
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•
1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物
浓度之间也具有类似的关系。A∝c
朗伯定律：A=K2*L
比尔定律：A=K3*C
透过光的强度It；与入射光的强 度Io比之比称为透光度或透光率， 用T表示。 T＝ It / Io
朗伯-比尔定律的表达式
A＝lg（I0/It)= kL c 式中A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度； L：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位； c：溶液的摩尔浓度，单位mol· L－１；
E h h
c
分子能级跃迁
分子能级跃迁较原子 能级跃迁更为复杂。 分子内部除了电子运 动状态外，还有核间 的相对运动，即核的 振动和分子围绕着重 心的转动。
E Ev Er Ee
振动能变化、转动能变化以及电子运动能量变化
有色溶液的颜色为什么会有深浅？
1、同一种物质对不同波长的光吸收能力是 否存在差异？ 2、不同的物质对相同波长的光的吸收是否 存在差异？ 分子只会选择吸收满足能级差能量的波长 各种分子内部结构不同，分子的能级也千 差万别，各种能级之间的间隔也互不相同， 这样就决定了它们对不同波长的光线的选 择性吸收。
λmax处吸光度A 的差异最大。
（5）吸光度具有加和性，A = A1 + A2 + A3 + ……。
三、比色法
通过显色反应，比较待测溶液与标准溶液 颜色的深浅来确定待测物质的含量为比色 法。 目视比色法 光电比色法 分子吸收分光光度法（分光光度分析法）
分光光度分析法是以物质对光的选 择性吸收为基础的分析方法。
光栅 和棱 镜分 光原 理
3.样品室
样品室放置各种类型的吸收池 （比色皿）和相应的池架附件。吸 收池主要有石英池和玻璃池两种。 在紫外区须采用石英池，可见区一 般用玻璃池。
4.检测器
利用光电效应将透过吸收池的 光信号变成可测的电信号，常用的 有光电池、光电管或光电倍增管。
5. 结果显示记录系统
检流计、数字显示、微机进行 仪器自动控制和结果处理
k：摩尔吸光系数，单位L· mol－１· cm－１；
或: A＝lg（I0/It)= a L c c：溶液的浓度，单位g· L－１ a：吸光系数，单位L· g－１· cm－１ a与k的关系为： a =k/M （M为摩尔质量）
第二节 紫外可见分 光光度计
仪器
紫外-可见分光光度计
一、基本组成
general process
光源 单色器 样品室 检测器 显示
1. 光源
在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具 有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作 为光源，其辐射波长范 围在320～2500 nm。 紫外区：氢、氘灯。 发射185～400 nm的连 续光谱。
吸光光度法的基本原理
颜色的产生白光(太阳光)：由各种单色光组成的复合光
能复合成白光的两种颜色的光叫互
补色光。物质所显示的颜色是吸
收光的互补色。
一、光的基本性质
光的波长λ(cm)、频率 γ (Hz) ，它们与光速c的 关系是：
c
在真空介质中，光速为2.9979×1010cm/s。单个 光子能吸收或发射能量时，能量E与上述三要素的关 系是：
吸收曲线
反映了它在不同的光谱区域内 吸收能力的分布，可以从波形， 波峰的强度、位置及数目来了 解物质内部信息
改变通过某一吸收物 质的入射光的波长， 并记录某物质在每一 波 长 处 的 吸 光 度 （A），然后以波长 为横坐标，以吸光度 为纵坐标作图，这样 的谱图称为该物质的 吸收光谱或吸收曲线。
二、分光光度计的类型
1.单光束
简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度， 一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高 的稳定性。
2.双光束
自动记录，快速全波段 扫描。可消除光源不稳定、 检测器灵敏度变化等因素的 影响，特别适合于结构分析。 仪器复杂，价格较高。
3.双波长
将不同波长的两束单色光(λ 1、λ 2) 快束交替通过同一
2.单色器（波长选择器）
将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任 波长单色光的光学系统。
①入射狭缝：光源的光由此进入单色器；
②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束； ③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅； ④聚焦装置：透镜或 凹面反射镜，将分光
后所得单色光聚焦至
出射狭缝； ⑤出射狭缝。
根据物 质所吸 收光的 波长范 围不同
可见分光光度法
紫外分光光度法
几乎所有的无 机离子和许多有机 化合物可以用分光 光度法进行测定。 如微生物培养基中 的氮、磷以及各种 微量元素的测定。
通常，待测物质的 含量1～10－5％时， 能够用分光光度法 准确测定。所以它 主要用于测定微量 组分。
分光光度分析法：
光源 单色器 样品 检测器
基于发射的电磁辐射与待测物质相互作 用后所产生的辐射信号与物质组成及结构 关系所建立起来的分析方法。
基本特点：
1、一般光分析法均包含三个基本过程； （1）能源提供能量； （2）能量与被测物之间的相互作用； （3）产生信号。 2、选择性测量，不涉及混合物分离（不同于色 谱分析）； 3、涉及大量光学元器件。
吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。△=
1～2nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。
A 原理
双光束光度计动画示意
动画
双波长光度计光路示意图
四、光的吸收定律
1.朗伯—比耳定律
• 布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和
1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系。
E h h
c
E－－光子的能量；h－－普朗克常数（6.625×10－34J· s）
二、能级与跃迁
分子中的电子总是处在某 一运动状态中，每一种状 态都具有一定的能量，属 于一定能级。当它得到时， 电子由于受到光、热、电 等的激发，得到适当的能 量，从一个能级转移到另 一个能级，称为跃迁。
叶绿素的结构和吸收光谱
吸收曲线的讨论
（1）同一种物质对不同波长光的吸光度不 同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长 λmax （2）不同浓度的同一种物质，其吸收曲线 形状相似λmax不变。
（3）而对于不同物质，它们的吸收曲线形状 不同。
（4）不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度 A 有差异，在