紫外和荧光分光光度计详解说课讲解

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紫外可见分光光度计的使用课件PPT

定义与工作原理
定义
紫外可见分光光度计是一种基于物质对紫外可见光的吸收特性进行物质定量和定性分析的仪器。
工作原理
通过测量物质在特定波长下的吸光度，利用朗伯-比尔定律（A=εbc）计算物质的浓度。
类型与特点
类型
单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。
特点
具有较高的测量精度和稳定性，广泛应用于化学、生物学、医学、环境监测等领域。
每次使用后记录仪器使用情况，包括测试样品、测试波长、测试结果等，以便后续分析。
常见故障排除
波长不准确
检查仪器是否正确设置波长，并确保仪器没有受到强烈震动或磁
场干扰。
读数不稳定
检查样品是否均匀，仪器是否处于稳定状态，以及是否有外界干扰。
仪器无响应
检查电源是否正常，仪器是否处于正常工作状态，以及是否有硬件故障。
THANKS
开始测量
点击开始按钮，仪器自动扫描并记录数据。
数据处理
将测量数据导入计算机进行进一步处理和分析。
实验操作技巧
保持样品池清洁
定期清洗样品池，避免残留物对测量结果的影响。
选择合适的标准物质
选择与待测样品性质相近的标准物质进行校准，提高测量准确性。
控制环境因素
确保实验室内温度、湿度和光照等环境因素稳定，以减小误差。
多次测量求平均值
为减小误差，可以对同一样品进行多次测量，取平均值作为最终结果。
常见问题及解决方案
波长校准不准确
可能是由于仪器内部棱镜或光路不干净导致。解决方法是清洁仪器内部并重新进行波长校准。
测量数据不稳定
数据处理软件崩溃
可能是由于计算机内存不足或软件 bug导致。解决方法是关闭不必要的程序，释放计算机内存，或更新数据处理软件。

紫外分光光度计PPT课件

紫外分光光度计的定义
描述紫外分光光度计的基本原理和结构组成。
简要介绍紫外分光光度计的发展历程和应用领域。
解释紫外分光光度计在光谱分析中的重要地位和作用。
02
紫外分光光度计的原理
吸收光谱的基本概念
01
02
03
吸收光谱
物质与辐射能相互作用时，物质对不同波长的光吸收程度的特性曲线。
吸收光谱的产生
土壤和固体废弃物分析
通过测量土壤和固体废弃物中有机污染物的紫外光谱，可以评估其对环境和生态的影响。
05
结论
紫外分光光度计的重要性和应用前景
重要性
紫外分光光度计是一种用于测量物质对紫外线的吸收或发射的仪器，广泛应用于化学、生物学、医学等领域。它能够提供定性和定量的分析结果，对于物质成分的鉴定、含量测定以及化学反应的动力学研究等方面具有重要作用。
物质中的电子在不同能级间跃迁时，会吸收特定波长的光，形成吸收光谱。
吸收光谱的形状
由电子跃迁的类型、能级差以及物质的组成和结构决定。
紫外吸收光谱的产生
紫外吸收光谱
物质在紫外波段产生的吸收光谱。
电子跃迁
分子中的电子在不同能级间跃迁，产生紫外吸
收光谱。
跃迁类型
伸缩振动跃迁、弯曲振动跃迁、电子跃迁等。
THANKS
紫外分光光度计ppt 课件
目录
• 引言 • 紫外分光光度计的原理 • 紫外分光光度计的种类和用途 • 紫外分光光度计的应用实例 • 结论
01
引言
目的和背景
介绍紫外分光光度计在科学研究中的应用和重要性。
强调本课件对于了解和使用紫外分光光度计的重要意义。
分析当前紫外分光光度计市场和技术发展趋势。

紫外、荧光分光光度计说明

一、设备名称：RF-5301PC荧光分光光度计；二、使用原理1、荧光分光光度计由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。

荧光是光致发光，任何荧光物质都具有激发光谱和发射光谱，发射波长总是大于激发波长。

荧光激发光谱是通过测定荧光体的发光通量随波长变化而获得的光谱，反映不同波长激发光引起荧光的相对效率。

荧光发射光谱是当荧光物质在固定的激发光源照射后所产生的分子荧光，是荧光强度对发射波长的关系曲线，表示在所发射的荧光中各种波长相对强度。

由于各种不同的荧光物质有它们各自特定的荧光发射波长，可用它来鉴定荧光物质。

有些发荧光的物质其荧光强度与物质的浓度成正比，故可用荧光分光光度法测定其含量。

在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。

利用某些物质受激发出的荧光，其光强度与该物质的含量成一定函数关系的性质而制成的。

三、组成结构光源、光件、样品池、检测器、数据处理器1、荧光分光光度计图RF5301PC荧光分光光度计主要是由激发光源、激发单色器、样品池、发射单色器、检测器以及数据处理系统几部分组成1. 光源：为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。

2．激发单色器：置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。

3．发射单色器：置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。

筛选出特定的发射光谱。

4．样品室：通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。

测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。

紫外可见分光光度计原理及操作课件

分析条件选择
一、仪器测量条件
由于光源不稳定性、读数不准等带来的误差。当分析高浓度的样品
时，误差更大。
由L-B定律：
微分后得：
AlgTbc
dlgT0.43d4Tbdc
T
将上两式相比，并将 dT 和 dc 分别换为T 和 c，得
c 0.434T c TlgT
当相对误差 c/c 最小时，求得T=0.368 或 A=0.434。即当A=0.434
你现在学习的是第20页，课件共33页
分析条件选择
四、干扰消除
1. 控制酸度：
配合物稳定性与pH有关，可以通过控制酸度提高反应选择性，副反应减少，而主反应进行完全。如在 0.5MH2SO4介质中，双硫腙与Hg2+生成稳定有色配合物，而与Pb2+、Cu2+、Ni3+、Cd2+等离子生成的有色物不稳定。 2. 选择掩蔽剂
该法是标准曲线法的简化，即只配制一个浓度为cs的标准溶液，并测量其吸光度，求出吸收系数k，然后由Ax=kcx求出cx
该法只有在测定浓度范围内遵守L-B定律，且cx与cs大致相当时，
才可得到准确结果。 2. 多组分定量方法
由于吸光度具有加合性，因此可以在同一试样中测定多个组份。
你现在学习的是第17页，课件共33页
精确度。
你现在学习的是第25页，课件共33页
保养
六、分光光度计的校正
当光度计使用一段时间后其波长和吸光度将出现漂移，因此需要对其进行校正。
波长标度校正：使用镨-钕玻璃（可见光区）和钬玻璃（紫外光区）进行校正。因为二者
均有其各自的特征吸收峰。
吸光度标度校正：
采用 K2CrO4 标准液校正（在15oC时，于不同波长处测定0.04000g/L的 KOH 溶

紫外分光光度法和荧光分析法课件PPT

造成污染。
实验操作规范
仪器校准
在进行实验前，应确保紫外或荧光分光光度计已经校准，以
确保测量结果的准确性。
样品处理
对于荧光分析法，样品应进行适当的预处理，如过滤、离心等，以去除杂质和悬浮物。
试剂纯度
实验所用的试剂应保证纯度，避免杂质干扰实验结果。
操作顺序
在实验过程中，应按照规定的操作顺序进行，避免因操作不
05
实验操作注意事项
安全注意事项
01
02
03
04
眼睛保护
实验操作过程中，应佩戴合适的护目镜，以防紫外线或荧光
物质对眼睛造成伤害。
皮肤保护
操作紫外或荧光实验时，应穿着长袖实验服，并佩戴手套，
以减少皮肤暴露。
避免吸入有害物质
实验过程中应保持室内通风良好，以防有害气体积累。
废弃物处理
实验结束后，应按照相关规定妥善处理废弃物，避免对环境
实验操作
实验操作主要包括样品处理、荧光激发和荧光测量三个步骤。样品处理是将待测物质提取、纯化、稀释等操作，以便进行后续的荧光测量。荧光激发是通过特定波长的光激发样品中的荧光物质，产生荧光。荧光测量则是通过光电倍增管等设备测量荧光的强度和光谱，并记录数据。
应用实例
01Biblioteka 0203环境监测
荧光分析法可用于水体、土壤等环境样品中的重金属、农药残留等有害物质的监测。
人才培养与交流
1
2
加强紫外分光光度法和荧光分析法领域的人才培养，提高专业水平。
3
加强国际间的学术交流与合作，推动该领域的快速发展。
谢谢观看
紫外分光光度法和荧光分析法课件
目录
• 引言 • 紫外分光光度法 • 荧光分析法 • 比较与选择 • 实验操作注意事项 • 课程总结与展望

紫外可见分光光度计演示文稿

当显示错误信息时一定查阅错误故障表，找出原因，再继续操作。放入样品池架时，要检查是否定位准确平稳，不能出现歪斜现象。当仪器执行程序发生错误时，先用STOP键转出，让显示器显示HELLO。如果出现的错误比较严重，不能转出的话，可以用复位键Reset键复位。仪器运行期间，注意仪器附近电磁干扰比较严重的电器应该关闭。以免仪器受到电磁干扰。仪器开电后不要用手拨保护光闸片，因为仪器的接收器不能受强光的照射。为了延长仪器的使用寿命，一般情况下，如果不使用氘灯，请最好不要开氘灯。氘灯关闭后，要等几分钟才能重新点燃。关闭仪器前，请先关氘灯。
测量样品浓度（C）：
在测量浓度之前，必须建立标准曲线才能进行浓度测量。如没有建立标准曲线则不能进行浓度测量，仪器会提示操作出错。测量浓度应该按以下过程操作： A：建立标准曲线（共有三种方法选择）； B：工作曲线的修正（自己认为工作曲线没问题可以不修正）； C：测量浓度。
工作曲线的修正
工作曲线方程为C=K×A+B，最多测量标准液的样点为20个。因此在建立曲线时是选20个样点的平均值建立方程，因此总有其中的样点离曲线较远（坏点），可以剔除该样点来达到修正曲线的目的，方法是在建立完曲线显示K、B、R后按STOP键，则程序会自动剔除坏点，按一次STOP键则剔除一个坏点，最多可以有n-1次（n个标准液）。
基本组成
光源在整个紫外光区或可见光谱区在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。的使用寿命。可见光区：钨灯作为光源，可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。射波长范围在～。紫外区：氘灯。紫外区：氢、氘灯。发射 185～400 nm的连续光谱。的连续光谱。～的连续光谱单色器样品室检测器显示

分光光度计的使用课件

数据分析
根据实验数据，进行数据的整理、分析和处理。利用图表、统计软件等方法，对数据进行趋势分析、差异显著性检验等，以得出实验结果并进行结论。
03
分光光度计的实验数据分析
数据分析的基本原则
1 2
实验数据的完整性
要确保实验数据的完整性，避免数据缺失或遗漏。
数据分析的可靠性
对实验数据进行可靠性的评估，以保证数据的准确性和可信度。
在食品检测方面的应用
食品安全
01
分光光度计可以检测食品中的有害物质和添加剂，如甲醛、亚
硝酸盐、重金属等，保障食品安全。
营养成分分析
02
分光光度计可以检测食品中的营养成分，如蛋白质、脂肪、维
生素等，为营养学研究提供数据支持。
产地和真伪鉴别
03
通过检测食品中的特定元素或化合物，分光光度计可以鉴别食
品的产地、真伪和品种等。
用拟合方法将实验数据与理论公式相比较，以获得更好的结果。
平滑处理可去除数据中的噪声，使数据更接近真实值。
数据的分离
数据的归一化
将不同类型的数据进行分离，以更好地分析各数据的特征。
将数据进行归一化处理，以便更好地比较各数据的特征。
04
分光光度计的实验技术
标准曲线法
总结词
标准曲线法是一种通过对比已知浓度标准品与待测样品吸光度的差异，推算待测样品浓度的定量方法。
对同一份样品进行多次测量，并取平均值，以减小误差。
选择合适的测量波长和带宽，以减少误差。
选择合适的实验条件
了解样品的基本性质和特点，选择适合的测量条件。
选择合适的溶剂和稀释比例，使样品的浓度在分光光度计的线性范围内。
选择合适的测量时间，因为某些化学反应会随着时间的推移而发生变化。

第5章荧光分光光度计课件讲解

它是最常用的荧光参数之一。单位为任意单位，表示的是相对强度。
12
荧光分光光度法
2、荧光分光光度计的基本结构
荧光分析仪器的结构和主要部件：
光源
激发单色器
显示装置
样品室发射单色器
检测器
13
荧光分光光度法
2、荧光分光光度计的基本结构
2.1、光源：对光源的要求是必须有足够的强度且
具有连续光谱，其波长范围能满足仪器的需要。即：具有光强度大、适用波长范围宽两个特点。先多用氙灯。
定量分析：标准曲线法
19
中药的一般理化鉴别
1、化学定性分析 2、中药的膨胀度 3、微量升华 4、荧光分析 5、显微化学分析
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理化鉴别-荧光分析
中药中所含的某些化学成分，在紫外光或常光下能产生一定颜色的荧光的性质进行鉴别。
样品置于紫外光等下约10cm处观察，一般紫外灯波长设为365nm。
取中药断面、饮片、粉末或浸出物在紫外光等下观察。某些本身不显荧光的中药，用酸、碱或其他化学方法处理后，可使其产生可见荧光，如：芦荟水溶液与硼砂共热，即反应显黄绿色荧光。
21
9
荧光分光光度法
3、荧光分光光度法的优缺点
3.1、优点：
（1）灵敏度高检测限可达10-10-10-12 g/mL，比紫外可见光度计高出3-4个数量级。
（2）定性更可靠荧光分析可提供激发光
谱、发射光谱、荧光强度、总荧光量、峰位、谱带宽度、量子产率、荧光寿命等参数。干扰因素较多
10
荧光分光光度法 3、荧光分光光度法的特点
λex(max)
λ发射
8
荧光分光光度法
4、荧光分析中常用参数
荧光分析法

紫外和荧光分光光度计详解

光源与检测器成直角安排，测量固体时，光源与检测器成直角。

检测器：光电管或光电倍增管。可将光信号放大并转为电信号。
荧光光谱仪工作原理示意图
相对应该强度
紫外-可见与荧光分光光度计工作原理区别：
其它附属设施

控温系统和装置停留装置固体样品架
仪器功能
VU—Vis仪

荧光光谱仪

荧光分光光谱仪

工作原理：光源的激发光照射到样品池中，激发样品中的荧光物质
发出荧光，被光电倍增管接受，最后以图或数字的形式显示出来。

光源：高压汞灯或氙灯，在190nM-800nM范围，发射强度较大的连
于光源和样品室之间的单色器（第一单色器）
发射单色器：置于样品室和检测器之间的为单色器（第二单色器。样品室：石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。

20世纪80年代出现的一种光学多通道检测器。
一个二极管对应接受光谱上一个纳米谱带宽的单色光每一个二极管相当于一个单色器的出口狭缝

DAD检测器的灵敏度比通常的UA检测器约低一个数量级。
单纯用于含量测定或杂质检查时，还是采用UA检测器为好。
F-4500 荧光分光光谱仪（日本 Hitachi）
检测器非线性响应、溶液pH值、光分解、
水解、温度等对吸光度产生影响；
在选择参比溶液和显色剂时也要注意。
DAD（PAD）检测器分光光度计

二极管阵列检测器（DAD）
又称光电二极管列阵检测器（PAD） PDA（photo-diode array） PDAD（photo-diode array detector） Diode array detector，DAD

紫外分光光度计分析PPT课件

5 分光光度计的维护和保养
（1）仪器工作环境
仪器应安放在稳固的工作台上，避免周围有强磁场。室内温度：15-28℃，相对湿度： 45%-65%，室内不宜有腐蚀性气体，不宜光线过强。
（2）仪器保养 ① 电压
一般为220V，在电压波动较大的实验室，最好有稳压器。
② 光源
在不用时不要开光源灯，延长光源的使用寿命。要注意及时更换光源不稳的灯泡，更换时不要直接用手接触，以免沾上油污。
2）在吸收池中装入相同的溶剂，吸光度相同即可成套，若不同可求出修正值后使用。
分光光度计的使用
（1）721型可见分光光度计 ① 检查各调节钮处于起始位置，接通电源，打
开样品室暗箱盖，预热20min。
② 选择调节至所需用波长，并调节相关波长的灵敏档。
③ 用调“0”电位器调整电表于T=0%，安放参比溶液（第一格）和待测液，盖上样品室盖，拉动拉杆，使参比溶液在光路上时调节“100%”电位器，使电表指针在 T=100%
管高200倍目前紫外-可见分光光度计广泛使用光电倍增管作为检测器
光电倍增管示意图
信号显示器
1 以检流计或微安表为指示仪表。标尺分上下两部分：上半部分是透光度T 下半部分是吸光度A
2 数字显示和自动记录型装置。直接数字显示可避免人为误读。
紫外-可见分光光度计类型及特点
按使用波长范围可分为 1 可见分光光度计：400nm-780nm
单波长双光束分光光度计特点：能连续改变波长，自动比较样品和参
比溶液的透光强度，自动消除光源强度引起的误差适用：在较宽波长范围内获得复杂的吸收光谱曲线的分析
双波长分光光度计
特点：可测定高浓度、多组分混合试样，浑浊试样；精确度高，操作简单。

紫外分光光度计的使用原理和方法 ppt课件

助色团：是指带有非键电子对的基团，如OH、-OR、-NHR、-SH、-Cl、-Br、-I等，它们本身不能吸收大于200nm的光，但是当它们与生色团相连时，会使生色团的吸收峰
向长波方向移动，并且增加其吸收强度。见表3-4。
紫外分光光度计的使用原理和方法
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红移和紫移
在有机化合物中，常常因取代基的变更或溶剂的改变，使其吸收带的最大吸收波长 λmax发生移动。向长波方向移动称为红移(表33)，向短波方向移动称为紫移。
2. 溶剂注意如下几点：
（1）尽量选用低极性溶剂；（2）能很好地溶解被测物，并且形成的溶液具有良好的化学和光化学稳定性；（3）溶剂在样品的吸收光谱区无明显吸收。
3. pH值
紫外分光光度计的使用原理和方法
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1.5 紫外-可见吸收光谱的应用
紫外-可见吸收光谱除主要可用于物质的定量分析外，还可以用于物质的定性分析、纯度鉴定、结构分析。
1. 物质对光的选择性吸收
物质对光的吸收是选择性的，利用被测物质对某波长的光的吸收来了解物质的特性，这就是光谱法的基础。
紫外分光光度计的使用原理和方法
6
通过测定被测物质对不同波长的光的吸收强度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得出该物质在测定波长范围的吸收曲线。如图3-1；
致，光学元件的缺陷引起的多次反射等，均
造成光径不一致，从而与定律偏离。
紫外分光光度计的使用原理和方法
27
§3. 紫外-可见分光光度计
一、主要部件的性能与作用基本结构:
光源→单色器→吸收池→检测器→信号显示系统 ↑ 样品
紫外分光光度计的使用原理和方法
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1 光源
在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源

荧光分光光度计课件

检查测试参数是否设置正确；检查样品是否符合测试要求。
定期校准与维护
定期校准
按照仪器说明书要求，定期进行校准，以确保仪器准确性。
维护保养
根据仪器使用情况，定期进行保养，包括清洗光学元件、更换滤光片、清洁机械部分等。
联系专业人员
如遇到无法解决的问题，应联系专业人员进行维修。
05 荧光分光光度计的实验技术与应用
CHAPTER
荧光光谱的测量技术
荧光光谱的测量技术
激发光谱的测量
通过测量荧光物质在不同波长激发光下的发射光谱，可以了解荧光物质的性质和结构。
通过改变激发光的波长，测量荧光发射光谱的变化，可以得到荧光物质的激发光谱。
发射光谱的测量
同步荧射光谱。
特点
具有高灵敏度、高分辨率和高精度等优点，广泛应用于化学、生物学、医学和环境科学等领域。
工作原理
激发光源
通常采用高压氙灯或激光器作为激发光源，能够发出紫外或可见光。
激发光照射样品
激发光照射到样品上，使样品中的荧光物质吸收光能并跃迁至激发态。
荧光发射与光谱分离
荧光物质从激发态回到基态时释放出荧光，通过光谱分离技术将不同波长的荧光分开。
数据采集与分析
数据采集
启动测量程序，开始采集数据，记录荧光光谱图及相关参数。
数据处理
对采集到的数据进行平滑处理、背景扣除等操作，以提高数据质量。
结果分析
根据测量需求对数据进行进一步分析，如荧光量子产率计算、动力学分析等。
04 荧光分光光度计的维护与保养
CHAPTER
日常保养
清洁仪器表面
每天使用后，用软布擦拭仪器表面，保持清洁。
通过比较不同浓度的标准荧光物质的量子产率，可以得到荧光物质的量子产率。