实验十 豆粕中尿素酶活性的测定
饲料成分分析实验：快速估测尿酶活性法
快速估测尿酶活性法（可选择方法一）目的：在有指示剂酚红存在的条件下，豆粕（饼）中的尿素酶活性可按尿素转变成氨的方法定性测定。
方法一：仪器及试剂1.培养皿2.稀硫酸（H2SO4）0.2N或更稀些，带滴管。
3.尿素—酚红试剂。
将1.2克酚红溶解于30ml0.2N的NaOH中，用蒸馏水将之稀释至约300ml，加入90g尿素并溶解之，用蒸馏水稀释至2l，加入14ml 1.0N的H2SO4或70ml o.2N的H2SO4，用蒸馏水稀释至最后体积3l，溶液应具明亮的琥珀色。
测定步骤1.在一个150ml的烧杯中倒入少量试剂，注意溶液必须呈明亮的琥珀色。
若溶液已转变为深桔红色，滴人稀硫酸深液并搅拌之，直至溶液再度呈境拍色。
2.量一场匙粉碎很好的豆饼粉，放置于培养皿中。
3.在样品上加入两场匙试剂，轻轻搅拌，将样品平铺于培养皿中。
若仍有干豆饼斑点，则再加入试剂，直至将豆饼浸湿。
4.放置5分钟后观察：a.没有任何红点出现：再任其放置25分钟，若仍无红点出现，说明豆饼过熟。
b.少量红点：少量尿素酶活性，豆饼可用。
c.豆饼表面约有25％为红点覆盖：少量尿素酶活性；豆饼可用。
d.豆饼表面约有50％为红点覆盖：有尿素酶活性。
e.豆饼表面的75％－100％为红点覆盖：尿素酶活性很高，不应接受这种原料，因为豆饼过生。
方法二：仪器与试剂1.粉碎装置（不强烈发热）2.天平：感量1%3.试管：直径18mm，长180mm4.尿素：分析纯5.酚红：分析纯0.1%乙醇（20%）溶液测定步骤将所测试样研细，称去0.02g，转移到试管中，加入0.02g结晶尿素及两滴酚红指示剂，加之20—30ml蒸馏水，摇动10s。
观察溶液颜色，并记录呈粉红色时间。
尿酶活性结果表示：1min内呈粉红色为——活性很强1~5min内呈粉红色为——活性强5~15min内呈粉红色为——有点活性15~30min内呈粉红色为——没有活性一般在10min以上不显粉红色，尿酶活性合格，30min以上不变色说明加热过度；10min内显粉红色说明加热不足，1min内呈粉红色说明过生。
大豆中脲酶活性的测定
e.结果计算
UA＝14×C(V0-V)/(30×m) C——氢氧化钾标准溶液浓度， mol/L； V0——空白试验消耗氢氧化钾的体 积， ml； V——测定试验消耗的氢氧化钾的 体 积，ml； m——试验质量，g。
比色法
原理：向含有EDTA二钠盐的PH=7的缓 冲液的分析悬浮液中加入尿素溶液，在 30℃下保温5min，加入磷钨酸终止酶作 用并沉淀蛋白质。产生的氨在次溴酸钠和 麝香草酚作用下形成蓝色的靛麝香草酚， 借以比色。
大豆饼粕中脲酶活性的测定
豆粕的蛋白质含量为45%左右，是一 种优质的蛋白质饲料，但是由于其中的抗 营养因子较多，极大的限制了豆粕在饲料 中的应用。
大豆中的抗营养因子
胰蛋白酶抑制剂 植物红细胞凝集素 皂甙 胃肠胀气因子 植酸 抗维生素 致甲状腺肿因子
这些抗营养因子大多是不耐热的，
在大豆饼粕的加工过程中由于加热而失 活，从而降低或者失去其有害作用 ，因 此，在大豆加工生产饲用饼粕时，必须 对大豆粕进行充分而又适当的加热，这 样才能使其中的抗营养因子失活 。
评价大豆饼粕的指标
脲酶活性： 检测豆粕的加热程度是否足以 破坏其中的抗营养因子的指标。 蛋白质溶解度：反映豆粕是否加热过度的 一个指标。
快速测定方法2
在培养皿上放入少量的豆饼粕，在样品上 滴入少量指示剂并搅拌，将其平铺于培养皿中， 放置5min后观察结果。 无任何红点出现，再放置25min仍然无红点出 现，说明豆粕过熟； 有少量红点出现，说明脲酶活性较低，豆粕可 用； 样品表面有25％被红点覆盖，豆粕可用； 样品表面有50％被红点覆盖，应慎用； 样品表面有75％－100％被红点覆盖，脲酶活 性过高，豆粕过生，不可用；
大豆中的抗营养因子?胰蛋白酶抑制剂?植物红细胞凝集素?皂甙?胃肠胀气因子?植酸?抗维生素?致甲状腺肿因子这些抗营养因子大多是不耐热的在大豆饼粕的加工过程中由于加热而失活从而降低或者失去其有害作用因这些抗营养因子大多是不耐热的在大豆饼粕的加工过程中由于加热而失活从而降低或者失去其有害作用因此在大豆加工生产饲用饼粕时必须此在大豆加工生产饲用饼粕时必须对大豆粕进行充分而又适当的加热这样才能使其中的抗营养因子失活
大豆制品中尿素酶活性测定方法_1
大豆制品中尿素酶活性测定方法中华人民共和国专业标准蛋白酶活力测定法ZBX66030-87Measurementofproteinaseactivity本方法适用于酿造酱油时在制品菌种、成曲的蛋白酶活力测定。
1福林法试剂及溶液:以下试剂都为分析纯福林试剂(Folin试剂):于2000mL磨口回流装置内,加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g,钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g,蒸馏水700mL,85%磷酸50mL,浓盐酸100mL,文火回流10h。
取去冷凝器,加入硫酸锂(Li2SO4)50g,蒸馏水50mL,混匀,加入几滴液体溴,再煮沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色而非绿色。
若溶液仍有绿色,需要再加几滴溴液,再煮沸除去之。
冷却后,定容至1000mL,用细菌漏斗(No4～5)过滤,置于棕色瓶中保存。
此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释。
即成已稀释的福林试剂。
碳酸钠溶液:称取无水碳酸钠(Na2CO3),定容至1000mL。
三氯乙酸(TCA)溶液:称取三氯乙酸(CCL3COOH),定容至1000mL。
磷酸盐缓冲液:称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O),定容至1000mL,即成溶液(A液)。
称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O),定容至1000mL,即成溶液(B液)。
取A液28mL和B液72mL,再用蒸馏水稀释1倍,即成的磷酸盐缓冲液。
2%酪蛋白溶液:准确称取干酪素2g,称准至,加入氢氧化钠10mL,在水浴中加热使溶解(必要时用小火加热煮沸),然后用磷酸盐缓冲液定容至100mL即成。
配制后应及时使用或放入冰箱内保存,否则极易繁殖细菌,引起变质。
100μg/mL酪氨酸溶液:精确称取在105℃烘箱中烘至恒重的酪氨酸,逐步加入6mL1N盐酸使溶解,用盐酸定容至100mL,其浓度为1000μg/mL,再吸取此液10mL,以盐酸定容至100mL,即配成100μg/mL的酪氨酸溶液。
尿素酶活性定性检测
尿素酶的测定（定性）1.试剂:1.10.62%苯酚红乙醇溶液2、测定方法:将试样粉碎,称0.2g试样转入试管中,加入0.2g结晶尿素,3-5滴苯酚红指示剂，加20-30mL蒸馏水摇动10秒钟，于30度水浴中观察溶液颜色，记录呈现粉红色时的时间。
3、尿素酶活性的结果表示：1min内呈粉红为:活性很强;区1-5 min内呈粉红为:活性强;5-15 min内呈粉红为:有点活性;15--30 min内呈粉红为: 无活性;美国大豆协会方法：1、原理：在有指示剂酚红存在的条件下，豆粕中的尿素酶活性可按尿素转变成氨的方法定性测定。
2、试剂：2.1 稀硫酸（H2SO4）0.2N或更稀些，带滴管。
2.2 尿素—酚红试剂：a、将1.2克酚红溶解于30毫升0.2N的NaOH中；b、用蒸馏水将之稀释至300毫升；c、加入90克尿素并溶解之，用蒸馏水稀释至2升；d、加入14毫升1.0N的H2SO4（或0.2N的H2SO4），用蒸馏水稀释至3升；e、溶液应具明亮的琥珀色。
3、测定步骤：3.1在一个150毫升的烧杯中到入少量试剂，注意溶液必须呈明亮的琥珀色。
若溶液已转为深橘红色，滴入稀硫酸溶液并搅拌之，直至溶液再度呈琥珀色。
3.2量一汤匙粉碎好的豆粕粉，放置于培养皿中，在样品上加入两汤匙试剂，轻轻搅拌，将样品平铺于培养皿中。
若仍有干豆粕斑点，则再加入试剂，直至将豆粕浸湿。
3.3放置5分钟后观察：No.1 没有任何红点出现：再任其放置25分钟，若仍无红点出现，说明豆粕过熟。
No.2 有少数红点：少量尿素酶活性，豆粕可用。
No.3 豆粕表面约有25%为红点覆盖：少量尿素酶活性，豆粕可用。
No.4 豆粕表面约有50%为红点覆盖：有尿素酶活性。
No.5 豆粕表面约有75-100%为红点覆盖：尿素酶活性很高，不应该接受这种原料，因为豆粕过生。
豆粕脲酶活性相关资料
V：消耗氢氧化钠体积，ml。
滴定法（续）
操作方法
称取0.2000g试样，转入比色管中，加入10ml尿素缓冲液， 立即盖好盖子并剧烈摇动。置于30±0.5℃恒温水浴上准确保 持30min后立即加入10ml0.1mol/l盐酸，迅速冷却到20℃， 将比色管内容物全部转入烧杯，用水冲洗比色管2～3次，立 即用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
大豆中脲酶活性测定
为什么要测定脲酶？
脲酶毒性
一般脲酶并没有毒性作用，但在一定温度和pH值条件下，生 大豆的脲酶遇水迅速将含氮化合物分解成氨，引起氨中毒。 大豆中的抗营养因子：胰蛋白酶抑制剂最重要
评估胰蛋白酶抑制剂活性
大豆饼粕中胰蛋白酶抑制剂抑制动物的生长和引起胰腺肥大。 而直接测定大豆饼粕中的胰蛋白酶抑制剂的活性比较困难、 耗时。脲酶和胰蛋白酶抑制剂在加热时有相近的速率变性， 并且脲酶对热的抵抗力比胰蛋白酶抑制剂强，又易于测定， 所以常用脲酶活性指标来判断大豆饼粕加热的程度和估计大 豆饼粕中胰蛋白酶抑制剂是否已经被破坏。
另取比色管做空白试验，加入10ml尿素缓冲液，10ml0.1 mol/l盐酸。称取与上述试样量相当的试样，迅速加入比色管中，
立即盖好比色管并剧烈摇动，在30±0.5℃恒温水浴上准确保 持30min，冷却到20℃，将比色管内容物全部转入烧杯，用 水冲洗比色管2～3次，用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
滴定法（续）
仪器与器皿 pH计 恒温水浴 比色管 10ml移液管
滴定法（续）
试剂
尿素：分析纯 尿素缓冲液：4.45g磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并
稀释至1000ml，再将30g尿素溶于此缓冲液中。 0.1mol/l盐酸 0.1mol/l氢氧化钠标准溶液
质检豆粕总结(3篇)
质检豆粕总结第1篇豆粕中存在着许多抗营养因子，如胰蛋白酶_、低聚糖、大豆凝血素、植酸、脲酶、大豆抗原蛋白(致敏因子)及致甲状腺肿素等，这些抗营养因子不仅影响饲料的适口性，还会影响饲料的营养价值和动物的物质消化吸收以及体内的一些生理过程，严重影响了动物的健康和生产性能。
通常检测豆粕品质的方法有以下几种：1.尿素酶活性(UA)测定法UA测定法是用于测定大豆中脲酶活性的方法，也是测定豆粕中胰蛋白酶_的间接方法，是评定大豆粕的加工程度是否适当及营养品质优劣的传统方法。
将粉碎的大豆粕与中性尿素缓冲溶液混合，在30±℃温度下保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨，在中性条件下用过量的盐酸中和氨，再用氢氧化钠回滴，计算出每分钟每克大豆粕释放氨态氮的毫克数来表示尿素酶的活性(UA)。
通常认为豆粕中脲酶活性越低，豆粕的营养价值就越高，但如果加热过度又会引起氨基酸的被破坏。
2.蛋白溶解度(PS)测定法此方法被认为是一项优于UA测定方法的评估大豆加工过度与加工不足的最佳方法。
方法主要是用氢氧化钾溶解豆粕，测定其中的蛋白含量占未用氢氧化钾处理的豆粕中的蛋白含量的百分比，来表示蛋白溶解度。
其原理是：加热使游离氨基酸与其他化合物的基团形成不能为消化酶所打开的分子间和分子内的结合键，因而降低了蛋白质的溶解。
一般情况下蛋白溶解度低于70%的豆粕营养价值已受到破坏，低于65%几乎可以肯定豆粕加热过度，严重过熟，致使蛋白的消化利用率会非常低。
近年来由于加工技术的改进，PS有增高的趋势。
有研究表明，豆粕蛋白在氢氧化钾溶液中的溶解度和脲酶活性呈正相关。
3.营养成分检测评定根据我国国家标准GB/T19541-2004，饲料用大豆粕的质量标准及分级标准主要以粗蛋白、粗纤维、粗灰分为质量指标，按含量分为三级。
三级大豆粕质量指标必须全部符合相应等级规定，二级饲用大豆粕为中等质量指标，低于三级者为等外品。
测定豆粕各项营养成分是评定豆粕营养价值的重要方法。
大豆制品尿素酶活性测定的影响因素
在 豆粕 中含有 一种 酶 叫 尿素 酶 ， 是 豆 粕 中含 它
有的几种天然酶类之一 ， 在许多高等植物 中都含有
尿 素酶 ， 特别是 胡 芦科 和 豆科 植 物 中含量 很 高 。判 断 豆粕加 热程 度的 主要 指标 是 尿素 酶 活性 ， 尿素 酶 本 身无 营养意义 ， 但它 与抗胰 蛋 白酶 的含量 接 近 ， 而
１ ６ 结 果表 述 ．
１样品 ， 分别称取 ０ １ 、． ０ｇ ． ０ｇ ０ ２ 、
０ ４ 、． ０ｇ０ ８ ． ０ｇ ０ ６ 、． ０ｇ五组 试 样 于 三 角 瓶 内 ， 每组
３ ０ 仿工业实验磨 ， ０ ８ｍｍ筛网；Ｆ Ｄ １０ 配 ． Ｊ Ｓ 一
＊ 收 稿 日期 ： ０ ２ ０ — ２ ２１－ ４ ８
匀 。置于（０ ． ℃） ３ ±０ ５ 空气摇床中， 计时 。隔 ５ｍ ｎ ｉ 放人第二个与此相同的三角瓶做平行试验 。
１４３ 称 取试样 ０ ２０ ， 入 另一 三 角瓶 中 ， ．． ． ００ｇ 放 加 １ ＯｍＬ磷 酸缓冲液 ， 好 橡 胶 塞 ， 匀 ， 为空 白试 塞 摇 作 验， 与前 一个 三角 瓶 间 隔 ５ｍｉ 于 同一 空 气摇 床 ｎ置 中 。隔 ５ｍｉ ｎ放入第 二 个与 此相 同 的三 角瓶 做空 白
平 行试 验 。
高。因此 ， 尿酶活性用来作为豆粕加热是否偏生的
间接估 测指 标 ， 有重要 意义 。 具 本 文分 别从样 品称样 量 、 粉碎 后样 品放 置时 间 、 粉碎 粒度 三方 面 ， 研究 其 在 豆 粕 尿 素 酶活 性 测 定 上
的影 响 。 １ 材 料 与 方 法
・
４ ・ ６
粮 油仓储 科技 通讯 ２ １ （） ０ ２４
大豆制品中尿素酶活性的两种快速检测法
大豆制品中尿素酶活性的两种快速检测法饲料公司酚红法1原理酚红指示剂在pH6.4~8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶，在室温下可将尿素水解产生氨。
释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断尿素酶活性的大小。
2仪器和试剂2.1粉碎装置粉碎时应不产生强烈发热（如研钵、球磨机）；2.2天平感量0.01 g；2.3 试管直径18 mm，150 mm；2.4尿素；2.5酚红试剂1g/L乙醇溶液。
3测定步骤将试样研细，称取0.02 g试样，称准至0.01 g，转入试管中。
加入0.02 g结晶尿素及2滴酚红指示剂，加20~30 mL蒸馏水，摇动10 s。
观察溶液颜色，并记下呈粉红色的时间。
4尿素酶活性的测定结果表示1 min内呈粉红色为：活性很强；1~5 min内呈粉红色为：活性强；5~15 min内呈粉红色为：有点活性；15~30 min内呈粉红色为：没有活性。
注：通常，10 min以上不显粉红色或红色的大豆制品，其尿素酶活性即认为合格。
饲料公司pH-增值法本法是美国、日本和前苏联等国常用方法。
尿素水解释放的氨是碱性的，可使溶液pH值升高。
试样反应30 min后，与空白溶液的pH之差数，可间接用来表示氨量的多少。
1. 仪器设备1.1 恒温水浴须能保持温度于30℃±0.5℃；1.2 酸度计（pH计）具有玻璃电极、甘汞电极、可测试5 mL 的溶液。
此为一种精密仪器，须装有温度补正器，其敏感度应为±0.02 pH单位或更佳。
仪器操作及pH值测定均应依照制造商的说明，该pH计应在测定前以标准缓冲液加以校正。
1.2试管20 mm×150 mm并配有橡皮塞。
2. 试剂2.1 取0.05 mol/L磷酸盐缓冲液溶解3.403 g磷酸二氢钾（KH2PO4）于约100 mL新蒸馏水中，溶解4.335 g磷酸氢二钾（K2HPO4）于约100 mL的蒸馏水中，然后将此两种溶液合并配成1000 mL。
大豆制品中尿素酶活性测定方法
大豆制品中尿素酶活性测定方法1 适用范围本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿素酶活性的测定。
本法可确认大豆制品的湿热处理程度。
2 定义本标准所指尿素酶活性定义如下：在30±0.5℃和pH7的条件下, 每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。
3 原理将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min, 尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。
用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。
4 仪器设备4.1 样品筛: 孔径200μm;4.2 酸度计: 精度0.02pH, 附有磁力搅拌器和滴定装置;4.3 恒温水浴: 可控温30±0.5℃;4.4 试管: 直径18mm, 长150mm, 有磨口塞子;4.5 精密计时器;4.6 粉碎机: 粉碎时应不生强热(例如球磨机)4.7 分析天平: 感量0.1mg;4.8 移液管: 10ml。
5 试剂和溶液5.1 尿素(GB 696-77): 分析纯;5.2 磷酸氢二钠(GB 1263-77): 分析纯;5.3 磷酸二氢钾(GB 1274-77): 分析纯;5.4 尿素缓冲溶液(pH6.9至7.0): 4.45g磷酸氢二钠(5.2)和3.40g磷酸二氢钾(5.3)溶于水并稀释至1000ml, 再将30g尿素(5.1)溶于此缓冲溶液中, 可保存1个月。
5.5 盐酸(GB 622-77): 分析纯, 0.1M溶液;5.6 氢氧化钠(GB 629-77): 分析纯, 0.1M标准溶液, 按GB 601标准溶液制备方法的规定配制。
6 试样的制备用粉碎机(4.6)将10g试样粉碎, 使之全部通过样品筛(4.1)。
对特殊试样（水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品）应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。
7 测定步骤称取约0.2g已粉碎的试样, 称准至0.1mg, 转入试管(4.4)中(如活性很高只称0.05g试样)移入10ml尿素缓冲溶液(5.4), 立即盖好试管并剧烈摇动, 马上置于30±0.5℃恒温水浴(4.3)中, 准确计时保持30min。
豆粕尿素酶活性的测定
豆粕中尿素酶活性的测定（PH差值法）1.参考标准无1.适用范围适用于用PH增值法测定豆粕中脲酶活性的方法。
2.原理豆粕中的脲酶可以使用尿素分解产生氨，使体系中pH增加，用pH计测定pH 变化，以判断脲酶活性。
3.仪器和工具4.1粉碎机4.2可调节温度的恒温水浴锅4.3酸度计：精确至0.014.4碘瓶：50ml4.5天平：感量0.01g4.6天平：感量0.1g4.7秒表4.试剂5.1磷酸二氢钾（KH2PO4）5.2磷酸氢二钾（K2HPO4）5.3 50%磷酸二氢钾溶液5.4 50%磷酸氢二钾溶液5.5 尿素[CO(NH2)2 ]5.6 pH7.00磷酸缓冲液：用天平（4.6）称取磷酸二氢钾（5.1）17.1g溶于100ml蒸馏水，再称取烘干的磷酸氢二钾(5.2)21.7g于100ml蒸馏水，将这两种溶液的混合液共配制5000ml。
并用酸度计(4.3)调节pH值，pH小于7.00时，加入少量50%磷酸氢二钾溶液（5.4），当pH大于7.00时，加入少量50%磷酸二氢钾溶液(5.3)，最终使得缓冲液的pH为7.00(±0.01)。
5.7 pH7.00尿素缓冲液：用天平（4.6）称取尿素（5.5）150.0g，溶于5000ml磷酸缓冲液（5.6）中。
并用酸度计(4.3)调节pH值，pH小于7.00时，加入少量50%磷酸氢二钾溶液（5.4），当pH大于7.00时，加入少量磷酸二氢钾溶液(5.3)，最终使得缓冲液的pH为7.00(±0.01)。
5.操作步骤用粉碎机（4.1）粉碎样品，用天平（4.5）分别称取三份样品约0.80g（±0.02g）的样品于3个50ml的碘瓶（4.4）中，其中两个加40ml尿素缓冲液（5.7），另一个加入40ml磷酸缓冲液(5.6)（空白），塞上塞子，摇匀后放入30℃（±1℃）的恒温水浴锅中，用秒表(4.7)准确计时，每10分钟摇匀一次，反应30分钟后，在5分钟内用酸度计(4.3)测定pH值。
实验十 豆粕中尿素酶活性的测定
实验十豆粕中尿素酶活性的测定一、实验目的掌握测定尿素酶活性的各种方法的基本原理及方法步骤。
二、实验原理将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。
用过量的盐酸溶液中和所产生的氨，再用氢氧化标准溶液回滴。
三、实验设备1、样品筛：孔径200μm；2、酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置；3、恒温水浴：可控温30±0.5℃；4、试管：直径18mm，长1 50mm，有磨口塞子；5、精密计时器；6、粉碎机：粉碎时应不生强热（如球磨机7、分析天平．感量0.1mg；8、移液管；10mL。
四、实验内容称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg，转入试管中，（如活性很高的样品，可只称0.05g试样），移入10ml尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于30±0.5℃恒温水浴中，准确计时保持30min。
即刻移人10m1盐酸溶液，迅速冷却到20℃。
将试管内容物全部转入烧杯，用5ml水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液滴定到pH4.70 。
另取试管作空白试验，移人10ml尿素缓冲液，10ml盐酸溶液。
称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。
立即盖好试管并剧烈摇动，将试管置于30±0.5℃的恒温水浴，同样准确保持20min，冷却至20℃，将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标准溶液滴定至pH 4.70。
以每分钟每克大豆制品释放氨的mg量来表示尿素酶的活性（UA），可按下式计算：m VVC UA⨯-⨯=30)(14式中：C—氢氧化钠标准溶液浓度（mo1/L）；V0一空白试验消耗氢氧化钠溶液体积（m1）； V—测定试样消耗氢氧化钠溶液体积（m1）； m—试样质量（g）。
若试样经粉碎前的预干燥处理时，则其计算如下：)1(30)(140S mV V C UA -⨯⨯-⨯= 式中：S 一预干燥时试样失重的百分率。
尿素酶活性快速测定法——酚红法(粗略法)
约25%红点
中度活跃（△pH=0.10-0.25）
约50%红点
活跃（△pH=0.30-0.50）
约75%红点25min任无
豆粕过熟
四、注意事项：
尿素-酚红溶液保质期90天，过期重新配制。
将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿培养皿中将已调好的尿素酚红溶液加入小玻皿中的豆粕上直至完全浸湿停留5min观察豆粕的红色反应
尿素酶活性快速测定法——酚红法（粗略法）
一、实验原理：
尿素酶+尿素 氨气（用酚红作指示剂）
二、实验试剂
2.1 0.1N氢氧化钠：称0.4g氢氧化钠溶于100ml水中。
2.2 0.1N硫酸：将2.77ml浓硫酸加入1000ml水中稀释。
2.3 尿素—酚红溶液配制：
0.14g酚红溶于35ml水中+7ml 0.1N氢氧化钠
混合 0.1N硫酸滴定 琥珀色
21g尿素溶于300ml水中
三、实验方法：
将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿(培养皿)中，将已调好的尿素——酚红溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全浸湿，停留5min，观察豆粕的红色反应。
少量红点
大豆饼粕生熟度的快速检测
大豆饼粕生熟度的快速检测[目的要求]了解大豆制品中尿素酶活性测定原理及注意事项，并掌握多种快速测定饲料中尿素酶活性的方法。
一、试纸法[原理]大豆饼粕中的尿素酶可使尿素水解释放出氨。
氨呈碱性，可使溶液PH 升高，红色石蕊试纸变成蓝色。
[仪器设备]1、植物粉碎机2、恒温水浴锅：2孔3、天平：感量0.01g4、带塞三角瓶：250ml[试剂]1、尿素：分析纯2、石蕊试纸：红色[测定步骤]取尿素0.1g置于250ml带塞三角瓶中。
将被检试样磨细至0.45mm，取试样粉0.1g，加水100ml，加塞于45℃的水浴中加热，每隔15min轻轻摇晃几下，1h后从水浴中移出。
取红色石蕊试纸一条浸入此溶液中，如试纸变蓝表示豆饼粕是生的，若试纸不变色，则说明豆饼粕是熟的。
二、酚红法[原理]酚红指示剂在PH6.4~8.2时由黄变红，大豆制品中所含的脲酶，在室温下将尿素水解，产生氨，释放出的氨可使酚红指示剂变红，根据变红时间长短来判断脲酶活性大小。
[仪器设备]1、植物粉碎机2、天平：感量0.01g3、试管：[试剂与溶液]1、尿素：分析纯2、95%乙醇3、酚红溶液：称取0.1g的酚红溶于100ml 95%乙醇中。
[测定步骤]将试样粉碎至0.45mm，称取0.2g试样，移入试管中，加入0.02g 尿素及2滴酚红指示剂，再加入20~30ml蒸馏水，摇动10s。
观察颜色变化，并记下呈粉红色的时间。
[尿素酶活性的测定结果判断]1、1min内呈粉红色为活性很强，表示豆粕生。
2、1~5min内呈粉红色为活性强，表示豆粕生。
3、5~15min内呈粉红色表示活性弱，为合格。
4、15~30min内呈粉红色为没有活性，为过熟粕。
三、尿素-苯酚磺试剂法[原理]用苯酚磺作指示剂，按尿素转变成氨的多少及显色度，定性测定大豆饼粕中脲酶的活性。
[仪器设备]植物粉碎机、玻璃吸管[试剂与溶液]1、尿素：分析纯2、苯酚红：分析纯3、0.2mol/L氢氧化钠溶液4、0.1mol/L硫酸溶液5、尿素-苯酚磺试剂：将1.2g苯酚红溶于30ml0.2mol/L氢氧化钠溶液中，用水稀释至300ml。
豆粕尿素酶快速检验法
豆粕尿素酶快速检验法-酚红法一、原理酚红指示剂在PH6.4~8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶，在室温下可将尿素水解产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断尿素酶活性的大小。
二、试剂1、尿素：AR2、酚红：0.1%乙醇(70%)溶液三、步骤称取0.2g试样（称准至0.01g）转入试管中，加入0.02g结晶尿素及两滴酚红指示剂，加20—30mL蒸馏水，摇动10S，观察颜色，并记下呈粉红色的时间。
2、1min内呈粉红色为活性很强，说明加热不够，不可接受这种原料，过生。
3、1—5 min内呈粉红色为活性强。
4、5—15 min内呈粉红色为有点活性，豆粕可用。
5、15—30min内呈粉红色为没有活性，豆粕过熟，营养损失严重，蛋白质量下降（一般在1—10 min内观察）通常10min以上不显粉红色或红色的大豆制品，其尿素酶活性即认为丧失。
附：尿素酶活性与呈色时间对照表油脂分析方法一、酸价的测定（GB 5530—85）酸价（酸值）是指中和1.0g油脂所含游离脂肪酸所需氢氧化钾的毫克数。
同一油脂，酸价高，表明油脂因水解而产生的游离脂肪酸多。
可直接说明油脂的新鲜度和质量的优劣。
1、原理油脂中的游离脂肪酸与氢氧化钾产生中和反应，从氢氧化钾标准溶液消耗量，可计算出游离脂肪酸的量。
RCOOH+KOH RCOOK+H2O2、试剂1．中性乙醚—乙醇（2∶1）混合溶液，临用前用0.1mol/L氢氧化钾溶液中和至微红色。
2．1%酚酞乙醇指示剂溶液。
3．0.1mol/L氢氧化钾标准溶液。
3、操作步骤准确称取试样3~5g置于锥形瓶中，加入混合溶液50mL，振摇溶解（必要时可水浴温热），加入3~4滴1%酚酞乙醇指示剂，用0.1mol/L氢氧化钾标准溶液滴定至淡红色且在30s内不褪色为终点，记下消耗的碱液毫升数。
4、计算酸价（mgKOH/g）=C×V×56.1÷m游离脂肪酸含量FFA%=C×V×M÷m式中c—氢氧化钾标准溶液的浓度，mol/L；V—消耗氢氧化钾标准溶液的体积，mL；56.1—与1mL1mol/L氢氧化钾标准溶液相当的脂肪酸的质量，mg；m—样品的质量，g。
C08大豆粕尿素酶检测方法md
粉碎机
孔径0.45mm（40目）
2
分析天平
感量0.0001g。
4
PH计
带有甘汞电极,准确度在+0.02PH值范围之内
试剂
序号
试剂名称
规格
序号
试剂名称
规格
1
尿素
分析纯
3
磷酸二氢钾
分析纯
2
分析纯
4
磷酸氢二钾
分析纯
注：1.0.05M磷酸盐缓冲液：取分析纯KH2PO43.403g溶于蒸馏水，再取分析纯
K2HPO44.355g溶于蒸馏水，将这两种溶液的混合液后定容至1000ML，用酸(或碱)溶液调节PH值至7.0（调节时最好用PH计调节）。该缓冲液有效期90天。
1适用范围:适用于由大豆制得的产品和副产品中尿素酶活性的测定。
2引用标准：AOCS Ba 9-58《脲酶活性》
3方法原理：试样与缓冲尿素溶液反应，使试样中的尿素酶分解尿素，释放出氨基氮，测定溶液的PH值，以PH值得增量表示。
4检验方法
ห้องสมุดไป่ตู้4.1试剂仪器
仪器
序号
仪器名称
规格
序号
仪器名称
规格
1
烧杯
100ml
2.尿素缓冲液：取分析纯尿素15克，溶于磷酸盐缓冲液500ML。调整该溶液的PH值至7.0。
4.2试样制备：取具有代表性的试样，粉碎至40目。用四分法缩减至200g，装于密封容器。防止试样的成分变化或变质。
4.3分析步骤：
将试样粉碎到至少60%过40目筛(0.45mm以下)，分别称取两份0.800克的样品于2个烧杯中，其中一个加40ml尿素缓冲液，另一个加入40ml磷酸盐缓冲液做空白试验；摇匀后放入30±0.5℃的恒温水浴锅槽中，每5分钟摇匀一次，反应30分钟后，在5分钟内测定两个试管中溶液的PH值。
脲酶活性测定方法pH增值法、盐酸中和法
MM_FS_CNJ_0315出口大豆饼粕脲酶活性 pH增值法盐酸中和法MM_FS_CNJ_0315出口大豆饼粕脲酶活性测定方法pH增值法、盐酸中和法1.适用范围本方法适用于大豆饼粕类脲酶活性的测定。
2.方法一2.1.术语脲酶活性：在规定的操作条件下，使试样中的脲酶分解尿素释放出氨基氮，以溶液pH值的变量表示。
2.2.原理概要将研细的试样与缓冲尿素溶液混合，在30℃作用30min后，测定溶液的pH值。
2.3.主要试剂和仪器2.3.1.主要试剂磷酸缓冲溶液：将3.403g KH2PO4和4.355g K2HPO4溶解并稀释至1000mL。
临用前，以强酸或强碱调节其pH至7.0，其使用期限不超过90d；缓冲的尿素溶液：溶15g尿素（NH2CONH2）于500mL磷酸缓冲溶液中。
加入5mL甲苯，用于防腐和防止霉菌生长。
按上法调节其pH至7.0。
2.3.2.仪器分析天平：感量0.1mg；研磨器：易于清理，研磨过程中不发热，并能达到要求的磨粉细度；恒温水浴：能控制于30±0.5℃；pH计：备有玻璃电极和甘汞电极，灵敏度不低于±0.02pH单位，同时附有温度补偿；试管：直径22mm，长150mm，具橡胶塞；烧杯：容量10mL；单刻度移液管：10mL；精密计时器；标准筛。
2.4.试样的制备用研磨器将约10g的样品，在不升高温度的条件下尽可能研细，使其通过60目标准筛的量不少于60％。
收集全部磨碎物于广口瓶中，小心混合并立即进行分析。
2.5.过程简述准确称取试样0.200g，放入试管内，加10mL缓冲的尿素溶液，塞好橡胶塞，混匀。
置于30±0.5℃水浴中，记下时间。
隔5min放入第二个与此相同的试管作重复试验。
另称试样0.200g，放另一试管内，加10mL磷酸缓冲溶液，塞好橡胶塞，混匀，作为空白试验。
与上管间隔5min置于同一水浴中。
在消化过程中，每隔5min将试管内容物都摇匀一次。
大豆制品脲酶活性测定 PPT
（4）注意事项： • 1.粉碎样品时，不应产生大量热，
否则会影响结果判定； • 2.称量样品时，一定要将样品混合
均匀，否则会造成试验误差； • 3.试样和空白试验同时操作，过程
要迅速，防止时间影响。
2、尿素酚红法 （1）原理：酚红指示剂在pH 6.4-8.2
时由黄变红，大豆制品中所含的尿 素酶可将尿素水解产生氨，释放的 氨可使酚红指示剂变红，根据变红 样品占所有样品的比例来判断脲酶 活性的大小。
（2）仪器和试剂： • 粉碎机：粉碎时不产生强烈发热 • 分析天平：感量0.01g • 25ml纳式比色管 • 恒温水浴锅 • 0.1%酚红指示剂：0.1g苯酚红溶于
100ml 95%乙醇溶液 • 结晶尿素：分析纯
（3）方法：
粉碎→称取0.05±0.001g→放入试 管→加入尿素0.2g、指示剂5滴→加 蒸馏水25mL→摇动10s→立即置于 30±0.5℃水浴锅→计时观察溶液变 红时间→5 min后取出试管，摇匀继 续观察
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
空白试验：不加尿素，其他同上。
品质判定：如果溶液为明显的粉红 色，则认为该大豆制品脲酶活性超 标，为不合格产品。
•0-1min变红，活性非常强（＞ 1.0）；
•1-2min变红，活性大概0.5-1.0； • 2-5min变红，活性大概0.3-0.5。
（4）注意事项： • 1.对于样品较粗、具有大块状的样品，
最好将其稍微粉碎，亦不可太细， 否则不容易观察； • 2.样品一定要铺平，容易观察； • 3.溶液保质期为3个月，最好1个月内 用完； • 4.此方法容易受颗粒度影响。
豆粕中尿素酶活性检测的意义及检测方法探讨
养 因子 是 指 植物 代 谢 产 生 的并 以不 同机 制 素 酶 活 性 降 低 甚 至 失 活 ， 且 尿 素 酶 活 性 而 （） １国家标 准方 法（ Ｂ ６ ２ ２ ０ ） Ｇ ８２ － ０ ６ 所 对 动物 产 生 抗 营 养 作 用 物 质 的 总 称 ， 抗 相 对 于 抗 胰 蛋 白 酶 因 子 也 便 于 测 定 ， 以 如 本法 是 将 尿 素 酶 活 性 定 义 为在 ３ ℃ ± Ｏ 胰 蛋 白酶 因子 、 维生 素 因子 等 ， 中 以抗 通 常采 用 测 定 尿素 酶活 性 的 方法 来 作 为 评 ０ ５ Ｆ Ｈ７ 抗 其 ． ℃￣ｐ 的情 况 下 ， 克 大 豆 制 品每 分 Ｉ 每 胰 蛋 白 酶 因 子 对 动 物 影 响 最 为 主 要 ， 胰 定大 豆 粕 加 工 程 度是 否 适 当 及营 养 品 质 的 钟 分 解 尿 素 所 释 放 的 氨 基 氮 的 质 量 。 测 抗 其
１豆粕 中尿素酶活性检测的意义
众 所 周知 ， 豆 含 有 较丰 富的 蛋 白质 、 大
过 程 是 一 步 非 常 关 键 的 工 艺 ， 度 加 热 不 Ｔｌ ５ ｌ ２ ０ 《 适 ９ ４ 一 ０ ４ 饲料 用大 豆粕 》 ， 定 了豆 中 规 仅 可 使 大 豆 中 的 蛋 白质 变 性 ， 高 氨 基 酸 粕的感 官性状 、 提 夹杂 物要求 外 ， 还规 定 了豆 粕 白质 、 分和粗 纤维 来分等 级 ， 水 还需 要通过 测 定氢氧化钾 蛋 白质溶解 度和尿素酶 活性（ ． ≤０
脂 肪 、 水化 合物 等 营 养 成分 ， 碳 是饲 料 生 产 的 消 化 率 ， 可 使 大部 分 热 不 稳 定 抗 营 养 技术指标及 质量分 级标 准 ， 又 不仅主要依据粗 蛋
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实验十豆粕中尿素酶活性的测定
一、实验目的
掌握测定尿素酶活性的各种方法的基本原理及方法步骤。
二、实验原理
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。
用过量的盐酸溶液中和所产生的氨，再用氢氧化标准溶液回滴。
三、实验设备
1、样品筛：孔径200μm；
2、酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置；
3、恒温水浴：可控温30±0.5℃；
4、试管：直径18mm，长1 50mm，有磨口塞子；
5、精密计时器；
6、粉碎机：粉碎时应不生强热（如球磨机
7、分析天平．感量0.1mg；
8、移液管；10mL。
四、实验内容
称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg，转入试管中，（如活性很高的样品，可只称0.05g试样），移入10ml尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于30±0.5℃恒温水浴中，准确计时保持30min。
即刻移人10m1盐酸溶液，迅速冷却到20℃。
将试管内容物全部转入烧杯，用5ml水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液滴定到pH4.70 。
另取试管作空白试验，移人10ml尿素缓冲液，10ml盐酸溶液。
称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。
立即盖好试管并剧烈摇动，将试管置于30±0.5℃的恒温水浴，同样准确保持20min，冷却至20℃，将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标准溶液滴定至pH 4.70。
以每分钟每克大豆制品释放氨的mg量来表示尿素酶的活性（UA），可按下式计算：
m V
V
C UA
⨯-
⨯=
30)
(
14
式中：C—氢氧化钠标准溶液浓度（mo1/L）；
V0一空白试验消耗氢氧化钠溶液体积（m1）； V—测定试样消耗氢氧化钠溶液体积（m1）； m—试样质量（g）。
若试样经粉碎前的预干燥处理时，则其计算如下：
)1(30)(140S m
V V C UA -⨯⨯-⨯= 式中：S 一预干燥时试样失重的百分率。
由一个分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之间的相差，应不超过平均值的10％，以其算术平均值报告结果。