动物细胞融合-----鸡血细胞体外融合

加入hanks液，控制 弃上清，取5ml
密度在1*10^7个
生理盐水重离
/ml,37度恒温保存 心操作一次
800r/min离 心5min
取1ml于离心管加 50%PEG约0.5ml(边 加边晃动)
制临时装片，用 詹纳斯绿染色 3min镜检
37度水浴静置 15min
加入5mlhanks液， 吹打均匀37度水浴
指用人工方法把不同类型的 两个或两个以上细胞合并成一 个细胞的技术。所得到的融合 细胞叫杂交细胞。
同核体：由同一亲本细胞融合而来。 异核体：由不同亲本细胞融合而来。
物理法：显微操作、激光诱导、电 刺激。 化学法：盐类融合剂、ＰＥＧ法。 生物法：仙台病毒ＨＶＪ法。
许多病毒具有凝集动物 细胞并促使凝集的动物细胞 发生融合的能力，当病毒位 于两个细胞之间时，病毒表 面的神经氨基酸讲解细胞膜 上的蛋白，促使细胞膜局部 凝集在细胞周围，在高ｐＨ 和钙离子的条件下，局部细 胞膜发生融合。
冲液，将细胞悬浮，镜检，在血细胞计数板上计 数。适当的细胞浓度应控制在1×107个/mL左右。 根据计数情况调整悬液密度，于37℃保温。
4.PEG诱导细胞融合 吸取1mL鸡血悬液放在离心管中，逐滴
加入37℃的50%PEG约0.5mL,边加边轻轻摇 动试管，混匀后于37℃水浴静置15min。
5.终止PEG作用 缓慢加入5mL Hanks缓冲液，轻轻吹打混匀， 于37℃水浴中静置10min 制备细胞悬液
1.鸡血细胞储备液的制备 取鸡血，加入肝素
（100U/5mL全血）制成抗凝全血。 再加入4倍体积生理盐水，制成红 细胞储备液。
2.鸡血细胞的处理 取鸡血细胞储备液1mL，加入4mL生理盐水，
混匀后，800rpm离心5~6min，弃上清，用5mL生 理盐水重悬浮沉淀，重复离心操作1次。
3.鸡血细胞悬液的制备 在离心后的鸡血细胞沉淀中加入适量Hanks缓
10min
吸管吹打分散， 离心沉淀用 hanks缓冲液 重悬浮
1.温度、融合时间、PEG的 浓度与作用时间、细胞密度、 机械力等因素均影响融合率， 实验操作时应予以注意，并在 需要的时候及时镜检。
2.50%的PEG一定得保持在 37°C水浴中，防止冷却后结晶 析出。
3.离心管必须干燥，防止稀释 PEG。
6.制备细胞悬液 用吸管轻轻吹打细胞团数次使其分散，
离心使细胞沉淀，用Hanks缓冲液重悬浮
7.染色和镜检 吸取细胞悬液，在凹面载玻片上滴一滴，
加入詹纳斯绿染液混匀，染色3min后盖上盖玻 片，在显微镜下观察细胞融合情况。
取鸡血加入肝素 （100U/5ml）
加入4倍体积的 生理盐水储备
取储备液1ml加入 4ml生理盐水混匀
动物细胞融合-----鸡血细胞体外融合
设计人：赵麒麟 09பைடு நூலகம்0150434 黄 华 0910150423 张耀镭 0910150441 邓江岳 0910150436 黄小江 0910150440
2009级临床4班
细胞融合（cell fusion)
两个或多个细胞相互接 触后，其细胞膜发生分子重 排，导致细胞合并、染色体 等遗传物质重组的过程称为 细胞融合。分为自发细胞融 合和诱导细胞融合。
可以认为是细胞在脉 冲电场下，细胞相紧接 的区域形成可逆电击穿， 即在外加电场下形成的 细胞膜电孔，在一定条 件下可以自行修复。
PEG是一种多聚化合物，分子 （CH2CH2O）nH。PEG靠醚键的联结 使其分子末端带有弱电荷，可溶于水。 PEG带有大量的负电荷，和原生质体 表面的负电荷在钙离子的连接下形成 静电键，促使异源的原生质体的粘着 和结合，在高Ph高钙离子的条件下， 将钙离子和与质膜结合的PEG分子洗 脱，导致电荷失调而重新分配，使两 种原生质体的正负电荷连接起来，进 而形成具有共同质膜的融合体。