革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒说明书
质粒大量试剂盒protocol
质粒大量试剂盒protocol（负压法和离心法）1.取80-200 ml在LB培养基中培养过夜的质粒菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），≥4,000×g离心5 min，弃上清。
将离心管倒置于纸巾上1 min，除尽上清。
* 一般过夜培养的菌液OD600在2.0-4.0之间。
若菌液OD600 >4，菌量需减少。
2. 加10 ml Buffer S1悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。
* 确认Buffer S1中已加入RNase A。
3. 加10 ml Buffer S2，温和并充分地上下翻转6-8次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。
此步骤不宜超过5 min。
* Buffer S2使用后立即盖紧瓶盖，以免空气中的CO2中和Buffer S2中的NaOH，降低溶菌效率。
* 避免剧烈摇晃，否则将导致基因组DNA污染。
* 此步骤不宜超过5 min。
4. 加10 ml 4℃预冷的Buffer S3K，温和并充分地上下翻转混合10次，直至形成紧实的凝集块；室温放置5 min。
* 加入Buffer S3K后应立即混合，以避免形成局部的凝结块。
* 避免剧烈摇晃，否则将导致基因组DNA污染。
5. 加10 ml 4℃预冷的Buffer B，温和并充分地上下翻转混合10次，≥6,000×g离心（4℃）10 min。
步骤6-9可以选择离心法或负压法。
A. 离心法：6A. 先将大量制备管放入50 ml离心管中。
吸取步骤5中的混合液，转移到大量滤器（Maxiprep syringe filter）中。
7A. 插入推杆，垂直向下缓慢将滤液推注至大量制备管中。
≥6,000×g离心5 min。
8A. 弃滤液，加12 ml Buffer W1至制备管中，≥6,000×g离心5 min。
9A. 弃滤液，加14 ml Buffer W2至制备管中，≥6,000×g离心5 min。
(完整word版)质粒提取试剂盒说明书(word文档良心出品)
E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意：1．使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液Ⅰ. 4℃保存2．加60ml 100%乙醇到DNA Wash Buffer Concentrate中.室温保存除试剂盒外还需准备：可达到13000×g的离心机无核酸酶的离心管无菌去离子水或TE缓冲液纯乙醇操作规程：(提取过程在室温下进行)：1.在10-20ml试管中，将携带有所需质粒的E.coli接种到5ml LB培养基LB（含氨苄青霉素50μg/ml），37cº振荡培养12-16h。
需特别指出的是：endA阴性的E.coli菌株用于常规质粒提取，如DH5α和JM109.2. 取1.5~5ml菌液室温10000×g离心1min，去上清3. 加250µl溶液Ⅰ（含RNase A），涡漩振荡器震荡至菌体完全悬浮。
（用移液枪吹打进行重悬浮）4.加入250µl溶液Ⅱ，温和颠倒离心管4~6次，获得澄清的裂解液。
最好室温孵育2min，剧烈混合会使剪切染色体DNA，降低质粒纯度。
(储存溶液Ⅱ应拧紧瓶盖)5.加350µl溶液Ⅲ，温和颠倒数次混合，至出现白色絮状沉淀6.室温13000×g离心10min，紧凑的白色沉淀就会形成，迅速进行到下一个步骤7.特别小心吸取上清，移至洁净的装配好容积2ml离心管的吸收柱中。
要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。
室温10000×g离心1min，至裂解物完全通过吸收柱8.弃滤过液，加500µl Buffer HB，10000×g离心1min，清洗吸收柱，除去残余蛋白质保证DNA的纯度以备后续试验使用。
如果接下来的步骤对质粒纯度要求不高，如酶消化法等其它筛选方法，此步可省略9.弃滤过液，再用100%乙醇稀释的750µl Wash Buffer清洗吸收柱，10000×g离心1min，弃过滤液。
高纯度质粒大量快速提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://HighPure Plasmid Maxi Kit高纯度质粒大量快速提取试剂盒目录号：PL12试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次(PL1201)RNaseA（10mg/ml）－20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml去蛋白液PE 室温63 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg/ml）置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。
有效防止了质粒被核酸酶降解。
3.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
快速、方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80 %左右。
康为世纪 CW0503高纯度质粒大提试剂盒
PurePlasmid Maxi Kit高纯度质粒大提试剂盒Version06302010‐2.1I 组分说明Catalog no. CW0503 CW0503ANumber of preps. 10 2Buffer P1 100 ml 25 mlBuffer P2 100 ml 25 mlBuffer P3 100 ml 25 mlBuffer EB 30 ml 10 mlRNase A(10 mg/ml) 1 ml 250 μlFliter 10 2Collection Tube(50ml) 10 2Protocol 1 1II 保存条件该试剂盒室温干燥条件下（15-25℃）可保存一年，更长的保存时间可置于2-8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A可室温（15-25℃）保存，长时间保存置于2-8℃，加入RNase A后的Buffer P1置于2-8℃保存，可以稳定保存半年。
III 产品简介本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，通过独特的缓冲系统和异丙醇沉淀方法，可快速获得大量高纯度的质粒DNA。
由本试剂盒所得质粒可直接用于转染细胞，DNA测序，PCR，体外转录，转化细菌，内切酶消化等。
IV 注意事项1．Buffer P1 在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A 全部加入），混匀，置于2–8℃保存。
2．使用前请先检查Buffer P2 和Buffer P3 是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3．注意不要直接接触Buffer P2 和Buffer P3，使用后应立即盖紧盖子。
4．提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
V 需要客户自备的试剂1.异丙醇2.5M NaCl溶液Ⅵ 操作步骤1.取100ml （根据培养菌体的浓度选择合适的量，低拷贝推荐用200ml）过夜培养的菌液，加入离心管中，10,000 rpm(~11,500×g )离心3 分钟收集细菌，尽量吸弃上清。
质粒提取试剂盒说明书
质粒抽提：质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
实验原理：提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
详细内容请参考《分子克隆实验指南》。
另外，复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章，提供了质粒提取机理的详细解说。
碱裂解法人们使用碱与SDS裂解法从E. coli（大肠杆菌）中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。
将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。
尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。
只要OH-处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。
在裂解过程中，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。
当用K+取代Na+时，复合物会从溶液中有效地沉淀下来，离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。
在SDS存在的条件下，碱水解是一项非常灵活的技术，它对E. coli的所有菌株都适用，并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL 以上。
煮沸法煮沸法是将细菌悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中，然后加热到100℃使其裂解。
加热除了破坏细菌外壁，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA 变性。
但是。
闭环质粒DNA链彼此不会分离，这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。
当温度下降后，闭环DNA的碱基又各就各位，形成超螺旋分子，离心除去变性的染色体DNA和蛋白质，就可从上清中回收质粒DNA。
质粒大量提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://Plasmid Maxi Kit质粒大量快速提取试剂盒目录号：PL11试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次(PL1101)RNaseA（10mg/ml）－20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg/ml）置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
快速、方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80 %左右。
3.获得的质粒产量高、超螺旋比例高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
nucleobond质粒大抽提中文说明书
nucleobond质粒大抽提中文说明书1.取过夜菌至50毫升离心管内，5000g离心1分钟收集细菌沉淀，弃上清。
再重复一次，每管共收集100毫升过夜菌沉淀。
通常大肠杆菌宜用LB培养过夜(16小时左右)至OD值为2-4。
建议5000g(通常为5000rpm左右)室温离心1分钟，如沉淀不充分则适当延长离心时间。
时间过长或离心速度过快会使沉淀过于紧密，不利于加入溶液I后散开沉淀。
直接倒掉上清，再倒入约50毫升菌液并重复上述操作，然后倒置于吸水纸上(可用普通草纸)，使液体流尽。
如果细菌密度明显偏低，可考虑使用更多菌液，再重复上述操作1-2次。
对于高拷贝质粒所用菌量每管一般不能超过150毫升，对于低拷贝质粒所用菌量每管一般不能超过200毫升。
过量的细菌会导致后续的裂解不充分。
2.每管加入5毫升溶液I，重悬细菌沉淀。
确保沉淀*散开，无可见细菌团块。
确认溶液I中已添加了RNaseA。
最高速度vortex10-20秒或更长时间，悬起沉淀。
一定要充分混匀，对着光亮处观察应呈均匀的悬浊液，无明显细菌团块或絮块。
如果没有vortex，可以用枪吹打沉淀使沉淀逐渐散开，或手指把沉淀弹开。
3.每管加入5毫升溶液II，轻轻颠倒离心管4-6次，室温放置1-2分钟，使细菌*裂解，溶液透明。
切勿vortex！vortex或其它剧烈操作会导致基因组DNA断裂，易导致最终所得质粒被基因组DNA污染。
颠倒4-6次后，溶液应变得透明，无团块或絮状物。
如果加入溶液I后细菌没有*散开，那么颠倒4-6次后，可能还会有团块或絮状物。
遇到有少量团块或絮状物产生的情况，可以增加颠倒次数3-5次，再室温放置2-3分钟，但总裂解时间不可超过5分钟。
4.每管加入7毫升溶液III，随即颠倒离心管4-6次混匀，可见白色絮状物产生。
切勿vortex！颠倒次数也不宜过多，否则易导致最终所得质粒的质量下降。
5.12,000-14,000rpm)室温离心10分钟。
如果离心机的最高速度较低，需要适当延长离心时间，例如约5000-6000rpm时需要离心20-30分钟或更长时间，直至沉淀充分。
威格拉斯生物技术(北京)有限公司 质粒大量提取纯化试剂盒
1) 从大量的菌液或菌体提取质粒时，可按比例提高Buffer I、Buffer II和Buffer III的用 量，以充分裂解菌体，提高质粒的回收量和纯度。
2) 提取步骤7和纯化步骤5中，充分溶解沉淀对提高质粒产量和纯度非常重要。 3) 操作中要动作轻柔，防止机械剪切可能对DNA的损失。 4) 可在纯化的各个步骤前后留取数微升的DNA溶液，最后电泳鉴定比较提取和纯化
4 l）
0.5 ml -20℃
试剂盒可作20次（<150ml菌液/次）质粒提取纯化。常温运输。RNase A于-20℃保存， 首次使用时加入Buffer I中混匀，置4℃保存。Buffer IV与Buffer VI置4℃保存，其余溶 液保存于室温。有效期6个月。
0.5 ml Buffer I，完全溶解沉淀团块（可用宽口吸管轻轻吹打辅助溶解）。移入新 的1.5 ml离心管中，室温放置10~20 min。 8) 质粒粗提物用台式离心机室温高速离心2 min，上清移入新的1.5 ml离心管中。
质粒纯化： 1) 0.5 ml质粒粗提液中加入100 μl Buffer IV（杂质清除液A），轻轻混匀，12,000 x g
电话：（010）58941231, （010）58941232 传真：（010）58941232
网址：
电子邮件：runon@
如在步骤6未见沉淀担心dna丢失可保留上清液待完成全部操作后电泳鉴定以确定是否获得终产物数百微克高纯度的质粒dna离心后沉淀在管的侧壁上可能无法看到明显团块
威格拉斯生物技术（北京）有限公司
质粒大量提取纯化试剂盒
(Plasmid Maxprep Kit)
产品说明：
本试剂盒用碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA，采用全新技术，通过几次离心去除 蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质，获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280 通常在1.9左右，可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的 工作中。纯化过程均在Eppendorf管中操作，方法简单，不需特殊设备，无需过柱， 不用酚氯仿抽提；无论细菌裂解释放出的质粒在1mg以下还是在10mg以上, 基本都可 完全回收，不必担心质粒DNA的丢失。本方法提取纯化质粒DNA，对质粒损伤小， 即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或超大型质粒，只要碱裂解法能够提取，就可 以有效纯化。纯化过程约需1.5~2小时。
无内毒素质粒 DNA 大量提取试剂盒
5 12,000 rpm 室温离心 12min，收集上清。 6 将上清置于 DNA 纯化柱中，静置 5 min。
●
如果收集的上清液过多，超过 DNA 纯化柱容积（15 ml），可 将上清分次加入 DNA 纯化柱中。
7 12,000 rpm 离心 2min，弃滤液。
●
此时质粒 DNA 被吸附于 DNA 纯化柱中的硅胶膜上。
溶液 W 初次使用前用无水乙醇按 1: 1.5 稀释，即含 60% 乙醇。 ● 溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、溶液 PB 中含碱和变性剂，请不要直接 接触皮肤。 ● 上述产品组分均可单独购买，详见产品索引。
质量控制 从大肠杆菌提取 pGEM 质粒 DNA。提取的质粒DNA 质 量通过琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切和序列测定分析。 保存条件 RNase A：可室温保存 1 年以上。RNase A 为浑浊溶液。初 次使用本试剂盒时，请将 RNase A 全部加入到溶液Ⅰ中，均 匀混合后于 4℃保存。可保存 6 个月。 其他试剂：室温保存。 若溶液Ⅱ出现沉淀，请于 37℃保温溶解。待恢复至室温后使 用。沉淀的出现不会影响质粒 DNA 的纯化结果。 注意事项-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------● ● ● ●
● ● ●
若溶液Ⅱ出现沉淀，请于 37℃保温溶解。待恢复至室温后使用。沉淀的出现 不可剧烈混和，否则会使染色体 DNA 断裂。 此步骤不宜超过 5 min。
不会影响质粒 DNA 的纯化结果。
质粒提取试剂盒说明书
质粒提取试剂盒说明书提质粒是分子生物学中最基本，最easy的实验。
完全不需要借助大脑，直接照着提取试剂盒中的操作说明傻瓜操作即可。
小编一直认为应该发明一个机器人在实验室中操作这些简单却耗时的实验。
尽管操作简单，提质粒却也是一个比较重要的步骤，提出质粒的质量和数量将直接决定着后续实验室的成败。
当我们按照试剂盒中操作说明进行操作时，我们会看到P1，P2，N3, PE，EB等不同的溶液（不同试剂盒可能标识不同）。
那么大家是否知道每瓶溶液中装的什么？它们在质粒提取过程中的作用又是怎样的？提质粒很简单，但其背后的学问却并不简单哦。
质粒提取采用的是强碱裂解法（alkaline lysis），这个方法是由Birnboim和Doly在1979年发明的，在SCI上原著文章的引用量至今为止已达到12886。
那么我们现在来看一下溶液P1 ，P2，N3, PE, EB都是什么。
溶液1（P1）组分浓度25 mM Tris-HCl（pH8.0），10 mM EDTA，50 mM 葡糖糖（Glucose）溶液1的主要作用是将菌体沉淀悬浮起来。
25mM Tris-HCl是缓冲溶液，保证反应体系的pH恒定。
EDTA是金属离子螯合剂，10 mM EDTA的作用是与微生物体内的金属离子相互结合，抑制DNase的活性。
50 mM葡萄糖的作用是增加溶液的粘度，保证菌体悬浮，延缓菌体沉降的时间。
溶液1在使用前通常要加入RNA酶（RNase A），RNA酶的作用很清楚，降解掉溶液中的RNA。
由于RNA酶属于蛋白质，蛋白质稳定性很差，所以加了RNase A的溶液1需要低温4oC 保存。
溶液2（P2）组份浓度250 mM NaOH，1％（W/V）SDS（十二烷基硫酸钠）溶液2的主要作用是细胞裂解。
溶液1将细胞悬浮后，就需要添加溶液2了，溶液2的作用就是对细胞进行裂解。
溶液2只包括两种成分：氢氧化钠和SDS。
真正起到到细胞裂解作用的是氢氧化钠，这也是为什么这个方法会被叫做碱裂解法。
革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒使用说明
革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒使用说明货号：D1650规格：50T/100T保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。
试剂盒内容：D1650-50T D1650-100T溶菌酶3ml 5.5mlRNase A1m11m1×2蛋白酶K1ml1m1×2溶液A10ml20ml溶液B10ml20ml漂洗液15m115ml×2洗脱液15m130m1吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品简介：革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取革兰氏阳性菌基因组DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料，能够高效专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。
使用革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、取细菌培养液1ml，12000rpm离心1min.，尽量吸除上清。
2、向菌体中加入200ul溶液A，振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮，向悬浮液中加入20ul 的RNase A(10mg/ml)和50ul溶菌酶，充分颠倒混匀，室温放置30min-60min。
3、向管中加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml)，充分混匀，55℃消化30-60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止，此时可见菌液呈清亮粘稠状。
4、向管中加入200ul溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可于75℃放置15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。
如果溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能会导致DNA的提取量以及纯度降低，还可能堵塞吸附柱。
细菌基因组DNA提取试剂说明书
细菌基因组DNA提取试剂盒使用说明本试剂盒可用于革兰氏阴性和阳性菌的基因组DNA提取，由细菌重悬液、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液组成。
可从1-5ml菌液中提取基因组DNA。
整个提取过程不超过45分钟。
提取过程包括：1菌液离心，重悬。
2裂解菌体，释放基因组DNA。
3盐析沉淀蛋白，分离DNA。
4异丙醇沉淀脱盐并浓缩。
5 70%乙醇清洗，晾干并用DNA溶解液溶解。
本试剂盒采用复合裂解液，其中含有抑制DNA酶的成分，在加热（65°C）状态下，可保证完整的细菌基因组DNA的充分裂解释放，本试剂盒即可提取异丙醇沉淀时，罕见浑浊的蛋白质杂质的共沉淀。
提取的基因组可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等。
一、试剂盒组成（本试剂盒提供的组份, 至少可提取100份1-5ml菌液基因组DNA的纯化，每种组份均有足够的富余量）1．复合裂解液：30ml×1瓶。
2．蛋白沉淀液：300ml×1瓶。
3．DNA溶解液：20ml×1瓶。
4．操作说明书一份。
二、本试剂盒未提供，须用户自备的试剂为：异丙醇，70%乙醇（国产分析纯）。
三、提取操作：1．菌液离心：取革兰氏阴性菌菌液1-2ml；或者革兰氏阳性菌菌液2-5ml，1000rpm离心1分钟。
2．加入细菌重悬液100ul，震荡使菌体重悬。
3．将复合裂解液置65°C水浴加热，使结晶成分溶解，每个细菌重悬液中分别加入300ul的复合裂解液。
4．混璇器震荡混匀10秒，置65°C水浴中反应10分钟（革兰氏阴性菌），20分钟（革兰氏阳性菌）。
5．各管中加入300ul蛋白沉淀液。
上下颠倒5-6次使两者混匀。
6．13000-16000×g, 离心3-5分钟。
7．将上清液转移至新的离心管中（注意：由于有些细菌含有多糖或者脂蛋白成分，离心后会出现细胞成分上浮的情况，此时取漂浮层下的均一透明液体），加入等体积异丙醇，此时可见透明的絮状物，混匀后离心，同步骤5，吸去上清。
质粒大量抽提试剂盒使用说明书( 质粒大量抽提试剂盒使用说明书
宁波保税区西区创业大道7号2C-1,315800, 电话：+86-574-86822306 传真：+86-574-26893101, sales@质粒大量抽提试剂盒使用说明书质粒大量抽提试剂盒使用说明书（（离心法离心法））产品编号 产品名称包装 DNAP002质粒大量抽提试剂盒（离心法）6×包装清单包装清单：：Solution Ⅰ（溶液Ⅰ） 60ml Solution Ⅱ（溶液Ⅱ） 60ml Solution Ⅲ（溶液 Ⅲ） 84ml Wash Solution （冲洗液） 21ml Elution Buffer （洗脱液）9ml Affinity Column （质粒纯化柱）6个 Collection Tube （废液收集管） 6个 Instrution （说明书）1份操作步骤操作步骤：：1. 取40ml 过夜培养菌液，放于Collection Tube 中，11,000－13,000rpm 离心2分钟，离心速度低时应适当延长离心时间。
2. 弃上清，再加入40ml 菌液，重复步骤1。
弃上清，离心1分钟，用吸头吸干多余液体。
3. 加10 ml 含RNase A 的Solution Ⅰ，用吸头冲打沉淀或用振荡器使菌体充分混悬。
4. 加10 ml Solution Ⅱ，上下翻转混合6－10次，使菌体充分裂解，形成清亮溶液。
5. 加14 ml Solution Ⅲ，上下翻转混合6－10次，于4℃静置10分钟，应见大量白色沉淀生成。
6. 于4℃，11,000rpm 离心30分钟。
离心期间，将Affinity Column 放在Collection Tube 中。
7. 将上清倒入准备好的Affinity Column 中，11,000 rpm 离心2分钟。
也可将过柱液重新倒回AffinityColumn 中，11,000 rpm 离心2分钟，以增加回收率。
8. 弃过柱液，加8.4ml Wash Solution 于Affinity Column 中，11,000 rpm 离心2分钟。
AxyPrep质粒大量提取试剂盒操作步骤
AxyPrep质粒大量提取试剂盒操作步骤AxyPrep Maxi Plasmid Kit (AXYGEN) AxyPrep质粒大量提取试剂盒操作说明实验准备:, 检查Buffer S1中是否已加入RNaseA。
, 检查Buffer W2中是否已加入无水乙醇。
, 检查Buffer S2是否出现沉淀，如有沉淀，在37?水浴中溶解沉淀，再平衡至室温。
,注意,Buffer S2不用时请立即盖紧，防止被空气中的CO中和。
, 2, 将Buffer S1，Buffer S3K和Buffer B放置4?预冷。
, 将洗脱液Eluent放置65?水浴中预热。
实验步骤:1. 将待提取的质粒对应菌液在5mL含有对应抗性的LB培养液中扩增培养过夜。
2. 次日，将5mL培养后的菌液接种至200mL含有对应抗性的LB培养液中扩增培养过夜。
3. 将菌液分装至5个50mL离心管中，每管40mL，4? 3000×g离心5min，彻底弃净上清。
4. 加入Buffer S1(已加RNaseA，4?预冷)，每管4mL，共20mL，涡旋充分重悬菌体。
5. 加入Buffer S2，每管4mL，共20mL，温和晃动混匀，室温作用5min。
6. 加入Buffer S3K(4?预冷)，每管4mL，共20mL，温和晃动混匀，室温作用5min。
7. 加入Buffer B(4?预冷)，每管4mL，共20mL，温和晃动混匀。
8. 4?10000×g离心10min，小心取上清至新管，最终合并为2管。
9. (可选步骤)再次4? 10000×g离心10min，小心取上清至新管。
10. 将上步收集的上清全部加入Maxiprep syringe filter中，将注射器芯从上方推入，下方用纯化柱(Maxiprep column)盛接滤液。
11. 推注注射器芯，将液体滤至纯化柱中，同时在纯化柱下方连接输液器(预先剪除输液针)，并用10mL注射器负压反复抽吸，直至液体滤尽。
革兰氏阳性菌质粒碱裂解法提取
革兰氏阳性菌质粒碱裂解法提取具体步骤：（1）将待检测菌株接种于3 mL LB或BHI培养基（含终浓度为170µg/mL的氯霉素）中，37℃培养过夜；（2）取1.5 mL上述菌液于2 mL离心管，12,000×g，离心0.5min，尽可能吸尽上清液，若菌体过少可重复一次；（3）加入1mL STE缓冲液（pH8.0），用旋涡振荡器充分悬浮菌体，再12,000×g，离心2min，尽可能吸尽上清液，重复1~2次以洗涤菌体；（4）加入150 µL冰预冷碱裂解液Ι，用旋涡振荡器充分悬浮菌体；然后，加入40 µL溶菌酶（10mg/mL），此时不得涡旋！上下颠倒离心管、混合均匀，然后37℃放置30~45min；（5）沿管壁加入300 µL现配碱裂解液Π，轻轻颠倒离心管4~ 5 次，混合均匀、不得涡旋，置于冰上5 min；（6）迅速加入200 µL冰预冷碱裂解液Ш, 轻轻颠倒离心管4~ 5 次, 混合均匀、不得涡旋，置于冰上3~5min;之后，12000×g，4℃离心8min（也可室温离心5 min）；（7）用移液器将上清液转移至新的1.5 mL离心管中，加入1倍体积酚/氯仿（1:1）抽提，12,000×g离心5 min，重复操作一次；（8）移取上清液移至新的1.5 mL离心管中，加入1倍体积冰预冷无水乙醇和0.1倍体积3M 醋酸钠，室温沉淀10min（或4℃沉淀过夜），12,000×g离心5 min，尽量去掉酒精；（9）用0.5 mL冰预冷70％酒精洗DNA沉淀一次，12,000×g，4℃离心2 min，小心地吸去上清液，室温风干10 ~15 min；（10）加50µLTE缓冲液（含终浓度为50µg/mL的RNaseA酶，pH8.0）溶解DNA沉淀，-20℃保存。
试剂配制:（1）LB培养液：Tryptone 10 gYeast Extract 5 gNaCl 10g双蒸水定容至1000mL，高压灭菌后4℃保存。
质粒 DNA 提取及纯化试剂盒 说明书
质粒DNA提取及纯化试剂盒使用说明书产品简介GBpure Plasmid试剂盒是质粒DNA提取领域中的突破性进展，它有效结合了细胞裂解，杂质去除，及质粒纯化等功能。
无需过柱，不用酚氯仿抽提，确保所提质粒DNA高产量、高质量。
并且可按用户需求灵活制定容量大小。
产品特色●简单:添加GBpure Plasmid试剂使细胞裂解，释放DNA，及杂质去除有效结合起来。
●延展性: 一盒GBpure Plasmid试剂盒可以进行：Miniprep, Midiprep或Maxiprep;无需购买额外的试剂盒。
●方便:无需过柱，无需过滤，无需高效液相色谱法，无需超速离心机，无需特殊设备。
●无毒性:无酚、氯仿，无饱和正丁醇，无溴化乙锭，无氯化铯。
●快速:一分钟完成菌体沉淀，五分钟完成颗粒细菌碎片，10分钟完成沉淀质粒DNA，整个过程只需30分钟。
●高纯度:A260/A280 = 1.7-1.8. 所得质粒DNA无任何抑制剂，可应用于所有分子生物学的操作。
●高产量: 从1 ml (mini), 10 ml (midi), 100 ml (maxi) 的过夜培养基中获得大约5 μg,50 μg, 500 μg的DNA质粒。
●质优价廉订购信息与储存条件室温保存。
有效期12个月。
使用限制：本产品属科研专用。
不用于人类或动物的诊断、治疗。
GBpure Plasmid MiniPrep Protocol从1-2 ml过夜细菌培养中提取5-10 μg质粒DNA操作方法1.取1- 2 ml过夜培养菌液，装入2 ml离心管中，室温最大速度（14,000 × g）离心1 min沉淀菌体，完全弃除上清。
2.加入300 μl Buffer P1 重悬液，充分混匀震荡菌体沉淀10-15 sec，使其完全分散开，至无絮块存在。
3.加入300 μl Buffer P2 裂解液，轻轻颠倒离心管3-5次，室温放置1 min，使细菌完全裂解，此时溶液应呈透明。
革兰氏阳性菌蛋白提取方法
革兰氏阳性菌蛋白提取方法革兰氏阳性菌蛋白提取试剂盒试剂盒组成：产品组成 BB-3129-1 BB-3129-2 组份编号规格 50T 100T试剂A：革兰氏阳性菌蛋白提取液 25ml 50ml 31290A试剂B：蛋白稳定剂 250ul 500ul 31290B试剂C：蛋白酶抑制剂混合物 100ul 200ul 31290C使用说明书 1 1产品简介：贝博革兰氏阳性菌总蛋白提取试剂盒可以从各种革兰氏阳性菌菌体中提取总蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及总蛋白制备。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D 电泳，需要除盐后再用于2D电泳。
如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用贝博其他货号的试剂盒（相关产品BB-3182）。
使用方法：革兰氏阳性菌蛋白提取1、裂解液的准备：根据所需要提取的样本量，每500ul裂解液中加入2ul蛋白酶抑制剂和5ul蛋白稳定液，充分混匀后置冰上备用。
2、在4℃ 12000g条件下将菌液离心5分钟，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
3、用PBS洗菌体2次。
若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4、按每20mg-50mg湿重菌体样本加入500ul裂解液，吹打混匀，冰上放置20-30分钟。
5、300w，10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。
6、在4℃ 12000g条件下将菌液离心5分钟，将上清移入冷的干净离心管。
7、即得革兰氏阳性菌蛋白样品。
8、将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱备用或直接用于下游实验。
相关产品：产品产品号产品产品号总蛋白提取试剂盒BB-3101 磷酸化蛋白富集试剂盒 BB-3108核蛋白提取试剂盒 BB-3102 膜蛋白提取试剂盒 BB-3103膜/胞浆/核蛋白分步提取试剂盒BB-3104 活性蛋白提取试剂盒BB-3106Bradford蛋白定量试剂盒BB-3411 BCA蛋白定量试剂盒BB-3401ECL化学发光检测试剂盒BB-3501 植物核蛋白提取试剂盒BB-3154细胞蛋白提取试剂盒 BB-3121 细菌膜蛋白提取试剂盒 BB-3151 组织蛋白提取试剂盒 BB-3122 植物总蛋白提取试剂盒 BB-3124 细菌蛋白提取试剂盒 BB-3123 植物膜蛋白提取试剂盒 BB-3152 - 1 -酵母蛋白提取试剂盒 BB-3125蛋白酶抑制剂混合物 BB-3301昆虫蛋白提取试剂盒 BB-3126真菌蛋白提取试剂盒 BB-3127磷酸化蛋白提取试剂盒 BB-3105 磷酸酶抑制剂混合物 BB-3311 SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 BB-3702 SDS-PAGE上样Buffer BB-3703总蛋白提取试剂盒（2D电泳用） BB-3181 细菌蛋白提取盒（2D 电泳用） BB-3182植物蛋白提取盒（2D电泳用） BB-3183 酵母蛋白提取盒（2D电泳用） BB-3185细菌膜蛋白提取盒（2D电泳用）BB-3187 线粒体蛋白提取盒（2D电泳用）BB-3191- 2 -。
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革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒说明书
货号：D1130
规格：10T
保存：RNA酶，溶菌酶于-20℃保存，其它试剂室温保存。
复检期一年。
产品内容：
试剂盒组成D1130-10T
RNase A1ml
溶菌酶10ml
溶液Ⅰ60ml
溶液Ⅱ60ml
溶液Ⅲ80ml
漂洗液15ml×2
洗脱液30ml
吸附柱10个
收集管20个
说明书1份
注意：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤：
1、取50-200ml细菌培养物，11000rpm离心5min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入5ml溶液Ⅰ和1ml溶菌酶，混匀。
37℃水浴30min以上（根据菌液量可适当加长水浴时间，请先检查溶液Ⅰ是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入5ml溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：混匀一定要温和以免污染基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入7ml 溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。
11000rpm 离心10min ，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。
注意：溶液Ⅲ加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
5、将上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中），室温放置2min，11000rpm 离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中(如果一次加不完，可分两次吸附)。
6、向吸附柱中加入7ml 漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），11000rpm 离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入7ml 漂洗液，11000rpm 离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8、11000rpm 离心5min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR 等。
9、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加1-2ml 经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，11000rpm 离心2min，收集质粒DNA 溶液。
10、（可选）为了增加质粒的回收率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置5min，11000rpm 离心2min。
注意事项：
1、使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。
2、洗脱缓冲液体积不应少于500ul，体积过小影响回收效率；洗脱液的pH 值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH 值在8.0左右(可用NaOH 将水的pH 值调至此范围)，pH 值低于7.0会降低洗脱效率。
DNA 产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。
3、如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，使用400-800ml 过夜培养物，同时按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。
4、DNA 浓度及纯度检测：得到的质粒DNA 纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。
得到的DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA 应在OD 260处有显著吸收峰，OD 260值为1相当于大约50μg/ml 双链DNA、40μg/ml 单链DNA。
OD 260/OD 280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗
脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。