溶出度方法学研究

（n=9）。
4.6 溶液稳定性 （可以同时做四种介质）
取胶囊 1 粒，置量瓶中，加质量标准中规定的溶剂适量，超声使充
分溶解后定量稀释至标准规定浓度，摇匀，滤过，取续滤液室温放置，
分别于 0、 2、4、6、8、12 小时进样。
要求：峰面积 RSD 不超过 2.0% 。
4.7 重复性
取胶囊 1 粒，按标准方法试验，到规定时间后，取样 6 份，依法测定含
小于 50，则认为两者相似。
在某些情况下，如果对于任一取样点释放度的平均差异的限定不
是 10%，则可通过计算得出相应的 f2 值(临界值)。表 1 提供了一些
释放度平均差异与相应的 f2 临界值。
表 1 释放度平均差异与 f2 临界值表
Table 1 Average difference of drug release percent
www.PDFCool.com
水：纯化水（质量标准见中国药典 2010 年版二部）
1.4 注释
溶出曲线一般要考察至少 3 种介质，对于仿制药，在标准介质中的
溶出曲线必做，如果标准介质与上述常用介质不一致，与标准介质最接
近的介质不再做。
溶出介质第一次配制时，要测定 pH 值，与标准值的差值应不超过
0.1。溶出介质使用前要加热或超声脱气。
注：方法（1）的测定结果与重复性的结果没有可比性。
方法（2）对试验操作要求较高。
www.PDFCool.com
4.9 耐用性 溶出度的色谱条件一般会与含量测定相同，但是样品浓度、溶剂通常与
含量测定不同，因此仍旧要考察耐用性。暂定考察柱温、检测波长、流速和 色谱柱这四项，试验设计同含量测定项。 4.10 溶出曲线对比研究（直接引用）
进样次数
1
2
3
4
5
6 RSD(%)
峰面积
保留时间
www.PDFCool.com
要求：峰面积 RSD 不超过 2.0%；保留时间 RSD 不超过 1.0% 。
4.3 线性与范围
取对照品适量，按标准方法配制一系列浓度的溶液，通常不少于 6
份，例如：10%、25%、50%、75%、100%（标准浓度）、150% 。
测定溶出曲线时取样点不宜过多，通常为 5～6 个点，例如：5、10、
15、30、45、60 分钟；小规格的制剂因采用 100～250 ml 溶出介质，所
以溶出曲线一般可选 3～4 个时间点。 2 不同类型药物溶出曲线
1 类：
高溶解性–高渗透性药物
源自文库
2 类：
低溶解性–高渗透性药物
3 类：
高溶解性–低渗透性药物
F2 因子的计算公式为：
Rt 与 Tt 分别代表参比和受试制剂第 t 时间点的平均累积释放度，n 为测试点数。其中如果两条溶出曲线完全一致，则： f2=50×lg(100)=100；如果一批样品释药完全，而另一批尚未开始释 药，则有：f2=50×lg(1)= 0。因此，f2 的值的范围在 0～100，而且 f2 越大，两条曲线的相似性越高。
最低浓度样品的色谱图中，信噪比要不低于 10:1；以峰面积对浓度
浓度进行线性回归，线性相关系数 r（保留 4 位有效数字）不小于 0.999 或 R2 不小于 0.998；y 轴截距的绝对值应不超过 100%浓度样品峰面积的 2% 。
4.4 滤膜吸附（此项试验要在准确度和精密度之前做）
供试品溶液：取胶囊 1 粒，置量瓶中，加质量标准中规定的溶剂适
在制剂的开发研究中，通过对比不同处方之间的溶出曲线，可以 较准确地反映药物处方、工艺、生产场地及规模等因素变化对药物体 外释放行为的影响。近年来，国外针对溶出曲线的相似性评价方法报 道很多，其中 f2 因子方法因为计算简单、判定结果可靠，作为评价 体外溶出曲线相似性的方法，已经被美国 FDA 的 CDER 和欧盟 EMEA 收 载并推荐使用。
限度）和 100%的供试品溶液，均加入处方量的辅料（包括胶囊壳），每
www.PDFCool.com
个浓度平行配制三份，依法测定含量。结果见下表。
表 3.2.P.5-45 溶出度回收率试验结果
样品
加入量 （mg）
测得量 （mg）
回收率 （%）
平均值（%）
1
50% 2
3
1
80% 2
3
1
100% 2
3
判断标准：3 个浓度的平均回收率均为 98.0%～102.0%；RSD≤2.0%
量。含量 RSD 应不超过 2.0% 。
4.8 中间精密度
（1）与重复性不同的时间，不同的试验人员，不同的溶出仪和液相。
取胶囊 1 粒，按标准方法试验，到规定时间后，取样 6 份，依法测定含
量。含量 RSD 应不超过 2.0% 。
（2）与重复性同时取样，由不同的试验人员，用不同的液相试验。测定
结果与重复性的结果合并计算，RSD 应不超过 2.0% 。
对于低溶解性-低渗透性药物（4 类），制备口服制剂比较困难。
3 溶出方法（转篮法与桨法）及其转速的选择
一般情况下，片剂多选择桨法，转篮法多用于胶囊剂，转速大部分
在 50～100 转/分。转篮法以 100 转/分为主；桨法以 50 转/分为主。一般
认为桨法 50 转/分相当于转篮法 100 转/分。
4 溶出度测定方法的验证 （以胶囊为例）
酸盐缓冲液（pH6.8）和水。 (4) 肠溶制剂：0.1mol/L 盐酸溶液、磷酸盐缓冲液（pH6.0）、磷酸盐
缓冲液（pH6.8）和水。 1.2 调释制剂
0.1mol/L 盐酸溶液、醋酸盐缓冲液（pH4.0～5.0）、磷酸盐缓冲液 （pH6.8）和水。 1.3 溶出介质配制方法
0.1mol/L 盐酸溶液：用吸量管取盐酸 9ml，加水稀释至 1000ml。 醋酸盐缓冲液（pH4.5）：取醋酸钠（三水合物）2.99g 加水溶解，加 入 2mol/L 醋酸溶液 14.0ml，加水稀释至 1000ml。（中国药典 2010 年版二 部附录中没有配制方法，以上是日本药典和美国药典中的配制方法） 醋酸盐缓冲液（pH5.5）：取醋酸钠（三水合物）5.98g 加水溶解，加 入 2mol/L 醋酸溶液 3.0ml，加水稀释至 1000ml。（中国药典 2010 年版二 部附录中没有配制方法，以上是日本药典和美国药典中的配制方法） 磷酸盐缓冲液（pH6.0）：取 0.2mol/L 磷酸二氢钾溶液 250ml，加 0.2mol/L 氢氧化钠溶液 28ml，用水稀释至 1000ml。（中国药典 2010 年版 二部附录中没有配制方法，以上是日本药典和美国药典中的配制方法） 磷酸盐缓冲液（pH6.8）：取 0.2mol/L 磷酸二氢钾溶液 250ml，加 0.2mol/L 氢氧化钠溶液 118ml，用水稀释至 1000ml。（中国药典 2010 年 版二部附录 XV D）
量，超声使主成分溶解后定量稀释至标准规定浓度，摇匀，分为 2 份；1
份滤过，弃去不同的体积，分别取续滤液进样，另 1 份离心，取上清液
进样。比较峰面积的变化，结果见下表。
样品
峰面积
吸附量（%）
离心
0
弃 3ml
弃 5ml
弃 7ml
判断标准：吸附量应不大于标示量的 2% 。
4.5 准确度（要保证主成分能够完全溶解） 取对照品适量，依法配制成相当于标示量 50%、80%（一般为标准
总之，f2 因子法作为定量描述制剂体外溶出曲线相似性的非 模型依赖方法，简单易行、结果可靠。当药品处方、生产工艺、 生产地点和生产规模等发生变更后，溶出度检查是比较变更前后 制剂产品相似性或差异程度的重要工具和研究工作的重要内容， 同时该方法也为口服固体制剂的处方筛选，产品质量控制、生物 等效性评价等提供了有力的判定依据。在进行 f2 因子比较试验时 要特别注意样本量、样本批间差异、溶出取样点等是否满足条件， 以保证数据的可靠性。
对于低溶解性-高渗透性药物（2 类），溶出可能是药物吸收的限速步
www.PDFCool.com
骤，有可能建立较好的体内外相关性。对于此类制剂，建议在多种介质中 的测定溶出曲线。
对于高溶解性-低渗透性药物（3 类），渗透是药物吸收的限速步骤， 可能不具有好的体内外相关性，吸收程度取决于溶出速率与肠转运速率之 比。
4.1 专属性
专属性试验的目的是考察辅料和胶囊壳对溶出度测定有没有干扰。
对照品溶液：取对照品，按标准方法配制。
供试品溶液：取胶囊 1 粒，置量瓶中，加质量标准中规定的溶剂适
量，超声使主成分溶解后定量稀释至标准规定浓度，摇匀，滤过，取续
滤液进样。
空白溶液：取空白胶囊，置量瓶中，加质量标准中规定的溶剂适量，
溶解性药物。一般情况下，在胃肠道内稳定且吸收程度高于 85%或有证据
表明其良好渗透性的药物，可认为是高渗透性药物。
在禁食状态下，胃内滞留（排空）T50%时间为 1520 分钟。对于高 溶解性-高渗透性（1 类）及某些情况下的高溶解性-低渗透性（3 类）药 物制剂，以 0.1mol/L 盐酸溶液为介质，在适当的溶出度试验条件下，15 分 钟的溶出度大于 85%时，可认为药物的生物利用度不受溶出行为的限制， 即制剂的行为与溶液相似。在这种情况下，胃排空速度是药物吸收的限 速步骤。如果药物溶出比胃排空时间慢，建议在多种介质中测定溶出曲 线。
口服固体制剂溶出度方法的选择和验证（HPLC 法）
1 溶出介质选择 1.1 普通制剂 (1) 酸性药物制剂：0.1mol/L 盐酸溶液、醋酸盐缓冲液（pH5.5）、磷
酸盐缓冲液（pH6.8）和水。 (2) 中性或碱性药物/包衣制剂：0.1mol/L 盐酸溶液、醋酸盐缓冲液（pH
4.5）、磷酸盐缓冲液（pH6.8）和水。 (3) 难溶性药物制剂：0.1mol/L 盐酸溶液、醋酸盐缓冲液（pH4.5）、磷
www.PDFCool.com
区域上取样点的增加会直接导致 f2 值偏大。因此，受试或参比制 剂的药物累积释放度在 85%以上的取样点应不多于一个，否则， 将会给判定结果带来误差。 4.f2 因子比较一般选择每个处方的 12 个剂量单位的测定均值来 进行处理。因为不考虑参比和受试制剂批内样本间差异，所以若 参比或受试制剂批内样本间差异较大时，用 f2 因子来评价两者溶 出曲线的相似性时需要谨慎，从第 2 个时间点至最后 1 个时间点 溶出结果的变异系数应小于 10%。 5.f2 值与平均偏差之间成非线性关系，它只适用于描述参比与受 试制剂溶出曲线的相似性，而不能用于评价受试制剂样本间差异。
4 类：
低溶解性–低渗透性药物
上述分类原则可作为制定体外溶出度质量标准的依据，也可用于预测
能否建立良好的体内-体外相关性（IVIVC）。药物的溶解性是通过将最高
剂量单位的药物溶解于 250ml pH 介于 1.0 和 8.0 之间的溶出介质中测定
而得。当药物的剂量除以介质中的药物浓度小于或等于 250ml 时，即为高
超声使充分溶解后定量稀释至标准规定浓度，摇匀，滤过，取续滤液进
样。
对照品溶液：取对照品适量，按标准方法配制。
判断标准：空白溶液在主成分的位置不出峰；供试品溶液色谱峰的
理论板数、拖尾因子要符合要求；对照品溶液和供试品溶液的峰面积相
差不超过 10% 。
4.2 系统精密度
取专属性项下的对照品溶液，连续进样 6 次。结果见下表。
事实上即使是相同处方的产品，其批次不同，在溶出曲线上也会 有一定的差异。如果受试与参比制剂溶出曲线的差异不大于参比制剂 间溶出曲线的差异，那么就可以认为受试与参比制剂溶出曲线具有相
www.PDFCool.com
似性。通常认为，同一处方不同批次的样品，在任一取样点释放度的
平均差异不超过 10%，是可以接受的。将 10%代入式中计算： 。 因此，FDA 与 EMEA 规定：若受试与参比制剂的溶出曲线间的 f2 值不
and f2 Limit
平均偏差（Average difference） 2% 5% 10% 15% 20%
F2 临界值（f2 Limit）
83 65 50 41 36
f2 因子的应用条件及注意事项： 1.在进行参比与受试制剂的溶出曲线比较的过程中，时间点间隔 无需相等，但两者所取各时间点必须一致，一般除 0 时外，选择 3 点以上，即 n≥3。 2.f2 计算公式只适用于受试与参比制剂的平均累积释放度差值 <100 时的溶出曲线比较（如果二者的差值>100，就会得到一个负 值），普通口服制剂要保证药物溶出 90%以上，缓释制剂、肠溶 制剂药物释放需达到 80%以上，或达到释放平台。 3.受试与参比制剂释放曲线上各时间点的平均累积释放度差异， 在平台区达到最小（如果外推到释放 100％，差值将为 0），在该