琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物(课堂PPT)
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实验三琼脂糖凝胶电泳ppt课件
2、将溶解的琼脂糖（约50℃）倒入制胶模具中，直至厚度为4-6 mm，插 入适当的梳子，在室温下冷却凝固。
3、充分凝固后小心垂直向上拔出梳子，以保证点样孔完好。将凝胶置入电 泳槽中，加0.5TBE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2 mm。
（二）点样
用微量取液器（P20）吸取质粒DNA样品2 l于点样板小孔中，再加入8 l TE及1 l的载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔，蓝色样品混合物将沉 入点样孔下部。同时点5 l MarkerⅢ作为分子量标准。
5、必须保证琼脂糖充分完全熔解，否则，会造成电泳图像模糊不清。 6、电泳槽中缓冲液使用次数过多，缓冲能力下降。特别是TAE缓冲液，
一般用2-3次就要更换，TBE缓冲液则可使用10次左右。 7、为了节约成本，没有跑过DNA的凝胶部分可切下来重复利用，但反复
熔化会降低分辨效率，建议时向哪一极移动？ 2、什么是迁移率？影响迁移率的因素有哪些？什么是分辨率？
分辨率与凝胶浓度的关系？ 3、DNA荧光染料的发光原理？ 4、质粒DNA存在哪些构型？其迁移率有何差异？ 5、loading buffer成分是什么？各成分有何作用？
注意：如何判断单酶切是否完全？ 如何判断双酶切是否完全？
质粒DNA三种构型：环状超螺旋、开环和线性。 质粒电泳三条带：超螺旋、开环和复制中间体（即2个没有复制完全的质粒 连在了一起）。 同一种酶切后电泳谱带的规律：从高分子量到低分子量条带亮度逐渐减弱 由于DNA Marker与酶切产物所含成分不同，因此迁移率不一定相同！
不同波长的紫外光
短波紫外光：254nm 中波紫外光：302nm 长波紫外光：365nm
1、为什么分光光度计测定的浓度很高，但电泳检测浓度却很低？
GoldViewI GoldViewII
3、充分凝固后小心垂直向上拔出梳子，以保证点样孔完好。将凝胶置入电 泳槽中，加0.5TBE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2 mm。
（二）点样
用微量取液器（P20）吸取质粒DNA样品2 l于点样板小孔中，再加入8 l TE及1 l的载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔，蓝色样品混合物将沉 入点样孔下部。同时点5 l MarkerⅢ作为分子量标准。
5、必须保证琼脂糖充分完全熔解，否则，会造成电泳图像模糊不清。 6、电泳槽中缓冲液使用次数过多，缓冲能力下降。特别是TAE缓冲液，
一般用2-3次就要更换，TBE缓冲液则可使用10次左右。 7、为了节约成本，没有跑过DNA的凝胶部分可切下来重复利用，但反复
熔化会降低分辨效率，建议时向哪一极移动？ 2、什么是迁移率？影响迁移率的因素有哪些？什么是分辨率？
分辨率与凝胶浓度的关系？ 3、DNA荧光染料的发光原理？ 4、质粒DNA存在哪些构型？其迁移率有何差异？ 5、loading buffer成分是什么？各成分有何作用？
注意：如何判断单酶切是否完全？ 如何判断双酶切是否完全？
质粒DNA三种构型：环状超螺旋、开环和线性。 质粒电泳三条带：超螺旋、开环和复制中间体（即2个没有复制完全的质粒 连在了一起）。 同一种酶切后电泳谱带的规律：从高分子量到低分子量条带亮度逐渐减弱 由于DNA Marker与酶切产物所含成分不同，因此迁移率不一定相同！
不同波长的紫外光
短波紫外光：254nm 中波紫外光：302nm 长波紫外光：365nm
1、为什么分光光度计测定的浓度很高，但电泳检测浓度却很低？
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琼脂糖凝胶电泳原理 PPT
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
凝胶准备
胶床准备
铺胶
静置
胶床置于电泳槽中 加电泳缓冲液 拔梳子 上样
电泳 取出凝胶 拍照
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
琼脂糖凝胶电泳结果分析
结果初步分析 数量分析：条带的宽度，
荧光的亮度。 质量分析：纯度
分子量
影响因素： DNA分子的大小：实验证明，DNA片段迁移距离与其 分子量的对数成反比； 琼脂糖的浓度：一定大小的DNA片段在不同浓度的琼 脂凝胶中，电泳迁移率不相同； DNA分子的构型：不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的 电泳速度差别较大
⑵可提取大分子DNA 利用琼脂糖凝胶制成凝胶块提取基因组DNA能够获得足够大 胶上进行的电泳检测。
3、琼脂糖在其他方面的应用 ⑴ 、琼脂糖在免疫扩散法中的应用。 ⑵ 琼脂糖在双链DNA探针的合成方法中的作用琼脂糖凝胶电泳ຫໍສະໝຸດ 果分析及其应用口腔1402
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、 RNA分子混合物的方法，主要是应用琼脂糖凝胶 作为支持物的电泳法，借助琼脂糖凝胶的分子筛 作用，核酸片段因其分子量或者分子形状的不同， 电泳速度有差异而分离，利用DNA、RNA分子在 泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合 物的目的。 与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子 筛”和“电泳”的双重作用。
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
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琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
1、DNA的制备. ⑴ 适合分离大片段DNA. 琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚 丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大 片段DNA.普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用 脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段.
琼脂糖凝胶电泳 ppt课件
• 有热可逆性
• 机械强度差，易破碎，浓度 不能太低。
• 易被细菌污染，不易保存， 临用前配制。
• 琼脂糖支持层上的区带易于 扩散，电泳后必须立即固定 染色。
• 与PAGE相比，分子筛作用小， 区带少。
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ppt课件
琼脂糖凝胶的配置
1. 根据电泳需要，配置合适浓度的电泳及制胶 缓冲液。一般为 1× TAE或0.5×TBE。
注意：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相 同的。
2. 根据制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电 泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂 糖粉。
注意：总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。
3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖
注意：必须保证琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电 泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡，停止加 热。微波炉中加热时间不宜过长。
2) 分子大小相近的DNA带不 增加电泳时间，核准正确的凝胶
易分辨
浓度
DNA带缺失 3) DNA 变性
电泳前请勿高温加热DNA链，以 20mM NaCl Buffer稀释DNA
4) DNA链巨大，常规凝胶电泳 在脉冲凝胶电泳上分析 不合适
31
注意：不要产生气泡，溶液温度太高(>60℃)，会使得水 分过分蒸发，改变凝胶离子浓度，影响电泳效果。
6. 在室温下使胶凝固（大约30 分钟），然后放置 于电泳槽中进行电泳。
注意： 凝胶不立即使用时，用保鲜膜将凝胶包好在4℃ 下保存，或者放在制胶的缓冲液中，一般可保存2～5 天。
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ppt课件
琼脂糖凝胶缓冲液
电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后 在冰上冷却5分钟
不规则DNA带迁移 2) 电泳条件不合适
电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃； 经常更换电泳缓冲液
• 机械强度差，易破碎，浓度 不能太低。
• 易被细菌污染，不易保存， 临用前配制。
• 琼脂糖支持层上的区带易于 扩散，电泳后必须立即固定 染色。
• 与PAGE相比，分子筛作用小， 区带少。
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琼脂糖凝胶的配置
1. 根据电泳需要，配置合适浓度的电泳及制胶 缓冲液。一般为 1× TAE或0.5×TBE。
注意：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相 同的。
2. 根据制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电 泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂 糖粉。
注意：总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。
3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖
注意：必须保证琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电 泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡，停止加 热。微波炉中加热时间不宜过长。
2) 分子大小相近的DNA带不 增加电泳时间，核准正确的凝胶
易分辨
浓度
DNA带缺失 3) DNA 变性
电泳前请勿高温加热DNA链，以 20mM NaCl Buffer稀释DNA
4) DNA链巨大，常规凝胶电泳 在脉冲凝胶电泳上分析 不合适
31
注意：不要产生气泡，溶液温度太高(>60℃)，会使得水 分过分蒸发，改变凝胶离子浓度，影响电泳效果。
6. 在室温下使胶凝固（大约30 分钟），然后放置 于电泳槽中进行电泳。
注意： 凝胶不立即使用时，用保鲜膜将凝胶包好在4℃ 下保存，或者放在制胶的缓冲液中，一般可保存2～5 天。
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琼脂糖凝胶缓冲液
电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后 在冰上冷却5分钟
不规则DNA带迁移 2) 电泳条件不合适
电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃； 经常更换电泳缓冲液
实验琼脂糖凝胶电泳的原理与方法 PPT
六、血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
按电泳法分:
按超速离心法分:
乳糜微粒(CM)
乳糜微粒CM ( < 0、96 )
-脂蛋白 (-位) 极低密度脂蛋白VLDL(0、961、006)
前-脂蛋白(2-位) 低密度脂蛋白LDL (1、0191、063) -脂蛋白 (1-位) 高密度脂蛋白HDL(1、0631、21)
进行印迹转移电泳时,要注意缓冲液得离子强度要低,pH要远 离pI,使蛋白质带有较多电荷,一般用稳定性较好得Tris-缓冲体 系。还要注意凝胶与支持膜之间不能有气泡。适当提高电压或 电流可以提高转移速度,但亦会增加热效应,故电压或电流不可过 高。
五、交变脉冲电场凝胶电泳
一般琼脂糖凝胶电泳只能分离小于20kb得DNA。 这就是因为在琼脂糖凝胶中,DNA分子得有效直径超 过凝胶孔径时,在电场作用下,迫使DNA变形挤过筛孔, 而沿着泳动方向伸直,因而分子大小对迁移率影响不 大。如此时改变电场方向,则DNA分子必须改变其构 象,沿新得泳动方向伸直,而转向时间与DNA分子大小 关系极为密切。
D-半乳糖
3,6-脱水-L-半乳糖
琼脂糖链依分子内与分子间氢键及其它力得作 用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束,构成大网孔型凝 胶。
冷却
松散,随机地,盘绕地琼脂糖链
双螺旋结构区域与线性链相链接
淬火
溶胶状态
初级胶
最终得凝胶结构
琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳,其优点如下: (1)琼脂糖凝胶电泳操作简单,电泳速度快,样品不需事
按支持物得装置形式不同,区带电泳可为: ➢平板式电泳,支持物水平放置,就是最常用得 电泳方式; ➢垂直板式电泳,聚丙烯酰胺凝胶常做成垂直 板式电泳; ➢垂直柱式电泳,聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳即 属于此类; ➢连续液动电泳,首先应用于纸电泳,将滤纸垂 直竖立,两边各放一电极,溶液自顶端向下流, 与电泳方向垂直。
DNA的琼脂糖凝胶电泳资料ppt课件
2）琼脂糖呈透明状，无紫外吸收，电泳后的样品可直 接用紫外检测；电泳后区带易染色，样品易洗脱，便 于定量测定。
3）操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可进 行电泳。
琼脂糖凝胶电泳的应用
用于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等的电泳分 离。现广泛应用于核酸的研究中。
按相对分子质量大小分离DNA 的凝胶电泳技术，是分析 鉴定基因工程重组DNA 分子的重要实验手段。
是现在通用的许多分子生物学研究方法，如DNA核苷酸 序列分析、限制性内切酶片段分析等的技术基础，受到科 学界的高度重视。
二、试剂与器材
电泳仪
缓冲液 琼脂糖
凝胶槽
梳子
电泳槽
溴酚蓝
取液器
试剂
1、Tris-硼酸-EDTA缓冲液（TBE缓冲液），pH8.3：称取 10.78gTris，5.50g硼酸，0.93g EDTA-Na2溶于去离子水， 定容至1000mL。
图像的实时观测
三、操作方法
1、琼脂糖凝胶液的制备：称1g 琼脂糖，置于三角烧 瓶中，加入100mL TBE缓冲液，瓶口扣上一小烧杯， 加热至微沸，琼脂全部融化。取出摇匀，即为1%琼脂 糖。
注意 要完全融化混匀
2、凝胶板的制备
置水平板于工作台面上，将样品槽模板（梳子）插进水
平板上凹槽内，距一端约0.5cm。梳子底边与水平板表
四、实验结果
打印凝胶电泳图，贴于实验报告上，并对实 验结果进行讨论，分析所测未知DNA的大小。
五、课后研讨题
1、总结本实验操作的关键环节和注意事项。 2、实验所用DNA染料EB具有潜在的致癌性，查阅
资料，查找可替代EB的染料并说明优缺点。 3、查阅资料，举例说明DNA琼脂糖凝胶电泳的应
用和发展。
3）操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可进 行电泳。
琼脂糖凝胶电泳的应用
用于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等的电泳分 离。现广泛应用于核酸的研究中。
按相对分子质量大小分离DNA 的凝胶电泳技术，是分析 鉴定基因工程重组DNA 分子的重要实验手段。
是现在通用的许多分子生物学研究方法，如DNA核苷酸 序列分析、限制性内切酶片段分析等的技术基础，受到科 学界的高度重视。
二、试剂与器材
电泳仪
缓冲液 琼脂糖
凝胶槽
梳子
电泳槽
溴酚蓝
取液器
试剂
1、Tris-硼酸-EDTA缓冲液（TBE缓冲液），pH8.3：称取 10.78gTris，5.50g硼酸，0.93g EDTA-Na2溶于去离子水， 定容至1000mL。
图像的实时观测
三、操作方法
1、琼脂糖凝胶液的制备：称1g 琼脂糖，置于三角烧 瓶中，加入100mL TBE缓冲液，瓶口扣上一小烧杯， 加热至微沸，琼脂全部融化。取出摇匀，即为1%琼脂 糖。
注意 要完全融化混匀
2、凝胶板的制备
置水平板于工作台面上，将样品槽模板（梳子）插进水
平板上凹槽内，距一端约0.5cm。梳子底边与水平板表
四、实验结果
打印凝胶电泳图，贴于实验报告上，并对实 验结果进行讨论，分析所测未知DNA的大小。
五、课后研讨题
1、总结本实验操作的关键环节和注意事项。 2、实验所用DNA染料EB具有潜在的致癌性，查阅
资料，查找可替代EB的染料并说明优缺点。 3、查阅资料，举例说明DNA琼脂糖凝胶电泳的应
用和发展。
琼脂糖凝胶电泳试验课件
0.3 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 5~60 ( kb) 0.8~10 0.5~7 0.4~6 0.2~4 0.1~3 100~2000 ( bp) 80~500 60~400 40~200 25~150 6~100
PAG
3.5 5.0 8.0 12.0 15.0 20.0
不同（空间） 不同（空间）类型核酸的凝胶电泳：
缓冲液的组成和离子强度直接影响迁移率。 传统最常用的是TAE，但其缓冲能力很低，长时间电泳需要正、负电极贮液槽之间 进行缓冲液循环，并经常更新TAE。
缓冲液的离子强度 离子强度与样品泳动速度成反比，电泳的最适离子强度一般 离子强度 在0.02~0.2之间。在高速离子强度下（如误加10×电泳缓冲液），溶液导 电性极高并明显产热，可能引起凝胶熔解及DNA变性。 缓冲液的pH值影响DNA迁移率，溶液的pH值远离样品等电点时，样 值 品荷电量越多，泳动越快，核酸电泳液常用偏碱性或中性条件，使核酸带 负电荷，向正极泳动。 在进行电泳时，荧光染料EB可插入到碱基中，从而增加线状和开环 DNA的长度，使其刚性更强，并会使线状DNA的迁移率降15%，另外温 度和碱基堆积也会影响DNA的迁移率。
2）凝胶孔径大小 ）
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel， PAG）是核酸凝胶电 泳常使用的支持材料，通过两种支持介质的浓度变化调整所形成凝胶的 分子筛网孔大小，能分离不同分子量的核酸片段。
凝胶
琼脂糖
胶浓度（ ） 线状DNA分子的有效分 胶浓度（%） 线状 分子的有效分 离范围
三、实验原理
概言之：DNA分子带负电荷，在电场中受到电荷效应、分子筛效应向
正极移动过程中，因DNA分子的大小及构象差别而呈现迁移位置上的差异， 对于线形DNA分子，其电场中的迁移率与其分子量的对数值成反比，电泳 时加溴化乙锭，其与DNA结合形成一种荧光络合物，在254~365nm紫外照射 下可产生桔红色的荧光，可用于检测DNA。（此法可观察到凝胶中2ng左右 的DNA）。琼脂糖可制成不同孔径的凝胶，分离DNA的范围广，约 200bp~50kb。
PAG
3.5 5.0 8.0 12.0 15.0 20.0
不同（空间） 不同（空间）类型核酸的凝胶电泳：
缓冲液的组成和离子强度直接影响迁移率。 传统最常用的是TAE，但其缓冲能力很低，长时间电泳需要正、负电极贮液槽之间 进行缓冲液循环，并经常更新TAE。
缓冲液的离子强度 离子强度与样品泳动速度成反比，电泳的最适离子强度一般 离子强度 在0.02~0.2之间。在高速离子强度下（如误加10×电泳缓冲液），溶液导 电性极高并明显产热，可能引起凝胶熔解及DNA变性。 缓冲液的pH值影响DNA迁移率，溶液的pH值远离样品等电点时，样 值 品荷电量越多，泳动越快，核酸电泳液常用偏碱性或中性条件，使核酸带 负电荷，向正极泳动。 在进行电泳时，荧光染料EB可插入到碱基中，从而增加线状和开环 DNA的长度，使其刚性更强，并会使线状DNA的迁移率降15%，另外温 度和碱基堆积也会影响DNA的迁移率。
2）凝胶孔径大小 ）
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel， PAG）是核酸凝胶电 泳常使用的支持材料，通过两种支持介质的浓度变化调整所形成凝胶的 分子筛网孔大小，能分离不同分子量的核酸片段。
凝胶
琼脂糖
胶浓度（ ） 线状DNA分子的有效分 胶浓度（%） 线状 分子的有效分 离范围
三、实验原理
概言之：DNA分子带负电荷，在电场中受到电荷效应、分子筛效应向
正极移动过程中，因DNA分子的大小及构象差别而呈现迁移位置上的差异， 对于线形DNA分子，其电场中的迁移率与其分子量的对数值成反比，电泳 时加溴化乙锭，其与DNA结合形成一种荧光络合物，在254~365nm紫外照射 下可产生桔红色的荧光，可用于检测DNA。（此法可观察到凝胶中2ng左右 的DNA）。琼脂糖可制成不同孔径的凝胶，分离DNA的范围广，约 200bp~50kb。
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注意事项：
❖ EB是致癌物质，切勿用手接触，更不要污染 环境。
❖ 实验过程中操作要保持安静、镇定，注意样 品不能污染。
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实验仪器、材料与试剂
（一） 仪器 ❖ 1. 水平式凝胶电泳槽 ❖ 2. 稳压电泳仪 ❖ 3. 电炉 ❖ 4. 紫外检测仪 ❖ 5. 台式离心机
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（二） 材料 ❖ 实验一中的PCR产物
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5
❖ 琼脂糖是一种线性多糖聚合物。 ❖ 浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。
琼脂糖浓度(%)
0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 12.0
线型DNA分子的分离范围 (Kb)
5～60
1～20
0.8～10
0.5～7
0.9～6
0.2～3
.
0.1～2
6
➢ DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分 子筛效应。不同的DNA，分子量大小及构型不同， 电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。
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❖ 此外在琼脂糖凝胶电泳中其它注意事项还有：
❖ 1.）凝胶中加入EB进行电泳，便于紫外线下观 察电泳状态，但EB会导致线形DNA迁移率下降。
❖ ２.）电泳过程中，溴化乙锭向负极移动，与 DNA泳动的方向相反，较长时间的电泳会造成 靠正极方向的凝胶中溴化乙锭含量低，会对含 量较少的小分子DNA片段检测困难。处理方法 是：将凝胶在0.5ug/ml的EB溶液中染色30－45 分钟。
❖ ３.）判断正负极的另一方法是负极气泡（H2） 比正极气泡（O2）多一倍。
电泳指示剂溴酚兰在碱性液体中呈紫兰色，一 般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成上样缓冲液。
作用： ①增加样品比重，以确保DNA均匀沉入加样孔内。 ②形成肉眼可见的指示带，预测核酸电泳的速度和位置。 ③使样品呈色，使加样操作更方便。
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实验步骤：琼脂糖凝胶制备
❖ 1. 洗净电泳槽、制胶槽、梳子、挡板，晾干。
❖ 琼脂糖凝胶电泳是基因工程操作中常规的实 验方法，它能检测少量的DNA（如用肉眼观 察，可检测到10 ng的DNA），且检测的范围 很广。
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4
➢ 琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解， 45℃ 开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决 定于琼脂糖的浓度。
➢ DNA分子在碱性环境中带负电荷，在加电场作用 下向正极泳动。DNA分子的迁移速度与相对分子质 量的对数成反比。
➢ 琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，是利用分子筛效应， 迁移速度与分子量的对数值成反比关系，可依据 DNA分子的大小使其分离。该过程可以通过把分子 量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。
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7
❖ 溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当 DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动 时，溴化乙锭从正极向负极移动，这样溴化 乙锭分子就会嵌入DNA分子中形成络合物， 使DNA在紫外光下发射很强的荧光。在溴化 乙锭足够的情况下，荧光的强度正比于DNA 的含量，这样就可以检测DNA的浓度。
❖ 2. 插好挡板、梳子。
❖ 3. 根据实验所需称取0.4克琼脂糖，放入制胶 的容器中（一般用三角瓶），然后加入40ml 电泳缓冲液（1×TAE）。
❖ 4. 加热煮沸，使琼脂糖完全溶解。
❖ 5. 溶液冷至约60℃时，加入溴化乙锭4 μL (终 浓度为0.5 g/ml)，轻轻摇匀，倒入制胶槽上， 检查有无气泡。
❖ 9.用移液器吸起离心管中溶液，移入凝胶的梳
孔中。
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❖ 10.插上导线，打开电泳仪电源，按照需要调节 电压至120V，电泳开始，观察电流情况或电泳 槽中负极的铂金丝是否有气泡出现。
❖ 11. 等溴酚蓝泳动至凝胶前沿后，将电压（或电 流）回零，关闭电源，停止电泳。
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❖ 6. 室温下约30-45分钟后，琼脂糖溶液完全凝 固，小心垂直拔出梳子和挡板，清除碎胶，将 凝胶放入电泳槽中。
❖ 7. 加入电泳缓冲液（1×TAE）至电泳槽中， 使液面高于胶面约1mm。
❖ 8.在DNA样品中加入2 μL (1/10体积)的10× DNA上样缓冲液(loading buffer)，混匀，稍甩 一下，使溶液都处于离心管底。
❖ 12. 取出凝胶，在紫外观测仪上观察电泳结果。
❖ 13.. 根据需要切下DNA条带，放入1.5ml Ep管中， 放于4℃保存，以备下实验用。
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PCR产物的 琼脂糖凝胶电泳
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使用3 mg的DNA Marker DL 2,000（500 ng/条带）进行1% 的琼脂糖凝胶电泳后，各DNA条带自上至下分别为2kb，1Kb， 750bp，500bp，250bp，100bp。
溴化乙锭（EB）
是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间， 在紫外线激发下，发出红色荧光。其荧光强度与DNA的含 量成正比。据此可粗略估计样品DNA浓度。 琼脂糖凝胶EB染色，肉眼可见核酸电泳带，其DNA量一般 >5ng。
注意事项：
EB是致癌物质，切勿用手接触，更不要污染环境。
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14
上样缓冲液
实验二 琼脂糖凝 胶电泳检测PCR产物
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1
1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果及讨论
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2
实验目的
❖ 了解琼脂糖凝胶电泳的原理 ❖ 掌握琼脂糖凝胶的制作及进行电泳的方法
.
3
实验原理
❖ 凝胶电泳是分离和纯化DNA片段最常用的技 术。根据制备凝胶的材料，分为琼脂糖电泳 和聚丙烯酰胺电泳。
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12
（三） 试剂
❖ 1.琼脂糖
❖ 2. TAE电泳缓冲液(50×) （pH8.0）
Tris 242g
冰醋酸 57.1ml
0.5mol/L EDTA（pH8.0） 100ml
❖ 3. 溴化乙锭溶液 10mg/ml水溶液，室温，棕色 瓶或铝铂纸包装保存。
❖ 4. 10×DNA样品上样缓冲液
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核酸染色剂
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关于琼脂糖凝胶电泳的实验技巧和方法 几点注意事项：
❖ 1.）加样时枪头不要碰坏凝胶壁，否则DNA的带 型将不会整齐，加样前要用枪头吸打凝胶孔中的 溶液，以赶走样品空中的气泡。
❖ 2.）每孔最大DNA上样量决定于DNA样品片段的 大小、数目及样品孔形状与容量。
❖ 3.）应注意每孔最大上样容量及样品孔体积，以 免加样时样品流入附近样品孔造成交叉污染，影 响结果分析。