金黄色葡萄球菌检测方法
金黄色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂 肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然 的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生 磷脂环。
整理课件
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
生物学特性 ——致 病 性
•金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取 决于其产生的毒素和侵袭性酶： •a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌 体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 •b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； •c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。 •d.耐热核酸酶 •e.肠毒素：引起急性胃肠炎。
有毒性，并使菌落产生黑色
✓ 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环
✓ 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制 作用。
整理课件
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
在BP平板上典型菌落为：圆形,表面光滑、凸起、湿 润、菌落直径为2mm~3mm, 颜色呈灰黑色至黑色,有光泽, 常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常 有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。
整理课件
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食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
•葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病， 可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突 出而且普遍，腹痛、腹泻次之。 •当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如 牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10 小时即可相当数量的肠毒素。
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（最高可耐受 15%的氯化钠），用7.5%氯化钠肉汤增菌。
金葡球菌实验报告
一、实验目的通过本次实验，掌握金黄色葡萄球菌的分离、培养和鉴定方法，了解其生物学特性，为临床诊断和治疗提供依据。
二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株2. 培养基：普通琼脂、血琼脂、Baird-Parker培养基、营养肉汤3. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、试管、培养皿等4. 实验试剂：革兰氏染色液、碱性复红液、氯化钠、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甲基红等三、实验方法1. 菌株分离与纯化（1）将金黄色葡萄球菌标准菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）取培养好的肉汤，用无菌移液器吸取适量接种于普通琼脂平板，37℃培养24小时。
（3）挑取单菌落，接种于血琼脂平板，37℃培养24小时。
（4）挑取单菌落，接种于Baird-Parker培养基平板，37℃培养24小时。
2. 鉴定试验（1）革兰氏染色：取纯化后的金黄色葡萄球菌，进行革兰氏染色，观察菌体形态。
（2）生化试验：进行触酶实验、葡萄糖发酵实验、麦芽糖发酵实验、乳糖发酵实验、蔗糖发酵实验、甲基红反应、VP反应等，以确定金黄色葡萄球菌的生化特性。
（3）溶血试验：观察金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的溶血情况。
（4）过氧化氢酶试验：观察金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上的过氧化氢酶反应。
四、实验结果1. 菌株分离与纯化在普通琼脂平板、血琼脂平板和Baird-Parker培养基平板上均分离出金黄色葡萄球菌，菌落呈圆形、凸起、表面光滑、湿润、不透明，产生黄色脂溶性色素。
2. 革兰氏染色金黄色葡萄球菌革兰氏染色阳性，呈球形，排列成葡萄串状。
3. 生化试验金黄色葡萄球菌触酶实验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、产酸不产气，甲基红反应阳性，VP反应阴性。
4. 溶血试验金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生溶血环。
5. 过氧化氢酶试验金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上产生黑色沉淀。
五、实验结论根据实验结果，分离出的金黄色葡萄球菌符合金黄色葡萄球菌的生物学特性，可以确认为金黄色葡萄球菌。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 检测(荧光PCR法)
汇报人：XX
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荧光PCR法是一种 基于DN聚合酶链 反应的检测方法
荧光PCR法通过荧 强弱来定 量分析DN序列
荧光PCR法具有高 灵敏度、高特异性 、快速、简便等优 点
灵敏度高：能够检测到极低浓度的MRS 特异性强：能够准确区分MRS和其他细菌 快速简便：操作简便，检测时间短 结果准确：检测结果准确可靠，重复性好
护公众健康
灵敏度高：荧光PCR法具有 较高的灵敏度，能够检测到 极低浓度的MRS
特异性强：荧光PCR法具有 较高的特异性，能够准确区 分MRS和其他细菌
快速高效：荧光PCR法具 有快速高效的特点，能够在 短时间内完成MRS的检测
自动化程度高：荧光PCR法 可以实现自动化操作，提高 检测效率和准确性
荧光PCR法在MRS检测中的前景展望：提高灵敏度和特异性，提高检测准确性和 可靠性，降低检测成本，提高检测效率，推动MRS检测技术的发展。
汇报人：XX
临床诊断：用于检 测MRS感染，快速 准确
科研研究：用于研 究MRS的传播、变 异和耐药性
公共卫生：用于监 测MRS的流行病学 和防控策略
食品检测：用于检 测食品中的MRS污 染，保障食品安全
样本类型：血液、 尿液、痰液等
采集方法：无菌操 作，避免污染
保存条件：低温、 干燥、避光
处理方法：离心、 过滤、稀释等
样品采集：采集患者样本，如血液、痰液等
核酸提取：使用核酸提取试剂盒提取样本中的DN或RN
荧光PCR反应：将提取的核酸与荧光PCR反应试剂混合，进行 PCR反应
荧光PCR检测：使用荧光PCR检测仪检测反应产物，判断样本 中是否存在MRS
食品中微生物的检测-金黄色葡萄球菌检验
免疫学方法
抗原制备
从金黄色葡萄球菌中提取特异性抗原，制备 成免疫原。
抗体制备
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过凝集 反应、沉淀反应等方法检测样品中的金黄色
葡萄球菌。
抗原抗体反应
将免疫原注射到动物体内，刺激机体产生特 异性抗体。
结果判定
根据反应结果判断样品中是否含有金黄色葡 萄球菌。
分子生物学方法
食品中微生物的检测-金黄 色葡萄球菌检验
目录
• 引言 • 金黄色葡萄球菌概述 • 样品采集与处理 • 微生物学检测方法 • 理化检测方法 • 结果分析与报告 • 质量控制与实验室安全
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引言
目的和背景
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是一种常见的食品污染源，可引起食物中毒，对公众健康构成威胁。因此，检测食品中的金黄 色葡萄球菌对于保障食品安全具有重要意义。
适量性
根据检测方法和目的，采 集适量样品，以满足检测 需求。
样品保存与运
低温保存
样品应尽快放入低温环境 （如4℃冰箱）中保存，以 减缓微生物的生长速度。
避免反复冻融
尽量避免样品在保存过程 中反复冻融，以免影响微 生物的存活和检测结果的 准确性。
快速运输
样品在运输过程中应保持 低温，并尽快送达实验室 进行检测。
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微生物学检测方法
传统培养法
增菌培养
将液体样品接种到选择性增菌液 中，于适宜温度下培养一定时间 ，使金黄色葡萄球菌得以增殖。
鉴定
通过观察菌落形态、革兰氏染色 、血浆凝固酶试验等生化特征进 行鉴定。
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样品处理
取适量食品样品，进行均质化处 理，得到均匀一致的液体样品。
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食品中微生物的检测金黄色葡萄球菌检验
对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。
防止金黄色葡萄球菌肠毒素生成
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应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；
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在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。
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1、形态与染色：(staphylococcus aureus) 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 mm左右，显微镜下排列成葡萄串状。 革兰氏染色阳性。 附： 金黄色葡萄球菌的显微照片 金黄色葡萄球菌的染色照片 金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片 金黄色葡萄球菌的透射电镜照片
金黄色葡萄球菌的致病性
＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数量的肠毒素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。人摄食该菌污染的食物2～3小时后可引起中毒症状，它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。
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此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓 感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：
溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；
杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；
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金黄色葡萄球菌的流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。
金黄色葡萄球菌的测定
金黄色葡萄球菌的测定1 卫生学意义金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。
2 检验方法2.1 术语与定义金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。
显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。
是常见的引起食物中毒的致病菌。
常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。
2.2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：（1）恒温培养箱：36℃±1℃。
（2）冰箱：2℃～5℃。
（3）恒温水浴箱：37℃～65℃。
（4）天平：感量0.1g。
（5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。
（6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。
（7）无菌培养皿：直径90mm。
（8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.3 培养基和试剂（1）7.5%氯化钠肉汤1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4；2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。
（2）B－P琼脂平板1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.22）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。
3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。
分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。
临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL摇匀后倾注平板。
培养基应是致密不透明的。
使用前在冰箱储存不得超过48h。
金黄色葡萄球菌肺炎的检查
金黄色葡萄球菌肺炎的检查金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，可以引起多种感染，其中包括金黄色葡萄球菌肺炎。
金黄色葡萄球菌肺炎是一种严重的肺部感染，会给患者的健康带来危害。
在临床上，及早诊断金黄色葡萄球菌肺炎至关重要，而检查是确诊这种感染的关键步骤之一。
临床症状金黄色葡萄球菌肺炎的临床表现多样，患者可能出现以下症状：•发热•咳嗽•咳痰•胸痛•呼吸困难•胸部 X 光检查有异常表现如果患者出现以上症状，尤其是在有金黄色葡萄球菌感染风险的情况下，应及时进行检查以明确诊断。
检查方法1. 血液标本检查通过抽取患者的血液标本进行实验室检查，可以检测出金黄色葡萄球菌的存在。
一般情况下，金黄色葡萄球菌会在血液中产生感染相关的标志物，比如 C 反应蛋白和白细胞计数增高等。
2. 咳痰标本检查金黄色葡萄球菌肺炎患者常常伴有咳嗽和咳痰，通过检测患者的咳痰标本，可以确定是否存在金黄色葡萄球菌的感染。
实验室会对咳痰标本进行培养和鉴定，以确定感染的病原体。
3. 气管镜检查在严重病例下，可以通过气管镜检查，直接观察患者的肺部情况。
医生会通过气管镜进入气管和肺部，对肺部病变进行观察和取样，以确诊金黄色葡萄球菌肺炎。
4. 胸部 X 光检查胸部 X 光检查是金黄色葡萄球菌肺炎的重要诊断手段之一。
通过 X 光片可以观察肺部是否存在感染病变，比如肺实变、肺不张等。
结合临床表现和其他检查结果，有助于确诊金黄色葡萄球菌肺炎。
结语金黄色葡萄球菌肺炎是一种严重的感染疾病，及早诊断和治疗对患者的健康至关重要。
通过上述检查方法，可以帮助医生明确金黄色葡萄球菌肺炎的诊断，从而制定有效的治疗方案。
建议患者在出现肺部感染症状时及时就医，并根据医生建议进行相应检查，以获得及时有效的治疗。
金黄葡萄球菌检测方法
金黄葡萄球菌检测方法金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种广泛存在于自然环境中的细菌。
它可以引起多种感染，包括皮肤感染、伤口感染、食物中毒等。
因此，对金黄色葡萄球菌的检测方法非常重要，可以帮助我们预防和控制感染的传播。
金黄色葡萄球菌的检测方法有多种，其中包括传统的培养方法和分子生物学方法。
下面将介绍一些常用的金黄色葡萄球菌检测方法。
1. 传统培养方法传统的培养方法包括使用营养琼脂平板、Baird-Parker平板等。
首先，需要从样品中采集细菌样本，例如食物、空气、表面等。
然后，将细菌样本涂布在培养基上，利用大肠杆菌选择性培养基限制非金黄色葡萄球菌的生长。
接下来，在适当的培养条件下，金黄色葡萄球菌会在培养基上形成典型的黄色菌落。
最后，可以通过形态学特征、生化试验（如氧化酶试验、凝胶酶试验等）或其他方法来确认是否为金黄色葡萄球菌。
2. DNA检测方法分子生物学方法主要利用特异性DNA序列来检测金黄色葡萄球菌。
这种方法通常包括PCR、实时荧光PCR、等温扩增等。
首先，需要从样品中提取细菌的DNA。
然后，利用特定的引物和荧光探针（如果使用实时PCR）扩增金黄色葡萄球菌特异性DNA序列。
最后，可以通过检测是否产生了特定的扩增产物或荧光信号来确认是否存在金黄色葡萄球菌。
3. 免疫检测方法免疫检测方法基于金黄色葡萄球菌表面的特定抗原与抗体的反应。
这些抗原通常包括蛋白质A、蛋白质H等。
免疫检测方法可以采用多种形式，例如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫层析试验等。
通过将样品与特异性抗体反应，可以检测金黄色葡萄球菌的存在并产生特定的信号。
此外，金黄色葡萄球菌的检测方法还可以结合使用多种方法，以增加检测结果的准确性和可靠性。
例如，可以同时使用培养方法和PCR方法，以便同时检测菌落和特定的DNA序列。
需要注意的是，金黄色葡萄球菌的检测方法应根据不同的场景和需求选择合适的方法。
例如，在食品安全监测中，可以使用培养方法来定性检测金黄色葡萄球菌的存在与否；而在临床诊断中，可采用分子生物学方法来检测金黄色葡萄球菌的DNA，从而快速、准确地确定感染的类型和治疗方案。
金黄色葡萄球菌的测定方法验证报告
方法验证报告公共场所卫生检验方法第4部分：公共用品用具微生物GB/T18204.4-2013(5)胰酪胨（或胰蛋白胨17g 植物蛋白胨（或大豆蛋白胨） 3g 氯化钠 100g 磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖 2.5g蒸馏水1000m L制法：将上述成分混合后，加热溶解，调pH 为7.2~7.3，分装，121C 、20min高压灭菌。
2.1.2氯化钠肉汤(75g/L)成分： 蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 氯化钠 75g 蒸馏水1000mL制法：将上述成分加热溶解，调pH 为7.4,分装，121°C 、20min 高压灭菌。
2.1.3BairdParker 平板成胰蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 酵母浸膏1g 丙酮酸钠 10g甘氨酸 12g1. 目的验证平皿鉴定法测定公共用品用具微生物中的金黄色葡萄球菌，来判断在本实验室此方法的适用性。
2.培养基和试剂2.1培养基和试剂2.1.1胰酪胨大豆肉汤成分：氯化锂（LiCl.6H2O）琼脂5g 20g蒸馏水950mL增菌剂的配制：卵黄盐水（30%,体积分数）50mL与除菌过滤的亚碲酸钾溶液（质量浓度=1%）10mL混合，保存于冰箱内。
制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25°C校正pH至7.0±0.2。
分每瓶95mL,121C高压灭菌15min,临用时加热熔化琼脂，每95mL加入预热至50C的卵黄亚碲酸钾增菌5mL,摇匀后倾注平板。
培养基应是致密不透明的。
使用前在冰箱储存，不得超过48h。
2.1.4血琼脂培养基成分：营养琼脂100mL脱纤维羊血（或兔血）10mL制法：将营养琼脂加热溶化,待冷至50C左右以无菌方法加人脱纤维羊血摇匀，制成平板，置冰箱内备用。
2.1.5革兰氏染色液2.1.5.1结晶紫染色液成分：结晶紫1g乙醇（95%,体积分数）20mL草酸铵水溶液（质量浓度=1%）80mL制法：将结晶紫溶于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合2.1.5.2革兰氏碘液成分：碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL制法：将碘与碘化钾先进行混合，加人蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水。
食品金黄色葡萄球菌的检验方法
食品金黄色葡萄球菌的检验方法
1，仪器和设备
1．1恒温培养箱：36±1℃
1．2恒温水浴箱：45±1℃
1．3高压灭菌锅
1．4均质器
1．5试管:18×150mm 18×180mm
1．6锥形瓶:500ml 250ml
1．7平皿：直径为90mm
1．8灭菌吸管
1．9灭菌均质杯
1．10酒精棉
1．11天平:感量0.1g
1．12冰箱：0-4℃和-15～-20℃
2．培养基的制备
2.1生理盐水
称氯化钠8.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，分装锥形瓶和18×150mm试管内，每管吸9ml,121℃高压灭菌15min。
2.2胰蛋白胨大豆肉汤
称大豆肉汤30g和氯化钠95g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装18×180mm试管内，每管吸10ml,121℃高压灭菌15min。
2.3Baird-parker培养基
称6.3g溶于95ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装锥形瓶内，121℃高压灭菌15min。
冷却至50℃，加入1瓶亚碲酸钾卵黄增菌液（冻干粉加5ml无菌生理盐水溶解）混匀。
倾注平板备用，待平板凝固后放入冰箱0-4℃。
2.4普通肉汤培养基
称18g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装18×180mm试管，每管吸10ml，121℃高压灭菌15min。
2.5冻干血浆（凝固酶试验）。
金黄色葡萄球菌
1.血浆凝固酶试验：原理:金黄色葡萄球菌能产生结合型血浆凝固酶，可使血浆中可溶性的纤维蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，附着于细菌表面，在玻片上形成凝集颗粒；游离型的血浆凝固酶则可使试管中血浆发生凝固。
大多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，而非致病株一般不产生。
因此，血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。
葡萄球菌产生的血浆凝固酶有两种，一种是结合凝固酶（用玻片法测试），另一种是游离凝固酶（用试管法检测）。
方法：（1）玻片法：在1张洁净玻片中央加1滴9g／L氯化钠(生理盐水)溶液，用接种环取待检培养物与其混合（设阳性和阴性对照）制成菌悬液，若经10～20s内无自凝现象发生，则加入兔新鲜血浆1环，与菌悬液混合，观察结果。
（如出现颗粒状凝集现象即为阳性。
如不立即发生凝集，可稍待一，二分钟，并轻轻摇动玻片，加速反应，若无凝集时则为阴性。
）（2）试管法：用生理盐水将新鲜兔血浆4倍稀释，取0．5ml于试管再加0.5ml 待测菌浓菌悬液（需做阳性对照及阴性对照。
），混匀后置37℃水浴中，每30min 观察1次结果。
若3小时内试验管和阳性对照管出现凝固，阴性对照管（即浓菌液管）不凝固，为阳性；若阴性，继续观察到24小时，不凝固者为阴性。
（观察结果，将试管微微倾斜，血浆成冻胶样凝块者为阳性，血浆仍为液状者为阴性。
）【结果判断】（1）玻片法：5～10s内出现凝集者为阳性。
（2）试管法：如有凝块或整管凝集出现为阳性。
4h后无上述现象出现，则放置过夜后再观察。
【注意事项】（1）最好使用EDTA抗凝的兔血浆，因为如果使用枸缘酸盐抗凝血浆会产生假阳性结果（2）玻片法：10秒内观察结果，如超过10 秒可出现假阳性，因此必须用试管法验证凝聚因子试验。
2. 耐热核酸酶试验原理：致病性葡萄球菌能产生一种耐热核酸酶，它能分解DNA，使含甲苯胺蓝核酸琼脂显示粉红色玻片法：取融化好的甲苯胺蓝DNA琼脂3ml均匀浇在载玻片上，待琼脂凝固后打上6-8个孔径为2-5mm的小孔，各孔分别加一滴经沸水浴3分钟处理过的待检葡萄球菌和阳性阴性对照葡萄球菌培养物，35℃大气环境孵育3小时，观察有无粉红色圈及其大小。
微生物检测技术-金黄色葡萄球菌检测
国内检测标准
GB 4789.10-2010
食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
GB/T 20944.32008
食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素的测定 第3部分：黄曲霉毒素 M1的测定
GB/T 23511.42008
食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定 第4部分：脱氢乙酸含量的 测定
样品中的快速检测。
纳米技术
纳米材料如纳米金、纳米孔等在 金黄色葡萄球菌检测中展现出巨 大潜力，具有高灵敏度、低检测
限和快速响应等优点。
未来研究方向
开发更高效、特异性的检测方法
01
针对金黄色葡萄球菌的不同表型和基因型，开发更高效、特异
性的检测方法，提高检测的准确性和可靠性。
集成化与自动化
02
将多种检测方法集成于一体，实现金黄色葡萄球菌的自动化检
治疗方案的选择。同时，对于流行病学调查和疾病监测也具有重要意义。
05
CATALOGUE
金黄色葡萄球菌检测技术展望
新技术发展与应用
基因组学技术
利用全基因组测序技术，能够快 速准确地检测金黄色葡萄球菌，
并识别其耐药性和毒力基因。
生物传感器技术
生物传感器能够实时、快速地检 测金黄色葡萄球菌，具有高灵敏 度和特异性，适用于食品和环境
测，提高检测效率，降低人工误差。
多重耐药性研究
03
深入研究金黄色葡萄球菌的多重耐药性机制，为遏制耐药性的
传播提供科学依据和技术支持。
对公共卫生的影响与意义
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，通过改进检测技 术，能够及时发现和控制食品中的污染，保障公众的食品 安全。
预防疾病传播
金黄色葡萄球菌检验与计数,GB4789.10-2016及纸片法-JW
金黄色葡萄球菌的肠毒素
金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一 种重要的致病物质。本菌引起的食物中毒是因 为食品污染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大 量肠毒素而导致的。
近年报导表明，50%以上的金黄色葡萄球菌菌株 在实验室条件下可产生肠毒素，并且1个菌株能 产生两种或两种以上的肠毒素。
肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的 肽链组成。分子量约为3000左右。易溶于水， 难溶于有机溶剂。
分离培养基
Baird-Parker琼脂：培养基中含有卵黄亚 碲酸钾，能抑制大多数细菌的繁殖，并能 促进金黄色葡萄球菌的生长使其产生黑色 和晕圈。培养基中的丙酮酸钠和甘氨酸也 能促进金黄色葡萄球菌的生长。
金黄色葡萄球菌的菌落形态：圆形、光滑 凸起、湿润，直径约2~3mm，颜色呈灰色到 黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在 其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似 有奶油树胶的硬度，偶而可见无混浊带和 透明圈的非典型菌落。
血浆凝固酶试验
挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落 1个或以上，分别接种到5mL BHI和营养琼脂 小斜面，36℃±1℃培养18 h～24 h。
取新鲜配置兔血浆0.5mL，放入小试管中，再 加入可疑菌落的BHI培养物0.2mL～0.3mL，振 荡摇匀，置36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半 小时观察一次，观察6h，如呈现凝固（即将 试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积 大于原体积的一半，判定为阳性结果。
金黄色葡萄球菌的菌落形态：呈金黄色， 有时也呈白色，大而突起，圆形、不透明、 表面光滑，周围有透明的β溶血环。
血平皿上的形态
血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素， 因此在血平板上产生明显的溶血环。
典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而 突起，圆形，不透明，表面光滑，菌落周围 有完全透明溶血环。
金黄色葡萄球菌检测方法
金黄色葡萄球菌检测方法Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT金黄色葡萄球菌检测方法1.纸片法目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。
采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。
技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。
技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。
此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。
但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。
使目视效果下降，导致计数偏低。
2.免疫学方法各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。
抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。
金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。
在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。
目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。
免疫学方法包括下面两个部分：（1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。
金葡鉴定生化实验
金葡鉴定生化实验金葡鉴定生化实验是用于鉴定金黄色葡萄球菌的一种生化试验。
该实验通过观察细菌对各种生化试剂的反应来判断其是否为金黄色葡萄球菌。
具体步骤如下：1.将可疑菌株接种于营养琼脂平板上，培养18-24小时。
2.取可疑菌落进行涂片、染色、镜检，观察菌落形态和染色特性。
3.对可疑菌落进行生化试验，包括甘露醇发酵试验、耐热核酸酶试验、血浆凝固酶试验等。
4.根据生化试验结果，结合菌落形态和染色特性，判断是否为金黄色葡萄球菌。
其中，甘露醇发酵试验是金葡鉴定生化实验的一种，阳性结果可以辅助诊断金黄色葡萄球菌。
此外，血浆凝固酶试验也是检测金黄色葡萄球菌是否具有致病性的常用试验。
需要注意的是，生化试验的结果需要结合其他实验室检查结果和患者的临床表现进行综合分析，以确定最终的诊断。
"金葡"可能是指"金葡菌"（Candidaauris）或其他相关的生物体。
如果你需要进行生化实验来鉴定金葡或其他微生物，通常需要使用特定的实验方法和培养基。
以下是一般性的生化实验，用于鉴定金葡或其他酵母菌：格拉姆染色法（GramStaining）：格拉姆染色是一种最基本的微生物分类方法。
金葡是一种真菌，通常是革兰氏染色阴性的。
氧气需求实验：金葡是一种真菌，通常是好氧菌（需氧生长）。
在含有氧气的条件下培养金葡，可以观察其生长状况。
生化反应培养基：使用含有特定生化反应底物的培养基，观察金葡对这些底物的反应。
例如，利用含有葡萄糖、果糖等碳源的培养基，观察其在不同底物上的发酵反应。
形态学观察：观察金葡在培养基上的生长形态，包括菌丝、孢子的形成等。
生物化学检测：使用生化试剂，检测金葡的代谢产物，如酶的产生等。
请注意，具体的实验方法和培养条件可能因金葡的不同类型而异。
对于金葡菌等致病性真菌，确保在受过专业培训的实验室环境中进行相关实验，并遵循相应的生物安全规范。
最好的做法是在专业实验室中进行这些实验，或者请教专业微生物学家的帮助。
金黄色葡萄球菌检测方法
金黄色葡萄球菌检测方法1.纸片法目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。
采用快速测试片检测具有显著的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。
技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。
技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。
此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。
但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。
使目视效果下降，导致计数偏低。
2.免疫学方法各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。
抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。
金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。
在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。
目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。
免疫学方法包括下面两个部分：（1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析作者：***来源：《食品安全导刊》2020年第06期金黄色葡萄球菌是生活中最常见的病原菌之一，也是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重的感染。
该菌对营养的要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧。
容易受金黄色葡萄球菌污染的食品主要为乳制品、蛋及蛋制品、各类熟肉制品，其次是含有乳类的冷冻食品等，因此对于该菌的检验也被确定为食品致病性菌种检验中的重要项目。
按照现行的国标方法，金黄色葡萄球菌检测方法分为第一法定性检验、第二法平板计数法（适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品），以及第三法MPN计数法（适用于金黄色葡萄球菌含量较低的食品）。
第一法定性检验过程包括样品处理、样品增菌、平板分离划线、初步鉴定、确证鉴定这5个步骤，整个流程全部完成至少需要5天时间。
第二法平板计数法包括5个步骤——样品稀释、样品接种涂布、典型菌和可疑菌计数、鉴定试验、结果计算，整个流程全部完成至少需要4天时间。
第三法MPN计数法同样包括5个步骤，即样品稀释、样品增菌、平板分离划线、鉴定试验、查MPN表确认结果，整个流程全部完成至少需要5天时间。
以下将对金黄色葡萄球菌的检测流程进行简单介绍，并对难点、注意事项进行梳理和讲解。
1 第一法：金黄色葡萄球菌定性1.1 样品处理固态和半固态样品：称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤中，充分混匀。
液体样品：吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，振荡混匀。
1.2 样品增菌将上述样品匀液置于36±1℃的恒温培养箱中培养18～24h。
1.3 平板分离划线该步骤是整个金黄色葡萄球菌检测环节中最重要的步骤之一，因为平板划线分离的效果决定了可疑菌落的判定和选择。
平板划线选择三分法或四分法则分离效果较好，更容易出现单菌落平板。
1.4 初步鉴定分离的培养基选用Baird-Parker平板（BP平板）和血平板。
食品中金黄色葡萄球菌检验
式（2）
案例
T A1B1/ C1 A2B2 / C2其中Leabharlann 1.1d样品稀释液
10-1
10-2
典型菌落数
183
21
T：样品中金黄色葡萄球菌菌落数；
用于做血浆凝固
A1：第一稀释度（低稀释倍数）典型菌落的总数；
5
5
酶菌落数
A2：第二稀释度（高稀释倍数）典型菌落的总数；
B1：第一稀释度（低稀释倍数）血浆凝固酶阳性的菌落数； 血浆凝固酶阳性
二、金黄色葡萄球菌定性检测
注意事项
Baird-Parker平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏:提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠:生长促进剂 亚碲酸盐:对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄菌株有毒性，并使菌落产生黑色 卵黄:提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂:对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。
36±1℃， 24~48h
圆形，光滑突起，湿润，直径23mm，颜色呈灰色到黑色，边缘 常为淡色（米黄色或灰白色略带 灰色或黄色的白色），周围为一 混浊带，在其外缘常有一透明圈。 用接种针接触菌落似有黄油树胶 的粘稠感。
革兰氏染色
血浆凝固酶鉴别
金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球 菌，排列呈葡萄球状，无芽孢
血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为白色，大 而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血圈。
36℃±1 ℃
45h~48h
计数及血浆凝固酶试验
GB 4789.10-2016 金黄色葡萄球菌的检验第二法
报告
操作规程
样品稀释 同菌落总数检验
选择合适稀释度 接种涂布BP平板
三、金黄色葡萄球菌定量检测
样品处理
移1ml
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金黄色葡萄球菌检测方法
一．材料与方法
1、材料
①培养基：7.5%NaCl肉汤培养基，血琼脂平板培养基（按常规方法制作）
②试剂：7.5%NaCl肉汤培养基，革兰氏染色，血琼脂平板，Baird-Parker琼脂平板，生理盐水，兔血浆（1：4），
③器材：温箱，显微镜，天平，均质器，载玻片，L型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，试管及试管架，研磨，1ml注射器，
④实验动物：健康的小白鼠
2、方法
待检样品25g+225ml灭菌生理盐水
│
┌─────┴─────┐
直接计数法增菌培养方法
↓↓
Baird-Parker琼脂平板7.5%NaCl肉汤培养基
↓↓
血平板血平板
└─────┰─────┘
↓
┌─────┰─────┰──────┐
↓↓↓↓
涂片染色镜溶血观察动物接种试验血浆凝固试验
└─────┴──┯──┴──────┘
↓
报告
1、样品的采集
称取25g火腿肠，切碎搅匀（用灭菌研钵研磨），置于250ml锥形瓶中，加入225ml灭菌生理盐水，制成1：10样品混悬液，混匀后作用20分钟，随机取10ml离心。
2、增菌及分离培养
①增菌培养方法：吸取5ml上清液，接种于7.5%NaCl肉汤培养基内，置于（37±1℃）恒温箱中培养24h，划线接种入血平板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。
②直接计数方法：吸取上述悬液，进行10倍递增稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的
稀释液各1ml，分别加入3个Baird-Parker琼脂平板，每个平板的接种量分别为0.3ml、0.3ml、0.4ml。
用灭菌L型涂布棒涂布整个平板，置于（37±1℃）恒温箱中培养24h。
之后分别对3个平板上生长的周围有浑浊带的黑色菌落进行计数。
转接入血平板，（37±1℃）恒温箱中培养24h。
3、涂片、染色与镜检
将纯培养的未知菌涂片，革兰氏染色，显微镜观察。
4、生化实验
①触酶试验
在载玻片上滴1滴3%的过氧化氢，调取纯化的细菌放在过氧化氢中观察变化。
30s内产生大量气泡者为阳性，不产生气泡者为阴性。
②血浆凝固酶试验
吸取1：4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h的2①中的肉汤培养液0.5ml，摇荡均匀，放入（37±1℃）恒温箱中培养，每0.5h观察一次，观察6h，检查是否出现凝固。
将试管倾斜或倒置时，呈现凝块状，可判定为阳性，同时以已知阳性葡糖球菌和阴性肉汤作为对照。
5、动物感染实验
用无菌生理盐水将2①中血琼脂板上纯化的菌落洗下后，以0.5ml/只腹腔注射入小白鼠体内，同时用灭菌生理盐水注射入另外的小白鼠体内，以做对照，分别在相同条件饲养，观察其症状。
对感染试验出现症状或死亡的小白鼠进行剖检，并采集病料，进行分离。
二．结果与分析
1、培养特性及形态特征
①培养特性
在37℃条件下，需氧与厌氧培养的血液营养琼脂平板均长出光滑、湿润、隆起，约1mm大小的金黄色菌落，并且有β溶血现象。
②镜检结果
显微镜下观察该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，也有个别2个或3个球菌相连。
根据菌落形态、镜检结果怀疑该菌为葡萄球菌。
2、菌落计数报告
将直接计数法试验中的3个平板中疑似黑色葡萄球菌的金黄色菌落数相加，乘以血浆凝固酶试验阳性数，除以5，在乘以稀释倍数，即为每克样品中金黄色葡萄球菌数量。
3、动物感染试验
只注生理盐水的小白鼠没有任何变化：接种分离菌的小白鼠在9h内死亡。
将死亡的小白鼠剖检采集病料，进行细菌分离和生化试验，得到与原分离菌。