时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay)操作

时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay)是在荧光分析的基础上发展起来的一种特殊的荧光分析。

它利用具有长效荧光的稀土金属（Eu、Tb、Sm、Dy）作标记物，充分利用激发光与发射光之间的降移与发射光较长的半寿期，在激发光后延时测量发射光的强度。

从而所测的荧光不受激发光和被检物中的非特异荧光干扰，提高了检测的特异性与灵敏度。

在激发光后延时400微秒，测量400微秒，间歇200微秒后进入下一个测量周期，每一个周期为1000微秒。

对每一个样品实施1秒钟的测量，意味着完成了1000个周期的测量，测量精确度极高。

（一）Auto DELFIA自动时间分辨荧光免疫分析仪开/关程序1 开机1.1 依次打开样品处理器电源，微孔板处理器电源，打印机电源。

1.2 打开计算机显示器。

1.3 启动计算机。

1.4 运行系统软件：Auto DELFIA与Multicalc系统软件在Windows启动后自动运行。

Auto DELFIA workstation软件用于控制Auto DELFIA的运行，MultiCalc的主要功能是与主机通讯，对测试结果进行评估和对质控及其他数据处理（可通过双击屏幕上图标不运行）。

在MultiCalc Auto DELFIA环境下，只有键盘有效，鼠标无效。

2 开机后准备1.1 清洗液准备1.1.1 微孔板处理器洗液（250ml浓缩液＋600ml去离子水混合），每做一块板至少1升用量，洗液在密闭条件可保存2周时间。

1.1.2 准备样品处理器洗液（50ml浓缩液＋5000ml去离子水混合），每做一块板至少需要800ml洗液，洗液在密闭条件下可保存1周时间。

1.2 样品处理器准备1.2.1 在Wash bottle（清洗液瓶）、Rinse bottle (冲洗液瓶)分别注入足够用量的清洗液和去离子水，倒空废液瓶。

拧紧各瓶盖，确保废液瓶管路向下。

1.2.2 如样品需要稀释，放入稀释杯和稀释液。

系统安装时已调好有71ml和190ml两种规格的稀释杯，若使用71ml的稀释杯，从最右端开始放置，如有预处理样品，则不能使用190ml 的稀释杯。

不能使用多个稀释杯。

1.3 微孔板处理器准备。

1.4 点击Load菜单下的Load System Liquids选项Option-Show Tempareture显示温度和压力。

当管路内有压力时，不要打开瓶盖。

1.5 点击Maintenance →Plate Processor →Washer test，检查洗板机功能，系统自动提示检查步骤。

1.6 在试剂舱内插入足量干净、不弯曲的吸嘴。

1.7 装载足量干净的稀释杯，每一稀释杯分为两半，可做两次稀释，总共有24个稀释位。

1.8 检查检测帽（白色）是否放入试剂舱最左边第一个帽架位置，并且其他位置没有黑色防蒸发帽。

1.9 确认传送器下方的废物盘已倒空。

1.10 检查两瓶增强液是否足够（一瓶可做8块板），通常先换右边的瓶子，但如左边瓶内溶液少于1/3，则两瓶均须更换。

增强液瓶内有压力，必须拧紧盖子。

必要时使用Maintenance 菜单下的Enhancement solution flush 命令灌注管路。

1.11 校准品：每瓶hAFP和βhCG校准品瓶中精确加1.1ml去离子水，轻轻混匀，30min后去除泡沫使用。

需再次使用的校准品保存于-20℃。

1.12 Eu/Sm标记物溶液：在使用前1h，根据每条板条（12孔）需30μl标记物和30ml缓液配制标记物溶液。

3 关机3.1 关闭微孔板处理器电源。

3.2 用探针支架支撑探针架防止损坏，关闭样品处理器电源。

3.3 退出Auto DELFIA系统软件，退出MultiCalc软件。

退出Windows。

3.4 关闭电脑电源。

（二）Auto DELFIA自动时间分辨荧光免疫分析仪分析参数设置程序1 检验项目设置1.1 在操作主界面点击Settings菜单→选择Assay Protocols（检验项目）。

1.2根据需要选择校准曲线、样品复管数、批号和质控。

使用新批号试剂时，则更新批号。

如果选择了参考曲线，批号改变后系统自动提示需做一条新的曲线。

1.3 若欲将结果存到LIS系统中，确认在MultiCalc中Protocol的Stored Files里选择Results，并选择Resulte格式。

1.4 如果要做双标，须先做溢出纠正因子校正（详见维护保养部分）。

1.5 如果做新生儿筛查，在Settings菜单系统子菜单下选择新生儿筛查。

编辑检验项目、校准和质控。

1．在主界面鼠标点击Settings菜单，选择Assay protocols →如Screening →AFP-BHCG →Edit 。

2．进入Assay protocol editor 对话框。

输入相应的批号，根据试剂说明书上标注输入正确的校准品浓度值。

（三）Auto DELFIA自动时间分辨荧光免疫分析仪校准程序。

1.1选择校准模式：有7种不同的选择，在屏幕左边从上到下依次是①每一测试块均做标准曲线；②第一块测试板做标准曲线，其余的做两点校正；③第一块测试板做标准曲线，其余不做校正和校准；④每一测试板均做两点校正；⑤第一块测试板做两点校正，其余不做校正和校准；⑥不做校正和校准，使用上一次标准曲线；⑦不做校正和校准，使用MultiCalc中设定的参考曲线。

1.2 如果还有其他需要，可更改校准品数目。

例如要求第一块板做标准曲线，其余的做3点校正，则选择第二项，然后在“Next Plates”下选择相应的3个标准即可。

1.3 如果做双标（Dual Label Assay ），例如AFP＿βhcg，则无法更改校准品的数目，只能修改浓度值。

双标有A-Protocol和B-Protocol两种协议，要更改B-protocol的浓度值，点击屏幕右下角的B-protocol 键。

弹出新对话框，可修改校准品和质控浓度值，然后按OK 保存退出。

返回到Assay Protocol Editor对话框。

1.4 复管数：在屏幕右下方点击Replicates ,输入校准品、质控品及待检标本的复管数，按OK保存，返回Assay Protocol Editor对话框。

1.5 在Assay Protocol Editor对话框输入校准品批号，输入正确的校准品浓度值。

1.6 进入Map Of Standards 对话框，拉出校准品抽屉，按屏幕提示顺序依次放入校准品，放好后合上校准品抽屉，按OK 。

使用后，校准品立即放置于4℃冰箱内保存。

校准品打开后最多使用二次。

在标准抽屉内一次最多可放8个项目的校准品。

1.6 运行（四）Auto DELFIA自动时间分辨荧光免疫分析仪室内质控程序1.1 点击屏幕右边Controls进入Controls 界面，输入质控的允许范围（目标值±2S）、质控代码、质控批号，必要时在Dil中输入质控稀释倍数。

1.2 在屏幕左边Controls栏选择质控做在第一块板或下一块板或最后一块板。

在屏幕下部的测试板图上已显示有校准品。

在屏幕右边Control Operation 栏中选择所用的质控水平（Low、Medium、High、Control 4～5），然后移动光标到板上所要放置的位置。

1.3 必要时选中Move Control、Delete control对质控进行移动和删除操作。

1.4 然后按OK键完成编辑,按Close键保存。

1.5 运行三、运行1 工作前准备（二）创建工作表在以上准备工作完成后，有两种方法检测。

即点击AutoMate（自动操作）键，系统会按预定的程序执行。

或选择Load Worklist 或Create list一步一步运行。

在Auto DELFIA软件中创建工作表，还可在已存在的工作表中添加样品：用鼠标点击空位置，然后输入所须的项目即可。

（如果试管已经放入样品处理器中，则不能添加项目）。

3．2．1编辑试管架图1．在主屏点击Create list图出现Analytes & samples 和Sample Racks 两个对话框。

2．进入Sample Racks（样品架图），点击想添加样品的位置，会出现一红方框。

注意要确保选择的位置与试管架上样品的实际位置对应。

通过对话框下方的按键可实现以下功能：●点击Plate Map 看微孔板图。

●选择一试管，然后点击Del Tube删除该管检测。

●Print打印样品信息。

3．在屏幕试管架图最后一排编号为73的单独试管架，是质控架，如已在检验项目中设置了质控品，则自动显示在质控架上。

3．2．2 移动试管架1．在想插入试管架的编号区输入希望的试管架编号，则该位置上插入了你输入编号的试管架，其余试管架相应后移。

2．如不使用1号试管架，则必须移动试管架或将试管直接编制到适当的试管架上。

3．2．3 移动质控架如要把质控放到其他试管架，在当前质控架73编号区输入想放质控的编号。

如把73号改成40号，则40架号成为质控架而原质控架73号变成普通的样品架73。

3．2．4 移动试管用鼠标点住想移动的试管，将其拖到需要放的位置，然后释放鼠标。

在试管架图左下角显示出鼠标位置、试管数和稀释液位置（从右到左排列）。

完成试管架安排后，点击Close，关闭Sample Racks 对话框。

3．2．5 项目和样品1．在Analytes & samples对话框中，在Analytes栏中选择检验目的2．在屏幕右边的下拉菜单中选择测试项目。

Screening的下拉菜单中只显示已校准的测试项目。

3．选择合适的试剂盒（1板或4板）及程序（不同温育时间）。

4．选择合适的运行序号，按OK 。

进入Sample 对话框。

注意：l 在设置菜单中选择了新生儿筛查后，才能按需要间歇振荡筛查项目。

l 如果在系统设定中选择了下一管，则需要预处理的实验将不显示。

5．在Sample 对话框的Code区输入相应的样本ID号，连续样本以2个点（..）连接起始ID 号与未尾ID号，即xx..xxx 。

点击Accept 或按ENTER键。

6．在样本类型栏中选择合适的试管，否则吸样探针会吸错位。

7．确认前可在项目列表中双击项目名称以删除测试；如果已按Accept键，可在微孔板图中删除管。

8．已经确认后也能增加测试样本。

包括使用微管稀释样品添加测试项目，但系统设定中选择下一管或下一架，则不能添加。

注意不能更改已确认样品的稀释状态。

9．确认后，样品架图上选中的试管位颜色发生改变，绿色为样品、浅兰色为用来稀释样本的空管或经稀释的质控或经预处理的标准、红色为质控。

10．必要时，在Sample 对话框的Factor栏中输入稀释倍数（5-100），按Accept键。