(协同凝集反应) +金葡菌
(整理)医学免疫学检验考试重点
概论+抗原抗体反应1 免疫学基本概念及其生物学功能；免疫：机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能免疫三大功能：免疫防御、免疫自稳、免疫监视中枢免疫器官（骨髓和胸腺）外周免疫器官（淋巴结、脾脏、扁桃体）免疫细胞：淋巴细胞（T，B，NK）、单核巨噬细胞、其他免疫应答细胞（中性粒、嗜酸性、嗜碱性和肥大细胞）免疫分子：免疫球蛋白（IgM，IgG，IgA，IgE，IgD），补体，细胞因子，细胞黏附分子，人类白细胞分化抗原免疫应答：机体免疫系统接受抗原刺激发生的一系列反应，并以排出或分解该抗原为目的的反应过程。
过程：抗原的识别、处理、信息传递（识别阶段），免疫细胞的激活、增殖、分化（活化阶段）以及产生一系列的免疫效应因子（效应阶段）。
临床免疫学检验：研究免疫学检测理论、技术、应用，免疫疾病发病机制、免疫诊断、及防治的一门医学领域的应用学科。
免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应，免疫学技术有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应和标记免疫反应五种类型。
免疫检验：1）利用免疫检测原理和技术检测免疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因子、细胞黏附分子等免疫相关物质；2）体液中的微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素。
临床免疫学：利用免疫学理论和技术研究疾病的免疫病理机制、诊断和鉴别诊断、疗效评价、预后判断和预防的多个分支学科的总称。
免疫性疾病：各种原因引起的机体免疫应答异常所致的疾病，包括超敏反应性疾病、自身免疫病、免疫缺陷病和免疫增生病。
感染免疫学：研究病原微生物与宿主相互关系从而控制感染的学科，传统免疫学核心。
肿瘤免疫学：研究肿瘤免疫原性、机体抗肿瘤的免疫效应及机体的免疫功能与肿瘤发生、发展的相互关系以及肿瘤免疫诊断与防治的学科。
移植免疫学：研究移植物与宿主相互关系从而选择移植物和延长移植物存活的学科。
2 血清学反应的概念；抗体主要存在于血清中，体外的抗原抗体反应称为血清学反应。
抗原抗体反应：抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应，特异性取决于抗原表位和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，并通过静电引力、范德华引力、氢键结合力和疏水作用力等非共价键结合在一起。
免疫学技术概论测试题
1.可用用于抗原定量量测定的沉淀试验有哪些？列列举两个并简述其原理理。 2.简述凝集试验的类型及其原理理用用途。 3.比比较凝集试验与沉淀试验的区别。 4.可溶性抗原都哪ຫໍສະໝຸດ 。 5.简述间接凝集抑制试验的原理理。
参考答案：
第四章 免疫学技术概论
一一、名词解释
1.是指一一个抗体分子子与整个抗原表位之间结合的强度，与抗体结合价直接向关。亲合力力力表现 为多价优势。 2.大大多数抗体为二二价，大大多数抗原为多价，只有两者比比例例适当时，才能形成彼此连接的大大复 合物。而而抗原过多或抗体过少时，形成的单个复合物不不能被肉肉眼所⻅见。 3.因反应体系中抗原过多或抗体过多出现抑制可⻅见反应的现象。 4.用用于检测抗原或抗体的体外免疫学技术，又又称免疫检测技术。 5.抗体的抗原结合位点与相应的抗原决定簇之间的结合强度，它是抗原抗体间固有的结合力力力。 6.与细胞免疫有关的各种检测技术，包括对免疫细胞、细胞因子子的检测及功能分析。 7.特异性：抗原与抗体的结合具有高高度特异性。 交叉性：两种天然抗原之间含有部分相同抗原或表位，或表位构象相似，则可发生生交叉反 应。 8.当抗原抗体发生生最强的结合反应，出现可⻅见反应时的抗原和抗体的适当比比例例。 9.制备与免疫检测有关制剂的技术，包括抗原制备、抗体纯化和抗体标记等技术。 10.抗体的抗原结合位点与相应抗原决定簇间的结合强度，是抗原抗体间固有的结合力力力。 11.一一个抗体分子子与整个抗原表位之间结合的强度，与抗体结合价直接相关。
6.间接凝集试验通常用用于检测抗体，间接凝集抑制试验通常用用于检测抗原。（ ） 7.试管发是一一种定性实验，用用以检测待测血血清中是否存在相应抗体和相应抗体的效价。() 8.间接凝集反应的优点有敏敏感性高高，比比直接凝集反应敏敏感 2～8 倍，以及特异性强。（） 9.协同凝集实验是利利用用葡萄球菌 A 蛋白白（SPA）与特异性抗体相结合再来检验未知抗原的方方 法。（） 10.桥梁梁凝集实验用用于检测不不完全抗体。不不完全抗体与抗原结合出现凝集反应。( ) 11.在琼脂凝胶扩散试验中，抗体浓度越高高，白白色色沉淀线离其所在孔越远，甚至至不不出现沉淀线。 （） 12.乳胶凝集试验既能检测抗体又又能检测抗原，快速简便便，保存方方便便，但准确度很低。 （） 13.可用用血血凝试验和血血凝抑制试验检测和鉴定病毒，血血凝抑制试验也可用用于检测病毒特异性 抗体。 （） 14.免疫电泳法可用用于抗体成分分析和抗原纯度鉴定。（） 15.任意颗粒性抗原和可溶性抗原均可产生生凝集试验。 16.直接凝集试验中的玻片片法是一一种定量量试验，而而试管法是一一种定性试验。 17.间接凝集抑制反应中一一共用用到三种颗粒分别为：致敏敏颗粒、抗体和载体。 18.SPA 是葡萄球菌的特异性表面面抗原，能与多种哺乳动物 IgG 分子子的 Fab 片片段结合，Fc 片片 段暴暴露露在外，保持抗体活性，当葡萄球菌 SPA-Ab 与相应抗原结合时，可产生生凝集反应。
金黄色葡萄球菌
3
4 5 6
当金黄色葡萄球菌侵入人体时， 该酶使血液或血浆中的纤维蛋白 沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞 噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形 成的感染易局部化与此酶有关。
致病物质：
1
2
血浆凝固酶 溶血毒素 杀白细胞素 肠毒素 表皮剥脱毒素
毒性休克综合征毒 素
3
4 5 6
外毒素，分α 、β、γ 、δ 四种，能 损伤血小板，破坏溶酶体，引起 肌体局部缺血和坏死。
致病物质：
1
2
血浆凝固酶 溶血毒素 杀白细胞素 肠毒素 表皮剥脱毒素
毒性休克综合征毒 素
3
4 5 6
可破坏人的白细胞和巨噬细胞。
致病物质：
1
2
血浆凝固酶 溶血毒素 杀白细胞素 肠毒素 表皮剥脱毒素
毒性休克综合征毒 素
3
4 5 6
金黄色葡萄球菌能产生数种引起 急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素， 分为A、B、C1、C2、C3、D、E 及F八种血清型。肠毒素可耐受 100°C煮沸30分钟而不被破坏。 它引起的食物中毒症状是呕吐和 腹泻。此外，金黄色葡萄球菌还 产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、 脂肪酶、肽酶等。
治疗：
1
对一般的菌株，在患者没有禁忌症的前提下，首选的抗菌药物为青霉素。
目前，绝大多数金葡菌对青霉素耐药。 原因通常是细菌产生青霉素酶，破坏青霉素类抗生素。 据资料显示，95%以上的葡萄球菌已产青霉素酶。
治疗：
1
对一般的菌株，在患者没有禁忌症的前提下，首选的抗菌药物为青霉素。
目前，绝大多数金葡菌对青霉素耐药。 原因通常是细菌产生青霉素酶，破坏青霉素类抗生素。 据资料显示，95%以上的葡萄球菌已产青霉素酶。
致病物质：
1
间接凝集反应
3发生凝集或凝集程度是否都是目测得出的 结果，是否还有其他测定凝集发生或凝集 程度的方法？
1.利用间接凝集抑制试验可以确证呈阳性 反应的间接凝集试验是否是非特异凝集反 应。以本次试验检测的RF为例：首先用待 测血清与IgG反应，再加入RF致敏的胶乳 颗粒，如果出现凝集则说明间接凝集为非 特异凝集（待测血清中无RF）；反之为特 异凝集。
2.利用胶乳凝集实验可进行半定量分析。 检测试剂盒具有一个检测灵敏度。如CRP 检测试剂盒，其校正灵敏度为〈 6mg/L, 超过上述含量即出现肉眼可见的凝集颗粒。 据此可将待检血清进行倍比稀释来进行半 定量分析。如稀释两倍后阳性，则浓度 〉 12mg/L,继续稀释至四倍八倍到不出现凝 集为止。
胶乳颗粒不凝集仍保持均匀胶乳状者为阴性反应。
2 在反应板上用牙签充分混匀后，连续摇动2-3min后，观察比较结果。
乳颗粒具有很强的吸附蛋白质的能力，借 若为乳胶颗粒，则称为乳胶凝集试验；
1胶乳凝集试验方法简便快速，但易发生非特异凝集反应，试分析如何判定实验的非特异凝集反应？
此将抗原（IgG）与胶乳颗粒结合成致敏 以本次试验检测的RF为例：首先用待测血清与IgG反应，再加入RF致敏的胶乳颗粒，如果出现凝集则说明间接凝集为非特异凝集（待
类风湿因子（RF）诊断 2利用本法是否可以进行定量或半定量分析？如何进行？
实验原理 利用胶乳凝集实验可进行半定量分析。
类风湿因子（RF）诊断
4 协同凝集反应
RF是一种抗变性IgG的抗体。聚苯乙烯胶 凝集反应：颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体在一定电解质存在的条件下发生特异性结合并出现肉眼可见的凝集块的现象。
间接凝集反应
基本概念
儿科学精讲肺炎考点考题
《儿科学》精讲复习：肺炎肺炎(pneumonia)是不同病原体或其他因素所致之肺部炎症，以发热、咳嗽、气促、呼吸困难以及肺部固定湿哕音为其共同临床表现。
本病是发展中国家最常见的儿科疾病，也是儿童死亡的第 1 位原因。
据国内 1991 年调查资料表明，肺炎占婴儿死亡率的 23.9%，故加强对本病的防治十分重要。
一、分类由于不能兼顾病因、病理及临床等特点，小儿肺炎至今尚无一种理想的分类方法。
目前常用者包括：(一)病理分类按解剖部位分为：支气管肺炎、大叶性肺炎、间质性肺炎、毛细支气管炎等。
(二)病因分类1.病毒性肺炎经大量研究证实，合胞病毒居首位，其次为腺病毒 3、7、 11、21 型，甲型流感病毒及副流感病毒 l、2、3 型，其他尚有麻疹病毒、肠道病毒、巨细胞病毒等。
2.细菌性肺炎有肺炎链球菌、链球菌、葡萄球菌、革兰阴性杆菌(流感杆菌、肺炎杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等 )及厌氧菌及军团菌等。
3.支原体肺炎肺炎支原体为主。
4.衣原体肺炎沙眼衣原体或肺炎衣原体为主。
5.真菌性肺炎念珠菌、曲菌、隐球菌、组织胞浆菌、球孢子菌等。
6.原虫性肺炎卡氏肺囊虫为主。
7.非感染病因引起的肺炎吸入性肺炎、嗜酸细胞性肺炎、坠积性肺炎等。
(三)病程分类：急性(1 月以内)、迁延性(1~3 月)、慢性(3 月以上)。
(四)病情分类1.轻症呼吸系统症状为主，无全身中毒症状。
2.重症除呼吸系统受累严重外，其他系统亦受累，全身中毒症状明显。
临床上若病原体明确，则以病原体命名，以便指导治疗，否则按病理分类命名。
本节着重讨论支气管肺炎。
二、支气管肺炎支气管肺炎(bronchopneumonia) 是小儿最常见的肺炎。
婴幼儿肺炎住院数为学龄儿童的 39.5 倍。
可能与此期小儿免疫力低下及下呼吸道解剖特点有关。
营养不良、维生素 D 缺乏性佝偻病、低出生体重为婴幼儿肺炎的高危因素。
(一)病因支气管肺炎病原体最常为细菌和病毒，也可由病毒、细菌“混合感染”。
免疫学实验整理
免疫学实验整理一、凝集试验、吞噬试验（一）凝集试验1、直接凝集反应（ABO血型鉴定）2、间接凝集反应（类风湿因子测定）3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验（二）吞噬试验（示教）1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）名解：1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。
如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。
2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。
4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。
5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。
6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer.实验及注意点：1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原）检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。
2、直接凝集反应（ABO血型鉴定）：若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原，为A型血。
协同凝集反应+金葡菌
凝集块（直接凝集反应）
？ ＋已知Ab 一定条件
凝集（有对应Ag） 无凝集（无对应Ag）
② Ag ＋ 金葡菌－Ab 凝集块（协同凝集反应）
？＋金葡菌－已知Ab 一定条件 凝集（有对应Ag）
无凝集（无对应Ag）
（一）1、ABO血型鉴定
直接凝集反应：
颗粒性抗原 + 抗体
RBC
抗A或抗B
凝集块 凝集块
血型 RBC抗原 抗A 抗B
免疫系统（通过产生抗体或效应T细胞）清除异物 的过程
• AD: antigenic determinant of Ag, epitope
• CDR( of Ab ):complementarity determining region，a shape complementary to
corresponding AD
Bilateralis of the ring finger tip
（一）2、血清类风湿因子测定
• 正向间接凝集反应、血球凝集试验：
可溶性Ag－载体 ＋ Ab
凝集
人IgG-红细胞 类风湿因子
（致敏红细胞） （待测）
（半定量）
（效价）
• 效价（滴度）：以出现明显抗原抗体反应
现象（＋＋及以上）的最高稀释度作为待检 抗原（或抗体）的效价，可反应待检物含量。
Ab
Ag
Ab ，游离Ab
Ab
Ag＋Ab → Ag－Ab → Ag、Ab比
(unvisible)
例合适：
Ab Ag Ab
Ag－Ab Ag Ab (visible)
Ab
（凝集或沉淀）
Ag＞＞Ab： Ag Ag ，游离Ag Ab
抗原抗体反应的可见性与抗原抗体比例： （形成可见的大抗原抗体复合物合适条件：）
协同凝集反应+金葡菌
Ab最终稀释度 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 － ++++
4. 现象 ＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋
＋
＋
－ － 1:320
+++
++ ++ +
医学免疫学实验
• 一、凝集试验、吞噬试验 • 二、沉淀试验、溶血反应 • 三、免疫标记技术；
免疫细胞的分离； 细胞免疫功能测定
实验一
• （一）凝集试验 • 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） • 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） • 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验 • （二）吞噬试验（示教）（310室） • 1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬） • 2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）
33
• So, • Titer, 1:320 ( or 320), • Titer, 1:160 ( or 160), • Titer, 1:20 ( or 20),
34
• If Titer ＞ 1:40 (or ＞ 40 ), positive (Ab positive) • If Titer ＜ 1:40 (or ＜ 40 ), negative (Ab negative)
++++
+
Agglutination
(result 3)
deposition
++++ +++ +++ ++ ++ -
-
-
-
1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120
微生物表格
菌属菌种（型）埃希菌属培养特性生化反应】兼性厌氧，营养要求不高2生化反应活泼，发酵多种糖类3IMViC试验结果为++--绝大多数发酵乳糖抗原构造O抗原：菌体抗原>170种，引起IgMH抗原：鞭毛抗原>50种，引起IgGK抗原：荚膜多糖抗原100种以上鉴定大肠杆菌血清型命名法O：K：HO157：K58：H7致病物质1黏附素：菌毛2III型分泌系统3外毒素：肠毒素溶血毒素所致疾病肠道外感染：条件致病菌泌尿系统感染：尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎化脓性感染：腹膜炎、阑尾炎、手术创口感染、败血症、新生儿脑膜炎胃肠炎（腹泻）：致病菌：肠产毒型大肠埃希菌ETEC肠致病型大肠埃希菌EPEC肠出血型大肠埃希菌EHEC肠侵袭型大肠埃希菌EIEC肠集聚型大肠埃希菌EAEC微生物学检查法1标本2分离培养与鉴定肠道外感染肠道内感染血清学鉴定：疑为致病性大肠杆菌需作血清学鉴定防治原则其它致病因素易感人群（6个种，众多型别，少数血清型有致病性，粪便污染的检测指标）肠产毒素型大肠埃希菌（ETEC）肠致病型大肠埃希菌（EPEC）肠毒素（二种）不耐热肠毒素LT加热65°C、30分钟失活耐热肠毒素ST加热100°C、20分钟不失活不产生肠毒素、无侵袭力细菌粘附（小肠）微绒毛绒毛微缩一刷状缘破坏上皮细胞功能受损干扰对肠道内水分的吸收婴幼儿、旅游者婴幼儿肠出血型大肠埃希菌（EHEC）志贺样毒素Stx-1破坏核糖体，阻止蛋白质合成，细胞损伤肠上皮细胞结构破坏-吸收减少，分泌增多Stx-2破坏肾内皮细胞肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）不产生肠毒素侵袭结肠粘膜上皮细胞-组织坏死-炎症较大儿童、成人接种疫苗对饮水和食物的消毒，加热对病人隔离治疗,补充水，维持电解质平衡耐药性非常普遍药敏试验IMViC试验：吲哚（I）、甲基红（M）、VP（V）、枸橼酸盐利用（C）四种试验常用于鉴定肠道杆菌大肠埃希菌“++--”产气肠杆菌“--++”其它血清型：0157：H7主要疾病：5岁以下儿童出血性结肠炎（剧烈腹痛及血便）溶血性尿毒综合征侵犯部位：结肠症状：腹泻、脓血便、里急后重虫媒病毒毒。
肠道细菌
伤寒沙门菌 并发症
小肠
肠系膜淋巴结
肠系膜淋巴结 胆囊
二次菌血症 典型症状 肝、脾、骨髓 内巨噬细胞 初次菌血症
肠热症的发病机制
发病机理 伤寒杆菌随污染的水或食物进入消化道后，一般 可被胃酸杀灭，若入侵病菌数量较多，或胃酸缺 乏时，致病菌可进入小肠，侵入肠粘膜，此时部 分病菌即被巨噬细胞吞噬并在其胞浆内繁殖，部 分则经淋巴管进入回肠集合淋巴结，孤立淋巴滤 泡及肠系膜淋巴结中生长繁殖，然后再由胸导管 进入血流而引起短暂的菌血症，即原发菌血症期， 此阶段病人并无症状，相当于临床上的潜伏期。
肠道细菌
杨X，男，21岁，某酒店餐饮部主任，因高热，食欲不
振，腹部不适，乏力—周入院。 一周前开始发热，午后高达40～41℃，伴腹痛，腹胀便 秘，无恶心、呕吐，不思饮食，全身乏力，曾作上感治 疗，用药不详。 入院检查：T：40.5℃，P：88次/分，R：28次/分，神 清、表情淡漠，消瘦，重听；舌尖红、舌苔黄厚；右胸 前皮肤有数个淡红色皮疹，压之退色。心肺未见异常， 肝肋下1.5cm，剑突下2cm，质软有轻度触痛，脾肋下 2cm。 血常规：WBC：3000/mm3，中性占56%，淋巴占38%， 单核占6%，未见嗜酸细胞， EC直计“0”，入院时血培 养阴性，肥达反应结果：T01：160，THl：80，PA1： 20，PB1：20，入院后第七天再复查肥达氏反应，结果 TO1：640，TH1：640，PA1：20，PB1：20。
微小的乳头状突起，由上皮和上皮下的结缔组织构成 ，腹胀、腹痛，多有便秘；
3、神经系统症状：伤寒内毒素（白细胞数目下降，体温升高）侵犯
中枢神经系统导致表情淡漠、反应迟钝、听力障碍、瞻 妄、昏迷、脑膜刺激征等； 4、循环系统症状：相对缓脉缓脉，一息四至，来去弛缓松懈的脉象。
化脓性球菌的分离鉴定
A群链球菌的防治原则
A群链球菌
主要通过飞沫传播，应对病人和带菌者及时治疗，以减少传染源。另 外，还应对空气、器械和敷料等消毒。对急性咽喉炎和扁桃体的病人， 尤其是儿童，须彻底治疗。以防止急性肾小球炎、风湿热和亚急性细菌 性心内膜炎的发生。首选药物为青霉素G。
葡萄球菌的鉴定
2.生化反应检测
2.1 血浆凝固酶试验
原理：金葡菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中可溶性的纤维 蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，结合型血浆凝固酶附着于细菌 表面，在玻片上形成凝块；游离型的血浆凝固酶则可使试管中 的血浆发生凝固；
方法步骤（玻片法）：在在玻片两端各滴生理盐水1d，取肉 汤培养菌液与生理盐水混匀，在其中一端的菌液中滴加兔血浆 1d混匀，观察结果。因致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可 凝固兔血浆，故如血浆中明显小凝块出现，而生理盐水中无此 现象者为阳性，若血浆中无凝块时为阴性。
A群链球菌的鉴定
3.2 吡咯烷酮试验（PYR）检验方法
原理：特异检验A群链球菌氨基肽酶 方法步骤： • 用PYR缓冲液A液浸润PYR测试条末端滤纸； • 用接种环从适合的琼脂培养基上挑取可疑待测菌落，在末端滤纸上
涂抹开或直接蘸取菌落； • 放置于密闭容器；35℃±2℃，孵育5min~10min； • 滴加一滴PYR缓冲液B液至末端涂抹细菌处，观察是否有红色产生。
化脓性炎症是临床上常见病。但是除了 病原性球菌外，其他微生物也可以引起化脓 性感染。
常见的标本有脓汁、咽拭子、痰液、血 液、脑脊液等。
本次实验以脓汁标本进行病原性球菌的 分离鉴定。
脓汁中病原球菌的查程序
涂片： 革兰氏染色
血琼脂平板 （分离培养）
免疫学实验
免疫学实验整理一、凝集试验、吞噬试验（一）凝集试验1、直接凝集反应（ABO血型鉴定）2、间接凝集反应（类风湿因子测定）3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验（二）吞噬试验（示教）1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）名解：1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。
如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。
2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。
4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。
5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。
6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer.实验及注意点：1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原）检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。
2、直接凝集反应（ABO血型鉴定）：若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原，为A型血。
协同凝集实验报告
一、实验目的本次实验旨在通过协同凝集反应，了解金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白与抗体结合的原理，并掌握协同凝集实验的操作方法。
此外，通过实验验证协同凝集反应在检测微量抗原中的应用价值。
二、实验原理金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白能与人及多种哺乳动物（猪、兔、羊、鼠等）血清中IgG类抗体的Fc段结合。
当IgG的Fc段与SpA结合后，两个Fab段暴露在葡萄球体表面，仍保持其抗体活性和特异性。
当其与特异性抗原相遇时，也出现特异凝集现象。
在本凝集反应中，金黄色葡萄球菌菌体成了IgG抗体的载体，称为协同凝集反应。
本反应也可用于检测微量抗原。
三、实验材料1. 抗原：可溶性伤寒杆菌O抗原；2. 免疫血清：伤寒杆菌0901免疫兔血清；3. 10%CoWan1株金黄色葡萄球菌（含大量蛋白A）的菌液；4. 0.5%甲醛，用PBS配制；5. 吸管、滴管、玻片等。
四、实验方法1. 10%葡萄球菌菌悬液的制备将CoWan1株葡萄球菌接种于柯氏瓶，37℃培养18-24小时。
用PBS洗下菌苔，每分钟2500转速度离心20分钟。
沉淀菌用PBS洗两次后，用0.5%甲醛（用PBS配置）在室温中固定3小时。
置于80℃水浴中4分钟以破坏菌体的自源性分解酶。
再用PBS洗涤2次后配成10%菌悬液。
2. 致敏葡萄球菌取1毫升10%的菌悬液，加入0.1毫升伤寒O抗血清，充分混合。
放入37℃水浴中30分钟（中间需摇动两次）。
取出后经每分钟2500转速度离心20分钟，弃去上清液。
沉淀菌用PBS洗涤2次后配成10%菌悬液。
3. 协同凝集反应将制备好的致敏葡萄球菌与待测抗原混合，置于37℃水浴中30分钟。
取出后观察凝集现象。
五、实验结果在协同凝集反应中，当致敏葡萄球菌与待测抗原混合后，出现明显的凝集现象。
这表明金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白与抗体结合，使抗体与抗原结合，从而出现凝集现象。
六、实验讨论1. 协同凝集反应是一种灵敏、快速、简便的检测微量抗原的方法。
兽医免疫学检测方法
第十八章免疫学检测方法第一节检测抗原抗体的体外方法第二节检测免疫细胞的方法第三节细胞因子的检测第四节分子生物学技术在免疫检测中的应用免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验方法。
随着学科间的相互渗透，免疫学涉及的范围不断扩大，新的免疫学检测方法层出不穷。
免疫学方法的应用范围亦在日益扩大，不仅成为多种临床疾病诊断的重要方法，也为众多学科的研究提供了方便。
本章将从抗原、抗体、免疫细胞和细胞因子检测等方面概括介绍试验的基本类型、原理和主要用途，并对分子生物学技术(分子杂交、转基因、多聚酶链反应)在免疫学领域的应用作一简要介绍。
第一节检测抗原抗体的体外方法抗原与相应抗体相遇可发生特异性结合，并在外界条件的影响下呈现某种反应现象，如凝集或沉淀，藉此可用已知抗原(或抗体)检测未知抗体(或抗原)。
试验所采用的抗体常存在于血清中，因此又称之为血清学反应(serological reaction)。
一、抗原抗体反应的特点(一)抗原抗体结合的特异性抗原借助表面的抗原决定簇与抗体分子超变区在空间构型上的互补，发生特异性结合。
同一抗原分子可具有多种不同的抗原决定簇，若两种不同的抗原分子具有一个或多个相同的抗原决定簇，则与抗体反应时可出现交叉反应(cross reaction)。
(二)抗原抗体结合的可逆性抗原抗体结合除以空间构型互补外，主要以氢键、静电引力、范德华力和疏水键等分子表面的非共价方式结合，结合后形成的复合物在一定条件下可发生解离，回复抗原抗体的游离状态。
解离后的抗原和抗体仍保持原有的性质。
抗原抗体复合物解离度在很大程度上取决于特异性抗体超变区与相应抗原决定簇三维空间构型的互补程度，互补程度越高，分子间距越小，作用力越大，两者结合越牢固，不易解离；反之，则容易发生解离。
(三)抗原抗体结合的比例性与结合物的可见性抗原与抗体的结合能否出现肉眼可见的反应，取决于两者的比例。
凝集反应试验
1900，Netley陆军医学院卫生助理教授 W. H. HORROCKS 发表的一篇“关于凝集试验作为大肠杆 菌生物分类诊断手段的价值”一文：文中对来自污染 高地表面的饮用水进行细菌学检查，文中也记载了 当时应用这个方法的诸多困难
最早的微生物诊断手段
1950，LAVERGNE 发表的一篇关于“通过丝氨酸血 清协同凝集布鲁杆菌”一文
原理：金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白（staphylocooccal protein A,SPA）能与人及多种哺乳动物（猪、兔、羊、鼠等）血清 中IgG类抗体的Fc段结合。当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为 抗体致敏的载体颗粒，若与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应
应用：可用于细菌、病毒、毒素及各种可溶性抗原的检测 特点：特异性及敏感性均较高，是目前用于快速诊断,微生物定群或
分型的一种新近发展起来的敏感而简便的方法
IgG的Fc段与SpA结合后，两个Fab段暴露在葡萄球体表面，仍保持其抗体 活性和特异性。当其与特异性抗原相遇时，会出现特异凝集现象。在本凝 集反应中，金黄色葡萄球菌菌体成了IgG抗体的载体，称为协同凝集反应。
红细胞凝集指红细胞凝集的现象。由病毒、细胞凝 集素和抗体而引起的红细胞凝集。
操作时，将待检血清用生理盐水连续成倍稀释，然后加入等量抗原，抗原抗体结合出 现明显可见反应的最大血清稀释度称为效价，又称滴度。以表示血清中抗体的相对含 量。
将可溶性抗原（或抗体）先吸附或偶联在与免疫无关、 大小适当的颗粒性载体的表面，使之成为致敏载体颗 粒，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜的电解 质存在条件下，出现特异性凝集的现象
通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来 检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。
金葡菌革兰染色镜下观察描述
金葡菌革兰染色镜下观察描述
金葡菌是一种常见的革兰染色菌，通过显微镜下的观察可以看到它们的特征。
在革兰染色镜下观察金葡菌时，我们可以清晰地看到它们的形态和结构。
金葡菌是一种球状细菌，通常呈现出单个细胞的形态。
它们的大小相对较小，呈现出直径约为0.5到1微米的球状。
金葡菌的细胞壁是革兰染色的一个重要特征。
革兰染色是一种以细胞壁分子成分为基础的染色方法，它可以将细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类。
金葡菌是革兰阳性细菌，这意味着它们的细胞壁较厚，可以显现出紫色或紫红色。
金葡菌的细胞膜也是观察时的一个重要特征。
细胞膜是细菌细胞内外环境的分界线，它可以控制物质的进出。
在革兰染色镜下观察金葡菌时，我们可以看到细胞膜的存在，它呈现出透明或淡黄色。
金葡菌的细胞核是它们生命活动的控制中心。
在显微镜下观察，我们可以看到金葡菌的细胞核位于细胞的中心，呈现出一个较小的圆形结构。
细胞核内含有菌体的遗传物质DNA，它能够控制菌体的生长和繁殖。
总的来说，通过革兰染色镜下观察金葡菌，我们可以看到它们的球状形态、革兰阳性的细胞壁、透明的细胞膜和位于中心的细胞核。
这些观察结果为我们深入了解金葡菌的结构和功能提供了重要的线
索。
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完全溶血 环
不溶血
名称
类别
溶血
甲型溶血性链 球菌
乙型溶血性链
溶血
球菌
溶血性链球菌
丙型链球菌 不溶血性链球
菌
致病性 多为条件致
病菌 致病力强
无致病性
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第33页
2）抗原结构分类
据链球菌细胞壁中抗原结构（C多糖 抗原）不一样,利用血清学方法分成A～ V 20群。对人致病链球菌菌株，90%左 右属A群，其它群少见。
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第43页
2）外毒素类
(1)致热外毒素（pyrogenic exotoxin） 是人类猩红热主要毒性物质。致热外毒
素抗原性强，含有超抗原作用，对兔有致热 性和致死性。
(2)链球菌溶素（streptolysin） 溶解红细胞、破坏白细胞和血小板。 A族链球菌可分为两种溶血素（hemolysin）： 链球菌溶素O（SLO）：对哺乳动物多 种细胞有毒性作用
协同凝集试验（coagglutination） 用于各种微生物抗原检测。
S.aureus
Ab
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第11页
5.分类
1)据色素、生化反应
金黄色葡萄球菌（S. aureus） 表皮葡萄球菌（S. epidermidis） 腐生葡萄球菌（S. saprophyticus）
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第12页
三种葡萄球菌判别主要性状
性状
菌落色素 凝固酶 葡萄糖 甘露醇 溶血素
耐热核酸酶 A蛋白
磷壁酸类型 噬菌体分型
致病性
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金葡菌
金黄色 + + + + + +
免疫学检验知识点整理(第一部分)
【免疫学检验】知识点整理（第一部分）概论+抗原抗体反应1免疫学基本概念及其生物学功能；免疫：机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能免疫三大功能：免疫防御、免疫自稳、免疫监视中枢免疫器官（骨髓和胸腺）外周免疫器官（淋巴结、脾脏、扁桃体）免疫细胞：淋巴细胞（T, B, NK）、单核巨噬细胞、其他免疫应答细胞（中性粒、嗜酸性、嗜碱性和肥大细胞）免疫分子：免疫球蛋白（IgM，IgG，IgA，IgE，IgD ），补体，细胞因子，细胞黏附分子，人类白细胞分化抗原免疫应答：机体免疫系统接受抗原刺激发生的一系列反应，并以排出或分解该抗原为目的的反应过程。
过程：抗原的识别、处理、信息传递（识别阶段），免疫细胞的激活、增殖、分化（活化阶段）以及产生一系列的免疫效应因子（效应阶段）。
临床免疫学检验：研究免疫学检测理论、技术、应用，免疫疾病发病机制、免疫诊断、及防治的一门医学领域的应用学科。
免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应，免疫学技术有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应和标记免疫反应五种类型。
免疫检验：1 ）利用免疫检测原理和技术检测免疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因子、细胞黏附分子等免疫相关物质；2）体液中的微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素。
临床免疫学：利用免疫学理论和技术研究疾病的免疫病理机制、诊断和鉴别诊断、疗效评价、预后判断和预防的多个分支学科的总称。
免疫性疾病：各种原因引起的机体免疫应答异常所致的疾病，包括超敏反应性疾病、自身免疫病、免疫缺陷病和免疫增生病。
感染免疫学：研究病原微生物与宿主相互关系从而控制感染的学科，传统免疫学核心。
肿瘤免疫学：研究肿瘤免疫原性、机体抗肿瘤的免疫效应及机体的免疫功能与肿瘤发生、发展的相互关系以及肿瘤免疫诊断与防治的学科。
移植免疫学：研究移植物与宿主相互关系从而选择移植物和延长移植物存活的学科。
2血清学反应的概念；抗体主要存在于血清中，体外的抗原抗体反应称为血清学反应。
金葡菌
4. 肠毒素（enterotoxin）：引起急性胃肠炎（食物中毒）
5. 表皮剥脱毒素（exfoliative toxin）：裂解表皮组织棘状 颗粒层，导致表皮与真皮脱离 6. 毒性休克综合征毒素-1（TSST-1）：引起中毒性休克
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus)
（二）所致疾病： 1. 侵袭性疾病：化脓性感染
2. 毒素性疾病
（1）食物中毒 （2）烫伤样皮肤综合征 （3）毒性休克综合征 3. 葡萄球菌性肠炎（假膜性肠炎）
Staphylococcal Scalded Skin Syndrome
(三) 免疫性：无牢固免疫力
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus)
三. 微生物学检查 标本分离培养鉴定 凝固酶试验 甘露醇分解试验 食物中毒检测：动物（6~8周幼猫）试验 四. 防治原则
防止医源性感染。
根据药物敏感试验结果，选用敏感抗生素
（四）抗原结构： 1. 葡萄球菌表面蛋白A（staphylococcal protein A，SPA） SPA是葡萄球菌细胞壁中的一种表面蛋白，可与人类IgG抗 体的 Fc段非特异性结合，增强细菌抗吞噬细胞的吞噬作用 2. 多糖抗原
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus)
（五）分类依据 1. 色素（pigment）：分为金黄色、表皮及 腐生葡萄球菌 2. 凝固酶（coagulase）：凝固酶阳性与阴性葡萄球菌 （六）抵抗力：强于其它无芽孢菌，易产生耐药性变异
金黄色葡萄球菌
表皮葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus)
二. 致病性与免疫性
（一）致病物质： 1. 凝固酶（coagulase）：促血浆凝固
凝集反应
凝集反应[单项选择题]1、用免疫学方法确定女性是否妊娠的方法属于（）A.直接凝集试验B.双向琼脂扩散C.单向琼脂扩散D.间接凝集试验E.间接凝集抑制实验参考答案：E[单项选择题]2、下列有关SPA的特点正确是（）A.SPA可与IgG的Fab和Fc段非特异结合B.SPA可与IgG的Fab段非特异结合，Fc段不受影响C.SPA可与IgG的Fc段非特异结合，Fab段不受影响D.SPA可与IgG的F（ab＇）段非特异结合E.SPA可与IgG的Fab和Fc段都不结合参考答案：C参考解析：葡萄球菌A蛋白质（SPA）一个分子内有4个相似的活性部位，能与人及多种哺乳动物（猪、兔、豚鼠等）血清中IgG类抗体的Fc段非特异性结合。
IgG的Fc段与SPA结合后，两个Fab段暴露在葡萄球菌菌体表面，仍保持其结合抗原的活性和特异性，当其与特异性抗原相遇时，能出现特异的凝集现象。
考点：间接凝集反应[单项选择题]3、用于检测抗溶血素O的方法属于（）A.直接凝集试验B.双向琼脂扩散C.单向琼脂扩散D.明胶凝集试验E.胶乳凝集试验参考答案：E参考解析：间接凝集反应可用于检测细菌、病毒和寄生虫等感染后产生的抗体，例如间接凝集试验或明胶颗粒凝集试验用于检测抗人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体以诊断艾滋病，胶乳凝集试验用于检测抗溶血素O等。
考点：间接凝集反应[单项选择题]4、间接凝集试验常用的载体是（）A.胶乳颗粒B.红细胞C.明胶颗粒D.以上都对E.以上都不对参考答案：D参考解析：间接凝集反应适用于各种抗体和可溶性抗原的检测。
以载体来分，常用的为红细胞、胶乳颗粒及明胶颗粒等。
考点：间接凝集反应[单项选择题]5、协同凝集试验与间接凝集试验的区别在于（）A.载体上包被的抗原不同B.前者只能包被抗原，后者包被抗原或抗体均可C.前者的载体颗粒只能是聚苯乙烯胶乳，而后者可以多种不同性质的材料作为载体D.前者是利用金黄色葡萄球菌细胞壁中的SPA具有与IgG的Fc段结合的特性而“标记”上抗体，而后者是用理化方法将抗原或抗体结合于载体颗粒表面E.载体上包被的抗体不同参考答案：D参考解析：协同凝集试验是指：葡萄球菌A蛋白质（SPA）能与人及多种哺乳动物（猪、兔、豚鼠等）血清中IgG类抗体的Fc段非特异性结合。
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可溶性Ag－载体 ＋ Ab → 凝集块（间接凝集反应） （细胞、细菌等） （正向间接凝集反应） 可溶性Ag ＋ 载体－Ab → 凝集块（反向间接凝集反应）
Ag ＋ 金葡菌－Ab
（致敏载体?）
凝集块（协同凝集反应）
（3）凝集试验检测原理 ①颗粒性Ag＋Ab
一定条件
凝集块（直接凝集反应）
凝集（有对应Ag）
？ ＋已知Ab
一定条件
无凝集（无对应Ag）
② Ag ＋ 金葡菌－Ab ？＋金葡菌－已知Ab
凝集块（协同凝集反应）
一定条件
凝集（有对应Ag） 无凝集（无对应Ag）
（一）1、ABO血型鉴定
直接凝集反应： 颗粒性抗原 + 抗体 RBC 抗A或抗B 凝集块 凝集块
血型 A B AB O
RBC抗原 A抗原 B抗原 有 A、 B 无 A、 B
抗原抗体反应的可见性与抗原抗体比例： （形成可见的大抗原抗体复合物合适条件：）
Ab
Ag＜＜Ab：
Ag
Ab Ab Ag
Ab
，游离Ab
Ab Ag Ab
Ag＋Ab → Ag－Ab →
(unvisible)
Ag、Ab比 例合适：
Ag－Ab Ab
(visible)
（凝集或沉淀） Ag
Ag＞＞Ab：
Ag Ab
50ul
1:20 1:40
50
1:80
50
1:160
50
50
50
50
弃去50
1:320 1:640 1:1280 1:2560
1.稀释液
50μl
50
50
50
50
50
50
50
2.待检血清 50 （1：10） （Ab?） 1:20 3. 加Ag 50μl
50ul +ve 50ul 弃去50
1:40
1:80
Antigen added
9
【凝集反应】：
（1）概念：
Ab Ag Ab Ag Ab（凝集块）
颗粒性Ag＋Ab →
（细菌、细胞）
Ag－Ab
Ab
（凝集反应）
Ag
可溶性Ag＋Ab →
（蛋白质、多糖）
Ab
Ab Ag
Ag－Ab Ab
（沉淀物） （沉淀反应）
（2）类型
颗粒性Ag＋Ab
一定条件
凝集块（直接凝集反应）
医学免疫学实验
• 一、凝集试验 吞噬试验 • 二、沉淀试验 溶血反应 • 三、免疫标记技术； 免疫细胞的分离； 细胞免疫功能测定
实验一
• （一）凝集试验 • 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） • 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） • 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验 • （二）吞噬试验（示教）（310室） • 1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬） • 2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）
（致敏红细胞） （待测） （半定量） （效价）
• 效价（滴度）：以出现明显抗原抗体反应
现象（＋＋及以上）的最高稀释度作为待检 抗原（或抗体）的效价，可反应待检物含量。
9 10
1.稀释液 2.待检血清 （1：10） （Ab?） Ab稀释度
50μl 50ul
50
50
50
50
50
50
50
50ul +ve 50ul
1:160
1:320
1:640
1:1280
1:2560
50 1:80
＋＋＋
50 1:160
＋＋
50
50
50
50
50
50ul 50 － ++++ 1:320 1:160 1:40 ＜ 1:40
Ab最终稀释度 1:40
1:320 1:640 1:1280 1:2560 5120
＋＋ ＋ ＋ － －
4. 现象
＋＋＋＋
+++ ＋＋
++ ＋ -
++ ＋ -
+
－ -
－ -
－ -
－ -
－ -
+
5. 效价＞1：40，判断待检标本为抗体（类风湿因子）阳性；否则阴性 （效价）
可能结果1：
第1孔 2 3 4 5 6 7 8 9 10
++++
+++
+++
++
++
+
-
-
-
++++
Result 1:
1 2 3 4 5 6 7 8
抗A
＋ －
抗B
－ ＋
＋
－
＋
－
实验步骤：
• • • • • • 1、制备红细胞悬液。 2、加抗A或抗B。 3、加红细胞悬液。 4、结果观察。 （2人/组）
Bilateralis of the ring finger tip
（一）2、血清类风湿因子测定
• 正向间接凝集反应、血球凝集试验：
可溶性Ag－载体 ＋ Ab 凝集 人IgG-红细胞 类风湿因子
，游离Ag
(Visible)
Ab excess Equivalence – Lattice formation
Ag excess
8
Free antigen Free antibody
+
-
+ -
Immune complex
Antibody excess zone
Equivalence zone
Antigen excess zone
• 一、 抗原抗体的检测→凝集试验 • 二、 免疫细胞数量、功能的检测
→吞噬试验
• 三、其他，如细胞因子的检测
如何检测抗原或抗体？（基本原则）
抗原 ＋ 抗体 抗原抗体反应现象
（抗原抗体结合反应的高度特异性）
有现象
（有相应抗原） （无相应 抗原）
？
＋ 抗体
无现象
抗原
+
?
有反应现象 （有相应 抗体) 无反应现象 （无相应抗体）
-ve +ve control control 9 10
++++
+++
+++
++
++
+
—
—
—
++++
Agglutination
deposition
++++
+++
+++
++
++
+
—
—
—
++++
standards to judge agglutination:
++++ all the red blood cells agglutinate +++ most red blood cells agglutinate ++ half red blood cells agglutinate no agglutination
all, agg. most, agg. half, agg. few, agg. no agglutination
++++
+++
++
+
-
all, agg.
most, agg.
half, agg.
few, agg.
no agglutination
++++ （ +++ ）
+++ （ ++
• （一）凝集试验 • 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） • 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） • 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验
（什么是凝集试验或直接、间接、协同凝集试验？）
免疫学检测技术
• 利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子 （抗体、补体、细胞因子和粘附分子等） 及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。