(协同凝集反应) +金葡菌
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all, agg. most, agg. half, agg. few, agg. no agglutination
++++
+++
++
+
-
all, agg.
most, agg.
half, agg.
few, agg.
no agglutination
++++ （ +++ ）
+++ （ ++
医学免疫学实验
• 一、凝集试验 吞噬试验 • 二、沉淀试验 溶血反应 • 三、免疫标记技术； 免疫细胞的分离； 细胞免疫功能测定
实验一
• （一）凝集试验 • 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） • 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） • 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验 • （二）吞噬试验（示教）（310室） • 1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬） • 2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）
？ ＋已知Ab
一定条件
无凝集（无对应Ag）
② Ag ＋ 金葡菌－Ab ？＋金葡菌－已知Ab
凝集块（协同凝集反应）
一定条件
凝集（有对应Ag） 无凝集（无对应Ag）
（一）1、ABO血型鉴定
直接凝集反应： 颗粒性抗原 + 抗体 RBC 抗A或抗B 凝集块 凝集块
血型 A B AB O
RBC抗原 A抗原 B抗原 有 A、 B 无 A、 B
可溶性Ag－载体 ＋ Ab → 凝集块（间接凝集反应） （细胞、细菌等） （正向间接凝集反应） 可溶性Ag ＋ 载体－Ab → 凝集块（反向间接凝集反应）
Ag ＋ 金葡菌－Ab
（致敏载体?）
凝集块（协同凝集反应）
（3）凝集试验检测原理 ①颗粒性Ag＋Ab
一定条件
凝集块（直接凝集反应）
凝集（有对应Ag）
Antigen added
9
【凝集反应】：
（1）概念：
Ab Ag Ab Ag Ab（凝集块）
颗粒性Ag＋Ab →
（细菌、细胞）
Ag－Ab
Ab
（凝集反应）
Ag
可溶性Ag＋Ab →
（蛋白质、多糖）
Ab
Ab Ag
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Ag－Ab Ab
（沉淀物） （沉淀反应）
（2）类型
颗粒性Ag＋Ab
一定条件
凝集块（直接凝集反应）
，游离Ag
(Visible)
Ab excess Equivalence – Lattice formation
Ag excess
8
Free antigen Free antibody
+
-
+ -
Immune complex
Antibody excess zone
Equivalence zone
Antigen excess zone
抗原抗体反应的可见性与抗原抗体比例： （形成可见的大抗原抗体复合物合适条件：）
Ab
Ag＜＜Ab：
Ag
Ab Ab Ag
Ab
，游离Ab
Ab Ag Ab
Ag＋Ab → Ag－Ab →
(unvisible)
Ag、Ab比 例合适：
Ag－Ab Ab
(visible)
（凝集或沉淀） Ag
Ag＞＞Ab：
Ag Ab
＋＋＋＋
+++ ＋＋
++ ＋ -
++ ＋ -
+
－ -
－ -
－ -
－ -
－ -
+
5. 效价＞1：40，判断待检标本为抗体（类风湿因子）阳性；否则阴性 （效价）
可能结果1：
第1孔 2 3 4 5 6 7 8 9 10
++++
+++
+++
++
++
+
-
-
-
++++
Result 1:
1 2 3 4 5 6 7 8
1:160
1:320
1:640
1:1280
1:2560
50 1:80
＋＋＋
50 1:160
＋＋
50
50
50
50
50
50ul 50 － ++++ 1:320 1:160 1:40 ＜ 1:40
Ab最终稀释度 1:40
1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120
＋＋ ＋ ＋ － －
4. 现象
-ve +ve control control 9 10
++++
+++
+++
++
++
+
—
—
—
++++
Agglutination
deposition
++++
+++
+++
++
++
+
—
—
—
++++
standards to judge agglutination:
++++ all the red blood cells agglutinate +++ most red blood cells agglutinate ++ half red blood cells agglutinate no agglutination
• （一）凝集试验 • 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） • 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） • 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验
（什么是凝集试验或直接、间接、协同凝集试验？）
免疫学检测技术
• 利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子 （抗体、补体、细胞因子和粘附分子等） 及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。
抗A
＋ －
抗B
－ ＋
＋
－
＋
－
实验步骤：
• • • • • • 1、制备红细胞悬液。 2、加抗A或抗B。 3、加红细胞悬液。 4、结果观察。 （2人/组）
Bilateralis of the ring finger tip
（一）2、血清类风湿因子测定
• 正向间接凝集反应、血球凝集试验：
可溶性Ag－载体 ＋ Ab 凝集 人IgG-红细胞 类风湿因子
50ul
1:20 1:40
50
1:80
50
1:160
50
50
50
50
弃去50
1:320 1:640 1:1280 1:2560
1.稀释液
50μl
50
50
50
50
50
50
50
2.待检血清 50 （1：10） （Ab?） 1:20 3. 加Ag 50μl
50ul +ve 50ul 弃去50
1:40
1:80
（致敏红细胞） （待测） （半定量） （效价）
• 效价（滴度）：以出现明显抗原抗体反应
现象（＋＋及以上）的最高稀释度作为待检 抗原（或抗体）的效价，可反应待检物含量。
9 10
1.稀释液 2.待检血清 （1：10） （Ab?） Ab稀释度
50μl 50ul
50
50
50
50
50
50
50
50ul +ve 50ul
• 一、 抗原抗体的检测→凝集试验 • 二、 免疫细胞数量、功能的检测
→吞噬试验
• 三、其他，如细胞因子的检测
如何检测抗原或抗体？（基本原则）
抗原 ＋ 抗体 抗原抗体反应现象
（抗原抗体结合反应的高度特异性）
有现象
（有相应抗原） （无相应 抗原）
？
＋ 抗体
无现象
抗原
+
?
有反应现象 （有相应 抗体) 无反应现象 （无相应抗体）
++++
+++
++
+
-
all, agg.
most, agg.
half, agg.
few, agg.
no agglutination
++++ （ +++ ）
+++ （ ++
医学免疫学实验
• 一、凝集试验 吞噬试验 • 二、沉淀试验 溶血反应 • 三、免疫标记技术； 免疫细胞的分离； 细胞免疫功能测定
实验一
• （一）凝集试验 • 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） • 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） • 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验 • （二）吞噬试验（示教）（310室） • 1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬） • 2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）
？ ＋已知Ab
一定条件
无凝集（无对应Ag）
② Ag ＋ 金葡菌－Ab ？＋金葡菌－已知Ab
凝集块（协同凝集反应）
一定条件
凝集（有对应Ag） 无凝集（无对应Ag）
（一）1、ABO血型鉴定
直接凝集反应： 颗粒性抗原 + 抗体 RBC 抗A或抗B 凝集块 凝集块
血型 A B AB O
RBC抗原 A抗原 B抗原 有 A、 B 无 A、 B
可溶性Ag－载体 ＋ Ab → 凝集块（间接凝集反应） （细胞、细菌等） （正向间接凝集反应） 可溶性Ag ＋ 载体－Ab → 凝集块（反向间接凝集反应）
Ag ＋ 金葡菌－Ab
（致敏载体?）
凝集块（协同凝集反应）
（3）凝集试验检测原理 ①颗粒性Ag＋Ab
一定条件
凝集块（直接凝集反应）
凝集（有对应Ag）
Antigen added
9
【凝集反应】：
（1）概念：
Ab Ag Ab Ag Ab（凝集块）
颗粒性Ag＋Ab →
（细菌、细胞）
Ag－Ab
Ab
（凝集反应）
Ag
可溶性Ag＋Ab →
（蛋白质、多糖）
Ab
Ab Ag
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Ag－Ab Ab
（沉淀物） （沉淀反应）
（2）类型
颗粒性Ag＋Ab
一定条件
凝集块（直接凝集反应）
，游离Ag
(Visible)
Ab excess Equivalence – Lattice formation
Ag excess
8
Free antigen Free antibody
+
-
+ -
Immune complex
Antibody excess zone
Equivalence zone
Antigen excess zone
抗原抗体反应的可见性与抗原抗体比例： （形成可见的大抗原抗体复合物合适条件：）
Ab
Ag＜＜Ab：
Ag
Ab Ab Ag
Ab
，游离Ab
Ab Ag Ab
Ag＋Ab → Ag－Ab →
(unvisible)
Ag、Ab比 例合适：
Ag－Ab Ab
(visible)
（凝集或沉淀） Ag
Ag＞＞Ab：
Ag Ab
＋＋＋＋
+++ ＋＋
++ ＋ -
++ ＋ -
+
－ -
－ -
－ -
－ -
－ -
+
5. 效价＞1：40，判断待检标本为抗体（类风湿因子）阳性；否则阴性 （效价）
可能结果1：
第1孔 2 3 4 5 6 7 8 9 10
++++
+++
+++
++
++
+
-
-
-
++++
Result 1:
1 2 3 4 5 6 7 8
1:160
1:320
1:640
1:1280
1:2560
50 1:80
＋＋＋
50 1:160
＋＋
50
50
50
50
50
50ul 50 － ++++ 1:320 1:160 1:40 ＜ 1:40
Ab最终稀释度 1:40
1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120
＋＋ ＋ ＋ － －
4. 现象
-ve +ve control control 9 10
++++
+++
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++
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—
—
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Agglutination
deposition
++++
+++
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++
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—
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++++
standards to judge agglutination:
++++ all the red blood cells agglutinate +++ most red blood cells agglutinate ++ half red blood cells agglutinate no agglutination
• （一）凝集试验 • 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） • 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） • 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验
（什么是凝集试验或直接、间接、协同凝集试验？）
免疫学检测技术
• 利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子 （抗体、补体、细胞因子和粘附分子等） 及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。
抗A
＋ －
抗B
－ ＋
＋
－
＋
－
实验步骤：
• • • • • • 1、制备红细胞悬液。 2、加抗A或抗B。 3、加红细胞悬液。 4、结果观察。 （2人/组）
Bilateralis of the ring finger tip
（一）2、血清类风湿因子测定
• 正向间接凝集反应、血球凝集试验：
可溶性Ag－载体 ＋ Ab 凝集 人IgG-红细胞 类风湿因子
50ul
1:20 1:40
50
1:80
50
1:160
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50
50
50
弃去50
1:320 1:640 1:1280 1:2560
1.稀释液
50μl
50
50
50
50
50
50
50
2.待检血清 50 （1：10） （Ab?） 1:20 3. 加Ag 50μl
50ul +ve 50ul 弃去50
1:40
1:80
（致敏红细胞） （待测） （半定量） （效价）
• 效价（滴度）：以出现明显抗原抗体反应
现象（＋＋及以上）的最高稀释度作为待检 抗原（或抗体）的效价，可反应待检物含量。
9 10
1.稀释液 2.待检血清 （1：10） （Ab?） Ab稀释度
50μl 50ul
50
50
50
50
50
50
50
50ul +ve 50ul
• 一、 抗原抗体的检测→凝集试验 • 二、 免疫细胞数量、功能的检测
→吞噬试验
• 三、其他，如细胞因子的检测
如何检测抗原或抗体？（基本原则）
抗原 ＋ 抗体 抗原抗体反应现象
（抗原抗体结合反应的高度特异性）
有现象
（有相应抗原） （无相应 抗原）
？
＋ 抗体
无现象
抗原
+
?
有反应现象 （有相应 抗体) 无反应现象 （无相应抗体）