菌种保存实验过程

菌种保存

一、保存时间：2014.3.2

二、待保存菌种：

KJNN-6(400mg/L)、KJSN-3(400mg/L)、KJNN-1(400mg/L)、KJSW-4(350mg/L)、KJNN-4(400mg/L)、KJNN-3(400mg/L)、KJNN-2(白)(400mg/L)、KJSW-5(350mg/L)、KJSN-2(400mg/L)、KJNN-5(400mg/L)、KJSW-7(350mg/L)、KJSW-2(400mg/L)、LJX1、KJSW-3(350mg/L)、KJSN-1(400mg/L)、KJSW-8(400mg/L)

三、保存材料与工具：50%甘油、EP管、镊子、试剂盒等

四、保存菌种原理

①由于纯甘油十分粘稠，很难定量，一般配成终浓度50% 的水溶液，高压灭菌后室温保存即可。使用时按50% 甘油:菌液= 1:1 混合均匀，然后迅速冻结。

②加甘油是为了避免水结冰产生冰晶损伤细菌

③细菌具有容易变异的特性，在保存过程中需使细菌的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定时间内使其不发生变异而又保持生活能力。低温、干燥和隔绝空气是使细菌代谢能力降低的重要因素。

五、保存菌种步骤：

①将待使用的镊子、EP管、枪头放入高压灭菌锅灭菌

②在超净工作台将待保存的菌种、实用工具紫外表面灭菌

③用酒精清洁完手后，在酒精灯上灼烧镊子消毒

④用镊子取10支EP管于试剂盒（防止碰到EP管口）

⑤用移液枪取500μL50%甘油于EP管，另取500μL菌种于EP管

⑥将EP管取出（防止碰到EP管口）盖好盖子，盖上写明菌种类型及保存人,震荡均匀后装袋

⑦将记录菌种类型、保存人、日期的字条放入小袋中

⑧所有菌种袋装入一个大袋中进行统一保存，贴上标签，写明类别并置于-20℃冰箱保存

（注意：操作过程中手及衣袖不要在试剂盒上EP管上晃动）

六、后期检测方法

一定时间后（如三个月），取出一套冻存菌种,37℃水浴中快速解冻,然后进行平板划线将菌种复苏,检测细菌的存活情况,并观察菌落形态、菌体形态,检测有关生化指标,比较各菌株的生物学特性是否发生变化。

七、预期结果

观察在存活期内,各菌株的形态、染色特性、生化反应等均无明显变化,也就是说这些菌在保存期内未发生变异。