蚂蟥不同月龄口器组织学及组织化学研究

蚂蟥不同月龄口器组织学及组织化学研究

[摘要] 利用石蜡切片、HE及AB-PAS染色法研究不同月龄蚂蟥口器组织结构的变化。结果显示1～3月龄口径与口宽增加幅度较小，分别为0.6，0.3 mm；3～4月龄增幅最大，为1.2 mm；4～6月龄口径、口宽达到最大值，基本不再增加。口唇位于口部最前端的外缘，外被薄的保护膜，随着生长口膜上皮细胞由立方上皮细胞到柱状细胞再到长

柱状细胞。口腔深处共有3个颚，较大1个居背面，另外2个较小的分居左右腹侧，与肌肉质的咽相连，颚从外到内由角质层、上皮细胞层、肌层、颚腔组成，颚上均存在具有分泌酸性颗粒的乳突，从2月龄开始存在大量酸性颗粒状物质；口腔由内向外由黏膜层、黏膜下层、肌层组成，周围有着丰富的围口神经。咽由内向外由黏膜层、肌层、浆膜层构成，黏膜褶皱随生长增高增厚，黏膜上皮由复扁平上皮变为柱状上皮，肌层发达且随着生长逐渐增厚，4月龄厚度最大。蚂蟥黏液细胞主要由管状、梨状2种形态4种着色类型构成，不同时期AB-PAS染色变化不大，口唇1月龄黏液细胞少，2，3月龄黏液细胞增多且主要为Ⅱ型黏液细胞，口腔中含有较多Ⅰ型黏液腺细胞，咽部肌层下的结缔组织层分布着较少的Ⅱ型黏液细胞。

[关键词] 蚂蟥；口器；组织学；组织化学

蚂蟥Whitmania pigra Whitman，又称宽体金线蛭，在分类上隶属于环节动物门Annelida蛭纲Hirudinea无吻蛭目Arhynchobdellida黄蛭科Haemopidae[1]，该种为《中国药典》（2010年版）药材水蛭的基原动物之一[2]，也是我国水蛭药材市场的主流品种。近年来随着水蛭药材的短缺和药品价格的不断攀升，蚂蟥人工养殖日趋受到重视、取得初步成功并进行了一定规模的推广，但由于蚂蟥目前还没有专属配合饲料，极大程度地限制了蚂蟥的规模化发展。

蚂蟥口器与其食性及食物规格关系密切，但目前对蚂蟥的研究多侧重在药理和生理方面[3-9]，有关蚂蟥口器的基础研究还未见报道。本研究拟针对不同月龄蚂蟥口器的组织和组织化学进行研究，在补充和完善蚂蟥生物学资料的基础上，为蚂蟥人工饲料的研究和生产提供理论指导。

1 材料

蚂蟥卵茧采自江苏宝应水蛭养殖基地，并经郭巧生教授鉴定为黄蛭科动物蚂蟥W. pigra的卵茧。蚂蟥自6月份孵化出茧后每个月末取样1次，直至11月份收获为止，每阶段取样10条。6月份记做1月龄，7月份记做2月龄，以此类推。

2 方法

将采集的蚂蟥放在10%乙醇中10 min，待其昏迷并舒展

身体后，分别测量其口径、口宽，取其口器用Bouin氏液固定，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片（厚度 5 μm），伊红-苏木精（HE）染色，AB-PAS法染色，中性树胶封片。观察蚂蟥口器发育情况，OLYMPUS BX-51显微镜观察并拍照。

3 结果与分析

3.1 口径变化

从蚂蟥口径、口宽变化趋势图中可以看出，1月龄口径、口宽分别为（0.43±0.01），（0.24±0.04）mm。2月龄口径、口宽分别为（0.59±0.01），（0.35±0.03）mm。3月龄口径、口宽分别为（1.03±0.01），（0.55±0.02）mm。4月龄口径、口宽分别为（2.24±0.23），（1.79±0.09）mm。5月龄口径、口宽分别为（2.42±0.14），（1.83±0.24）mm。6月龄口径、口宽分别为（2.48±0.25），（1.91±0.08）mm。1～3月龄口径与口宽增加幅度较小，3～4月龄增幅最大，4～6月龄口径、口宽达到最大值，基本不再增加（图1）。

3.2 口咽部黏液细胞类型

根据AB-PAS黏液细胞染色结果，将蚂蟥口部

根据蚂蟥黏液细胞的形状将黏液细胞分为梨形黏液细

胞和管状黏液细胞。所有的蛭类都有梨形腺[1]，蚂蟥中的梨形腺细胞较大，由表皮细胞转化而成，分布于表皮细胞下层，体积较大，球形或梨形，细胞基部有细胞核等细胞器，其分

泌颗粒含有酸性粘多糖。管状腺细胞深入到肌肉层，其下端为一圆形较小的基部，上端有一特长的长管，通过表皮细胞之间开口于体表（图2）。

3.3 不同月龄蚂蟥口器组织学及组织化学

3.3.1 口唇部口唇位于口部最前端的外缘，外被保护膜，口的周围有口膜。1月龄口唇部保护膜不明显，口膜上皮细胞排列紧密，为立方上皮细胞，细胞核位于细胞基底部，上皮组织下层为疏松结缔组织（图3-1）。2月龄保护膜清晰呈紫红色，口膜上皮细胞变为柱状细胞，上皮细胞下分泌细胞紧密排列（图3-2）。3月龄上皮细胞变为长柱状细胞，结缔组织增厚（图3-3）。4，5，6月龄口唇组织结构变化不大（图3-4，3-5，3-6）。

1月龄口唇黏液细胞较少，仅零星分布在疏松结缔组织层，呈蓝色（Ⅱ型黏液细胞）（图3-7）。2月龄口唇黏液细胞增多，上皮层、结缔组织层均有分布，主要以Ⅱ，Ⅳ型黏液细胞为主，有少量的Ⅲ型黏液细胞分布，黏液细胞呈球状、管状等（图3-8）。3月龄口唇上皮及结缔组织层分布有大量黏液细胞，以Ⅱ型为主，主要为小型管状细胞（图3-9）。

3.3.2 颚颚是蚂蟥消化管前端重要取食器官之一，颚位于口腔深处，共有3个，较大1个居背面，另外2个较小的左右各分居腹侧，与肌肉质的咽相连，颚从外到内由角质层、上皮细胞层、肌层、颚腔组成，肌层围成颚腔。颚顶上存在

具分泌作用的锥形乳突（图4-1）。

在蚂蟥生长发育过程中颚部组织结构变化不大。在2月龄时，颚上出现酸性颗粒状物，经AB-PAS染色呈现较多且较小的红色颗粒状物，此后一直存在且逐渐增多（图4-2，4-3，4-4）。

3.3.3 口腔口腔由内向外依次为黏膜层、黏膜下层、肌层组成，在口腔的周围有着丰富的围口神经。1月龄黏膜褶微小，黏膜上皮为复扁平上皮，黏膜层结缔组织增厚，黏膜下层出现少量空泡状分泌细胞，无浆膜层（图5-1）。2月龄从口腔往咽部方向，复扁平上皮细胞层数逐渐增多，黏膜褶增高（图5-2）。3月龄口腔面积明显增大，黏膜层出现次级皱襞，肌层明显，约2～3层环肌（图5-3）。4月龄口腔黏膜褶皱明显增高且次级皱襞发达，结缔组织增厚（图5-4）。4，5，6月龄口腔组织结构变化不大（图5-5，5-6）。口腔上皮外有保护膜，经AB-PAS染色后，呈红色，未见有明显着色的黏液细胞分布，1月龄时口腔中有少量的Ⅰ型黏液腺细胞，呈管状，开口于口腔（图5-7）。2月龄时口腔内黏液腺细胞增多且增大，黏膜层存在未被染色的分泌细胞，口腔腔面被染成红色（图5-8）。3月龄后AB-PAS染色与2月龄相比无明显变化（图5-9）。

3.3.4 咽部咽部从内向外由黏膜层、肌层、浆膜层构成。咽部肌层发达，有5～10个指状突起。1月龄咽部指状突起