细胞培养常用试剂配制

实验室常用染料性能介绍及常用药品试剂和培养基的配制

实验室常用染料性能介绍及常用药品试剂和培养基的配制一、实验室常用染料性能介绍1.苏木精：苏木精是一种常用的组织染料，其主要成分是吡啶类化合物。

苏木精具有很好的亲水性，对细胞核染色效果好，特别适用于观察细胞的核结构和形态。

2.基本蓝1：基本蓝1是一种亲水性染料，也是常用的组织染料。

它能与细胞内核酸结合，使细胞核显色。

基本蓝1在显微镜下观察时呈现出暗蓝色，有良好的穿透性，可以用来观察细胞的核仁、蛋白质沉积等。

3.伊红：伊红是一种细胞染色常用的酸碱指示剂。

它在碱性条件下呈红色，在酸性条件下呈黄色，可以用来染色观察细胞的酸性和碱性成分。

4.甲磺酸伊地洛尔：甲磺酸伊地洛尔是一种常用的荧光染料，可以与细胞膜结合，形成荧光标记的细胞，用于细胞增殖、迁移等研究。

在实验室中，还有很多常用的药品试剂和培养基需要配制。

下面介绍一些常见的配制方法：1.X溶液的配制：X溶液通常是用于细胞培养的培养基中的一种添加剂。

具体的配制方法是将X溶液的粉末称取适量加入适量的去离子水中，搅拌均匀即可。

X溶液可以用于抗菌、抗霉等作用。

2.磷酸缓冲盐水的配制：磷酸缓冲盐水经常用于细胞培养中的一种缓冲液。

配制磷酸缓冲盐水需要称取适量的氢磷酸盐和二氢磷酸盐加入适量的去离子水中，搅拌均匀并调节pH值即可。

3.阿霉素的配制：阿霉素是一种常用的抗生素，常用于细胞培养中的抗菌作用。

阿霉素的配制需要将相应的阿霉素粉末加入适量的溶剂中，搅拌均匀形成阿霉素溶液。

4.LB培养基的配制：LB培养基是著名的富含营养成分的培养基，常用于大肠杆菌等细菌的培养。

LB培养基的配制需要称取适量的草莓粉末、酵母粉末、纯化骨粉和氯化钠加入适量的去离子水中，通过高压灭菌形成LB培养基。

以上仅为常用染料性能介绍及部分常用药品试剂和培养基的配制方法，实验室中还有很多其他药品试剂和培养基需要进行配制或选购，要根据实际需要进行选择和使用。

细胞培养基本实验操作一般培养试剂介绍常用培养基及基本特性 HBSS的配制和使用攻略

常用培养基及基本特性1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。

主要用于悬浮细胞培养。

其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。

2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。

成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。

MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。

3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。

适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。

4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。

低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。

5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。

F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。

该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。

为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mM HEPES缓冲液。

6、McCoy’s 5AMcCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。

常用的几种细胞培养配套试剂的配置

常用的几种细胞培养配套试剂的配置几种常用细胞培育基产品⒈ BME(basal medium eagle)基础伊格培育基⒉ MEM⒊ DMEM⒋ IMDM⒌ RPMI-1640⒍ M199⒎ Mccoys 5A⒏ F10\ F12 \DMEM混合F12几种常用细胞培育配套试剂的配置(缓冲液、平衡盐溶液等)1、无钙、镁、离子溶液(1000ml)氯化钠(NaCl)8g磷酸二氢钠、(NaH2PO4H20)0.05g、碳酸氢钠(NaHCO3)1g、柠檬酸三钠(Na3C6H5O7,H20)1g、葡萄糖1g、加去离子水或双蒸水至1000mL2、PBS(Phosphate-Buffered saline)磷酸盐缓冲液甲液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、磷酸氢二钠(无水)28.4g、氯化钠8.77g加去离子水或双蒸水至1000mL乙液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、磷酸二氢钠(无水)2.4g、氯化钠8.77g加去离子水或双蒸水至1000mL甲、乙液于4℃保存，使用时按表3-2所示比例，配制成所需pH 浓度，高压灭菌后室温保存。

3、Hanks液(HBSSHanks Balanced salt solution)⑴ 母液甲(20x)配法①NaCl(A.R)160g、KCl(A.R)8g、MgSO4.7H2O(A.R)2g、MgCl.6H2O(A.R)2g依次溶于800mL双蒸水中，前一物质溶后再加后一种。

②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL双蒸水中，溶时不断搅拌(此液应单配，单溶)。

待上述两溶液中的"溶质"全溶后，将它们混合，再用双蒸水补至1000mL，向其中加2mL作为防腐剂，置4℃保存。

⑵ 母液乙(20×)配法①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g、KH2PO4(A.R)1.20g、葡萄糖(A.R)20.0g溶于800ml双蒸水中。

②0.4%酚红液0.4g酚红放在玻璃研钵后加0.01N、NaOH11.28mL，直到全部溶解，移入100mL容量瓶中，加水至100mL，过滤，pH为7.4，4℃保存。

细胞培养过程中的注意事项及试剂配制

细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一.常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。

配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。

培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。

必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO孵箱（孵育培养物）、2水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。

二.无菌操作无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。

2.CO孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者20.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。

实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。

2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。

无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。

3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。

5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。

如吸管不能碰到废液缸。

6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。

三.器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：(1)新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。

2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。

3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。

DMEM培养基配制方法

DMEM培养基配制方法DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种常用的细胞培养基，广泛应用于细胞培养、病毒繁殖和实验室研究中。

DMEM培养基含有多种必需和非必需氨基酸、糖类、维生素和盐类成分，提供了生长细胞所需的营养和环境。

以下是DMEM培养基的配制方法。

配制DMEM培养基的主要成分包括基础培养基、补充物和pH调节剂。

基础培养基：1.准备适量的无菌去离子水，用于稀释和配制DMEM培养基。

补充物：1.氨基酸：将提供的无菌氨基酸液中的每种氨基酸均匀混合，制得氨基酸混合液。

如有需要，可以根据实验需求添加特定的氨基酸。

2.糖类：将葡萄糖溶液与无菌去离子水混合，配制成葡萄糖溶液。

3.维生素：将提供的无菌维生素溶液与去离子水混合，制得维生素溶液。

4.盐类：将提供的无菌盐溶液与去离子水混合，制得盐溶液。

pH调节剂：1. 英文名Tris（Tris(hydroxymethyl)aminomethane）：是一种常用的pH缓冲剂。

取适量的Tris溶液。

2. 英文名Sodium bicarbonate：是一种重要的pH调节剂，可提供细胞培养中所需的碱性环境。

取适量的Sodium bicarbonate溶液。

先准备好所需的试剂和仪器，并保证它们是无菌的。

配制过程如下：1.取适量的基础培养基（DMEM），移至无菌培养瓶中。

2.依次向DMEM基础培养基中加入补充物。

首先加入氨基酸混合液，根据提供的比例将其加入培养基中，充分混合。

然后加入葡萄糖溶液、维生素溶液和盐溶液，依次混合均匀。

3. 加入适量的Tris溶液，用于调节pH值。

根据实验需求和DMEM配方，逐渐加入Tris溶液，同时用pH计测量pH值，直到达到所需的pH范围（通常为7.2-7.4）。

4. 加入适量的无菌Sodium bicarbonate溶液，用于调节和维持培养基的碱性环境。

根据实验需求和DMEM配方，逐渐加入Sodium bicarbonate溶液，充分混合。

细胞培养常用试剂配制

细胞培养常用试剂配制1. 水：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。

需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.2. PBS（0.01M）：NaCl 8.0g KCl 0.2gNa2HPO4·12H2O 3.49g KH2PO4 0. 2g充分溶解后，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀。

用HCl或NaOH调PH到7.4。

3. 胰蛋白酶溶液（0.25％）：胰酶 2.5g D-Hanks液 1000mLEDTA 0.1g NaHCO3调PH值 7.2～7.4用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0. 22微米微孔滤膜）抽滤除菌。

然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。

4. 青、链霉素溶液：所用纯净水（双蒸水）需要15磅高压20分钟灭菌。

具体操作均在超净台内完成。

青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml灭菌双蒸水。

链霉素是100万单位/瓶，加5ml灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位。

分装于－20℃保存。

使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度最终为100单位/ml（每升溶液中加入0.5mL）。

5. RPMI1640：1640(GIBICO, 1L/袋) 1袋双蒸水 1000mlHEPES(sigma,99.5％) 5g NaHCO3 3g青链霉素各0.5ml使用前向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液（4℃时两周有效）。

6.谷氨酰胺：合成培养基中都含有较大量的谷氨酰胺，其作用非常重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏要导致细胞生长不良甚至死亡。

在配制各种培养液中都应该补加一定量的谷氨酰胺。

由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃冰箱中保存，用前加入培养液。

加有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，应重新加入原来的谷氨酰胺。

一般培养液中谷氨酰胺的含量为1～4mmol/L。

可以配制200mmo l/L谷氨酰胺液贮存，用时加入培养液。

细胞培养所需耗材有哪些

细胞培养的路上，有多虐心就有多少需要值得注意的地方。

小小的平皿之中，细胞点点，引无数英雄竞挂东南枝。

正所谓“万事开头难”，即便是细胞复苏与保存这两件看似简单的事情，也能造成实验汪内心无比巨大的阴影面积。

下面就给各位实验室新手介绍一下细胞培养具体需要哪些耗材。

一、细胞培养基础试剂1、培养基：一般是用不完全培养基+10% FBS（胎牛血清）自己配的，有时也添加双抗预防细胞感染。

具体培养基类型根据你养的细胞类型去选择。

2、胰蛋白酶：简称是胰酶，消化细胞用的。

一般消化1-2 min，时间太短，细胞消化不完全，时间太长，会消化过度损伤细胞。

3、常用试剂：酒精，PBS 缓冲液。

二、细胞培养基础耗材1、细胞培养容器。

（1）培养瓶：如果你们是实验室小规模一般选50ML 100ML 250ML。

（2）玻璃瓶：培养基可以买胰酶的配置需要的成本很低所以准备两三个150ML的瓶子自己配就行了。

配置胰酶需要购买一种过滤器。

（3）细胞4102培养1653板（我们自己常用的有96空、24孔、6孔，当然还有其他的规格，可以根据需回要选择）。

（4）培养基：如果自己配置的话要买一些蓝盖的瓶子，一般规格会有1000ml、500ml、250ml、100ml的，也要买一些装血清的血清瓶，10ml的玻璃试管也要买一些。

2、耗材。

吸管、移液管、各种枪和枪头、离心管、封口膜等。

（1）玻璃吸管：长25-30CM 玻璃器2113皿总是摔5261断所以稍稍长一点比较好。

（2）EP管：4ML的塑料管、冻存管、这些塑料的管子是必须的。

（3）移液枪：（各种型号都要一把吧）这个不算是耗材但是枪头是耗材。

三、细胞冻存试剂和耗材1、冻存液：一般用10% DMSO+FBS+培养基组成，FBS 和培养基的比例依细胞类型决定，比较珍贵的细胞一般用90% FBS，一般的细胞可以用50% FBS+40% 培养基来配制。

2、胰蛋白酶等用于细胞培养的一般试剂。

3、冻存管、离心管、离心机、吸管、枪头、显微镜、冻存盒、冰箱、液氮罐等。

培养用液的配制

实验一培养用液的配制、除菌与分装【实验目的】1. 掌握常见培养用液的配制方法。

2. 掌握常用的灭菌方法。

3. 了解每种培养用液的作用。

【实验原理】常用细胞培养用液包括磷酸盐平衡盐溶液（Phosphate Buffered Saline，PBS）、液体培养基、胰蛋白酶（Trypsin）和EDTA溶液。

PBS用于清洗细胞、配制胰蛋白酶和EDTA。

培养基含有细胞生长需要的各种营养元素，使用时通常还需填加血清和抗生素。

鱼类细胞培养的培养基常用种类是MEM 和L-15；用于动物的一般是DMEM和RPMI-1640。

胰蛋白酶可将贴壁的细胞从培养瓶壁上消化下来，通常使用浓度为0.25%或0.125%。

EDTA 用于清洗细胞表面，螯合Ca2+等二价离子，使细胞易于为胰蛋白酶消化。

细胞培养用的试剂必需是无菌的，PBS 和EDTA 可以采用高压灭菌，而培养基和胰蛋白酶溶液含生物活性物质，配制好后通过过滤除菌。

【试剂、材料与仪器】试剂：NaCl ；KCl；Na2HPO4；KH2PO4；EDTA；胰蛋白酶；HEPES；碳酸氢钠；MEM或PRMI-1640 培养基干粉；GPS材料：三蒸水，蒸馏水瓶，精密天平，药匙，称量纸，烧杯（250 mL、1000 mL），玻棒，精密pH 试纸（6.8-8.0），容量瓶（250 mL、1000 mL），一次性注射器，一次性过滤器，普镊，酒精灯，打火机，医用酒精，消毒纱布，酒精喷壶，已高压灭菌试剂瓶（500 mL、250 mL、100 mL），记号笔，标签纸，橡胶手套，移液管（5 mL、10 mL），封口膜仪器：超净工作台，加液枪，4℃冰箱【实验分组】实验分组进行，每组4人，每班20人，共分5组。

第1组配制PBS并高压灭菌，第2组配制胰蛋白酶溶液并过滤除菌和分装，第3组配制EDTA溶液并分装高压灭菌，第4组配制培养基，第5组过滤除菌培养基并分装。

每个实验小组需准备试剂有：胰酶50 mL；EDTA 50 mL；培养基90 mL（使用前加入10 mL血清）。

BHK-21传代细胞培养

BHK-21传代细胞培养BHK是仓鼠肾细胞[原理]细胞在培养瓶壁上长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。

传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。

同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。

[材料和试剂]1、细胞：贴壁BHK-21细胞株2、试剂：0.25％胰蛋白酶、配制好的DMEM培养液、小牛血清、双抗溶液、7.5%碳酸氢钠3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、胶塞、量筒、注射器、针头、酒精灯、污物缸等[操作步骤]1、应需要计算好培养液的总用量，按10%的比例加入血清，按1%的比例加入双抗。

用7.5%的碳酸氢钠调PH至7.0~7.2左右。

2、将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。

3、加入0.25％胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中为宜。

4、瓶口塞好胶塞，平放在实验台上。

约2~3分钟会看到贴壁细胞层出现细针孔空隙，赶紧将胰酶弃去，加入少量培养液终止消化。

5、用注射器将贴壁的细胞反复吹打，使其均匀分散成悬液，再加入足量的培养液，分成两到三瓶。

塞好胶塞，置37℃温箱中继续培养。

细胞培养常用溶液的配制一、青、链霉素溶液青霉素钠盐(80万IU／瓶) 5瓶链霉素(100万IU／瓶) 4瓶将两者溶于400ml0.9％的无菌生理盐水，分装小瓶，-20℃保存。

双抗在培养基中的终浓度为100IU/ml为宜。

二、7.5%碳酸氢钠溶液的配制称取碳酸氢钠7.5g，加入超纯水使总体积为100ml。

高压灭菌，分装于小瓶中，4℃贮存。

三、1%酚红溶液的配制首先配制1mol/L的NaOH溶液。

称取NaOH4.0g，加入100ml超纯水，使NaOH 完全溶解，在室温或4℃贮存（最好现用现配）。

配制好NaOH溶液后，再称取1.0 g 酚红置研钵中，加1mol/L的NaOH（不多于7.0ml），研磨使酚红完全溶解，加超纯水至100ml，高压消毒，在室温或4℃贮存。

四、0.25%胰蛋白酶溶液的配制氯化钠8.0g氯化钾0.2g柠檬酸钠(Na3C6H5O7•5H2O) 1.12g磷酸二氢钠(NaH2PO4•2H2O) 0.056g碳酸氢钠 1.0g葡萄糖 1.0g胰蛋白酶（1：250） 2.5g超纯水加至1000ml放4℃冰箱过夜，待胰蛋白酶充分溶解后，用0.2um微孔滤膜过滤除菌，分装于小瓶中，-20℃保存。

细胞培养液配制的流程

细胞培养液配制的流程
细胞培养液配制的流程：
①材料准备：
- 准备所需的所有化学试剂、培养基粉末、抗生素、血清、pH指示剂、无菌水或三蒸水。

②滤器消毒：
- 准备0.45μm和0.22μm孔径的滤膜，浸入三蒸水中，然后置于滤器上，打包后进行高压蒸汽灭菌。

③容器准备：
- 确保所有使用的容器（如烧杯、量筒、移液管等）都是干净且无菌的。

④溶解培养基：
- 将培养基粉末倒入无菌容器中，加入预热的三蒸水，使用磁力搅拌器充分搅拌直至完全溶解。

⑤添加补充成分：
- 按照实验需求，向溶解的培养基中加入nahco3、抗生素（如青霉素和链霉素）、L-谷氨酰胺等成分。

⑥加入血清：
- 如果配方需要，加入胎牛血清或其他类型的血清，通常为10%或20%体积比。

⑦ pH调节：
- 使用pH计检测溶液的pH值，根据需要加入1N HCl或1N NaOH进行调节，直至达到目标pH值。

⑧温度控制：
- 将配制好的培养液加热至接近细胞培养的温度（37°C左右），以防止温度骤变影响细胞。

⑨过滤除菌：
- 通过0.22μm孔径的滤器过滤培养液，以除去任何可能存在的微生物。

⑩分装：
- 将过滤后的培养液转移到无菌的细胞培养瓶或培养皿中，避免空气中的微生物污染。

⑪标记与记录：
- 在容器上标记培养液的类型、批号、配制日期以及有效期，并记录所
有操作细节。

⑫储存：
- 将配制好的培养液储存在适当的温度下，通常是4°C，直到使用前再恢复至室温或培养温度。

细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本

细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本（一）胰酶的配制：（浓度为1‰，1L）1、认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。

2、称取牛胰蛋白酶1.0g；EDTA 2 g；3、用超纯水溶解；4、磁力搅拌器搅拌至胰酶完全溶解，溶液变得澄清；5、超纯水定容至1L；6、不锈钢滤器加0.22um滤纸两张高温灭菌后，在超净工作台过滤；7、在血清瓶中加入少量滤好的胰酶，置于细胞培养箱中检测是否染菌，其余置于4℃待用；8、过滤后洗净滤器再次灭菌，避免残留的胰酶降解蛋白。

（二）DMEM配制：1、所需试剂及材料：试剂：DMEM干粉（GIBCO 10L）、超纯水（Milli-Q）、Na2CO3 （Sigma）材料：10L玻璃瓶、500ml盐水瓶（灭菌）、0.22um滤膜、滤器（事先放好两层滤膜并高压灭菌）、磁力搅拌器大号搅拌子蠕动泵胶塞2、操作步骤：(1)10L玻璃瓶洗涤，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。

(2)在10L玻璃瓶中加入超纯水9.5L，将DMEM干粉倒入，在磁力搅拌器上搅拌溶解。

(3)按照3.7g/L 加入Na2CO3 。

(4)调节pH值至7.2~7.4。

(5)过滤分装，并注明名称及配制日期。

此过程注意无菌操作！(6)最后用血清瓶取10ml左右置于细胞培养箱中检测是否染菌。

(7)清洗滤器，10L玻璃瓶，软管，将所有实验器具归位。

（三）1640、MEM培养基的配制同上，Na2CO3的用量见包装说明（四）细胞间100×双抗（青霉素、链霉素）的配制青霉素及链霉素配制的终浓度为1万单位/毫升。

配制的步骤以400ml为例：1.认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。

2.准备5瓶青霉素（80万单位/瓶）、4瓶链霉素（100万单位/瓶）。

3.加入1-2ml细胞间专用PBS进入青霉素、链霉素的瓶子内，浸泡后吹吸数次至全部溶解，溶解后的液体吸入配制容器内。

氨氯化铵缓冲液的配制

氨氯化铵缓冲液的配制
氨氯化铵缓冲液是一种常用的生化试剂，用于细胞培养、蛋白质纯化等实验中。

本文将介绍氨氯化铵缓冲液的配制方法。

准备所需的试剂和设备，包括氨氯化铵、氯化钾、氯化钠、磷酸二氢钾、三氧化二磷、去离子水、称量器、磁力搅拌器等。

按照以下步骤进行配制：
1.将0.1mol/L氯化钾、0.1mol/L氯化钠、0.05mol/L磷酸二氢钾分别称量，加入100ml去离子水中，搅拌至完全溶解。

2.将氨氯化铵称量，加入上述溶液中，搅拌至完全溶解。

3.将pH计校准至7.4左右，将pH计插入溶液中，调节pH至7.4左右。

4.加入适量的三氧化二磷，搅拌均匀。

5.最后用去离子水将溶液体积补至1L，搅拌均匀。

注意事项：
1.在配制过程中，应注意试剂的准确称量和充分溶解。

2.在调节pH值时，应缓慢加入氢氧化钠或盐酸，同时不断搅拌，直至pH值稳定。

3.配制好的氨氯化铵缓冲液应保存在冰箱中，避免阳光直射和高温。

4.使用前应检查pH值是否稳定，如有变化应重新调节。

氨氯化铵缓冲液的配制方法简单易行，但在实验中起到了重要的作用，希望本文能对大家有所帮助。

常用细胞培养基配方及缓冲液

常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是为了在体外维持细胞生长和增殖所设计的一种营养液。

细胞培养基的配方要求提供细胞所需的基本营养物质，如氨基酸、糖类、维生素和激素，并提供适当的pH和离子平衡。

同时，缓冲液也是细胞培养过程中不可或缺的一部分，用于稳定细胞培养基的pH，维持细胞正常的生长环境。

下面列举几种常用的细胞培养基配方及缓冲液：1. DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)-细胞培养基配方：-DMEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：无2. RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute Medium) -细胞培养基配方：-RPMI1640培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)溶液，浓度为25mM，用于稳定pH。

3. MEM (Minimum Essential Medium)-细胞培养基配方：-MEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)- 缓冲液：盐酸/NaOH缓冲体系，通常用NaHCO3/N-2-羟乙基piperazine-N'-2-乙磺酸(HEPES)缓冲。

4. Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)-细胞培养基配方：-HBSS培养基粉末-对应体积的无菌水-缓冲液：无5. L-15 Medium (Leibovitz's L-15 Medium)-细胞培养基配方：-L-15培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。

6. DMEM/F12 Medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium and Ham's F-12 Medium)-细胞培养基配方：-DMEM/F12培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。

实验总结细胞培养方法

一、培养细胞常用配置培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml冻存液的配置：10 % DMSO + 90%胎牛血清依次比例酌量配置。

超净工作台常规配置移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个，常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，冻存管所需试剂：培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，75%酒精……实验前准备：所需的各项高压后的耗材及污物缸放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。

培养基及胰酶恢复常温后使用，可37℃水浴5-10min二、细胞复苏步骤：1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。

2. 培养液（DMEM），恒温水浴箱37℃预热20min，备用。

超净台内准备一支15ml离心管备用。

3.将所需的培养基确保瓶身干净后酒精消毒放于工作台面内，点燃酒精灯，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后需再次分别消毒瓶口和瓶盖。

4. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入37℃水浴中，快速摇晃，直至冻存液融化至黄豆粒大小后迅速取出。

5. 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。

6. 取出2个培养皿并做好标记（复苏日期等），提前加入5-10ml培养液；离心结束后用1ml培养液悬液混悬沉淀细胞后分别加入培养皿内。

7. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧，熄灭酒精灯，整理实验台面，取出实验试剂及污缸等，关闭超净工作台。

8. 将培养瓶放入培养箱内培养注意事项：1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套。

此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。

生物工程配液方案模板

生物工程配液方案模板一、实验目的本实验旨在通过配制合适的培养基，为生物工程实验提供所需的适宜环境，以满足细胞培养、发酵、基因表达等过程的需求。

二、实验材料1. 蒸馏水2. 葡萄糖3. 酵母粉4. 大豆蛋白胨5. 酵母提取物6. 胰蛋白酶7. 氰化钾8. 磷酸二氢钠9. 硫酸镁10. 不同种类的氮源：氨酸、尿素、硝酸铵等11. 不同种类的微量元素：铁盐、锌盐、锰盐等三、实验仪器1. 电子天平2. 反应釜3. 干燥箱4. 培养箱5. 恒温振荡器四、实验步骤1. 配制基础培养基a. 在1000ml蒸馏水中加入20g葡萄糖，搅拌均匀。

b. 加入10g酵母粉和5g大豆蛋白胨，继续搅拌至完全溶解。

c. 在溶液中加入氰化钾0.5g、磷酸二氢钠0.5g和硫酸镁0.5g，搅拌均匀。

2. 调整pH值a. 使用pH计测定溶液的pH值，一般调整到7.0左右。

b. 如果pH值偏高，可以添加少量盐酸或硫酸调节；如果pH值偏低，可以添加少量氢氧化钠或氢氧化钠调节。

3. 添加微量元素和氮源a. 根据实验需要，加入不同种类的氮源和微量元素。

b. 最常用的氮源是氨酸，需要根据实验需求调整添加量；微量元素一般以铁盐、锌盐、锰盐为主，也需要根据实验需求调整添加量。

4. 混合均匀并灭菌a. 将配制好的培养基溶液通过过滤器或高温高压的方法进行灭菌处理，确保培养基的无菌性。

b. 灭菌处理后，培养基可存放在4摄氏度冰箱中，待生物工程实验使用。

五、实验注意事项1. 配制培养基时要注意严格按照操作流程进行，确保培养基的质量和无菌性。

2. 在调整pH值时需小心操作，避免对人身体造成伤害。

3. 在添加氮源和微量元素时，根据实验需要合理调整添加量，避免过量或不足。

4. 灭菌处理时需使用专业设备，并严格按照操作规程进行。

六、实验结果通过本实验的配制，可获得适宜的培养基溶液，用于生物工程实验中的细胞培养、发酵、基因表达等过程，为实验提供所需的适宜环境。

七、实验结论本实验设计的培养基配液方案可以满足生物工程实验中的培养基需求，为后续实验提供了良好的基础条件。

常用培养基配方范文

常用培养基配方范文培养基配方是微生物学研究的基础，它们提供了养分和条件，促进微生物的生长和繁殖。

常用培养基配方有多种，以下是几个常用的配方范文。

一、莱文斯坦－鲍德尔培养基（Luria-Bertani agar）配方：成分：1.蛋白胨：10克2.酵母提取物：5克3.食盐：10克4.琼脂：15克5.蒸馏水：1000毫升6.高氯酸钠（0.1M）：2毫升（pH7.2）制备方法：1.将蛋白胨、酵母提取物和食盐加入蒸馏水中，加热至溶解。

2.加入琼脂并搅拌均匀，再加入高氯酸钠调节pH值。

3.煮沸1~2分钟，然后分装入培养皿中。

注意事项：1.注意消毒操作，以防止污染。

2.琼脂的煮沸时间通常为15~20分钟。

二、营养琼脂培养基（Nutrient agar）配方：成分：1.蛋白胨：5克2.细胞色素：1克3.维生素B1：0.1克4.卵黄：10克5.食盐：5克6.琼脂：15克7.蒸馏水：1000毫升制备方法：1.将蛋白胨、细胞色素、维生素B1、卵黄和食盐加入蒸馏水中并加热溶解。

2.加入琼脂并搅拌均匀。

3.煮沸1~2分钟，然后分装入培养皿中。

注意事项：1.注意消毒操作，以防止污染。

2.煮沸时间可根据需要适当延长，但不要超过20分钟。

三、马尿素琼脂培养基（MacConkey agar）配方：成分：1.蛋白胨：17克2.硼砂：1.5克3.细胞色素：2.5克4.氯化钠：5克5.水合甲基红：0.03克6.钴绿：0.015克7.红绿二色砂：0.15克8.琼脂：13.5克9.蒸馏水：1000毫升制备方法：1.将蛋白胨、硼砂、细胞色素、氯化钠、水合甲基红、钴绿和红绿二色砂加入蒸馏水中并加热溶解。

2.加入琼脂并搅拌均匀。

3.煮沸1~2分钟，然后分装入培养皿中。

注意事项：1.注意消毒操作，以防止污染。

2.此培养基适用于选择肠道革兰氏阴性杆菌。

以上是常用的几个培养基配方范文，供参考使用。

在制备培养基时，需要注意消毒操作，以防止污染。

另外，不同微生物对培养基的要求也有所不同，可以根据实际需要进行配方的修改和优化。

培养基的配制

一. 细胞培养所需基本器皿、试剂等1.玻璃器皿培养瓶、培养皿、称量瓶、小烧杯、青霉素瓶、盐水瓶（100、250、500）毫升、吸管刻度离心管2.试剂Hanks液. D-Hanks液. 培养基小牛血清、胎牛血清、胰蛋白酶（0.125%、0.25%）、7.5%碳酸氢钠10%醋酸、青霉素、链霉素3.器械.眼科剪（直头、弯头）、眼科镊（直头、弯头）、中号剪刀、中号镊子、金属滤网、小毛笔4.其他Zeiss滤器滤膜微量加样器、枪头、滤纸、饭盒吸管筒酒精棉球75%酒精新洁尔灭‰三蒸水双蒸水血球记数板盖片(20×20、24×24) 载玻片PBS二.试剂配方1.Hanks液称量NaCl 8.0gKCl 0.4gMgSO • 7H2O 0.2gCaCl2 0.14gNa2HPO4 •1 2H2O 0.06gKH2PO4 0.06gGlukose 1.0gAqua dest 1000.0ml先将（1）CaCl2溶解在100ml三蒸水中，（2）其他成分于750ml三蒸水中（应待前一种试剂完全溶解后，再溶解下一种试剂）；.再将（1）缓慢倒入（2）中，并边加边搅动。

最后补足水到1000ml。

分装盐水瓶中，8磅10分钟高压蒸汽灭菌。

冷却后用75%碳酸氢钠调整pH7.2-7.4,4℃保存。

2．D-Hanks液只需从Hanks液配法中去掉MgSO4 CaCl2的量，其他步骤同上。

2.不完全培养基先将1000ml粉剂培养基完全溶解于少许水中，然后加水至1000ml。

抽滤消毒并分装于250ml 盐水瓶中，4℃或低温保存。

（注如果粉剂培养基没有碳酸氢钠则需按要求加上）25%胰蛋白酶（多用于传代）胰蛋白酶0.25gD—Hanks100ml先称取0.25克胰蛋白酶，用少许.D—Hanks液溶解，然后补足D—Hanks到100ml。

PH7.2~7.4，抽滤消毒。

分装于青霉素小瓶，低温保存。

4.0.125%胰蛋白酶（本实验室多用于原代）胰蛋白酶0.125gD—Hanks100ml配制方法同上。

实验室常用细胞表征及处理方法（实战版）

实验室常⽤细胞表征及处理⽅法（实战版）实验室常⽤细胞表征及处理⽅法⼀、细胞培养1.1细胞培养基配⽅普通细胞所需要的培养基配⽅主要为：购买的培养基+10 %⾎清（⼩⽜或者胎⽜）+1%双抗。

（常⽤的双抗及胰酶建议直接购买）1.2细胞传代1.2.1洗涤：将培养瓶内的旧培养液吸出，加⼊2~3ml PBS缓冲液洗涤2-3次，摇晃使其均匀铺满整个平⾯，清洗细胞，随后吸弃PBS液以除去残留的⾎清和死细胞。

1.2.2消化：加⼊适量（盖满细胞层表⾯即可，25cm2的培养瓶加⼊0.5-0.6mL 即可，75 cm2加⼊1.0mL）的0.25%胰蛋⽩酶液，轻轻摇晃，普通细胞⼀般需要60s左右，特别难以消化的细胞可以放在37℃孵箱孵育适当的时间，如Hela细胞⼤约需要30s-40s，翻转培养瓶。

然后在倒置相差显微镜下观察细胞消化情况,待细胞开始收缩成圆形、细胞间的连接明显消失，细胞间出现明显的空隙，即可终⽌消化（若细胞成⽚收缩，倒去消化液）。

若存在细胞团，可以轻轻拍打培养瓶侧壁，尽量消化完全，不然传代后会出现较多的细胞团，再次消化会⾮常困难。

1.2.3终⽌消化：在培养瓶中加⼊1-3ml培养液（胰酶遇⾎清会终⽌其活性）以终⽌消化。

⽤吸管反复吹打洗瓶壁上的细胞，边⾓部分特别注意多次吹打。

可在倒置相差显微镜下观察细胞吹打的程度，（轻轻摇动培养瓶，观察细胞是否完全脱壁），最后形成单细胞悬浮液。

将单细胞悬液移⼊15ml离⼼管内,离⼼1000r×5min,弃去上清液,加⼊5ml 培养基进⾏吹打重悬（也可不⽤离⼼，直接把单细胞悬液分装于新的培养瓶⾥，补加适量培养基）。

⼩培养瓶需5ml左右培养基，直径60mm培养⽫5-7ml，以上均应视细胞的数⽬⽽定，细胞多，可适当加多些培养基）。

1.2.4.传代：取上述步骤所得单细胞悬液，进⾏细胞悬液计数，然后按所需密度接种到其它培养瓶中。

标注上代数、⽇期及操作⼈。

注：本实验所需的PBS液、DMEM细胞培养液及0.25%胰蛋⽩酶液均需37℃预热处理。