原代肿瘤细胞的培养

原代肿瘤细胞的培养

1、组织提取和处理

1）手术切除的标本立即置于冰壶中存放着的RPMI1640中，随后立即送往实验室。

2）将标本取出置于无菌的平皿中，使用无菌手术刀取出周边坏死组织和脂肪组织。

3）用D-Hanks溶液清洗3遍去除血迹。

4）将组织置于双抗溶液（青霉素5×105U/L，链霉素100mg/L）中，浸泡20min。

2、制备单层细胞

1）将组织切成1mm3的组织块，一组置于30ml胶原酶I（2×105U/L）的三角瓶中，封口；一组置于30ml胰蛋白酶（）的三角瓶中，封口。

2）消化：在37℃空气震荡箱中，120r/min消化（胶原酶I需3h，胰蛋白酶30min）。

3）100目细胞筛过滤，滤液1000r/min离心10min，弃上清。

4）用D-Hanks溶液清洗2遍。

5）5%小牛血清RPMI1640培养基，重悬。

6）细胞计数，109个/L 浓度接种于25ml培养瓶中培养。

其他同常规培养。