梅毒血清学检测的操作规范标准PPT课件

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非梅毒螺旋体抗原检测意义
早期梅毒硬下疳出现1~2周后，血清学可 呈阳性
梅毒患者经治疗后血清滴度可下降并转 阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发 或再感染的指征
为什么要做定量检测？
滴度常与病情活动相关，滴度改变4倍具有 临床意义
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梅毒血清试验假阳性因素：
技术性
标本的污染 溶血 操作失误
硬下疳和/或腹股沟淋巴结肿大
二期梅毒
病期在2年内有多形性皮疹等
三期梅毒
病期在2年以上，可有皮肤黏膜损害等
隐性（潜伏）梅毒 胎传（先天）梅毒
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梅毒的诊断
病史 症状 实验室检查
梅毒的实验室检查对诊断有重要意义
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梅毒实验室检测技术
病原学检测 血清学检测
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梅毒实验室检测的特点
梅毒血清学检测的操作规范
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主要内容
梅毒概述 梅毒血清学检测方法 梅毒检测技术规范
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梅毒概述
➢ 梅毒是一种几乎可以侵犯全身所有器官， 而产生多种症状和体征的慢性传染性疾 病。
➢ 十六世纪初由欧洲传入亚洲，后蔓延我 国。梅毒又称为杨梅疮、广东疮、疳疮、 下疳、霉疮等。
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梅毒螺旋体生物学特征
临床表现
一期梅毒
二期梅毒
潜伏梅毒 三期梅毒 神经梅毒
取材部位
溃疡 淋巴结 血液 皮损 淋巴结 血液 血液 血液 血液 脑脊液
检查方法
病原学检查 血清学检查 病原学检查 血清学检查 血清学检查 血清学检查 血清学检查 细胞、蛋白量检查VDRL等
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梅毒的病原学检测--显微镜检测法
暗视野显微镜检查 镀银染色检查
不需灭活
反应板及结果判 玻片，肉眼或显 玻片，肉眼或显 纸卡片，肉眼
断
微镜
微镜
注释
唯一用于检查脑脊 液的试验，诊断神 经梅毒
结果容易判断
稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月
不需灭活 纸卡片，肉眼
结果容易判断
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非梅毒螺旋体抗原血清试验
RPR/TRUST
基本原理：在心磷脂、卵磷脂和胆 固醇等组成的抗原中加入活性炭/甲 苯胺红，与待检血清中的反应素结 合，形成肉眼可见的红色絮状物。
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暗视野显微镜检查
标本类型：梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等 皮损的渗出液、淋巴结穿刺液
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镀银染色检查
基本原理：梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶 液染色，从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体
结果：棕褐色的梅毒螺旋体
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梅毒血清学检测分类
非梅毒螺旋体抗原血清学检测
（非特异性梅毒抗体）
梅毒螺旋体抗原血清学检测
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梅毒传播途径—母婴传播
妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘 传播
未经治疗者，虽已无性传播（病期>2 年），但妊娠时仍可传染胎儿，病期越 长，传染性越小
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梅毒传播途径—其他途径
输血传播 接触传播 接触部位附有梅毒螺旋体 日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途
径
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Baidu Nhomakorabea
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梅毒的分期
一期梅毒
病原体为苍白密螺旋体苍白亚种,不易着色 直径 0.10~0.15μm，有8~14个致密而规则
的 小螺旋，两端尖直，运动活跃，运动方式多 样 抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感 对青抗生素敏感
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梅毒传播途径—性传播
性接触是主要传染途径 未经治疗的患者在感染后1年内具有传
染性 随着病期的延长，传染性越来越小 感染后2年，通过性接触一般无传染性
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定量检测操作步骤
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 稀释倍数 原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 阳性K 阴性K 生理盐水(ul) - 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 - 样 品(ul) 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0弃50.0 - 阳性血清(ul) - - - - - - 50.0 阴性血清(ul) - - - - - - - 50.0 抗原悬液(ul) 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7
生物学假阳性
患者有其他疾病，使梅毒血清试验出现阳性 生理机能发生变化：少数孕妇也可发生生物
学假阳性
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急性生物学假阳性反应的疾病
麻疹、风疹、水痘、牛痘疹 传染性单核细胞增多症 传染性肝炎 上呼吸道感染、猩红热 肺炎链球菌肺炎、病毒性肺炎 其他，如亚急性心内膜炎、斑疹伤寒等
TRUST
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TRUST凝集反应强度分级
++++：抗原颗粒呈粗大团块，凝结
+++：抗原颗粒中等团块、凝结
++：颗粒凝结，与清亮液体呈明显反差
+：抗原颗粒凝结、均匀肉眼可见
±：抗原颗粒细小凝结，肉眼可辨
―：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀 分散。
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试验操作—定量检测
（1）稀释液准备：在圈内加入50μL生理 盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐 水涂开。 （2）加样：吸取50μL血清与各圈中生理 盐水做系列稀释，并涂布整个圈内。 （3）余同定性试验中。
USR（不加热血清反应素试验）
RPR(加速血浆反应素环状卡片试验)
TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)
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非梅毒螺旋体抗原血清学试验
抗原基本成分为心磷脂、卵磷脂和胆固 醇
抗原抗体集合形成复合物，凝集成网状 肉眼可见的沉淀颗粒
试验方法敏感性和特异性基本相似
操作简单，价格便宜
可定量检测
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四种非特异性试验方法比较
抗原成分
VDRL
USR
RPR
TRUST
心磷脂、卵磷脂、 同前+EDTA+氯化 同前+EDTA+氯化 同前+EDTA+氯化胆
胆固醇
胆碱
胆碱+活性炭
碱+甲苯胺红
抗原稳定性 不稳定,1天
稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月
稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月
血清试验前处理 需灭活
不需灭活
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试验所需仪器
测速要求：100±2转/分钟
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试验操作—定性检测
(1)加样：吸取50μL血清/浆放在 卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈中 (2)加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号 针头加1滴抗原（16.7ul） (3)反应：将卡片置水平旋转仪旋转 8分钟，立即在亮光下观察结果
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结果判读
RPR
（特异性梅毒抗体）
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非梅毒螺旋体抗原血清学检测
原理
人感染梅毒螺旋体后，组织受到破坏释放一 种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗 原，刺激机体在3~4周时产生类脂质抗体（ 反应素）。
抗体的作用
治疗监测和疗效监测
无保护作用
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非梅毒螺旋体抗原血清学检测方法
VDRL(性病研究实验室试验)