第七章 抗生素微生物检定法

于估计效价的110%，则检验结果仅作为初试，
应调整供试品估计效价，予以重试。
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第二节 无菌检查法
是检查药品与辅料是否污染活菌的一种 方法。
无菌检查的操作环境和全部过程应严格
遵守无菌操作，防止微生物污染，同时应避 免在有菌条件下操作。
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无菌检查法
1、菌种
需气菌与厌气菌 藤黄微球菌、生孢梭
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管碟琼脂扩散法
抗生素管碟测定法是利用抗生素在摊布特定试 验菌的固体培养基内呈球面形扩散，形成含一定 浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现
透明的抑菌圈。
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该法根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂 量与抑菌圈的直径或面积呈线性关系，通过比较 标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试 品的效价。
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3、标准品溶液的制备 按标准品说明书进行，在同 一条件下称量标准品与供试品。
4、供试品溶液的制备 按药典规定的方法称量，溶 解后，再按估计的效价或标示量稀释至与标准品相 当的浓度。用容量瓶稀释药品，不得超过3步， 每 次取样量不得少于2 ml。
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5、双碟的制备：
取直径90 mm，高16-17 mm的平底双碟，加入融化的 培养基20 ml，使在碟底内均匀摊布，放置在水平台上使 其凝固，作为底层。 另取培养基适量（5 ml），加热融化后，放冷至4050℃，假如规定的细菌悬液适量（能得到清晰的抑菌圈 为度），此为含菌培养基（菌层）。放置在水平台上使 其冷却，然后在每一双碟中以等距离均匀安置不锈钢 管，钢管内径为6 mm，高10 mm，外径7.8 mm。二剂量法 用4个，三剂量法用6个，用用陶瓦盖覆盖，留置5-10分 钟。
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临用前培养基分别经30-35℃（用于细菌培养的培养 基）和20-25℃（用于霉菌培养的培养基）培养不少于 48h和72h。 常用的培养基： ①硫乙醇酸盐流体培养基 30-35℃，用于培养好氧菌、厌 氧菌。 ② 改良马丁培养基 23-28℃条件下培养，用于培养真菌。 ③ 营养肉汤培养基 蛋白胨+牛肉浸出粉+氯化钠，灭菌。 ④ 营养琼脂培养基 营养肉汤培养基中加入琼脂，灭菌
菌。
霉菌：白色念珠菌。
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2、培养基 按规定的组方制备、配制后应采用合格的灭菌程序灭 菌(121 ℃,30 mins)。制备好的培养基应保存在225℃，避光的环境中。 培养基若保存在非密闭的环境中，一般应在3周内使 用。 若保存在密闭的环境中，一般可在一年内使用。 培养基无菌检查：每批培养基随机取不少于5支 （瓶），培养14天，应无菌生长。
第七章 抗生素微生物检定法 无菌检查法
第一部分 抗生素微生物检定法 第二部分 无菌检查法
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第一节 抗生素微生物检定法
本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用， 比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑 菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。 依试验设计原理不同，分为稀释法、比浊法、 琼脂扩散法。 中国兽药典采用管碟琼脂扩散法。
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无菌检查法
3、随机抽取2份样品，无菌接种后，
分别在30-35℃和20-25℃培养7日。 4、结果判定： 无菌生长为符合规定。
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（2）三剂量法
取双碟六个，在每个双碟内间隔的3个不锈钢管中 分别滴加高、中及低浓度的标准液，其余两个不锈 钢管中分别滴加高、中及低浓度的供试品溶液。三 个浓度的剂距比为1：0.8。35-37℃ 培养14-16h， 用游标卡尺测量抑菌圈直径。
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7、结果判定
实验计算所得效价低于估计效价的90%或高7Fra bibliotek6、检定法
（1）二剂量法 取双碟四个，在每个双碟内对角线2个不锈钢管 中分别滴加高浓度及浓度的标准液，其余两个不 锈钢管中分别滴加高浓度及低浓度的供试品溶液。 高、低浓度的剂距比为2：1或4：1。35-37℃ 培 养14-16h，用游标卡尺测量抑菌圈直径。滴加抗 生素溶液：滴加溶液至钢管口平满，滴加溶液间 隔时间不可过长 。
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操作要点：
1、常用菌种：枯草芽胞杆菌、短小芽胞杆菌 、金黄 色葡萄球菌 、藤黄微球菌 、大肠杆菌 。
菌种不同，培养要求条件也不一样。 2、培养基及其制备方法
培养基配方： 胨 5 g 磷酸氢二钾 3 g 牛肉浸出粉 3 g 琼 脂 15-20 g 蒸馏水 1000 ml
混合上述成分，调节pH 比最终要求的略高0.2-0.4,加入琼 脂，加热融化后，过滤，分装、灭菌。