LAMP技术在病毒检测中的应用
环介导等温可视扩增(LAMP)检测禽肺炎病毒方法的建立
LAMP技术在病原微生物检测中的应用
作者单位:1.南华大学医学院病原生物研究所,湖南衡阳421200; 2.珠海市疾病预防控制中心 通讯作者:魏泉德,E2mail:weiqd99@ ・综述・LA MP技术在病原微生物检测中的应用张如胜1,2综述,魏泉德2审校 【摘要】 环介导等温扩增(l oop2mediated is other mal a mp lificati on,LAMP)技术是近年来发展出的一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。
与传统PCR方法相比,LAMP不需要热循环,为等温扩增,且由于LAMP反应中产生大量的副产物-白色焦磷酸镁沉淀,扩增产物可不经过电泳,通过肉眼观察或浊度计即可判定结果。
因此LAMP是一种不需要热循环仪、肉眼即可判定结果的高度特异和敏感的DNA扩增方法,适合于现场、战时野外或条件较差的实验室进行病原微生物的快速检测。
近年LAM P技术在病原微生物检测方面已有广泛应用,本文就这一方面的研究进展作一综述。
【关键词】 环介导等温扩增; 病原微生物 中图分类号:R37 文献标识码:A 文章编号:1671-5039(2007)05-0045-05 目前对病原微生物的检测主要依靠病原体分离法、免疫学方法和各种PCR方法。
病原体分离虽然是金标准,但繁琐费时;免疫学方法的特异性和敏感性均较低;PCR方法敏感、准确、快速,可替代病原学检测,但由于需要昂贵的仪器设备、较高检测费用以及对检测人员较高的技术要求而使其不适用于现场快速检测及基层普及应用。
NOT OM I等[1]于2000年报道了一种新型的等温核酸扩增方法,即环介导等温扩增法(l oop2mediated is other mal a mp lifica2 ti on,LAMP),该法针对靶基因的6个区域设计4条特异引物,利用一种链置换DNA聚合酶(B st DNA poly merase)在恒温条件(65℃左右)保温约60m in,即可完成核酸扩增反应,扩增出LAMP特征性梯状条带。
LAMP技术在动物病毒病原检测中的应用进展
（ １ ．Ｃｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｂ ｏ ｅ ｇ ｒ ” ｇ，Ｈｅ ｎ ａ ｎ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇｙ，Ｚｈ ｅ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ４ ５ ０ ０ ０ １ ，Ｃｈ ｉ ｎ ａ
中 图分 类号 ： Ｒ ３ ７ ３ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ２ —２ ６ ９ ４ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ ｎ ｍｅ ｄｉ ｃ ｉ ｎａ ｌ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｅ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｙ ｌ ｏ ｏ ｐ。 ｍｅ ｄ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｓ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｍａ ｌ ａ ｍ ｐｌ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎｏ ｌ ｏ ｇ ｙ
ＫＥＹ Ｗ ＯＲＤＳ：ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｏ ｔ ｉ ｄ ｅ ｓ ；ｌ ｏ ｏ ｐ ～ ｍｅ ｄ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｓ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｍａ ｌ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ；ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ；ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ
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对虾白斑综合征病毒可视化环介导等温扩增(LAMP)检测技术的建立与应用
岸 检疫 ， 甚至 海洋 生态监 测 中对 ＷＳ Ｓ Ｖ进行 现场检 疫 。 关键 词 对虾 ， 白斑综 合征病 毒（ ｗｓ ｓ ｖ ） ， 环 介导 等温扩 增技 术（ Ｌ Ａ ＭＰ ） ， 检 测
Ｄｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ Ａｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｖｉ ｓ ｕ ａ ｌ Ｌｏ ｏ ｐ Ｍ ｅ ｄ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ Ｉ ｓ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｍａ ｌ
焦 磷酸 根 离子 ， 此时 焦磷 酸 根 离子 竞 争性 与 Ｍｎ 结合 ， 形 成稳 定 的不溶 性焦 磷 酸盐 沉 淀 ， 钙黄 绿 素被 释
放 而发 出 肉眼可 见 的黄 绿色 荧 光 。该 扩 增一 次 性反 应 约 ６ ０ ｍｉ ｎ即可 完 成对 待检 样 品 的检 测 。经 测 定 ， 本 方法 能特异 性地检 测 出 阳性样 品 中的 ＷＳ Ｓ Ｖ 目的基 因 ， 并 能通过 扩增 产物所 产生 的黄绿 色变 化与 阴性 样 品 区别 ； 本 技 术对 目的基 因的 最低 检测 量 为 １ ｆ ｇ 。在 临 床检 测试 验 中， ＷＳ Ｓ Ｖ － Ｌ Ａ ＭＰ与 世 界动 物 卫生 组 织（ ＯＩ Ｅ ） 推 荐 的 ＷＳ Ｓ Ｖ － Ｐ Ｃ Ｒ检测 方法均 能从 ２ ５ ０ 份对 虾样 品中， 同时检测 到 １ ５ 份编 号相 同的阳性 样 品， 符 合 率达 １ ０ ０ ％。除 此 之 外 ， ＷＳ Ｓ Ｖ － Ｌ Ａ ＭＰ还 能 从 另 外 ３ 份Ｐ Ｃ Ｒ检 测 为 阴性 的样 品 中检 测 到 目的基 因 。
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LAMP方法及其在病原微生物检测中的应用_吴禹熹
LAMP
LAMP（环介导等温扩增）技术2011-07-28 11:46 来源：北京蓝谱点击次数：1341 关键词：LAMP PCR技术环介导等温扩增分享到：收藏夹腾讯微博新浪微博开心网PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用，其灵敏度高、特异性好，是目前最精准的基因诊断方法。
然而PCR方法操作起来较复杂，对仪器和人员要求比较高，不适合基层或现场快速诊断，因此在国内的推广速度并不是很快。
2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Res杂志上公开了一种新的基因诊断技术，即LAMP (L oop-mediated isothermal amplification),中文名为“环介导等温扩增反应”，受到了世卫组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，在这次甲型H1N1流感事件中，日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。
通过荣研公司近十年的推广，LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，并得到了欧美国家的认同。
LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像PCR那样进行凝胶电泳，LAMP反应的结果通过肉眼观察白色浑浊或绿色荧光的生成来判断，简便快捷，适合基层快速诊断。
可以预见，在未来的基因诊断领域，LAMP方法将占据大壁江山。
目前，在万方数据库搜索LAMP文章500多篇。
详见：/paper.asp x?q=loop-mediated+isothermal+amplification&o=sortby+CitedCount+CoreRank+date+relevanc e%2fweight%3d5&f=top&n=10&p=11. 优缺点介绍：LAMP方法优点：灵敏度高（比传统的PCR方法高2～5个数量级）；反应时间短（30～60min就能完成反应）；临床使用不需要特殊的仪器（试剂盒研发阶段推荐用实时浑浊仪）；操作简单（不论是DNA还是RNA，检测步骤都是需将反应液、酶和模板混合于PCR管中，置于水浴锅或恒温箱中63℃左右保温30～60min，肉眼观察结果）。
环介导等温扩增技术在植物寄生线虫检测中的应用
环介导等温扩增技术在植物寄生线虫检测中的应用王一椒（上海辰山植物园，上海201602）摘要植物寄生线虫是世界各地农林业生产中一种重要的生物胁迫，在早期快速、准确地鉴定出植物寄生线虫种类是减少其危害的重要前提。
环介导等温扩增（LAMP）技术因在实际操作中具有简易、快速和灵敏等特点，已被广泛应用于多种植物病原体的检测和诊断。
本文主要就LAMP技术在伞滑刃线虫、根结线虫、孢囊线虫、短体线虫、滑刃线虫、粒线虫等重要植物寄生线虫检测中的应用研究情况进行了综述，以期为针对不同的植物寄生线虫开发和选用最佳的LAMP检测方法提供参考。
关键词环介导等温扩增（LAMP）技术；植物寄生线虫；检测中图分类号S433文献标识码A文章编号1007-5739（2023）11-0105-05DOI：10.3969/j.issn.1007-5739.2023.11.029开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Application of Loop-mediated Isothermal Amplification Technology in Detecting PlantParasitic NematodeWANG Yijiao(Shanghai Chenshan Botanical Garden,Shanghai201602)Abstract Plant parasitic nematode is an important biological stress in agricultural and forestry production around the world.Rapid and accurate identification of plant parasitic nematode species in the early stages is an important prerequisite to reduce their harm.Loop-mediated isothermal amplification(LAMP)technology has been widely used in the detection and diagnosis of many plant pathogens due to the advantages of simpleness,quickness and acuteness in operation.This paper reviewed the research progress on the application of LAMP in important plant parasitic nematodes, such as Bursaphelenchus,Meloidogyne,Heterodera,Pratylenchus,Aphelenchoides and Anguina,in order to provide a reference for developing and selecting the optimal LAMP detection method for different plant parasitic nematodes.Keywords loop-mediated isothermal amplification(LAMP)technology;plant parasitic nematode;detection植物寄生线虫是指能寄生于植物的根系、幼芽、茎、叶、花、种子等组织，使植物发育不良，并且在感染寄主的同时会传播其他植物病原，造成植物出现疾病症状的一类线虫。
马视LAMP技术对人乳头瘤病毒18亚型检测的应用价值研究
Hale Waihona Puke ・ 论 著 ・ 目视Ｉ Ａ ＭＰ 技术对人乳头瘤病毒１ ８ 亚型 检测 的应用价值研 究
唐 宏 霞 熊学峰 秦 志 强 周 晓农 １ ． 湖南省益阳市赫 山区妇幼保健 院， 湖南益阳 ４ １ ３ ０ ０ ２ ； ２ ． 中国疾病预 防控制中心寄生虫病预 防控制所， 上海 ２ ０ ０ ０ ２ ５
Ｈｕ ｍａ ｎ ｐ ａ ｐ ｉ ｌ ｌ ｏ ｍａ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｔ ｙ ｐ ｅ ｌ ８ （ ＨＰ Ｖ １ ８ １ ｆ ｒ ｏ ｍ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｍｅ ｎ ｓ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｉ ｔ ｉ ｓ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｚ ｅ ｄ ｂ ｙ ｅ ｍｐ ｌ ｏ ｙ ｉ ｎ ｇ ａ ｓ ｅ ｔ
【 摘要 】目的 探 讨环介 导等 温扩 增技术 用于 检测 临床标本 乳 头瘤病 毒 ＨＰ Ｖ１ ８ 亚 型 的应用价 值 。 方法 设计 针对
Ｈ Ｐ Ｖ１ ８ － Ｌ １基 因序列 中 ６ 个 区段 的 ４条特异 引物 ， 在等温 条件下 （ ６ ５ ℃） 进 行核酸 扩增反应 １ ｈ ， 在扩增前加入 钙黄
ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍｅ ｄ ａ ｔ ６ ５ ％ ｆ ｏ ｒ １ ｈ ｏ ｕ ｒ ｗｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ａ ｄ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｃ ａ ｌ ｃ ｅ ｉ ｎ ｄ ｙ ｅ ｐ ｒ ｉ ｏ ｒ ｔ ｏ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ｌ ＡＭＰ ｗａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ａ ｎ ｄ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ ＨＰＶ １ ８ ｍｏ ｎ ｏ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ ｃ ｅ ｒ ｖ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｅ ｃ ｒ ｅ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｗｏ ｍｅ ｎ ｏ ｆ ｐ ｈ ｙ ｓ ｉ ｃ ａ ｌ ｅ ｘ ａ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ． Ｒｅ ｓ ｕｌ ｔ ｓ
LAMP技术在微生物检测中的应用
3随着经济的迅速发展，人们对各类食品的需求也日益增大，食品安全问题越来越受到人们的重视，微生物对食品的污染问题也相应地备受关注。
然而，使用传统的检测方法即非选择性和选择性增菌、生长法及血清学鉴定虽然比较准确，但繁琐费时。
此外，低水平的病原菌污染，食品加工后导致菌体的“致伤”及食品其它成分的干扰等因素，使得传统的检测方法受到了一定的限制，因此，急需一些灵敏度更高、特异性更强、简便快捷的食品安全检测技术和方法，以及时发现致病菌，控制污染及其可能对人体健康产生的危害。
科技的进步使得新的检测方法层出不穷，如ATP 荧光检测法，酶联免疫吸附法(ELISA)，生物传感器技术，基因芯片技术，以及目前被广泛应用的基于PCR 的检测技术。
ELISA 由于免疫反应特异性强，对试剂的选择性高，致使很难同时分析多种成分；对结构类似的化合物有一定程度的交叉反应；分析分子量很小的化合物和很不稳定的化合物有一定的困难[1]。
生物传感器技术以生物分子特异识别为基础，而非特异性信号干扰常使其检测底限和可信度受到影响。
目前多数生物传感器制作的相对不够均一，使设置对照检测的作用降低，且多数传感器检测对象只限于一种目标物[2]。
基因芯片技术检测的灵敏度较低需要昂贵的尖端仪器，技术上也存在一些问题[3]。
PCR 方法敏感、准确、快速，可替代病原学检测，但由于需要昂贵的仪器设备、较高检测费用以及对检测人员较高的技术要求而使其不适用于现场快速检测及基层普及应用。
2000年，日本学者Notom i 等[4]发明了一种全新的核酸扩增方法—环介导等温扩增技术(LAMP ，loop-mediated isothermal amplification)。
该法在等温条件下(6～65℃)就能完成扩增反应，它可以在以内在恒LAMP 技术在微生物检测中的应用李志强(西华大学生物工程学院，四川成都，610039)摘要LAMP (1oop-m ediated isothermal amplifica tion)技术是一种新的恒温核酸扩增技术，具有特异性强、等温灵敏、操作简单、产物易检测等优点。
LAMP技术及应用
由LAMP原理可知，LAMP反应的最终扩增产物是茎环DNA组 成的混合物，即有若干倍茎长度的茎环结构和类似花椰菜的结构。 因此，LAMP扩增产物在2％的琼脂糖凝胶糖上呈现的是典型的梯 状条带。（图A）
肉眼观察法
在LAMP反应过程中，可以通过产生的副产物焦磷酸镁白色 沉淀的产生来肉眼直接判断扩增反应是否进行。（图B）
LAMP法使用的酶
链置换型DNA聚合酶: Bst DNA Polymerase
扩增对象为双链DNA时，其中一条链解离的同时进行链延长。 LAMP法使用最适温度65℃的聚合酶。
LAMP法的引物设计
LAMP法的原理
LAMP法的原理
LAMP法所需的试剂
LAMP法常规操作步骤
LAMP法的检测方法
LAMP法在结核菌检测中的应用 靶标限定: 结核分枝杆菌复合群
临床上感染人类的是结核分枝杆菌复合群，包括结核分枝 杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌、非洲分枝杆菌、卡氏 分枝杆菌。 对检测对象的准确限定能避免假阳性过高而增加治疗成本， 长远来说，更有利于避免耐药性的产生。 gyrB基因作为结核分枝杆菌重要的功能基因，在复合群进 化过程中非常保守，LAMP法检测即以gyrB基因作为靶标。
比传统PCR大大节省了时间和实验操作步骤。
LAMP法和其他PCR法的比较
LAMP法和其他PCR法的比较
技术特点
特异性高 4条引物靶向目标基因6个区段，特异性高于PCR和qPCR 灵敏度高 扩增模板可低至每测试10拷贝或更少。 检测时间短 恒温扩增，省却温度循环，扩增时间60min。 设备简易，可同时检测多批样本 不需特定或高端检测仪器，恒温设备即可，例如水浴锅， 可以随时放入后续批次样本。
LAMP技术对猪呼吸道主要病原诊断
猪呼吸道疾病的主要病原检测LAMP方法的建立
猪胸膜肺炎放线杆菌特异性检测 M12 3 4
2000bp 1000bp 750bp 500bp 250bp 100bp
特异性检验电泳结果 1：阴性对照；2：肺炎双球菌3：副猪嗜血杆菌；4：猪胸膜肺炎放线杆菌
21
猪呼吸道疾病的主要病原检测LAMP方法的建立
从结果中表明可以成功建立了肺炎支原体、放线杆菌和巴氏杆菌的LAMP诊 断方法，为我们国家临床上诊断支原体肺炎、放线杆菌和巴氏杆菌提供了灵敏有 效的分子生物学的方法 。
LAMP方法的现场应用及综合防治措施的制定
猪肺炎支原体的防制措施： （l）做好猪场环境卫生工作：定期对猪场内进行卫生清扫和消毒工作。采取自
2.10：阳性对照；7：阴性对照
17
猪呼吸道疾病的主要病原检测LAMP方法的建立
优化后建立 LAMP 检测方法
LAMP 扩增反应体系
组成
外引物（支F3、支R3）（10 pmol/μL） 内引物（支F1/F2、支R1/R2）（10 pmol/μL） dNTP＋（10 mmol/L） MgSO4（25 mmol/L） 10×LAMP反应缓冲液 Bst DNA 聚合酶（8 U/μL） 模板DNA
dNTP+不同浓度下电泳结果 1-4 的浓度：0.3 mmol/L、0.4 mmol/L、0.5 mmol/L、0.6 mmol/L；
5：阳性对照；6-7：阴性对照
15
猪呼吸道疾病的主要病原检测LAMP方法的建立
Bst DNA 聚合酶用量的优化
M12 345 67M
2000bp 1000bp 750bp 500bp 250bp 100bp
1
研究意义
LAMP技术研究进展及其在动物疫病检测中的应用
行 了阐述 。与普通 Ｐ Ｃ Ｒ、荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ相 比，Ｌ Ａ ＭＰ 技 术具有 不需要 精密仪器、 肉眼即可判定 、操作简单、所 用 时间短、灵敏度 高等优 点，在 水生和陆生动 物的 细菌病、病毒病 、寄生 虫病的检测 中 得 到广 泛应 用。Ｌ Ａ ＭＰ
技 术与其他技 术的联合应 用以及 Ｌ ＡＭＰ检测仪 器的出现 ，更加促进 了 Ｌ Ａ ＭＰ技术的发展和应用 。
Ｂａ ｓ ｅ ｄ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ａ ｄ ｖ ｎｔ ａ ａ ｇ ｅ ｓ ，ｔ ｈｅ ＬＡＭ Ｐ ｈ ａ ｓ ｂ ｅ ｅ ｎ ｗｉ ｄ ｅ ｌ ｙ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｅ ｄ ｔ ｏ ｈｅ ｔ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ，ｖ ｉ ｒ ａ ｌ ａ ｎ ｄ ｐ ｒａ ａ ｓ ｉ ｔ ｉ ｃ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ｏ ｆ ａ ｑ ｕ ａ ｔ ｉ ｃ ａ ｎ ｄ ｔ ｅ ｒ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｉ ａ ｌ ｎｉ ａ ｍａ ｌ ｓ ． Ｔｈ ｅ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ ｎｄ ａ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｌ ＡＭ Ｐ ａ ｒ ｅ ｆ ｕ ｒ ｔ ｈ ｅ ｒ ｆ ａ ｃ ｉ ｌ ｉ ｔ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｍｂ ｉ ｎ ｅ ｄ
LAMP技术在微生物检测中的应用
LAMP技术在微生物检测中的应用【摘要】本文以LAMP技术的优缺点为分析对象，并食源性致病徽生物和临床致病微生物检测行业的发展现状进行了阐述，结合实际情况，对LAMP技术在微生物检测中的应用进行了探讨。
【关键词】LAMP技术，微生物检测，应用一、前言LAMP技术是随着微生物检测技术发展而不断发展的，LAMP技术在微生物检测中的应用中越来越广泛。
经过几十年的迅速发展，目前LAMP技术已广泛应用于很多微生物检测当中，成为一门实用的技术。
二、LAMP技术的优缺点1、优点（一）、特异性强、灵敏度高4条引物可以严格识别靶核酸序列上的6个独立区域,反应过程不会受到反应混合物种非靶序列DNA的影响,保证了LAMP扩增的高度特异性。
在检测过程中可以根据是否扩增就能判断目标基因是否存在,可用于细菌或病毒的定性检测。
（二）、等温高效LAMP在等温条件下扩增,不会因温度改变而造成时间的损失,在1 h内可将靶序列扩增至109～1010倍。
而且受非靶序列的影响小,模板也不需要热变性。
（三）、整个扩增反应操作简便、快捷LAMP反应过程中会产生白色的焦磷酸镁沉淀,肉眼即可直接观察,是鉴定反应是否进行的最直接方法。
另外,LAMP扩增产物可以像PCR反应利用凝胶电泳结合成像系统进行鉴定,通过产生的不同梯型来区分特异性扩增和非特异性扩增。
（四）、实验装置简单,费用相对较低LAMP反应不需要进行模板的热变性、长时间的温度循环、繁琐的电泳和紫外观察等,在操作过程中,仅需要普通的水浴锅或其他可以得到稳定热源的设备即可。
2、缺点（一）、LAMP技术对试验设计的要求较高需要设计的引物数目相对较多、结构复杂,需要考虑到靶序列的片段及茎环结构等因素。
在检测高度变异的病原体时,实验设计相对比较困难（二）、LAMP技术在一次反应中只能检测一个病原体LAMP技术的阳性反应并不只呈现单条带,而出现拖尾和一些低分子质量的带,一旦产生非特异性扩增,则不易鉴别。
环介导等温扩增技术(LAMP)检测人星状病毒方法的建立及其在再生水检测中的应用
环介导等温扩增技术(LAMP)检测人星状病毒方法的建立及其在再生水检测中的应用杨丽;何晓青;韦玉梅;朱轶;程莉;王子健;黄文【摘要】为快速高效地检测人星状病毒,建立了一种新的试验方法——环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification technology,LAMP),并对人星状病毒LAMP反应条件进行了优化.结果表明,镁离子终浓度为4 mmol·L-1、甜菜碱终浓度为1mol.L-1的25μL体系下65℃反应90 min为其最佳反应条件.对扩增终产物进一步进行酶切分析得到的条带大小与预期的结果(84和135 bp)吻合,以人星状病毒、轮状病毒及诺如病毒为模板进行特异性测试亦没有发生交叉反应.将人星状病毒质粒等倍稀释后分别用LAMP及聚合酶链式反应(PCR)检测其灵敏度,结果表明,LAMP与PCR的灵敏度分别达到5.04 copies·μL-1和50.4 copies·μL-1.用改良的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)及逆转录PCR(RT-PCR)检测12个再生水水样,其中人星状病毒检出率为分别为41.7％ (5/12)和33.3％ (4/12).以上结果证明,LAMP是一种检测程序简单、灵敏度和特异性较高的检测手段,在人星状病毒的快速检测方面具有一定的开发潜力.%A loop-mediated isothermal amplification (LAMP) technology was developed for rapidly detecting human astrovirus. The data showed that the optimal amplification condition was at 65℃ for 90 min with 4 mmol·L-1 magnesium ions and 1 mol-L"' betaine. The specificity of RT-LAMP assay was further validated by restriction analgsis of the amplified products and we got two bands (84bp and 135bp) as expected . There is also no cross-reaction with different virus (human rotavirus and norovirus) and restriction analysis of the amplified products. The sensitivity of the LAMP and PCR were 5.04copies·μL-1and 5.04 × 10 copies· μL-1, respectively. Improved RT-LAMP and RT-PCR wereboth used for detection of human astrovirus in 12 reclaimed water samples. The detection rates of human astrovirus were 41.7% (5/12) and 33.3% (4/12), respectively. All these results suggested that LAMP was a simple, high sensitivity and specificity method which was potential for rapid detection of human astrovirus.【期刊名称】《生态毒理学报》【年(卷),期】2011(006)006【总页数】7页(P600-606)【关键词】人星状病毒;环介导等温扩增技术(LAMP);HNB;焦磷酸镁;再生水【作者】杨丽;何晓青;韦玉梅;朱轶;程莉;王子健;黄文【作者单位】北京林业大学生物科学与技术学院,北京 100083;中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室,北京 100085;华中农业大学食品科技学院,湖北武汉 430070;北京林业大学生物科学与技术学院,北京 100083;北京林业大学生物科学与技术学院,北京 100083;中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室,北京 100085;北京林业大学生物科学与技术学院,北京 100083;北京林业大学生物科学与技术学院,北京 100083;中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室,北京 100085;中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室,北京 100085;华中农业大学食品科技学院,湖北武汉 430070【正文语种】中文【中图分类】X171.51 引言(Introduction)人星状病毒(human astrovirus，HAstV)于1975年从腹泻婴儿粪便中分离得到，呈球形，28～30 nm，无包膜，电镜下表面结构呈星形，有5～6个角，故Madeley和Cosgrove将其命名为星状病毒。
LAMP技术及应用PPT参考幻灯片
沉淀的产生来肉眼直接判断扩增反应是否进行。（图B）
➢ 通过荧光染料检测 有时，通过肉眼观察白色沉淀来检测会存在一定的误差，所
以也可通过添加荧光染料，如溴化乙锭(EB)、SYBR GreenI等进行 染色，来检测扩增是否发生。（图C）
安徽省胸科医院&安徽省结防所
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LAMP法在结核菌检测中的应用
临床试验
—— LAMP法和对照试剂（TB-qPCR）对比结果
➢ 阳性一致率=88.56% ➢ 阴性一致率=93.06% ➢ 总符合率=91.36%
安徽省胸科医院&安徽省结防所
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WHO 认为LAMP法的检测结果优于痰涂片检测。在 已有肺结核症状的检测者中进行对比，TB-LAMP法比 痰涂片检测法多检出15%的患者。对比WHO近年推荐 的其它快速检测法，如果把TB-LAMP法用于对痰涂片 检测阴性患者的复查，TB-LAMP法检出率要高40%。
➢ 结果易读 产物和显色液直接显色即可肉眼判断结果。
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LAMP法在结核菌检测中的应用
临床试验
—— LAMP法和对照试剂（BD快速培养）对比结果
➢ 灵敏度＝89.54% ➢ 特异性＝98.93% ➢ 总符合率＝95.31%
阳性结果预期值＝98.13% 阴性结果预期值＝93.77%
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LAMP法的引物设计
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LAMP法的原理
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LAMP法的原理
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LAMP技术特点
lamp技术介绍以及在微生物检测中的应用
研究生课程论文课程: 微生物检测技术题目LAMP技术及其在微生物检测中的应用姓名: 王飞学院: 生命科学学院专业: 微生物学号: 201121601620 11 年12 月30 日LAMP技术及其在微生物检测中的应用摘要：环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification，LAMP)技术是近年来发展出的一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。
与传统PCR方法相比，LAMP不需要热循环，为等温扩增，且由于LAMP反应中产生大量的副产物一白色焦磷酸镁沉淀，扩增产物可不经过电泳，通过肉眼观察或浊度计即可判定结果。
因此LAMP是一种不需要热循环仪、肉眼即可判定结果的高度特异和敏感的DNA 扩增方法。
近年LAMP技术在病原微生物检测及食品微生物检测上已有广泛应用，本文就LAMP极其在这两方面的研究进展作一综述。
关键词：LAMP；环介导等温扩增；核酸扩增Application of LAMP in detection of microorganism Abstract:LAMP (loop-mediated isothermal amplification) method, which develops in recent years, is a sensitivity, special and convenience nucleic acid amplification technique. To compare with the traditional PCR, LAMP, which needn’t hot circle, is constant temperature amplification. Because LAMP can produce a mount of coproduce, magnesium pyrophosphate,which is a white precipitation,the result can be estimated by eyes or nephelometer without electrophoresis. In recent years, the application of LAMP in detection of disease pathogen and microorganism in food had been wide studied. These articles summarize the studies in these two aspects.Key words:LAMP; loop-mediated isothermal amplification; nucleic acid amplification 1.引言核酸体外扩增技术是分子生物学领域最重要的研究手段之一，以检测核酸为基础的分子诊断技术已广泛应用于临床医学和微生物检测等领域。
免疫检验技术 新冠检验方法
免疫检验技术新冠检验方法
免疫检验技术的新冠检验方法如下：
RT-PCR。
RT-PCR是目前应用最广泛的新冠病毒检测方法。
该方法利用逆转录酶将新冠病毒RNA转录为cDNA，然后利用PCR技术扩增cDNA，通过荧光信号检测新冠病毒RNA的存在。
LAMP。
LAMP是一种新兴的核酸检测方法，也被广泛应用于新冠病毒检测中。
LAMP方法利用特定的酶和引物，在等温条件下扩增目标DNA序列，并通过可视化技术检测新冠病毒RNA 的存在。
免疫荧光分析法。
免疫荧光分析法是一种基于免疫荧光原理的抗体检测方法，该方法利用特定的抗体标记荧光物质，通过荧光信号检测新冠病毒抗体水平的存在。
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LAMP技术在病毒检测中的应用发表时间：2013-01-31T16:04:31.107Z 来源：《医药前沿》2012年第31期供稿作者：吴昊1 孙立新2 叶松1 陆军1 杨庆贵2[导读] LAMP（Loop-mediated Isothermal Amplification）环介导等温扩增技术，是近年来新兴的分子生物学检测技术吴昊1 孙立新2 叶松1 陆军1 杨庆贵2（1安徽理工大学医学院病原生物教研室安徽淮南 232001）（2江苏出入境检验检疫局医学媒介生物监测实验室江苏南京 210001）【摘要】LAMP（Loop-mediated Isothermal Amplification）环介导等温扩增技术，是近年来新兴的分子生物学检测技术。
因其特异性强、等温扩增，反应灵敏、操作简单、产物易检测，此项技术已被用于多种病原微生物的检测。
本文综述了LAMP技术的原理以及其在几种常见病毒检测项目中的应用。
【关键词】 LAMP 技术原理病毒检测【中图分类号】R319 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）31-0064-02病原微生物带来的卫生问题时常出现，各种检测手段也不断更新。
但由于非特异性扩增、反应操作程序复杂、及仪器昂贵等问题，很多方法在疾病爆发时筛查现场和监测站点的应用受到限制。
LAMP技术是由日本学者Notomi等[1]在2000年开发的一种新型快速的扩增技术，它能在一定温度范围内，通过一个步骤在短时间内对目的片段进行大量有效扩增。
其具有高特异性、高效性、快速、低成本、易检测、结果易观察等特点，被广泛用于各种病原体检测和研究中并取得了一定的成就。
1 LAMP技术原理1.1 扩增机制LAMP技术利用能够特异性识别靶序列上的6个独立区域的两对内、外引物，及具有链置换活性的BstDNA聚合酶启动循环链置换反应来进行靶序列的扩增[1]。
反应中，先由外部引物将内部引物扩增所需要的模板扩增出来，然后由内部引物对靶基因片段进行引导合成。
由于内部引物所扩增出的片段含有与该引物5’端DNA片段的反相互补序列，因此这些反相互补序列之间形成茎-环结构，同时，另外一条内部引物与也可形成茎-环结构，片段的两端形成哑铃状结构，如此循环往复的过程最后形成花椰菜形状的茎-环结构，可在15min-60min之内实现109-1010倍的括增[2]。
1.2 结果观察扩增后可以通过琼脂糖电泳后染色进行观察，更可通过扩增衍生物焦磷酸镁进行观察：阳性的样本会出现白色浑浊沉淀，而阴性则无此现象。
同时也可以应用SYBR Green I染色，呈现绿色的为阳性，橙色的为阴性[2]。
2 病毒检测2.1 日本脑炎病毒日本脑炎又称乙脑，是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus)引起的一种常见的蚊媒传染病。
JEV的检测方式很多，如血清学，病毒分离等，但耗时繁琐、敏感性特异性都较低。
TORINIWA等[3]利用LAMP技术原理建立了快速Real-time RT-LAMP方法，该方法通过扩增JEV病毒的包膜（E）蛋白基因来定量检测JEV病毒，可将检测用时缩短至1h，检测下限为1PFU并与常规RT-PCR具有相似的敏感性。
且不需特殊设备、操作方便，有利于推广其在基层的应用。
2.2 西尼罗河病毒西尼罗河病毒（West Nile Virus，WNV）是引起西尼罗河热的病原体，近年来在世界部分地区的流行并造成了重大的损失。
PARIDA 等[4]创立了一种一步法来检测WNV，通过凝胶电泳或者浊度仪来对扩增结果进行判定。
结果显示其敏感性比常规RT-PCR高10倍。
2.3 甲型流感病毒甲型流感病毒（AIV)具有高度传染性，致病性，以及致死率。
对甲流病毒的检测方法主要为病毒分离，抗原和抗体检测以及PCR方法，但是过程费时繁琐。
POON等[5]设计了特异性引物，利用LAMP技术成功的检测了H1-H3型的AIV，与PCR方法比较阳性符合率为100%，敏感度可达传统方法的100倍。
LAMP技术由于其检测的简便快速且高度敏感，可更多的用于现场检测。
2.4 禽流感病毒的检测禽流感是由禽类A型流感病毒引起的一种急性、高接触性的传染病，可带来重大损失。
禽流感检测方法有各类血清学试验以及免疫学实验等。
这些方法都存在着如试验周期较长，操作繁琐，检测材料受限制等不足。
国内李启明等[8]对H5N1亚型禽流感病毒进行了RT-LAMP检测，验证和分析后证明其特异性与常规方法一致，并且其灵敏度可达到10个拷贝。
侯佳蕾等[6]根据H5亚型禽流感病毒血凝素基因序列设计了引物，并建立了一种针对性的检测诊断方法。
结果表明，该方法的灵敏度高于一步RT-PCR法。
2.5 口蹄疫病毒的检测口蹄疫是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的一种急性，热性，高度接触性传染病，主要侵害偶蹄兽并给经济带来极大威胁。
血清学检测不足以确定整群动物是否带毒而PCR方法由于需要专门的仪器。
吴绍强等[7]以灭活的亚洲I型口蹄疫细胞培养病毒为材料，设计引物并建立了口蹄疫病毒RT-LAMP检测法，为口蹄疫现场快速检测提供了有效的方法。
2.6 丙型肝炎病毒（HCV）的检测HCV是一种常见的病毒，传播途径为母婴传播和血液传播。
目前最常用的方法是ELLSA法检测抗原抗体或PCR法。
但是由病毒的抗原量极少，所以常规免疫学方法常无法检测出病毒。
PCR方法操作复杂繁琐，特异性较低。
李启明等[8]利用LAMP技术的原理，利用特殊引物进行了LAMP扩增，成功的检测HCV基因，实验结果阳性符合率高达98%。
这一成果证实了LAMP技术的优势。
2.7 严重急性呼吸窘迫综合征冠状病毒（SARS-CoV）的检测SARS带来的阴影提醒人们对此类病毒检测的重要性。
目前临床上对其检测的方法主要有2种。
一是检测SARS-CoV抗体，虽然此法灵敏度较高，但在发病初期不能检出。
二是Real-time PCR，这种方法可在发病早期检测出SARS-CoV，但是其需要熟练操作技术以及高成本仪器，不适于常规筛查。
POON等[9]利用改良LAMP法对人群的鼻咽分泌物样本进行了检测。
结果显示SARS病人中的SARS-CoV检出率为64%，且随着病情的发展检出率进一步提高。
HONG[10]等根据LAMP原理设计的方法对来自越南河内SARS流行期间的病人和健康人标本进行检测，结果证明RT-LAMP法的灵敏度是RT-PCR的100倍，且更加省时，经济简便。
2.8 其他病毒的检测LAMP技术还在诺瓦克病毒、单纯疱疹病毒、腮腺炎病毒、乙型肝炎病毒、小颗粒病毒、病毒性出血性、败血症病毒、伪狂犬病毒、尧新城疫病毒等的检测中得到了应用。
3 结语综上所述，LAMP技术是一种不需要特殊仪器设备且便捷灵敏而又快速的检测手段。
能够在现场对样本进行快速准确的检测。
但由于其易受污染导致假阳性，所以相关的技术以及体系需要进一步的优化和革新。
相信LAMP技术会在不远的将来得到更加广泛的应用和更高的价值体现。
参考文献[1]Notomi T,Okayama,Masubuchi H,et al.Loop-mediated isothermal amplification of DNA[J].Nucleic Acids Res,2000,28(12):E63.[2]IWAMOTO T ,SONOBE T,HAYASHI K.Loop-mediated isothermal amplification for direct detection omycobacterium tuberculosis complex,M.avium and M.intracellulare in sputum samples[J].J Clin Microbiol,2003,41(6):2616-2622.[3]TORINIWA H,KOMIYA T.Rapid detection and quantification of Japanese encephalitis virus by real-time reverse transcription Loop-mediated isothermal amplification[J].Microbiol Immunol,2006,50(5):379-387.[4]PARIDA M,POSADAS G,INOUE S,et al.Real-time reverse transcription Loop-mediated isothermal amplification for rapid detection of West Nile virus[J].J Clin Microbiol,2004,42(1):257-263.[5]Poon LIM,Leung CSW,Chan KH,et al.Detection of human influenza Aviruses by Loop-mediated isothermal amplification[J].J Clin Microbiol,2005,43（1）：427-430.[6]侯佳蕾，罗开健，樊惠英等.H5亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立[J].中国兽医科学，2008，38（12）：1070-1074.[7]吴绍强，林祥梅，刘建等.亚洲I型口蹄疫病毒环介导等温扩增（LAMP）检测方法的建立[J].检验检疫科学，2008，18（1）：9-12.[8]李启明，马学军，彭夫望等.环介导逆转录等温扩增技术（RT-LAMP）在丙型肝炎病毒基因检测中的应用[J].病毒学报，2006，22（5）：334-338.[9]POON LL,LEUNG C S,TASHIRO M,et al.Rapid detection of the severe acute respiratory syndrome(SARS) coronavirus by a Loop-mediated isothermal amplification assay [J].Clin Chem,2004,50(6):1050-1052.[10]HONG T C,MAL Q L,CHONG D V,et al.Development and evaluation of a novel Loop-mediated isothermal amplification method for severe acute respiratory syndrome Coronavirus[J].J Clin Microbiol,2004,50(6):1050-1052.。