迈瑞BriCyteE6流式细胞仪介绍
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BriCyte E6流式细胞仪
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2020/7/22
1
目录
流式细胞仪基础知识 流式细胞术应用 迈瑞流式细胞仪BriCyte E6介绍
竞争产品介绍
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2020/7/22
17
流式细胞仪的临床应用
• 主要项目：
∞ 淋巴细胞亚群分析
∞ HLA-B27检测 ∞ 白血病免疫分型
急性白血病、慢性淋巴增生性疾病（CLD)/淋巴瘤
∞ 造血干细胞分析
造血干细胞相对计数； 造血干细胞绝对计数；
∞ 阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）诊断
CD55/CD59检测
∞ 血小板相关分析
∞ 许多研究证据表明人群中HLA-B27的表达频率与AS的发病率高度相关； ∞ AS患者中HLA-B27的阳性率显著高于普通人群，高达90%以上，而普通
人群HLA-B27的阳性率低于10%，HLA-B27阴性的普通人群未患AS的几 率为99.9%； ∞ HLA-B27检测阳性可显著增加正确诊断AS的几率，阴性则为排除AS的诊 断提供了有力的证据；
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2020/7/22
27
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迈瑞流式细胞仪Bricyte E6介绍
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2020/7/22
28
BriCyte E6 产品特点
类风湿、重症肌无力、SLE、自身溶血性贫血；
AIDS、传染性单核细胞增多症、病毒感染、肿瘤；
MM、巨球蛋白血症、淋巴瘤、AIDS；
先天性免疫缺陷病、恶性肿瘤；
病毒感染早期、骨髓移植术后、习惯性流产；
恶性肿瘤、部分病毒\细菌和真菌感染；
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2020/7/22
流式细胞术应用
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2020/7/22
15
流式细胞仪的应用
临床研究
血液，肿瘤， 药理，免疫…
环境研究
湖泊，海洋 生态研究…
生物学研究
遗传，生殖， 微生物，细胞 生物，毒理， 分子生物…
食品制药工业
食品检测、药物筛 选，疫苗研究…
农业畜牧业
选种，育种…
t
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2020/7/22
7
常用的激光器和 标记单克隆抗体的荧光素
488nm激光激发：
• FITC（异硫氰酸荧光素）： 荧光强度可受pH的影响，当pH降低 时其荧光强度也随之减弱
• PE（藻红蛋白） • PerCP（多甲藻叶绿素蛋白）：光量子产量并不太高，最好应用在
抗原抗体反应
计量
宏观和微观 输出
百分比或绝对计数 （如 %、**个/uL）； 物质的量或定性判定 （L、UI/L、 阴性、阳 pmol/m性）
测量宏观对象（细胞）上的 微观物质（抗原、看不见、 摸不到）
百分比和绝对计数 （如 %、**个/L）
物质的量 （mol/L）
测定宏观对象（细胞）上的宏 测量微观物质（可溶性成
2020/7/22
2
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流式细胞仪基础知识
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2020/7/22
3
流式细胞仪的定义
流式细胞仪(flow cytometer)：
是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计 算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的 高科技仪器。可对单个生物颗粒在流动状态进行分子功能水 平上的定量定性分析。
血小板计数、血小板免疫表型分析
∞ 细胞周期与DNA倍体分析
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18
淋巴细胞亚群分析
淋巴细胞根据功能分类
淋巴细胞种类
特异性分子标记
T淋巴细胞
CD3+
B淋巴细胞
CD3-CD19+
NK淋巴细胞
CD3-CD16+CD56+
T淋巴细胞根据表面分子分类
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20
淋巴细胞亚群分析在肿瘤内科中的应用
临床意义 CD3+ CD3+ CD4+ CD3+ CD8+
CD4+ / CD8+
肿瘤进展
↓
↓
↑
↓
B细胞 NK细胞
↑
↓
预后不良
↓
↓
↑
↓
复发转移
↓
↓
↑
↓
有效手术
↑
↑
↓
↑
↓
↑
有效化疗
↑
↑
↓
↑
↓
↑
wenku.baidu.com
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2020/7/22
21
淋巴细胞亚群分析在风湿免疫科中的应用
临床意义 CD3+ CD3+ CD4+ CD3+ CD8+
CD4+ / CD8+
SLE
↓
↑
类风湿性 关节炎
自身免疫 性溶血性
贫血
重症肌无 力
↑
↓
↑
↓
↑
↓
↑
免疫缺陷 病
↓
↓
↓
↓
B细胞 NK细胞
血清
免疫分析仪
血清
测试目标 测试原理
物理或化学性质（如细胞大 物理或化学性质（如细胞大小、 化学成分和一些小分子物 小、内部复杂程度、DNA含 内部复杂程度、DNA含量） 质（如钾、钠、钙、酶） 量）；
小分子物质（如抗原，抗体）
流式细胞术+抗原抗体反应 流式细胞术
化学比色法
小分子物质（如抗原、 抗体、激素）
淋巴细胞种类
特异性分子标记
T辅助/诱导淋巴细胞
CD3 + CD4 +
T抑制/细胞毒淋巴细胞 CD3 + CD8 +
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2020/7/22
19
淋巴细胞亚群分析的临床应用
淋巴细胞亚群分析可以了解机体在不同条件下的免疫 功能状态，主要包括细胞免疫功能和体液免疫功能。在临床 上，主要用于对免疫系统造成明显干扰的相关疾病的辅助诊 断，分析疾病的发病机理，监控疾病的病程进展，观测疗效 及监测预后等等。
t
FL2 (PE)
(PE-cy7) FL3 (PerCP)
585/40
670LP
785/60
反光镜 反光镜
488/10
SS
785/60
t v
530/30
740LP FL6
488/10
645LP 660/20
(APC-cy7)
FSC
t
488/10
550LP 491/LP
FL4
v
FL4
(APC)
v
FS
t
↑
↓
↓
↓
↓
↑
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2020/7/22
22
淋巴细胞亚群分析在器官移植中的应用
• 急性排斥反应是器官移植的第一大障碍；
• 动态观测受者淋巴细胞亚群变化特点，对判断急性排斥 反应和估计移植后感染等预后具有重要意义；
• 当CD4+ / CD8+比值持续升高且大于1.2时应当考虑排斥 发生；当CD4+ / CD8+比值持续降低表明移植后出现感 染；若CD4+ / CD8+比值小于0.2时，应立即停用免疫抑 制剂；
11, 4% 3, 1%
26, 10%
64, 24%
112, 41%
检验科 中心实验室 血液科 血液病研究所 肿瘤科 分子生物中心 病理科 感染科 肾病实验室 肝病研究所 肺病研究所 肾病研究所 免疫中心 内科 外科 放射科 皮肤科 其他
国内三甲医院中流式细胞仪分布图（2012年）
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2020/7/22
23
常见疾病的淋巴细胞亚群变化
细胞亚群
CD3+T细胞
CD3+ CD4+ T细胞
CD3+ CD8+ T 细胞
（CD3+ CD4+ ） / （ CD3+ CD8+ ）比
值
B细胞
NK细胞
变化
增高 降低 增高 降低 增高 降低 增高 降低 增高 降低 增高 降低
研究对象：生物颗粒； 检测信号：光信号（散射光，荧光）； 分析特点：快速，特异，准确，客观，多参数；
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4
流式细胞仪基本构造
➢ 液流系统 ➢ 光学系统 ➢ 电子系统 ➢ 数据分析系统
① ③
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检测表达较高的抗原上 • PerCP-Cy5.5（叶绿素蛋白偶联物） • PE-Cy7（藻红蛋白偶联物） • PE-Cy5（藻红蛋白偶联物） • PE-Texas Red（藻红蛋白-德州红偶联物）
638nm激光激发：
• APC（别藻青蛋白） • APC-Cy7（别藻青蛋白偶联物）
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2020/7/22
16
流式细胞仪的临床应用
• 主要科室：
检验科、中心实验室、血液科、肿瘤科、病理科、肾病研究、免疫中心、…
2,
2, 1%
1% 3, 1%
3, 1% 3, 1% 2, 1%
4, 1%
4, 1%
9, 3%
3, 1% 2, 1% 2, 1% 15, 6%
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25
TBNK四色试剂盒
• 简单准确的淋巴细胞亚群的分型方 案——双管四色;
• 无需仪器设置，信号采集、分析与 报告一键式解决方案——全自动 TBNK四色试剂盒配套分析软件;
• 检测结果准确可靠，阳性细胞峰荧 光强度高，阴阳性细胞群分离度 好——试剂分析性能优于同类主流 产品；
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8
荧光素的选择
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2020/7/22
9
荧光补偿
由于每一种荧光素分子都发射某一特定波长范围内的光，然而这些荧光的 发射光谱会发生部分重叠，有时这种重叠现象非常显著。
为了能够在存在荧光泄露的情况下，得到真实的多色荧光发射信号，在流 式细胞仪中采用了称之为颜色补偿的方法，通过测得信号经修正得到真实信号 加以使用。
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5
流式细胞仪分析流程
1 单个细胞悬液制备 2 样本细胞荧光标记 3 流式细胞仪检测 4 数据分析处理
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6
流式细胞仪工作原理
SSC FL2 FL5
FL6
v v
v
t
FL3
FL5
FL1
v t
v t
FL1 (FITC)
观物质（物理、复杂度、含量， 分和一些小分子物质，看
看得见、摸得到）
不见、摸不到）
物质的量或定性判定 （L、UI/L、 阴性、阳 pmol/m性）
测量微观物质（小分子 物质，看不见、摸不到）
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14
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26
HLA-B27检测双色试剂
• 有效排除HLA-B7和非特异性吸 附带来的假阳性并且准确识别 HLA-B27/HLA-B7双阳性样本— —HLA-B27/HLA-B7双抗原与同 型对照双管分析设计;
• 无需仪器设置，信号采集、分 析与报告一键式解决方案—— 全自动HLA-B27检测双色试剂 配套分析软件;
11
散射光双参数散点图
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12
荧光双参数散点图
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13
流式细胞仪与几种检验仪器的比较
项目
测试对象
流式细胞仪
细胞
血球仪
细胞(测量设置全部固定化）
生化分析仪
FITC 530/30
PE 585/40
实真测实
FITC通道信号 =
+
真实实测
PE通道信号 =
+
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10
数据分析-图形类型
数据显示
直方图 散点图 等高线图 密度图 三维图
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24
HLA-B27检测与强直性脊柱炎诊断
• 强直性脊柱炎（AS）定义：
一种慢性、进行性和炎性疾病，主要累计骶髂关节、脊柱、脊柱软组 织及四肢关节，表现为椎间盘纤维环和纤维环结缔组织的骨化，椎间动关节 和四肢关节滑膜的炎症和增生，严重者可失去劳动能力。
• 淋巴细胞HLA-B27检测在AS中的诊断价值：
常见疾病
T系淋巴细胞白血病、SLE、重症肌无力、慢性活动性肝炎；
恶性肿瘤晚期、B系细胞白血病、多发性骨髓瘤，传染性单核细胞 增多症、免疫缺陷病；
类风湿（活动期）、自身溶血性贫血；
AIDS、肿瘤晚期、巨细胞病毒感染、麻风、血小板减少；
病毒感染（HBV、EB）、肿瘤、传染性单核细胞增多症；
类风湿、重症肌无力、免疫缺陷病、肿瘤放射治疗；
BriCyte E6流式细胞仪
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流式细胞仪基础知识 流式细胞术应用 迈瑞流式细胞仪BriCyte E6介绍
竞争产品介绍
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流式细胞仪的临床应用
• 主要项目：
∞ 淋巴细胞亚群分析
∞ HLA-B27检测 ∞ 白血病免疫分型
急性白血病、慢性淋巴增生性疾病（CLD)/淋巴瘤
∞ 造血干细胞分析
造血干细胞相对计数； 造血干细胞绝对计数；
∞ 阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）诊断
CD55/CD59检测
∞ 血小板相关分析
∞ 许多研究证据表明人群中HLA-B27的表达频率与AS的发病率高度相关； ∞ AS患者中HLA-B27的阳性率显著高于普通人群，高达90%以上，而普通
人群HLA-B27的阳性率低于10%，HLA-B27阴性的普通人群未患AS的几 率为99.9%； ∞ HLA-B27检测阳性可显著增加正确诊断AS的几率，阴性则为排除AS的诊 断提供了有力的证据；
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迈瑞流式细胞仪Bricyte E6介绍
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BriCyte E6 产品特点
类风湿、重症肌无力、SLE、自身溶血性贫血；
AIDS、传染性单核细胞增多症、病毒感染、肿瘤；
MM、巨球蛋白血症、淋巴瘤、AIDS；
先天性免疫缺陷病、恶性肿瘤；
病毒感染早期、骨髓移植术后、习惯性流产；
恶性肿瘤、部分病毒\细菌和真菌感染；
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流式细胞术应用
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15
流式细胞仪的应用
临床研究
血液，肿瘤， 药理，免疫…
环境研究
湖泊，海洋 生态研究…
生物学研究
遗传，生殖， 微生物，细胞 生物，毒理， 分子生物…
食品制药工业
食品检测、药物筛 选，疫苗研究…
农业畜牧业
选种，育种…
t
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常用的激光器和 标记单克隆抗体的荧光素
488nm激光激发：
• FITC（异硫氰酸荧光素）： 荧光强度可受pH的影响，当pH降低 时其荧光强度也随之减弱
• PE（藻红蛋白） • PerCP（多甲藻叶绿素蛋白）：光量子产量并不太高，最好应用在
抗原抗体反应
计量
宏观和微观 输出
百分比或绝对计数 （如 %、**个/uL）； 物质的量或定性判定 （L、UI/L、 阴性、阳 pmol/m性）
测量宏观对象（细胞）上的 微观物质（抗原、看不见、 摸不到）
百分比和绝对计数 （如 %、**个/L）
物质的量 （mol/L）
测定宏观对象（细胞）上的宏 测量微观物质（可溶性成
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流式细胞仪基础知识
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流式细胞仪的定义
流式细胞仪(flow cytometer)：
是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计 算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的 高科技仪器。可对单个生物颗粒在流动状态进行分子功能水 平上的定量定性分析。
血小板计数、血小板免疫表型分析
∞ 细胞周期与DNA倍体分析
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淋巴细胞亚群分析
淋巴细胞根据功能分类
淋巴细胞种类
特异性分子标记
T淋巴细胞
CD3+
B淋巴细胞
CD3-CD19+
NK淋巴细胞
CD3-CD16+CD56+
T淋巴细胞根据表面分子分类
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20
淋巴细胞亚群分析在肿瘤内科中的应用
临床意义 CD3+ CD3+ CD4+ CD3+ CD8+
CD4+ / CD8+
肿瘤进展
↓
↓
↑
↓
B细胞 NK细胞
↑
↓
预后不良
↓
↓
↑
↓
复发转移
↓
↓
↑
↓
有效手术
↑
↑
↓
↑
↓
↑
有效化疗
↑
↑
↓
↑
↓
↑
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淋巴细胞亚群分析在风湿免疫科中的应用
临床意义 CD3+ CD3+ CD4+ CD3+ CD8+
CD4+ / CD8+
SLE
↓
↑
类风湿性 关节炎
自身免疫 性溶血性
贫血
重症肌无 力
↑
↓
↑
↓
↑
↓
↑
免疫缺陷 病
↓
↓
↓
↓
B细胞 NK细胞
血清
免疫分析仪
血清
测试目标 测试原理
物理或化学性质（如细胞大 物理或化学性质（如细胞大小、 化学成分和一些小分子物 小、内部复杂程度、DNA含 内部复杂程度、DNA含量） 质（如钾、钠、钙、酶） 量）；
小分子物质（如抗原，抗体）
流式细胞术+抗原抗体反应 流式细胞术
化学比色法
小分子物质（如抗原、 抗体、激素）
淋巴细胞种类
特异性分子标记
T辅助/诱导淋巴细胞
CD3 + CD4 +
T抑制/细胞毒淋巴细胞 CD3 + CD8 +
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淋巴细胞亚群分析的临床应用
淋巴细胞亚群分析可以了解机体在不同条件下的免疫 功能状态，主要包括细胞免疫功能和体液免疫功能。在临床 上，主要用于对免疫系统造成明显干扰的相关疾病的辅助诊 断，分析疾病的发病机理，监控疾病的病程进展，观测疗效 及监测预后等等。
t
FL2 (PE)
(PE-cy7) FL3 (PerCP)
585/40
670LP
785/60
反光镜 反光镜
488/10
SS
785/60
t v
530/30
740LP FL6
488/10
645LP 660/20
(APC-cy7)
FSC
t
488/10
550LP 491/LP
FL4
v
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(APC)
v
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t
↑
↓
↓
↓
↓
↑
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淋巴细胞亚群分析在器官移植中的应用
• 急性排斥反应是器官移植的第一大障碍；
• 动态观测受者淋巴细胞亚群变化特点，对判断急性排斥 反应和估计移植后感染等预后具有重要意义；
• 当CD4+ / CD8+比值持续升高且大于1.2时应当考虑排斥 发生；当CD4+ / CD8+比值持续降低表明移植后出现感 染；若CD4+ / CD8+比值小于0.2时，应立即停用免疫抑 制剂；
11, 4% 3, 1%
26, 10%
64, 24%
112, 41%
检验科 中心实验室 血液科 血液病研究所 肿瘤科 分子生物中心 病理科 感染科 肾病实验室 肝病研究所 肺病研究所 肾病研究所 免疫中心 内科 外科 放射科 皮肤科 其他
国内三甲医院中流式细胞仪分布图（2012年）
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23
常见疾病的淋巴细胞亚群变化
细胞亚群
CD3+T细胞
CD3+ CD4+ T细胞
CD3+ CD8+ T 细胞
（CD3+ CD4+ ） / （ CD3+ CD8+ ）比
值
B细胞
NK细胞
变化
增高 降低 增高 降低 增高 降低 增高 降低 增高 降低 增高 降低
研究对象：生物颗粒； 检测信号：光信号（散射光，荧光）； 分析特点：快速，特异，准确，客观，多参数；
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流式细胞仪基本构造
➢ 液流系统 ➢ 光学系统 ➢ 电子系统 ➢ 数据分析系统
① ③
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检测表达较高的抗原上 • PerCP-Cy5.5（叶绿素蛋白偶联物） • PE-Cy7（藻红蛋白偶联物） • PE-Cy5（藻红蛋白偶联物） • PE-Texas Red（藻红蛋白-德州红偶联物）
638nm激光激发：
• APC（别藻青蛋白） • APC-Cy7（别藻青蛋白偶联物）
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流式细胞仪的临床应用
• 主要科室：
检验科、中心实验室、血液科、肿瘤科、病理科、肾病研究、免疫中心、…
2,
2, 1%
1% 3, 1%
3, 1% 3, 1% 2, 1%
4, 1%
4, 1%
9, 3%
3, 1% 2, 1% 2, 1% 15, 6%
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TBNK四色试剂盒
• 简单准确的淋巴细胞亚群的分型方 案——双管四色;
• 无需仪器设置，信号采集、分析与 报告一键式解决方案——全自动 TBNK四色试剂盒配套分析软件;
• 检测结果准确可靠，阳性细胞峰荧 光强度高，阴阳性细胞群分离度 好——试剂分析性能优于同类主流 产品；
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荧光素的选择
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9
荧光补偿
由于每一种荧光素分子都发射某一特定波长范围内的光，然而这些荧光的 发射光谱会发生部分重叠，有时这种重叠现象非常显著。
为了能够在存在荧光泄露的情况下，得到真实的多色荧光发射信号，在流 式细胞仪中采用了称之为颜色补偿的方法，通过测得信号经修正得到真实信号 加以使用。
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流式细胞仪分析流程
1 单个细胞悬液制备 2 样本细胞荧光标记 3 流式细胞仪检测 4 数据分析处理
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6
流式细胞仪工作原理
SSC FL2 FL5
FL6
v v
v
t
FL3
FL5
FL1
v t
v t
FL1 (FITC)
观物质（物理、复杂度、含量， 分和一些小分子物质，看
看得见、摸得到）
不见、摸不到）
物质的量或定性判定 （L、UI/L、 阴性、阳 pmol/m性）
测量微观物质（小分子 物质，看不见、摸不到）
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HLA-B27检测双色试剂
• 有效排除HLA-B7和非特异性吸 附带来的假阳性并且准确识别 HLA-B27/HLA-B7双阳性样本— —HLA-B27/HLA-B7双抗原与同 型对照双管分析设计;
• 无需仪器设置，信号采集、分 析与报告一键式解决方案—— 全自动HLA-B27检测双色试剂 配套分析软件;
11
散射光双参数散点图
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荧光双参数散点图
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流式细胞仪与几种检验仪器的比较
项目
测试对象
流式细胞仪
细胞
血球仪
细胞(测量设置全部固定化）
生化分析仪
FITC 530/30
PE 585/40
实真测实
FITC通道信号 =
+
真实实测
PE通道信号 =
+
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数据分析-图形类型
数据显示
直方图 散点图 等高线图 密度图 三维图
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HLA-B27检测与强直性脊柱炎诊断
• 强直性脊柱炎（AS）定义：
一种慢性、进行性和炎性疾病，主要累计骶髂关节、脊柱、脊柱软组 织及四肢关节，表现为椎间盘纤维环和纤维环结缔组织的骨化，椎间动关节 和四肢关节滑膜的炎症和增生，严重者可失去劳动能力。
• 淋巴细胞HLA-B27检测在AS中的诊断价值：
常见疾病
T系淋巴细胞白血病、SLE、重症肌无力、慢性活动性肝炎；
恶性肿瘤晚期、B系细胞白血病、多发性骨髓瘤，传染性单核细胞 增多症、免疫缺陷病；
类风湿（活动期）、自身溶血性贫血；
AIDS、肿瘤晚期、巨细胞病毒感染、麻风、血小板减少；
病毒感染（HBV、EB）、肿瘤、传染性单核细胞增多症；
类风湿、重症肌无力、免疫缺陷病、肿瘤放射治疗；