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细胞培养期末考试试题

细胞培养期末考试试题一、选择题（每题2分，共20分）1. 细胞培养中常用的培养基是：A. 蒸馏水B. 营养琼脂C. RPMI 1640D. 细菌培养基2. 细胞培养中，以下哪项不是细胞生长必需的：A. 温度B. 氧气C. 二氧化碳D. 紫外线3. 以下哪种细胞培养技术不涉及细胞的遗传改造：A. 转染B. 转导C. 克隆D. 原代培养4. 细胞培养中，pH值的维持主要依赖于：A. 细胞自身的代谢B. 培养基中的缓冲系统C. 培养箱的温湿度控制D. 定期更换培养基5. 细胞培养中，细胞传代的频率通常取决于：A. 细胞的密度B. 细胞的类型C. 培养基的成分D. 培养箱的CO2浓度二、填空题（每空2分，共20分）6. 细胞培养中，细胞的贴壁依赖于细胞表面的_________与培养基表面的_________。

7. 细胞培养过程中，细胞的增殖速率通常用_________来表示。

8. 细胞培养中，常用的细胞计数方法包括_________和_________。

9. 细胞培养时，细胞的形态变化可能预示着_________。

10. 细胞培养中，细胞的冻存通常使用含有_________的冷冻保护剂。

三、简答题（每题10分，共30分）11. 简述细胞培养中常用的传代方法及其优缺点。

12. 描述细胞培养过程中可能出现的污染类型及其预防措施。

13. 解释细胞培养中为什么要维持适宜的pH值，并说明如何调节。

四、论述题（每题15分，共30分）14. 论述原代细胞培养与次代细胞培养的区别及其在生物医学研究中的应用。

15. 讨论细胞培养技术在药物筛选和毒性测试中的应用及其重要性。

五、实验设计题（共30分）16. 设计一个实验方案，以评估不同培养条件对特定细胞株生长的影响。

请包括实验目的、原理、材料与方法、预期结果和可能的实验变量。

(完整版)细胞培养技术练习题.doc

细胞培养技术练习题选择题 1.接种工具灭菌常采用（A） A. 灼烧 B. 高压 C.过滤 D.熏蒸2.具有促进愈伤组织生产的物质是（ B ） A. 维生素 PP B. 维生素 B1 C.维生素 B6 D. 甘氨酸3.微量元素母液的配制浓度（ B ） A.10 倍 B.100 倍 C.1mg/ml D.10mg/ml4.配制 10 倍大量元素母液，所需硝酸铵（ C ） mg A.9000 B.3700 C.16500 D.44005.配制 100 倍有机物母液时，所需维生素B1 ( B )mg A.0.4 B.10 C.100 D.0.16.下列哪种不是组织培养常用的维生素（ A ） A. 维生素 B 2 B. 维生素 B 1 C.维生素 B6 D.维生素 C7.下列哪种激素不属于生长素类（ C ） A.IAA B.IBA C.6-BA D.NAA8.下面哪种是MS 培养基大量元素所用药剂（A） A.硫酸镁 B.硫酸亚铁 C. 硫酸锌 D.硫酸铜填空： 1、组织块的分离方法有机械分散法、剪切分离法、消化分离法。

2、目前，较常用的消化试剂有胰蛋白酶、胶原酶、EDTA 消化液。

3、接种培养瓶的细胞数量一般为5× 105-1× 106/ml。

4、培养细胞的污染一般包括微生物污染、细胞交叉污染、化学物质的污染。

5、细胞冻存时DMSO 常用的浓度为10%的浓度。

1. 体外培养的动物细胞其生长方式主要贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁型细胞和悬浮型细胞。

体外培养的动物细胞其生长方式以贴附生长为主。

2. 贴壁生长的体外培养动物细胞，按形态来分，大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形细胞型四种类型，最常见的为前两种。

3. 细胞在体外生长时具有一些特点，其中主要是贴附生长、接触抑制和密度依赖性。

4. 培养细胞生命期可分为原代培养期、传代培养期、衰退期三个阶段。

名词解释1、原代培养：原代培养也叫初代培养，是从供体进行细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。

细胞培养技术方面试题与答案

简答：一、细胞培养目的与用途1. 药物研究与开发(1) 新药筛选:如化学合成药物药效研究,中药有效成分筛选与鉴定等.(2) 疫苗研究与开发:如病毒性疫苗的研究与开发(肝炎病毒疫苗,艾滋病疫苗等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等.(3) 基因工程药物研究与开发:如干扰素研究与开发,细胞生长因子研究与开发等.(4) 细胞工程药物研究与开发:生物活性多肽研究与开发,人参皂甙,紫杉醇等生物活性成分研究与开发.(5) 单克隆抗体制备:包括诊断用单克隆抗体,治疗用单克隆抗体.基础研究(1) 药物作用机理(2) 基因功能(3) 疾病发生机理2, 生物制药(1) 疫苗生产:如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗,艾滋病疫苗等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等.(2) 基因工程药物生产:如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素,粒细胞生长因子,胸腺肽等 (3) 诊断用和药用单克隆抗体生产(4) 细胞工程药物生产:生物细胞内的一些生物活性多肽,生物活性物质等二、细胞培养基本条件1,合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一,培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质,而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境.2,优质血清目前,大多数合成培养基都需要添加血清.血清是细胞培养液中最重要的成分之一,含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分.3,无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件.在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物质污染,或者自身代谢物质积累,可导致细胞中毒死亡.因此,在体外培养细胞时,必须保持细胞生存环境无菌无毒,及时清除细胞代谢产物. 4,恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定适宜的温度.5,合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳. 细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多,按其来源分为合成培养基和天然培养基(目前使用的培养基绝大部分是合成培养基),按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类.干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌,液体培养基由专业商家提供,用户可直接使用,非常方便.每种细胞都有其合适的培养基,三、细胞冻存与复苏要点与注意事项1、细胞冻存要点(1)冷冻过程要缓慢.需要冷冻保存的细胞先在4℃冰箱中放置 30-60分钟;然后转入-20℃,放置30分钟;然后再转入-80℃放置16-18小时(或过夜);最后放入液氮中长期保存.有条件的地方,可用程控降温仪,按每分钟-1 到-3℃速度降温,一直到-80℃以下,然后直接放入液氮中长期保存.(2)冻存细胞必须处在对数生长期,活力大于90%,无微生物污染.(3)细胞浓度控制在:1×107-5×107/ml.(4)使用高浓度血清或蛋白保护剂.一般情况下,用于冷冻保存完全细胞生长培养液中血清浓度大于20%.(5)使用合适的细胞冷冻保护剂,以保护细胞在冷冻过程中免受冰晶破坏.目前,最常用的冷冻保护剂是DMSO(二甲基亚砜),使用终浓度为5-10%.但是,有些细胞系不能用DMSO作为冷冻保护剂,如人白血病细胞系HL-60.因为,DMSO能诱导HL-60细胞分化.在这种情况下,可选用其它冷冻保护剂,如甘油(glycele),羟乙基淀粉等.特别注意:(1)细胞在冷冻过程中在-20℃冰箱内放置时间不可超过1小时,以防止冰晶过大而破坏细胞.也可跳过-20℃这一步骤直接放入-80℃冰箱中,但这样做细胞存活率要低一些.(2)DMSO稀释时会释放大量热量.因此,DMSO不能直接加到细胞液中,必须事先配制.(3)DMSO 必须是细胞培养级别的.新买的DMSO本身处于无菌状态,第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管或瓶中,4℃保存.避免反复冻融造成DMSO裂解产生有害物质.并可减少污染机会.如要过滤DMSO,必须选用耐DMSO 的尼龙滤膜. 细胞冷冻保存液主要成分:冷冻保护剂,基础培养液,血清或蛋白.常用细胞冷冻保存液:(1)10%DMSO + 完全细胞生长培养液(20%血清+基础培养液)(2)10%甘油 + 完全细胞生长培养液(20%血清+基础培养液)悬浮细胞冷冻保存操作程序(液氮保存法):(1)取对数生长期细胞培养物,离心200-400g 5分钟.用粘附(贴壁)细胞冷冻保存操作程序(液氮保存法):2、冷冻保存细胞的解冻与复苏要点:(1)快速解冻.冻存细胞从液氮中取出后,应立即放入37℃水浴中,轻轻摇动冷冻管,使其在1分钟内全部融化(不要超过3分钟).(2)解冻操作过程动作要轻.由于冷冻保存过的细胞变得非常脆弱,不仅解冻速度要快,而且动作要轻.一般情况下,解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养(1ml 冻存细胞液加入到25-30ml新鲜完全培养液中),24小时后再用新鲜完全培养替换旧培养液,以去除DMSO.如果,细胞对冷冻保护剂特别敏感,那么,解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂,然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中.特别注意:(1)解冻时务必注意安全,预防冷冻管爆裂.,要带手套,用镊子将细胞冷冻管从液氮中取出,放入37℃水浴中.切不可直接用手,以免冻伤.(2)冷冻管在水浴中解冻时,液面不可超过冻存管盖面,否则,易发生污染.解冻冷冻保存细胞的离心方法:(1)从液氮中取出冻存的细胞,立即放入37℃水浴中快速解冻.(2)将1-2ml 冻存细胞液加入到25ml新鲜完全细胞生长培养液中,轻轻混匀.(3)用80g 离心2-3分钟,弃上清液.(4)用完全生长培养液轻轻悬浮细胞团,并计数细胞.(5)接种细胞到培养瓶中,起始密度为3×105/ml.四、细胞传代要点与注意事项1 细胞传代方法贴壁细胞（1）洗掉旧培养液；（2）、用无钙镁PBS洗涤细胞一至二次；（3）、加入适量Trypsin-EDTA溶液方法一：37℃或温室作用数分钟，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆颗粒状时，洗掉消化液，轻敲培养瓶边缘使细胞自瓶壁脱落，然后加入适量的新鲜培养液，与脱落的细胞或细胞团块混合均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，依正常条件继续培养之。

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细胞培养技术准备工作常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。

配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。

培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。

必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。

无菌操作无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。

2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。

实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。

2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。

无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。

3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。

5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。

如吸管不能碰到废液缸。

6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。

器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。

2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。

3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。

细胞培养技术中的常见问题解答

细胞培养技术中的常见问题解答细胞培养技术是生物科学领域中重要的研究方法之一，广泛应用于细胞生物学、生物医学研究、药物开发等领域。

然而，细胞培养过程中常会遇到各种问题，这些问题的解答对于保证实验结果的可靠性和研究顺利进行至关重要。

本文将就细胞培养技术中的常见问题进行解答，希望对于读者在实验过程中的疑问起到一定的帮助。

Q1：为什么我的细胞无法附着在培养皿上？A：细胞无法附着的原因可能有多种。

首先，确保培养皿表面已经充分涂上了适当的基质，如凝胶体或胶原蛋白等。

其次，检查培养基的配方是否正确，是否缺乏必需的生长因子或氨基酸等。

同时，培养环境的温度、湿度和培养皿表面的处理都会影响细胞附着。

最后，细胞密度和接种时间也会影响细胞的附着能力。

如果问题仍然存在，可以尝试不同的培养条件以找到合适的附着条件。

Q2：为什么我的细胞生长缓慢？A：细胞生长缓慢可能源于多种因素。

一方面，细胞培养基的配方可能导致细胞生长受到限制。

检查培养基中是否缺乏必需的营养物质，如葡萄糖、氨基酸等，并根据需要进行调整。

另一方面，细胞密度过高或过低也会影响细胞生长速度。

合理调整细胞密度以促进正常的生长。

此外，温度、CO2浓度、培养皿和培养箱的湿度等因素也会对细胞生长产生影响。

对这些条件进行优化，在适当的环境中培养细胞可以加快其生长速度。

Q3：我应该什么时候更换培养基？A：细胞生长到饱和状态之前应避免更换培养基。

通常，在细胞取代率达到80-90%时，即到达细胞生长的最佳时机进行培养基的更换。

更换培养基的目的是为了提供充足的营养物质和清除废弃物，以促进细胞的生长和健康。

然而，过于频繁的培养基更换也会带来损害细胞的风险，因此要根据实验的需要和细胞的生长状态来进行判断。

Q4：细胞是否可以冻存？A：冻存细胞是细胞培养技术中常见的方法之一。

冻存细胞可以长期保存，以备将来的培养和实验使用。

冻存细胞需要使用特定的冻存液来保护细胞，并通过特定的冷冻和解冻过程来确保细胞的完整性和生存率。

细胞培养技术常见问题解答

细胞培养技术常见问题解答细胞培养基础问答1. BHK细胞就是指BHK21吗？答：BHK细胞是指幼年叙利亚地鼠肾细胞（Baby Hamster Syrian Kidney），1961年建株。

原始的细胞株是成纤维细胞，贴壁依赖性。

1963年获得单细胞克隆细胞。

后经无数次传代后细胞可悬浮生长，它广泛用于增殖各种病毒，生产兽用疫苗。

最常用的是BHK21的一个亚克隆细胞，即克隆13或C13 。

2. 二倍体细胞有什么特点？答：二倍体细胞的染色体组型是2n核型；贴壁依赖接触抑制；一般可传代培养50代；无致瘤性。

如W1-38：正常胚肺组织人二倍体细胞系。

MRC-5：从正常男性肺组织中获得的人二倍体细胞系。

3. 什么是动物细胞大规模培养？答：所谓动物细胞大规模培养技术（large-scale culture technology）是指在人工条件下（设定pH、温度、溶氧等），在细胞生物反应器（bioreactor）中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。

目前可大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、CHO（中华仓鼠卵巢）细胞、BHK-21、Vero细胞(非洲绿猴肾传代细胞)等，并已成功生产了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。

在过去几十年来，细胞培养技术经有了很大发展，从使用转瓶(roller bottle) 、CellCube等贴壁细胞培养，发展为生物反应器（Bioreactor）进行大规模细胞培养。

4. 细胞体内外培养的差别是什么？答：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。

因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。

细胞培养技术考试试题

细胞培养技术考试试题一、选择题1. 细胞培养的基本步骤是：A. 细胞获取和处理；B. 细胞传代；C. 培养基配置；D. 细胞实验操作答案：ABCD2. 细胞培养的最佳温度范围是：A. 4-10°C；B. 15-25°C；C. 28-37°C；D. 40-50°C答案：C3. 常用的细胞培养基包括：A. DMEM；B. RPMI 1640；C. MEM；D. FBS答案：ABCD4. 细胞分离的方法有：A. 酶消化；B. 机械分离；C. 磁珠分离；D. 筛选分离答案：ABCD5. 细胞培养器具清洗消毒的方法包括：A. 高温蒸汽消毒；B. 紫外线照射消毒；C. 化学消毒；D. 过滤器过滤消毒答案：ABCD二、简答题1. 请简述细胞培养的原理及意义。

细胞培养是将细胞从生物体中分离出来，在无菌条件下通过培养基提供养分和适宜环境，使细胞在体外持续增殖和生长的过程。

细胞培养技术的意义在于：①探究细胞的生理生化特性和功能；②研究生物发育和分化机制；③药物筛选；④生物工程和生物制造的基础；⑤治疗和诊断疾病。

2. 请简述细胞培养的几种常用技术方法。

（1）传代：将细胞从一代细胞培养物中分离出来，移植到新的培养基中，继续培养和传代。

传代通常采用酶消化和机械分离的方法进行。

（2）冻存：将细胞冻存保存，以备后续使用。

常用的冻存方法是将细胞与冻存液混合，缓慢冷却至低温下保存。

（3）细胞分化：通过调控培养条件，使细胞表现出特定的细胞型态和功能。

（4）细胞感染：将病毒或质粒导入细胞，使细胞表达外源蛋白或产生特定生理反应。

3. 请简述细胞培养中常见的细胞污染及预防方法。

常见的细胞污染包括细菌污染、真菌污染和其他细胞污染。

预防细胞污染的方法有：①无菌操作，使用无菌工具和无菌培养基；②定期检测细胞污染，如细菌和真菌检测；③定期更换培养器具和培养基；④定期消毒培养环境。

三、论述题细胞培养在生物科技领域的应用细胞培养技术在生物科技领域起着重要的作用。

第6章《细胞培养》复习题及参考答案

第6章《细胞培养》复习题参考答案一、填空：1、一般平板培养要求细胞密度每毫升为1x103∽100x103个。

2、1.4%琼脂基本培养基+等量细胞培养液=0.7 % 琼脂条件培养基。

3、小细胞团计数方法：①低倍显微镜直接计算；②细胞团显影法。

4、条件培养基是悬浮培养过一段时间组织或细胞的液体培养基。

5、细胞悬浮培养主要应用于植物有用物质的生产、诱发和筛选突变体、原生质体培养和细胞器分离、食品生产等。

二、名词：1、看护培养法(nurse culture)：是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。

2、平板培养法(plante culture)：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

3、细胞悬浮培养（suspension culture）：是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。

4、初始植板密度（inital planting density）：单细胞固体平板培养时，细胞悬浮液接种到琼脂培养基上最初细胞密度。

5、临界密度(critical density)：单细胞培养时，初始植板密度低于某值培养细胞就不能进行分裂和发育成细胞团，则该值就是临界密度。

三、问答题：1、如何得到单细胞无性系？在细胞培养中，常由分散性较好的愈伤组织或悬浮培养物来制备单细胞，也可以用纤维素酶和果胶酸酶从植物不同组织直接制备单细胞。

由分离的单细胞经看护培养法、微室培养法或平板培养法，即可得到单细胞无性系2、单细胞培养有哪些方法？各有何含义及特点单细胞培养：看护培养；微室培养；平板培养（1）看护培养法是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。

特点：①简便易行。

②效果好，易于成功。

③不能在显微镜下直接观察细胞生长过程。

（2）微室培养：即将细胞培养在很少量的培养基中。

特点：在培养过程中可连续进行显微观察，将一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程记录下来。

细胞培养考试题目

细胞培养考试题目(总3页) -本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-细胞培养特性：分为贴壁性（上皮细胞型、成纤维细胞型）和悬浮型（白细胞、癌肿细胞）体外培养细胞生长特点：贴附和伸展以及接触抑制和生长的密度限制。

原代培养（原代细胞）：取自动物并置于体外培养中生长的细胞在其传代之前称为原代培养或原代细胞。

传代培养：细胞持续生长繁殖一段时间，到达一定浓度之后，就应当将细胞分离成两部分（或更多）至新的培养器皿，并补充更新培养液。

细胞系：原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。

有限细胞系：一般正常细胞系的寿命只能维持一段时间期限。

无限细胞系：传代中极少的后代发生转化，通过“危机期”，获得不死性而具有持久或无限增值能力，这种永生化细胞即为无限细胞系。

细胞株：通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株。

克隆：在动物细胞培养中从细胞群体中分离出一个细胞开始，其在体外无性繁殖成新的基因型相同的细胞群体，这种纯化的细胞群称为细胞株，他们中的每个细胞的遗传特征及生物特性极为相似，常用的细胞克隆技术有有限稀释法和平皿克隆分离法。

杂交瘤技术：主要由免疫动物、细胞融合、筛选杂交瘤细胞、克隆化培养、单克隆抗体的制备与鉴定等一系列实验组成的实验系统，核心是细胞融合。

杂交瘤：由产生抗体的肿瘤细胞与抗原-刺激的正常浆细胞融合而形成的细胞，这种细胞产生的抗体称为单克隆抗体。

基本原理是用分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养并可低温保存的肿瘤细胞进行杂交。

筛选得到的杂交瘤细胞应该是既能分泌抗体又有瘤细胞的特性，可长期传代培养，又可在液氮中保存的细胞。

把这些细胞单克隆化，用单克隆化的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的生产。

细胞杂交：通过人工培养和诱导将不同种生物或同种生物不同类型的两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。

杂交技术过程:①免疫动物及细胞培养:用特定抗原免疫纯系动物获得预定抗体B 淋巴细胞,利用细胞融合技术可使短寿命抗体形成细胞与能永久生长的同种骨髓瘤细胞系融合,获得既有分泌抗体能力,又有无限繁殖能力的细胞②筛选杂交瘤细胞(在具有筛选作用的培养基上培养)③克隆化培养④单克隆抗体的大量制备与鉴定(动物体内诱生法和体外培养法)⑤进一步分离和纯化单克隆抗体,鉴定单克隆抗体类型及亚类,测定抗体亲和力以及相应抗原的分子量等.显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距，其计算公式是σ=λ/NA 式中σ为最小分辨距离；λ为光线的波长；NA为物镜的数值孔径。

细胞培养复习题

名称解释细胞培养动物细胞培养：动物细胞培养是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬液,然后放在类似于体内生存环境的体外环境中,进行孵育培养,使其生存、生长并维持其结构与功能的方法;组织培养：从生物体内取出活的组织多只组织块在体外进行培养的方法;有时泛指所有的体外培养;器官培养：是将活体内的器官一般是胚胎器官、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法;合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量,用人工方法模拟合成的、配方恒定的培养基;无血清培养基：由基础培养基和替代血清的补充因子生长因子和激素、结合蛋白等组成;完全培养基：在合成培养基里添加血清后的培养基;接触抑制：体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象;无限细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系;去分化脱分化：细胞在体外不可逆地失去原有特性;注意：去分化不意味分化能力完全丧失在适当调节信号刺激下仍能表现出分化特性;但分化能力会随培养时间延长而逐渐丧失;不适应：各种分化细胞,在体外培养时逐渐失去各自的形态与功能特征,表现出某种趋同性;原因：培养条件变化使分化发生阻抑细胞分裂指数MI：是指细胞群中每1000个细胞中的分裂相数量细胞群体倍增时间：是指培养物中细胞数量翻倍的时间;原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞;培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养; 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养;1体外培养细胞,其生长方式主要有贴壁生长和悬浮生长两种,分别称为贴壁细胞和悬浮细胞;2一般可将贴壁细胞生长的体外培养细胞大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多行细胞型四种类型,最常见的为前两种;3体外培养细胞的主要生长特点：①贴附生长②接触抑制③密度依赖性培养细胞分化状态的变化：①去分化脱分化②不适应1、细胞培养的基本要求有哪些和工作方法要求：1培养前准备2操作间消毒3洗手和着装4火焰消毒培养前的准备的基本要求：培养基的选择和无菌配制动物细胞培养用液的类型、配制和无菌处理方法：1操作程序规范2试剂设备专人负责3培养用品定点存放2、平衡盐溶液BBS：1成分：无机盐和葡萄糖,少量酚红;2作用：维持渗透压、缓冲和调节酸碱度3常用：Hanks液、PBS等消化液1作用：分散组织或细胞团;2常用：胰蛋白酶消化液、胶原酶消化液、EDTA-2Na液、蜗牛酶等2、消化液中的胰蛋白酶消化液、胶原酶消化液、EDTA-2Na液作用的原理是什么胰蛋白酶消化液主要作用是水解细胞之间的蛋白质,使细胞相互分离;EDTA-2Na液：是一种化学螯合剂,其溶液又称Versen液,对细胞有一定的离解的作用;EDTA-2Na液的主要作用是通过结合螯合细胞间质中的二价阳离子从而破坏细胞之间的细胞连接;达到分散细胞的目的;胶原酶溶液：胶原酶是从细胞中提取的一种酶,对胶原组织和细胞间质有较强的消化作用,而对培养细胞一般不产生损伤,常在上皮类细胞原代培养时用来离散细胞与胶原组织;3、1天然培养基：定义:主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基,如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等;优点：含有丰富的营养物质,渗透压、pH等也与体内环境相似,培养效果好;缺点：成分复杂,批间差异大,易被支原体污染;2合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量,用人工方法模拟合成的,配方恒定的培养基;成分：氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质;优点：标准化生产,组分和含量固定;成本低;缺点：缺少某些成分,不能促进细胞增殖生长;3完全培养基;定义：在合成培养基里添加血清后的培养基;细胞生长培养基:常用培养基,血清含量高, 10-20%;维持培养基:维持细胞不死或缓慢生长,血清含量低, 2-5%;4无血清培养基：定义：由基础培养基和替代血清的补充因子生长因子和激素、结合蛋白等组成;用途：用于研究细胞生长因子、单克隆抗体制备、细胞分泌产物研究等;优点：保证实验结果的准确性、可重复性和稳定性,减少细胞污染,简化提纯和鉴定等程序;3、完全培养基中各成分的作用是什么合成培养基基础培养基的成分只能维持细胞生存血清：常用牛血清,含有促进细胞增殖的各种生长因子和其他多种有利于细胞生存的物质;一定量的抗生素：防止污染4、体外培养细胞与体内培养细胞的差异都有哪些5、论述培养细胞的一代生存期可分为几个阶段及其特点培养细胞的“一代生存期”,是指从细胞接种后到再次传代培养之前的这一段时间,它与细胞世代或倍增时间不同;可分为潜伏期、指数生长期、停滞期平顶期1.潜伏期特点：1细胞适应新环境的恢复期包括悬浮期、贴壁期、潜伏期三个时期2可有运动活动,基本无增殖,少见分裂相;2.指数生长期特点：1细胞增殖最旺盛的时期,细胞数量呈指数生长,是实验研究和生产的主要阶段;2用细胞分裂指数和细胞群体倍增时间表示;3.停滞期特点：特点：细胞数量不再增加,仍有代谢活动6、动物细胞培养具有一系列优点：①可简化细胞的生长环境;在细胞存活的基础上独立研究细胞生命活动、逐项研究细胞生存条件和细胞功能;②能够方便地控制实验因素; 研究某种实验因素对细胞的生物学作用,只需在培养液中有针对性地加入或者删除这种成分;③易于观测实验结果;利用细胞培养技术研究细胞的生命活动规律,可以很方便地采用各种实验技术和方法来观察、检测和记录;④可供研究的细胞种类极其广泛;⑤可同时提供大量均一性较好的细胞群,降低实验成本;⑥能够进行大规模生物制品的生产;包括酶、单克隆抗体以及多种疫苗等生物制品或者基因工程产品;2、动物细胞培养的缺点：①体外培养的动物细胞对营养的要求较高;②动物细胞生长缓慢,对环境条件要求严格;③体外培养的细胞与体内生长的细胞存在或多或少的差异;形态和功能的差异7.动物细胞培养实验室有哪几个部分组成理想的培养实验室可分为：准备室、缓冲室与培养室相连的消毒房间,作为隔离培养室与外面非消毒房间的缓冲地带、培养室一间或几间,普通实验室、办公室;8.论述细胞培养的生长特点;培养细胞生命期：指细胞在培养中持续增殖和生长的时间;包括三个阶段：原代培养期、传代培养期、衰退期; 1.原代培养期也称初代培养,即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段,一般持续1一4周特点：二倍体,细胞分裂次数少,异质性,独立生存性差; 用途：药物测试,疫苗制备等;2.传代培养期定义：原代细胞接种到两个或以上的器皿继续进行培养标志进入传代培养期特点：细胞分裂增殖旺盛,去分化,在全生命期中此期的持续时间最长,传代10-50次;3.衰退期定义：传代培养一定代数后,细胞生命活动明显减弱,增殖很慢或不增殖,直至衰退死亡的时期;细胞特点：细胞形态轮廓增强,色泽变暗,细胞质内出现暗的颗粒样结构及空泡状结构,胞质突起回缩,最后衰退凋亡;9.论述玻璃制品清洗步骤10、论述动物细胞培养技术的应用1.在生物学领域基础研究中的应用1在细胞生物学上的应用研究细胞的形态、结构、生长发育、细胞营养、代谢以及病变等微观过程;2在遗传学上的应用染色体分析,杂交育种;3在胚胎学上的应用通过体外培养卵母细胞,进行体外受精、胚胎分割和移植;4在病毒学上的应用培养细胞为病毒的增殖提供场所;5在药理学领域的应用药品、食品添加剂等对机体的毒性及其产生不良影响的安全性调查;许多致畸、致癌物质加入动物细胞培养液后,培养细胞会发生染色体结构和数目的变异;2.在临床医学上的应用1用于遗传疾病和先天畸型的产前诊断用羊膜穿刺技术获得胎儿细胞,培养后进行染色体分析,诊断胎儿是否患有遗传性疾病或先天畸型;2用于癌症的早期诊断和预防通过培养淋巴细胞,对其染色体进行对比分析检测出易患癌症的病人,进行及早的预防和治疗;3用于临床治疗目前已有将正常骨髓细胞经大量培养后植入患造血障碍症患者体内进行治疗的报道;4用于药物效应的检测检测的药物具有组织特异性时,可选用相应的细胞,如检测治疗肝病的药物可选用肝细胞、检测抗癌药物可选用癌细胞;3.在动物育种上的应用新品种的培育可大大缩短育种进程,且更加经济有效;胚胎干细胞的研究成果和克隆羊多莉的问世为动物遗传育种开辟了一条新途径;4.在生物制品生产上的应用用动物细胞可生产的生物制品有各类疫苗、干扰素、激素、酶、生长因子、病毒杀虫剂、单克隆抗体等; 11、血清种类：人血清、牛血清、马血清等;成分：基本营养物、激素、生长因子、结合蛋白、贴壁和扩展因子等;标准: 透明,淡黄色,无沉淀物,无细菌、支原体、病毒污染;使用：逐步解冻,热灭活, 10%浓度,超低温保存;牛血清又分胎牛血清和小牛血清,它们的区别胎牛血清是从母牛剖腹取出的胎牛中分离出来的血清,对许多细胞系均有促进生长作用,主要用于细胞株的保藏及特殊娇贵细胞株的体外培养,但价格昂贵;小牛血清是从刚出生但尚未哺乳的小牛分离出来的血清;12、细胞传代方法贴壁细胞的消化法传代步骤1吸出或倒掉瓶内的旧培养液;2加入适量的消化液消化;3镜检,发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,应立即终止消化;4吹打瓶壁细胞,制成细胞悬液;5计数,接种到新的培养瓶;悬浮细胞多采用离心法传代将细胞连同培养液一并转移到离心管内,800-1000rpm离心5min,然后取出上清,加入新的培养液到离心管内,用吸管吹打使之形成细胞悬液,然后传代接种;13、培养细胞的观察和检测技术1培养液观察培养液的颜色和透明度的变化;正常培养液pH介于7.2～7.4之间,呈桃红色、清亮透明;培养中细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降,引起颜色变浅变黄;2～3天或3～4天换液一次;2细胞生长状况倒置显微镜观察;原代细胞培养中最先可见从组织块中边缘“长出”细胞;成纤维细胞是最易生长的细胞;细胞长满瓶底80%应及时传代;3、细胞形状变化生长良好的细胞：透明度大,折光性强,轮廓不清;细胞生长状态不良的细胞：轮廓增强,细胞折光性变弱,边缘不齐,胞质中出现空泡、脂滴、颗粒状物质,细胞之间空隙增大,细胞表面及周围出现丝絮状物;采取措施：换液、排污、废弃;4、微生物污染细菌污染：培养液浑浊、漂浮菌丝;支原体污染：生长减缓、胞质颗粒增多、培养液不变混;细胞交叉污染;化学物质污染;14、去分化和不适应的区别“去分化”不可逆染色体变化;“不适应”可重新诱导培养条件变化关于去分化需要注意：①去分化并不意味着完全返回胚胎时期的原始细胞状态;如:高度分化的神经细胞和心肌细胞已经丧失的增生活性不可能恢复,但已经具备的生物电活动特性不会完全失去 ;②可重新表现出分化特点; 如：把表皮细胞放在气液界面上培养,可分化成含大量角蛋白丝的角质细胞、内皮细胞,但,这种能力会随着培养时间延长逐渐丧失;15、谷氨酰胺在培养基中的主要作用配液时应该注意哪些问题作用：在细胞代谢中有重要作用,是细胞合成核酸和蛋白质必需氨基酸,在缺少时,细胞生长不良死亡配液时：由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20度冰箱中保存,在使用前加入培养液内;已含谷氨酰胺的培养液在4度冰箱中储存2周以上时,还应重新加入原来的谷氨酰胺;第二章1、细胞冷冻的原理是什么细胞冻存的原则：慢冻快融 2加冷冻保护剂常用：甘油或二甲基亚砜DMSO主要原因：1冷冻速度过快,细胞内水分结冰形成冰晶,造成细胞膜和细胞器的破坏引起细胞死亡;冷却速度越快,冰晶损伤越大;2细胞悬浮在溶液中,随着温度的下降,细胞外部的水分会先结冰,从而使得未结冰的溶液中电解质的浓度升高;如果将细胞暴露在这样高溶质的溶液中且时间过长,细胞膜上脂质会受到损坏,细胞便发生渗漏;冷冻保护剂作用机理：1冷冻保护剂易同溶液中水分子结合,从而降低冰点,减少冰晶的形成；2通过其摩尔浓度降低未结冰溶液中电解质的浓度,使细胞免受溶质的损伤,细胞得以在超低温条件下保存;2、复苏原理复苏时融解细胞速度要快,使之迅速通过细胞最易受损的-5~0度,这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化,避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损害,以防止细胞内形成冰晶引起细胞死亡;3、细胞复苏的过程①将恒温水浴箱的温度调至37～40℃;②从液氮中取出冻存小管,立即投入37～40℃温水中快速晃动,直至冻存液完全融解;要在1～2min内完成复温;③将细胞冻存悬液移入离心管,加入约5m1培养液,轻轻吹匀;④将细胞悬液经800～1000 r/min离心5min;弃上清液;⑤给细胞沉淀物加入完全培养液,轻轻吹吸均匀;将细胞悬液移入培养瓶内,加培养液37℃、5%CO2培养;4、细胞活性检查1.染色法：使损伤或死亡细胞着色;结晶紫、台盼蓝、苯胺黑等;2.四唑盐MTT比色法：活细胞可沉淀四唑盐并形成蓝紫色结晶,再用DMSO溶解结晶物,溶液颜色的深浅与所含的甲躜量成正比;用酶标仪在5 7 0nm波长处测定其吸光度OD值,可间接反映活细胞数;第三章1、原代细胞培养常用组织块培养法和消化培养法;2、组织块培养法定义：组织块培养是即将组织剪切成小块后,接种于培养瓶培养的方法;基本方法：将剪成的小组织团块接种于培养瓶或皿中,瓶壁可预先涂以胶原薄层,以利于组织块粘着于瓶壁,使周边细胞能沿瓶壁向外生长;特点：操作简便,组织块易损伤,细胞生长缓慢,适于组织量少的原代培养;基本过程：①取材修剪冲洗；②剪成1mm3左右的小块；③移入培养瓶；④间距5mm分布组织小块；⑤翻转培养瓶37℃静止2-4h；⑥翻正培养瓶培养；⑦原代细胞培养;3、消化培养法定义：利用组织消化分散法将细胞间质物质去除,使细胞分散,形成悬液培养的方法;特点：容易获得大量细胞,生长速度快,适于培养大量组织,但步骤繁琐,易污染,实验费用高;过程：①消化分离法消化细胞、镜检；②发现组织已分散成细胞团或单个细胞,终止消化,筛网过滤,大块继续消化；③过滤的消化液,低速离心,加培养液,细胞计数后,接入培养瓶;4、原代取材的基本要求1无菌取材：严格无菌操作;2取材器械锋利：防止机械损伤;3及时培养：可培养液4℃暂存;4去除无用组织,避免干燥;5营养丰富：添加10%血清;6采用易培养组织：组织类型、分化程度、年龄等;7作好记录：来源等信息及标本要保留;5、组织材料的分离1 细胞悬液的分离方法来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,可采用离心法分离;一般采用5000~1000r/min的低速离心5~10分钟;2组织材料的分离方法可采用机械分散法物理裂解和消化分离法;1.机械分散法方法:注射针芯挤压法; 特点:简便、快速,但对组织机械损伤大,而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织;2.剪切分散法利用剪切法将组织剪切成1平方毫米的小块;3.消化分离法定义：消化法是结合生化和化学手段把已剪切成较小体积的组织进一步分散的方法; 种类：胰蛋白酶法、胶原酶法、EDTA法;6、应用体外培养技术进行中瘤研究具有的优点1,可以免受机体内部因素的影响,从而便于研究理化和生物等因素对肿瘤细胞生命的影响2、便与研究肿瘤细胞的结构和功能3、肿瘤细胞可长期保存以便观察其遗传行为的变化4、可用抗癌药物的快速筛选7、肿瘤细胞培养生物学特性：永生性、侵袭性,不受控增殖性,遗传性质改变,异质性、成瘤性;第四章动物细胞大规模培养技术：指在人工条件下,在细胞生物反应器中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术微载体：微载体指直径在60～250微米,能适用于细胞贴壁培养的微珠,一般由葡聚糖或各种合成聚合物组成;中空纤维培养技术：模拟细胞在体内生长的三维状态,利用中空纤维给培养细胞提供物质代谢条件而建立的一种大规模培养方法微囊化培养是指在无菌条件下将拟培养的细胞、生物活性物质以及生长介质共同包裹在薄的半透膜中形成微囊,再将微囊放入培养系统内进行培养的方法;1、动物细胞大规模培养的方法 1.贴壁培养2.固定化培养3.悬浮培养一贴壁培养定义：指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养方式;优点：适用细胞种类多；容易采用灌流培养；容易更换培养液;缺点：操作比较复杂,需要合适的贴附材料和足够的面积,培养条件不易均一,传质和传氧较差,投资大;培养方式：旋转瓶培养、中空纤维培养、细胞工厂培养、微载体培养;二固定化培养定义：将动物细胞与水不溶性载体结合起来进行培养的方式;优点：既适用于贴壁依赖性细胞,又适用于非贴壁依赖性细胞的包埋培养,细胞密度高,抗剪切力和抗污染力强,易于分离纯化;方法：吸附法、包埋法、微囊法三悬浮培养定义：指细胞在生物反应器中自由悬浮生长的培养方法;优点：操作简单、培养条件均一、传质和传氧比较好,容易扩大培养规模,可借鉴细菌发酵的经验;缺点：体积小,较难采用灌流培养;常用反应器为搅拌式和气升式;2、微载体的选择有何要求①微载体表面性质与细胞有良好的相容性,适用细胞附着、伸展和增殖；②微载体无毒、惰性,不与培养基成分发生化学变化,也不会吸收培养基中的营养成分；③微载体的比重在1.030～1.045g/ml,使载体在低速搅拌下就可悬浮,而在静止时又可很快沉降,便于换液和收获；④粒径在60～250μm溶胀后之间,均一,差异不大于20 μm ;有利于细胞均匀分布在各微载体表面；⑤具有良好的光学透明性,利于观察细胞在载体上的生长情况；⑥可耐120℃高温,便于采用高压蒸汽灭菌；⑦原料充足,价廉,制备简便,经简单的适当处理后,可反复多次地使用;3、微载体培养的操作包括哪些步骤①培养初期阶段；②粘附贴壁阶段；③维持培养阶段；④细胞收获阶段；⑤微载体培养放大阶段4、大规模培养技术的应用5、微囊化培养中微囊的制备应注意哪些问题1温和、快速、不损伤细胞,尽量在液体和生理条件下操作2所用试剂和膜材料对细胞无毒害3膜的孔径可控制,必须使营养物和代谢物自由通过4膜应有足够机械强度抵抗培养中的搅拌;6、理想的动物细胞生物反应器应满足哪些基本要求使比较教材所介绍的几种生物反应器各自优缺点①能提供充足氧气；②良好的传质传热及密闭性能；③制备材料对细胞无毒；④有自动检测调控系统；⑤便于操作维护;1、搅拌式细胞生物反应器优点：避免向培养基直接通气时气泡损伤细胞,没有移动部件,密封好,氧转换率较高,便于放大; 缺点：氧传递系数小,气路系统不能就地灭菌;2、气升式动物细胞培养反应器优点:器内气流温和均匀剪切力小,完全密封,便于无菌操作,氧的转换率高,便于放大生产缺点：1这种生物反应器只能用于需要气体的反应,或者是需要有气体的场合2在培养细胞的过程中会产生大量的气泡,从而会对正在培养的细胞的生长产生影响3这种生物反应器,如果没有其他装置的帮助就只能培养悬浮生长的细胞;3、中空纤维细胞培养反应器优点1培养器体积小,细胞高细胞损害小；2浓缩产品；3易于分离产物,产物纯度高,不易污染；4自动化程度高,细胞生长周期长; 缺点:细胞生长速度慢,代谢物容易堵塞孔径,不易清洗维护,价格高第五章抗原上可以引起机体产生抗体的分子结构,叫做抗原决定簇;抗体：是指机体受抗原刺激后产生的能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白;单克隆抗体：即单个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体;是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合,通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的;多克隆抗体：一个抗原上可以有好几个不同的抗原决定簇,进入机体后会刺激好几中B细胞增殖,因而使机体产生几种不同的抗体,成为多克隆抗体基因转染技术：将外源性基因采用化学或物理的方法人工导入细胞的技术;主要用于癌基因研究;1、什么是单克隆抗体其特性和局限性如何与多克隆抗体有何异同单克隆抗体是由一种B细胞克隆所产生的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子;局限性：固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围；反应强度不如多克隆抗体；制备技术复杂,费时费工,价格较高;特性：理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强,便于人为处理和质量控制不同：单克隆抗体的特异性强,只针对单一的抗原表位；而多克隆抗体则可以与多个抗原表位结合,当抗原的某个抗原表位改变时,单抗不能发挥其作用2、简述单克隆抗体的制备流程和应用;应用：1用于疾病的诊断和治疗：2作为载体制备导向药物;3、骨髓瘤细胞和脾细胞融合过程中应特别注意的几个问题是什么1细胞比例2反应时间3反应温度4PEG的选择4、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理1要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞,但B淋巴细胞不能在体外生长;2而骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖,应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞融合,得到杂种骨髓瘤细胞; 3杂种细胞既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性,也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性,用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群,可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体;与多抗相比,单抗纯度高,专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应;5、HAT筛选杂交瘤细胞原理细胞融合时加入HATH为次黄嘌呤、A为氨基喋呤、T为胸腺嘧啶选择系统,目的是保证只有杂交瘤细胞的生长;HAT培养基是含有由次黄嘌呤H、氨基喋呤A、胸腺嘧啶T、的一种选择性培养基,这三种成分与细胞DNA合成有关;A可阻断细胞利用正常途径合成DNA,细胞在含有氨基碟呤的培养基中不能通过正常途径合成DNA;这时正常细胞可以通过“补救合成途径”,由胸腺嘧啶激酶HK和次黄嘌呤磷酸核糖转移酶HGPRT利用T和H合成核酸而繁殖;骨髓瘤细胞都是HGPRT缺乏株,不能利用H和T合成DNA,而B细胞中有这种酶,但在体外培养只存活5·7天,所以只有脾-瘤才能在HAT选择培养基上生长;6、酶联免疫吸附法ELISA原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记;结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性;第六章外植体：用于植物组织细胞培养的器官或组织的切段;愈伤组织：在人工培养基上,由外植体的表面形成的一团不定形的排列疏松的薄壁细胞;细胞全能性：植物的每个细胞都携带一整套遗传信息,具有发育成完整植株的潜力;。

细胞培养试题及答案

细胞培养试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 细胞培养中常用的细胞类型是：A. 原代细胞B. 次代细胞C. 传代细胞D. 所有以上答案：D2. 在细胞培养过程中，以下哪项是必需的？A. 血清B. 抗生素C. 胰蛋白酶D. 所有以上答案：D3. 细胞培养基中通常不包含以下哪种成分？A. 氨基酸B. 葡萄糖C. 维生素D. 抗生素答案：D4. 细胞培养中，细胞贴壁生长的表面通常需要进行哪种处理？A. 酸处理B. 碱处理C. 胰蛋白酶处理D. 胶原蛋白包被答案：D5. 细胞传代时，常用的细胞分离方法是什么？A. 机械剪切B. 胰蛋白酶消化C. 化学溶解D. 物理震荡答案：B6. 细胞培养的无菌操作中，以下哪项是不必要的？A. 使用无菌操作台B. 使用无菌培养基C. 使用无菌移液器D. 使用非无菌的培养皿答案：D7. 细胞培养中，细胞的形态变化可能是由于什么原因？A. 细胞老化B. 细胞污染C. 培养基成分不足D. 所有以上答案：D8. 细胞培养中，细胞的倍增时间通常是多少？A. 10分钟B. 10小时C. 10天D. 10个月答案：B9. 细胞培养中，细胞的传代次数过多可能导致什么后果？A. 细胞生长速度加快B. 细胞形态改变C. 细胞遗传稳定性下降D. 细胞死亡答案：C10. 细胞培养中，细胞的冻存通常使用哪种溶液？A. 磷酸盐缓冲液B. 无菌水C. 冷冻保护剂D. 细胞培养基答案：C二、填空题（每题2分，共20分）1. 细胞培养的基本原则是______、无菌和______。

答案：无菌、无毒2. 细胞培养基中通常含有的营养成分包括______、______和______。

答案：氨基酸、维生素、无机盐3. 细胞培养中，细胞的传代次数过多可能导致______下降。

答案：遗传稳定性4. 细胞培养中，常用的细胞冻存液是______%的DMSO溶液。

答案：5-105. 细胞培养中，细胞的形态变化可能是由于______污染。

细胞培养复习题(含答案)

1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型?⑴按生长方式分为二型:粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。

悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面, 而在悬浮状态下即可生长的细胞。

（绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。

）⑵可分四型: (1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程⑴通常, 体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段:①原代培养期: 也称初代培养, 是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。

此期的细胞呈现出活跃移动的特点, 可见细胞分裂, 但不旺盛。

处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。

细胞群具有明显的异质性, 细胞间的相互依存性强, 在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。

②. 传代期：通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期, 原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。

一般情况下, 正常体细胞在传代10-50次左右后, 细胞分裂的能力就会逐渐减弱, 甚至完全丧失, 细胞便进入衰退期。

③衰退期：处于衰退期的培养细胞, 增殖速率已经变得很慢或不再增殖, 直至最后衰退死亡。

以上特点, 主要是针对体外培养的机体正常细胞, 对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言, 永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力, 这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。

⑵每代贴附生长细胞的生长过程：①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态, 也称悬浮期。

此时细胞质回缩, 胞体呈圆球形。

时间：10分钟一4小时②贴壁期：细胞附着于底物上, 游离期结束。

底物：玻璃、塑料、胶原、其它细胞等③潜伏期：此时细胞有生长活动, 而无细胞分裂。

细胞株潜伏期一般为6～24小时。

④对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长, 活力最佳, 最适合进行实验研究。

细胞培养技术题库1-0-8

细胞培养技术题库1-0-8问题：[单选,A1型题]下列关于细胞培养的描述错误的是（）A.冻存细胞的液氮温度约为-196℃B.培养箱的温度一般在36～37℃C.一般使用0.45μm的微孔滤膜除菌D.培养箱内通5%CO，95%空气E.处理活细胞的离心速度一般在1000r／min左右一般使用0.22μm的微孔滤膜除菌。

问题：[单选,A1型题]下列关于细胞冻存及复苏过程的描述错误的是（）A.细胞冻存的原则为快速冻存B.冻存液中含有8%二甲基亚砜C.每只冻存管中以冻存（1～1.5）×10个细胞为宜D.冻存的细胞提前一天换全培养液E.复苏时将冻存细胞从液氮中取出迅速投入42℃温水中速溶冻存细胞时，要注意缓慢逐步降温。

先将细胞悬液加入冻存管，封好口，冰水浴置-20℃冰箱过夜，次日转A-80℃冰箱，24～48小时后再转入液氮罐中。

问题：[单选,A1型题]肾穿刺活检病理诊断免疫病理学检查，通常不包括（）A.IgAB.IgDC.IgGD.C3E.C1q依据导致肾脏疾病的常见免疫复合物成分，免疫病理学常规进行IgA、IgG、IgM的免疫球蛋白及旁路激活的补体C3和经典途径激活的补体C1q、C4和纤维蛋白的检查。

(飞禽走兽金鲨银鲨 https:///)问题：[单选,A1型题]肾穿刺电镜标本的固定液和其浓度是（）A.10%中性缓冲甲醛固定液B.10%甲醛固定液C.2.5%戊二醛固定液D.4%多聚甲醛固定液E.1.25%戊二醛固定液问题：[单选,A1型题]肾穿刺标本应用石蜡切片进行免疫荧光染色时，以下描述不正确的是（）A.IgM不受影响B.纤维蛋白原不受影响C.IgA、IgG强度减弱D.补体不受影响E.HBsAg不受影响石蜡标本进行免疫荧光染色时，IgM、纤维蛋白原和HBsAg不受影响，补体往往消失，IgA、IgG强度减弱。

问题：[单选,A1型题]肾活检石蜡包埋切片常用的固定液有（）A.缓冲甲醛B.80%乙醇C.戊二醛D.多聚甲醛E.无水乙醇问题：[单选,A1型题]肾活检时免疫荧光制片厚度的要求是（）A.2μmB.3～4μmC.5μmD.5～6μmE.10μm问题：[单选,A4型题,A3A4型题]男性，35岁。

细胞培养常见问题及回答 .doc

3.L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
噬菌体检验
生物化学检测
激素的检测
血红蛋白检测
Sf9 细胞生长促进及方法学检测
12.二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？
二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。
KB
上皮细胞
人
口腔癌
MEM, 10% 胎牛血清和NEAA
KG-1
骨髓白细胞
人
红白血病病人骨髓
IMDM, 20% 胎牛血清
L2
上皮细胞
大鼠
肺
F-12K, 10%胎牛血清
L6
大鼠
骨骼肌成肌细胞
DMEM, 10% 胎牛血清
LLC-WRC 256
上皮细胞
大鼠
癌
Medium 199, 5% 马血清
McCoy
仓鼠
肾
BME, 10% 小牛血清
HCT-15
上皮细胞
人
结肠直肠腺癌
RPMI-1640, 10% 胎牛血清
HeLa
上皮细胞
人
子宫颈癌
MEM, 10% 胎牛血清和NEAA (in suspension, S-MEM)
HEp-2
上皮细胞
人
喉癌

细胞培养技术考试答案

一、名词解释1、细胞培养技术：指从体内组织取出细胞在体外模拟体内的环境使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术2、原代培养：取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

3、传代培养：细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。

4、细胞系：原代细胞首次传代成功后即可成为细胞系5、细胞株：通过选择法或克隆法形成法从原代培养物或细胞系中获得特殊性质或标志，并保持这些特性的培养物。

二、简答题1、细胞冻存与复苏要点与注意事项细胞冻存要点(1)冷冻过程要缓慢.需要冷冻保存的细胞先在4℃冰箱中放置 30-60分钟;然后转入-20℃,放置30分钟;然后再转入-80℃放置16-18小时(或过夜);最后放入液氮中长期保存.有条件的地方,可用程控降温仪,按每分钟-1 到-3℃速度降温,一直到-80℃以下,然后直接放入液氮中长期保存.(2)冻存细胞必须处在对数生长期,活力大于90%,无微生物污染.(3)细胞浓度控制在:1×107-5×107/ml.(4)使用高浓度血清或蛋白保护剂.一般情况下,用于冷冻保存完全细胞生长培养液中血清浓度大于20%.(5)使用合适的细胞冷冻保护剂,以保护细胞在冷冻过程中免受冰晶破坏.目前,最常用的冷冻保护剂是DMSO(二甲基亚砜),使用终浓度为5-10%.但是,有些细胞系不能用DMSO作为冷冻保护剂,如人白血病细胞系HL-60.因为,DMSO能诱导HL-60细胞分化.在这种情况下,可选用其它冷冻保护剂,如甘油(glycele),羟乙基淀粉等.注意事项(1)细胞在冷冻过程中在-20℃冰箱内放置时间不可超过1小时,以防止冰晶过大而破坏细胞.也可跳过-20℃这一步骤直接放入-80℃冰箱中,但这样做细胞存活率要低一些.(2)DMSO稀释时会释放大量热量.因此,DMSO不能直接加到细胞液中,必须事先配制.(3)DMSO 必须是细胞培养级别的.新买的DMSO本身处于无菌状态,第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管或瓶中,4℃保存.避免反复冻融造成DMSO裂解产生有害物质.并可减少污染机会.如要过滤DMSO,必须选用耐DMSO 的尼龙滤膜. 细胞冷冻保存液主要成分:冷冻保护剂,基础培养液,血清或蛋白.冷冻保存细胞复苏要点与注意事项:细胞复苏要点(1)从液氮中取出冻存的细胞,立即放入37℃水浴中快速解冻.(2)将1-2ml 冻存细胞液加入到25ml新鲜完全细胞生长培养液中,轻轻混匀.(3)用80g 离心2-3分钟,弃上清液.(4)用完全生长培养液轻轻悬浮细胞团,并计数细胞.(5)接种细胞到培养瓶中,起始密度为3×105/ml.注意事项(1)解冻时务必注意安全,预防冷冻管爆裂.,要带手套,用镊子将细胞冷冻管从液氮中取出,放入37℃水浴中.切不可直接用手,以免冻伤.(2)冷冻管在水浴中解冻时,液面不可超过冻存管盖面,否则,易发生污染.(3)快速解冻.冻存细胞从液氮中取出后,应立即放入37℃水浴中,轻轻摇动冷冻管,使其在1分钟内全部融化(不要超过3分钟).(4)解冻操作过程动作要轻.由于冷冻保存过的细胞变得非常脆弱,不仅解冻速度要快,而且动作要轻.一般情况下,解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养(1ml 冻存细胞液加入到25-30ml新鲜完全培养液中),24小时后再用新鲜完全培养替换旧培养液,以去除DMSO.如果,细胞对冷冻保护剂特别敏感,那么,解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂,然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中.2、细胞培养基本条件（1）合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一,培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质,而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境.（2）优质血清目前,大多数合成培养基都需要添加血清.血清是细胞培养液中最重要的成分之一,含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分.（3）无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件.在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物质污染,或者自身代谢物质积累,可导致细胞中毒死亡.因此,在体外培养细胞时,必须保持细胞生存环境无菌无毒,及时清除细胞代谢产物.（4）恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定适宜的温度.（5）合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳. 细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多,按其来源分为合成培养基和天然培养基(目前使用的培养基绝大部分是合成培养基),按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类.干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌,液体培养基由专业商家提供,用户可直接使用,非常方便.每种细胞都有其合适的培养基,3、常用的合成培养基种类(1).MEM细胞培养基系列(2).DMEM细胞培养基系列(3)RPMI-1640细胞培养基系列(4).199细胞培养基系列(5).水解乳蛋白细胞培养基(6)欧氏平衡盐(7)F-10,F-12细胞培养基系列(8)其它类型细胞培养基4、传代细胞分散后要经历的那些阶段，什么阶段细胞继代最合适细胞传一代后，一般要经过以下三个阶段：1．潜伏期（Latent Phase）。

细胞培养中常见的问题题库

细胞培养中常见的问题2006-11-23 15:53细胞中的颗粒到底是怎么回事？我的细胞总有颗粒，开始是细胞中有，后来细胞之间也好像有许多颗粒。

好像是细胞碎片一样。

是什么东西啊？是支原体污染吗？这可是我刚买回来的细胞啊!我们实验室也有这种情况，是不是黑的小碎片，有人说是细胞代谢产物，后来拿到高倍镜下看还会动，就怀疑是污染了，也想问问大家到底是什么是黑色的小碎片。

我没注意到它会动，只是觉得不像是活的微生物。

我觉得是由于某种污染或外界因素导致的细胞状态变差，裂解出的东西。

但是，是什么东西不清楚。

的确很常见在以前帖子见到说是“黑焦虫”。

长时间培养的很容易出现，我根据自己的经验估计是一种污染，因为随着黑点增多，本来生长旺盛的细胞逐渐停滞甚至死亡。

而且我后来原代培养的几批细胞并没有发现，我怀疑有好多细胞系本身就是污染的。

不过增加换液次数的情况下，好象一般不太娇气的细胞生长不是很受影响。

以前听很有经验的老师说黑焦虫是国产血清的问题，可以有条件换进口血清试试，或者离心一下也可能能解决问题。

那么所谓的“黑焦虫”到底是什么东西啊？有谁知道？我培养的细胞也出现过此中问题，放到高倍镜下看时有东西在动，但培养液不混浊，估计不是细菌污染，可能是血清问题，是支原体污染。

我培养的细胞也出现过这样的问题，我个人认为是一种支原体污染。

国产血清是罪魁祸首，因为只要将细胞饥饿一下，不超过24小时，这种东西就会疯长我培养的细胞也有出现这中情况。

但是并不影响细胞生长。

应该不是支原体污染最近，我复苏细胞细胞的时候也发现过这样的东西，尽管我用的是GIBCO的FBS，后来，每天换液之前洗几遍后，就慢慢变少，现在没了细胞培养的细菌污染我们新建的细胞室。

每周都会做清洁，用0。

2%新洁尔灭消毒，照紫外。

实验前也会照至少30分钟。

培养基中加青霉素，链霉素。

可是培养细胞时还是常有细菌污染，有时甚至分析不出原因。

用培养瓶还好一点，用多孔板或平皿就更凄惨。

细胞培养技术习题.docx

常用术语及解释■体外培养(in vitro)：原意为在试管中，现常与组织培养一词通用，译为体外培养。

I组织培养(tissue culture)：维持组织在体外生长，也泛指体外培养。

■器官培养(organ culture)：在体外维持器官、器官的部分或器官的原基生存和生长的方法。

■*细胞培养(cell culture)：即细胞(包括单个细胞)在体外条件下的生长。

在细胞培养中，细胞不再形成组织。

■细胞融合(cell fusion)：两个独立的细胞融合成一个细胞。

可用聚乙二醇(PEG)或仙台病毒诱发。

I *细胞杂交(cell hybridization)：两个或多个不同的细胞融合。

导致一个含核体(aynkaryo)的形成。

I体外培养转化(in vitro transformation)：细胞在体外培养中发生与原细胞遗传性状不同的变化，但不一定具有致癌性。

单倍体(haploid)：正常细胞染色体基本数(每一染色体只有一种)。

■整倍体(euploid)：具有两个以上单倍体数目的细胞■*原代培养(primary culture)：从体内取出细胞或组织的第一次培养。

■*传代(passage)也称再培养无论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代或传代培养。

也称再培养。

■单层培养(monolayerculture)：培养细胞在底物上长成单层。

I 悬浮培养(suspension culture)：细胞在培养液中是悬浮状态生长。

■*贴壁依赖性(anchorage-dependent)为细胞需贴附于底物或支持物上才能生长的性质。

I贴壁依赖性细胞(anchorag dependent cell)：由它们繁衍出来的细胞(或培养物)只有贴附于不起化学作用的物体(如玻璃或塑料等无活物体)的表面时，才能生长，生存或维持其功能。

I 无贴壁性(anchorage—independent)：不依赖于贴附底物或支持物上生长的性质。

细胞培养技术考题整理

1.为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。

激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞核血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。

（在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

）2.谷氨酰胺在细胞培养中起什么作用及使用方法？作用：几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。

使用方法：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃放置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃保存，临用前加入培养液。

配制方法：谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后，过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。

3.如何用台盼兰计数活细胞？正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

（用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。

轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。

）4.如何消除组织培养的污染？确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。

（一）认真做好外植体的选择和消毒工作，防止外植体带菌。

（二）改善接种室和培养室的环境条件，保证接种与培养环境清洁无菌。

（三）操作人员严格遵守无菌操作规程。

（四）培养基及接种工器具要严格灭菌，确保灭菌质量。

（五）在培养基中加入适量的抗生素。

（六）利用病毒在植株体内分布不均匀的原理，生产脱毒苗。

（七）利用培养基中高盐或高糖的浓度，抑制微生物的生长。

（八）减少培养基中的某些有机成分，可抑制微生物的生长繁殖。