抗酸染色液(金胺O荧光法)

萋-尼氏抗酸染色法和金胺o荧光染色法在结核分枝杆菌痰涂片检测中

1382019 年第 6 卷第 90 期2019 Vol.6 No.90临床医药文献电子杂志Electronic Journal of Clinical Medical Literature萋-尼氏抗酸染色法和金胺O 荧光染色法在结核分枝杆菌痰涂片检测中的效果比较李彦贞（阜康市疾病预防控制中心检验科，新疆阜康 831500）【摘要】目的比较结核分枝杆菌痰涂片检测中萋-尼氏抗酸染色法（Z-N 法）和金胺O 荧光染色法的应用效果。

方法选取2018年1月～2019年6月市疾病预防控制中心检验科收治的需行结核分枝杆菌痰涂片检测者60例作为研究对象，分别采取Z-N 法和金胺O 荧光染色法检测，比较两组检测阳性率。

结果 Z-N 法检测阳性率为31.7%，金胺O 荧光染色法为53.3%，差异有统计学意义（P ＜0.05）。

结论金胺O 荧光染色法在结核分枝杆菌痰涂片检测中阳性率略高于Z-N 法，可有效诊断肺结核，减少误诊与漏诊现象。

【关键词】萋-尼氏抗酸染色法；金胺O 荧光染色法；结核分枝杆菌痰涂片检测【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.90.138.01结核分枝杆菌会诱发结核病，此为常见慢性传染病，我国为高发国家之一。

实验室检查可有效诊断结核病，其中痰标本直接涂片法应用最为广泛，其优势主要为价格低廉及操作简易等。

目前萋-尼氏抗酸染色法（Z-N 法）为痰涂片镜检标准化方法，全国已经有规定章程，但在出阴性结果之前检测者需在100倍油镜下至少对300个视野予以观察，耗时耗力[1]，而基层痰检工作量大，人员少，涂片阴性检查可能无法尽早将结核病患者找出，进而无法预防其传播与流行。

荧光染色技术逐渐发展，在医学科领域内临床诊断与各种基础理论研究中应用广泛，金胺O 荧光染色法也逐渐用于结核分枝杆菌痰涂片检测中。

现选取患者60例，比较Z-N 法与金胺O 荧光染色法的检测效果。

萋—尼氏抗酸染色、金胺“O”荧光染色及结核菌快速液体培养检查

萋—尼氏抗酸染色、金胺“O”荧光染色及结核菌快速液体培养检查结核杆菌的对比观察发表时间：2013-06-05T09:43:50.230Z 来源：《医药前沿》2013年第11期供稿作者：蔡静贺彦玢姜元[导读] 目前结核病诊断工作中，主要依靠抗酸染色找到结核杆菌作为确诊依据。

蔡静贺彦玢姜元( 甘肃省兰州市肺科医院 730046)【摘要】目的：比较萋-尼氏抗酸染色、金胺“O”荧光染色与结核菌快速液体培养在结核病诊断方法的差异。

方法：将我院2012年6月—2012年12月六个病区350例住院患者痰液标本进行调查，分别采用萋-尼氏抗酸染色法、金胺“O”荧光染色法、快速液体培养法。

结果：350例患者痰液标本中，抗酸染色阳性共94例，阳性率为26.86%，金胺“O”荧光染色阳性共138例，阳性率为39.43%，快速液体培养法培养阳性为183例，阳性率为52.29%。

结论：选择有效的实验检测方法是发现疾病的关键。

【关键词】结核病结核杆菌诊断方法【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）11-0204-01 目前结核病诊断工作中，主要依靠抗酸染色找到结核杆菌作为确诊依据。

然而，因为疾病的不典型性及难治性结核病患者的出现，增加了鉴别的难度。

在常见的几种结核杆菌的检测方法中，抗酸染色结核杆菌检出率不足30%[1]，金胺“O”荧光染色可用于抗酸染色，如结核或麻风分枝杆菌，操作简便，阳性率较抗酸染色略高[2]，结核杆菌快速液体培养的方法对实验室要求较高，在基层医院中开展难度大。

1 资料与方法1.1标本来源收集2012年6月—2012年12月我院六个病区住院患者痰液标本350例。

1.2方法操作方法严格按照全国结核病诊断细菌学检验规程[3]执行,350份标本各直接涂片2张，分别进行抗酸染色和金胺“O“荧光染色及结核菌快速液体培养。

1.3试剂萋—尼氏抗酸染色法试剂由珠海贝索生物试剂有限公司提供，金胺“O”染色法试剂由珠海贝索生物试剂有限公司提供，快速液体培养法试剂由美国BD960公司提供。

结核分枝杆菌、厌氧菌及其它微生物的检测

（五）鉴定试验
最终鉴定需要进行生化反应及终末代谢产物等检查。
生化试验主要包括多种糖类发酵试验、吲哚试验硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂酶试验、明胶液化试验、硫化氢试验等——厌氧 API条。
目前用于厌氧菌快速鉴定还有自动微生物鉴定系统等。
实验内容
1、记录抗酸染色步骤。 2、油镜下观察抗酸杆菌涂片，并记
厌氧菌的分离与鉴定
（三）标本接种
标本接种3个血琼脂平板，分别置于有氧、无氧和含5-10%CO2的环境中培养。若只要求检测厌氧菌，只需接种1个厌氧血琼脂平板。
厌氧菌的分离与鉴定
（四）耐氧试验
当厌氧血平板上有细菌生长时，为了确定是否为厌氧菌，必须做耐氧试验。挑取菌落分别转种2块需氧血琼脂平板和1 块厌氧血琼脂平板，然后将平板分别放置在需氧、厌氧和CO2环境中培养。
荧光染色结果报告
—：观察70个视野未发现抗酸杆菌； ±：70个视野内发现1-2条抗酸杆菌； 1+：50个视野内发现2-18条抗酸杆菌； 2+：10个视野内发现4-36条抗酸杆菌； 3+：每个视野内发现4-36条抗酸杆菌； 4+：每个视野内发现36条以上抗酸杆菌。
厌氧菌的分离与鉴定
厌氧菌标本的采集涂片与染色标本接种耐氧试验鉴定试验
干后油镜下观察结果。
抗酸染色结果观察
油镜下观察涂片，在淡蓝色背景下可见染成红色细长或分枝状杆菌，此为抗酸染色阳性细菌。
抗酸染色结果报告
—：观察300个视野未发现抗酸杆菌； ±：300个视野内发现1-2条抗酸杆菌； 1+：100个视野内发现1-9条抗酸杆菌； 2+：10个视野内发现1-9条抗酸杆菌； 3+：每个视野内发现1-9条抗酸杆菌； 4+：每个视野内发现9条以上抗酸杆菌。

萋-尼氏抗酸染色法和金胺O荧光染色法在结核分枝杆菌痰涂片检测中的对比

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结核杆菌痰涂片镜检的意义及其应注意的问题需知

结核杆菌痰涂片镜检的意义及其应注意的问题需知结核杆菌，是人类结核病的病原菌。

结核杆菌是专性需氧菌，无鞭毛，有荚膜，没有运动能力，典型的结核杆菌的形态为细长稍弯曲或直的、两端圆钝的杆菌，长1μm～4μm，宽0.3μm～0.6μm。

痰涂片经过抗酸染色阳性的标本，在100倍的生物显微镜下可在蓝色背景下看到紫红色的杆状菌，呈单个散在，有时也呈X、Y形或条索状、聚集成簇等。

痰涂片经金胺“O”染液染色后，在含有紫外光源的荧光显微镜下发出橘黄颜色，高倍镜（物镜40倍目镜10倍）下，可见结核杆菌产生黄绿色荧光，呈杆状或分枝状。

目前基层实验室多采用抗酸染色镜检。

（一）结核杆菌痰涂片镜检的意义1.诊断传染性肺结核结核病的控制是以发现和控制传染源为主，而痰涂片镜检阳性的肺结核患者是社会上最主要的传染源，故痰涂片镜检结果对诊断传染性肺结核具有重要意义。

2.评价化疗效果结核病是由结核杆菌引起的，针对结核病的治疗，现行化疗方案的制定也主要是以结核杆菌的生物学特性为依据，所以痰涂片镜检结果可以作为化疗效果的评估依据。

1.为流行病学疫情评价服务由于传染性肺结核在流行病学中有着特殊的意义，因此，涂阳患病率、涂阳发现率是反映某一国家或地区结核病疫情的严重程度的重要指标。

根据世界卫生组织（WHO)和国际防痨及肺部疾病联合会（UNION）针对低收入且结核病疫情严重的发展中国家所制定的技术指南，痰涂片镜检是相应国家开展结核病控制项目时非常符合成本效益原则的细菌学试验技术。

相对于临床和实验室经常采用的其他诊断和检查项目，高质量的痰涂片镜检有其自身特殊的优势：作为诊断手段，对传染性肺结核的诊断比X线的准确性高；技术相对简单，操作容易标准化；建立结核杆菌检查室设备投入少；检查成本低，易于接受；从收到标本到报告结果的时间短，能够满足临床诊断的需要；对涂阳患者的治疗效果，能够作出及时和准确的评价。

（二）结核杆菌痰涂片镜检应注意的问题1.实验室布局原则结核杆菌检查需要有独立的实验室，不能和其他实验室混用；染液配置、镜检等相对洁净的操作与标本存储、涂片、染色等污染操作要有独立分开的场所，最好分别在专用的房间进行，中间通过传递窗连接；基层实验室若只从事涂片镜检的，在只拥有一间独立房舍的情况下，相对洁净区与污染区也要有明显区分。

观察金胺O荧光染色在结核病诊断中的应用效果

观察金胺 O荧光染色在结核病诊断中的应用效果摘要目的：观察分析金胺O荧光染色在结核病诊断中的应用。

方法：2020年2月-2020年8月到北川羌族自治县疾病预防控制中心结核病控制科门诊就诊的患者755例，收集他们的痰标，同时用金胺O荧光染色法和抗酸染色法检测痰标本中结核分支杆菌，观察检测效果。

结果：金胺O荧光染色组共检出84份阳性标本，阳性率为11.13%；抗酸染色组检出59份阳性标本，阳性率为7.81%。

经检验，P＜0.05,两组间有统计学差异。

结论：运用金胺O荧光染色进行结核病诊断，其诊断率更高，效果更理想。

关键词：金胺O荧光染色；结核病；诊断由于流动人口骤增、HIV感染、耐药结核菌株蔓延，发展中国家贫穷加剧和对结核病控制的忽视，全球结核病疫情再次恶化[1]。

有抽样调查显示，绵阳地区15岁及以上人群肺结核的患病率为579/10万，高出全国平均水平26.1%（459/10万），属于结核疫情严重地区之一[2]。

结核病实验室检查是为结核病的确诊提供病原学证据，也是确定传染性肺结核尤其是耐多药结核病的重要依据，是开展结核病疫情监测、治疗和防治效果评价的技术关键。

目前结核病的实验室检测方法传统抗酸染色法、HE染色法、细菌培养法、荧光定量PCR法和斑点免疫层析法等。

金胺O荧光染色法检测结核分支杆菌，效果比较理想，现将此项技术的开展应用情况报告如下。

1.材料与方法1.1材料（1）采集痰标本的容器采用了可密封的、带螺旋盖的痰盒。

（2）采集时间和采集次数痰标本的采集时间：即时痰、晨痰、夜间痰痰标本的数量：初诊患者收集3份痰标本（即时痰、晨痰、夜间痰）；随访患者按期收集2份痰标本（晨痰、夜间痰）。

（3）标本 2020年2月-2020年8月到北川羌族自治县疾病预防控制中心结核病控制科门诊就诊的患者，初诊患者269例，随访患者486例，共755例。

1.2方法同时用金胺O荧光染色法和抗酸染色法检测痰标本中结核分支杆菌。

微生物基本染色方法

基本染色方法1.染色准备：染色的第一步是制作涂片。

菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布。

菌落涂片时，先取生理盐水 1滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。

涂片时必须注意应轻轻操作。

猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。

制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。

将固定后的涂片进行染色。

2.几种基本染色方法2.1 革兰染色本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。

染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)和革兰阴性(红色)两类。

2.1.1结晶紫溶液A液：结晶紫2g95％乙醇20mlB液：草酸铵0.8g蒸馏水80ml需在用前24h将A液、B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。

2.1.2碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300ml碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完全溶解。

最后补足水量。

也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。

2.1.3 脱色液：95％乙醇。

2.1.4复染液A. 贮存液：沙黄 2.5g95％乙醇100mlB. 应用液： A液 10ml蒸馏水 90ml2.1.5染色方法：A．涂片经火焰固定，加结晶紫液染30s，清水冲去染液。

B．加碘液染30s，水洗。

C．加脱色液，不时摇动约5～10s，至无紫色脱落为止，水洗。

D．加复染液，染30s，水洗。

E．干后镜检。

3、抗酸染色抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。

染厚涂片时，须掌握复染色时间。

如果背景过深，影响镜检。

奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象，视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应予注意。

抗酸染色有两种常用方法：①碱性复红法又称萋纳(Ziehl—Neelsen)法(我们使用的方法)。

金胺“0”荧光染色法对结核病细菌学检验的价值分析

捷、敏感的新型方法，但由于对结核病的临床诊断仍需根据痰涂片检
对于本文所有痰液样本，均首先取一份采用金胺 … ０ ’荧光染色法进行检查，将痰液涂片于荧光染色液下进行１０ｍｉｎ的染色，染色完成后首先使用蒸馏水洗，再使用３％盐酸酒精进行脱色，脱色时间为
Ｐ＞Ｏ．０５，而ｌ＋检出率前者明显高于后者，Ｐ＜Ｏ．０５，具体数据详见表ｌ。
表ｌ两种检查方法阳性率结果对比
组另０萋一尼染色法
Ｐ
卫生条件有限有关＿Ｉｊ。目前临床上对于结核病的细菌学检验的方法为抗酸染色法，即为萋．尼染色法，但由于该法存在检测时间过长、无
１．２检查方法
，
对于结核病的重视程度可见一斑。结核病的实验室检查方法较
多，而痰涂片抗酸染色体检查为我国规定检验方法。该方法使用时间
长，操作较为成熟，但其检验时间过长，难以达到一次性检验多批样品的目的，且阳性检出率较低、在进行加热与染色的过程中容易产生气溶胶影响检查结果、对于工作人员的操作水平要求非常高，不能完全满足临床对于检验高准确性的要求。ＰＣＲ法、ＰＥＧＥ法等虽然是快
＞Ｏ．Ｏ５＜０．０５＞Ｏ．０５＞Ｏ．Ｏ５＞０．０５
学检验价值进行分析与探讨，旨在为该疾病的诊断提供科学依据，
具体报道如下。１资料与方法
３讨
论
结核病在临床上是一种严重危害人类健康的传染性疾病，据有关文献记录，每年新增结核病患者超过８００万人次，且因结核病死亡的人数约为２００万】。我国作为全球２２个结核病流行最为严重的国家之

抗酸染色液(金胺O荧光法)

抗酸染色液(金胺O 荧光法)简介：分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面, 所以分枝杆菌一般不易着色。

传统的染色方法要经过加热和延长染色时间来促使其着色。

分枝杆菌中的分枝菌酸与染料一旦结合后，就很难被酸性脱色液脱色，故名抗酸染色。

其中最具代表性是结核杆菌Ziehl －Neelsen 染色法，该法是WHO 推荐热染的方法。

Leagene 抗酸染色液(金胺O 荧光法)属于荧光染色液，无需加热，相对较抗酸热染液安全。

其染色原理是在室温条件下Auramine O 染色以及复染后，用含有紫外光源的荧光显微镜检查，抗酸杆菌呈亮黄色，而其他细菌及背景中的物质呈暗黄色，这种方法可用低倍镜检，因此能更快速找出抗酸性菌。

组成：自备材料：1、接种环2、载玻片3、蒸馏水4、荧光显微镜操作步骤(仅供参考)：1、接种环挑取待检样本，涂布于载玻片上，加热固定。

2、滴加金胺O 染色液，避光染色，水洗。

3、用酸性脱色液脱色，直至涂片无黄色为止，水洗。

4、用复染液染色，水洗。

5、轻轻吸干水分，自然干燥。

6、荧光显微镜下镜检。

染色结果：编号名称 DM0037 4×100ml DM0037 4×500ml Storage 试剂(A): 金胺O 染色液 100ml 500ml RT 避光试剂(B): 酸性脱色液 2×100ml 2×500ml RT 试剂(C): 复染液 100ml 500ml RT 避光使用说明书 1份抗酸菌亮黄色或橘黄色非抗酸菌、细胞、背景暗黄色注意事项：1、每次使用后盖紧试剂瓶，以防试剂挥发和污染。

2、金胺O荧光易衰减，尽量避光操作。

3、上述试剂均对人体有刺激性，请注意适当防护。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：编号名称CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)DC0032 Masson三色染色液DG0005 糖原PAS染色液DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液DM0015 标准革兰氏染色液PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)TC1213 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)。

金胺O荧光染色法在病理特殊染色中的应用

【ｅｗｒｓＫｙｏｄ】
Ｆｏｓｎｔｎｌｒｃｔａ；ｕｅｅｓｉ
ＡｒｉＯｕｍｎａｅ；
Ｓｅｉｃｔｎｇｆｐｔｌ；ｐｃｉａｉｏａｏｇｆｓｉｎｈｏｙ
Ｍｙｏａｔｒｍｕｅｃｌｓｃｂｃｅｉｔｂｒｕｏｉｕｓ
ｏａｈｌｇ．ｅｈｄｆｐｔｏｏｙＭｔｏｓＢｉｐｙｔｓｅｃｎｉｅｅｕｅｃｌｓｓｗａｔｉｅｙｆｏｅｃｎｙｓｍａｅｗｉｏｓｉｕｏｓｄｒｄｔｂｒｕｏｉｓｓｓａｎｄｂｕｒｓｅｔｄｅｄｔｌｈａｒｍｉｅ０ａｄｃｍｐｒｄｔｌｓｉｉｈ — ｅｓｎａｉ — ｓｓａｎＲｅｕｔＵｄｒｆｏｅｃｎｅｍｉｒｓｏｙｕａｎｎｏａｅｏｃａｓｃＺｅｌＮｅｌｃｄｆｔｔｉ．ｓｌｅａｓｎｅｕｒｓｅｃｃｏｃｐ，ｌＭｙｏａｔｉｍｕｅｃｌｓｓｗｓｓａｎｄａｏｄｎＣｏｃｕｉｎＡｕａｎｆｏｅｃｎｅｍｅｈｄｉｒｃｂｃｅｕｔｂｒｕｏｉａｔｉｅｓｇｌｅ．ｎｌｓｏｒｒｍｉｅＯｕｒｓｅｃｔｏｓｗｏｔｌｈｍａｉｕａｉｇａｄｐｐｌｒｉｇｉｐｆｉｓａｎｐａｔｅｎｐｌｔｎｏｕａｉｎｎｓｅｃｃｔｉｒｃｉ、ｎｚｉｃ
材料与方法
一
１荧光染色法：．首先石蜡切片脱蜡至水，再用金胺Ｏ荧光染液染５ｍｎｉ。水洗后用３的盐酸酒精％脱色１２ｍｎ至外观无黄色为止。水洗后用苏木～ｉ，

微生物检验在临床上有哪些用途？

微生物检验在临床上有哪些用途？大家都知道，微生物具有分布广泛、生长繁殖能力强、种类繁多、易培养、易变异及代谢能力、适应能力强等特点，在临床疾病监测中也有着广泛的应用：一、常见的检测方法1、重量检测法重量检测法也就是通过称重的方式来进行，利用离心或过滤法测定。

一般情况下，干重是湿重的百分之十五左右，这种方式比较繁琐。

若是微生物为菌体，大部分都会采取这种方式，如活性干酵母这种，以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。

2、体积测量法体积测量法也就是平时所说的测菌丝浓度法，这种检测方法是通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况，这种类型的检测方式比较简单、快捷、粗放，由于离心沉淀物中会夹杂各种固体营养物，在检测之前需要设定一致的处理条件，不然会导致结果有很大的偏差，该检测方式目前已成为大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。

二、临床应用1、重视显微镜检查对于留取标本进行革兰染色，一方面可以掌握标本质量以确定进行培养或重新留取标本;另一方面通过镜检对某些细菌可以作出初步分类。

对于脓性分泌物或穿刺液进行革兰染色镜检亦可作出大致分类或初步诊断。

对泌尿系男性尿道和女性分泌物涂片革兰染色镜检，查到白细胞内或外有革兰阴性双球菌，是诊断淋病的重要依据。

脑脊液墨汁染色检查新型隐球菌，对于临床诊断隐球菌性脑膜炎有重要价值。

痰、胸水涂片抗酸染色查抗酸杆菌，对于诊断肺结核有重要意义。

粪便球杆菌比例检查，对于肠道菌群失调的诊断有重要帮助。

粪便暗视野检测弧菌的运动情况，对于霍乱的诊断有意义。

2、用显色培养基对微生物快速鉴定在分离培养基中加入检测某些细菌特异性酶的底物（由产色基团和微生物代谢物如糖苷类，氨基酸或肽类两部分组成，通常为无色），在特异性酶作用下游离出产色基团并产生荧光或显示一定颜色，用紫外灯观察菌落产生的荧光或直接观察菌落颜色即可对细菌做出鉴定。

如CHRO真菌培养基:白色念珠菌（绿色），热带念珠菌（蓝色），克柔念珠菌（粉红色）。

百度文库-抗酸染色液说明书

广州市外显子生物技术有限公司
抗酸染色液
产品说明：
本试剂盒方法学参照世界卫生组织(WHO)所推荐的标准
Ziehl-Neelsen法，主要用于对结核杆菌等抗酸性菌的化学
染色。

抗酸染色有两种常用方法：①碱性复红法又称萋-尼
氏(Zieh1-Neelsen)法；②荧光染料金胺O法(也称金胺－罗
丹明法)，本染色液采用的是改良碱性复红法，可以不用加
温。

结核菌、麻疯杆菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或
脂质之皮膜而不易着色，但一经着色后，酸性酒精的作用亦
是不容易把它脱色。

利用此特性并以增强的染色液予染色，
然后再以酸性酒精加以处理，使其脱色后再对比染色，此时
抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色(红色)，也就易于鉴别。

产品组成：
货号产品规格储存条件
S-1539 石碳酸复红溶液
酸性酒精溶液
亚甲基蓝溶液
10ml
30ml
10ml
RT
-- 说明书1份
有效期：12 个月。

原包装未开封染色液的使用期限为 12 个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后 6 个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

实验步骤：
1.涂片经火焰固定，加石碳酸复红溶液染色5-10分钟。

2.水洗后沥干。

3.酸性酒精溶液脱色2分钟。

4.水洗，如残存红色，再添加酸性酒精溶液至完全脱掉红色。

5.加亚甲基蓝溶液染色30秒，水洗、干燥、镜检。

结果判定：抗酸性菌呈红色，其他细菌及细胞呈蓝色。

痰抗酸杆菌的荧光染色法

抗酸杆菌荧光染色检查质量控制
• 2.试剂：染液外观无沉淀、无悬浮物（金胺 O非常稳定，一般不产生沉淀），贮存环境避光通风、避免高温，每次使用后及时盖紧，已开瓶的试剂的使用，一般控制在6个月内用完或弃去。
• 3.涂片：应当取痰的脓样、干酪样部分，于玻片右侧2/3均匀涂成10×20mm痰膜，自然干燥，染色前固定。
抗酸杆菌荧光染色检查操作程序
• （三）镜检和报告 • 2. 抗酸杆菌（1~9条）：1～9条抗酸杆菌
/50个视野（报告抗酸杆菌数）。
• 3. 抗酸杆菌阳性（1＋）：10～49条抗酸杆菌/50个视野。
• 4. 抗酸杆菌阳性（2＋）：1～9条抗酸杆菌/每视野。
抗酸杆菌荧光染色检查操作程序
• （三）镜检和报告 • 5. 抗酸杆菌阳性（3＋）：10～99条抗酸
• (镜检后的标本置于标本盒内，放4℃冰箱避光保存)
萋—尼氏法与荧光法的主要区别：
项目初染色
脱色时间
萋—尼氏染色法
碱性复红热染5分钟（或冷染15分钟） 1分钟（脱色不彻底可重复）
荧光染色法
0.1%金胺Ｏ染液，不加热染色 15分钟， 3分钟（脱色不彻底可重复）
复染液
镜检
阴性报告
报告抗酸杆菌数抗酸杆菌阳性(1 ＋) 抗酸杆菌阳性(2 ＋) 抗酸杆菌阳性(3 ＋) 抗酸杆菌阳性(4 ＋) 标本片保存
抗酸杆菌荧光染色检查质量控制
• 4.染色：初染15分钟要避免染液干燥，可续加染液；脱色符合要求，复染操作根据试剂说明书或经验控制好时间，时间过长可导致荧光亮度消失。初染、脱色、复染的水洗后，都要沥去玻片上的残余水。
• 5.显微镜维护：防尘、防潮、防震、避免阳光直射，按操作规范使用，定期清扫灰尘。为延长光源灯的使用寿命，一般不把光源调到最强，并且注意使用后及时关闭光源灯开关和变压器电源。

金胺O荧光染色与抗酸染色在结核病诊断中的应用价值

金胺O荧光染色与抗酸染色在结核病诊断中的应用价值摘要：目的：比较结核杆菌抗酸染色、金胺 O 荧光染色（以下简称荧光染色）2种检测方法的阳性检出率，探讨最适合结核杆菌筛查的检测模式。

方法：萋-尼法与金胺O荧光染色结果：金胺 O 荧光染色联合抗酸染色可有效提高结核杆菌的阳性检出率，具有较高的敏感度、特异和准确度，可作为诊断结核病的有效手段。

金胺“O”荧光染色组检出率明显高于萋-尼染色组，尤其是痰液标本菌量是1+，对那些病变轻，排菌量少的肺结核病人的诊断具有重要意义。

荧光染色镜检时间短，工作效率高，适用于大量标本的检测。

关键词：肺结核；结核杆菌；萋-尼染色；金胺 O 荧光染色结核病是临床上最常见的慢性传染病之一，由结核杆菌经呼吸道或消化道或血液等途径侵入人体所致，早期症状无显著表现，随病情进展可表现全身乏力、消瘦、夜间盗汗等严重影响患者的身体健康，目前，临床上结核病细菌学的诊断主要采用抗酸染色法，即萋-尼染色法，该法已成为抗酸杆菌检测的经典方法，但因该法检测时间长，阳性检出率低，已无法满足临床诊断需要[1]。

我们采用金胺“O”荧光染色法检测，通过与萋-尼法对比试验，证明荧光染色法能提高抗酸杆菌的阳性检出率。

肺结核的防治关键是早发现早治疗。

在众多的检测方法中，结核菌痰检方便快捷，可靠性高，能为临床治疗提供有力的辅助诊断依据，是肺结核诊断的金标准。

其它实验室辅助诊断都具有间接性，临床意义有限。

所以，本研究将目前应用最广泛的其中2种结核菌痰检方法的阳性检出率进行比较，探究2种方法的临床意义、适用范围以及最适合基层医疗机构结核杆菌筛查的检测模式。

1资料与方法1.1一般资料选取 2015 年 1 月～2017 年 12 月期间通过影像学及PPD、T-spot等辅助检查确诊为活动肺结核的患者 520 例。

收集所有病例的痰液制作成标本同时进行萋-尼法染色及荧光染色，Z-N 组和 LED 组进行染色镜检进行比较，取样时都嘱咐患者在清晨嗽口，然后从深部咳出 2 ～3 ml 痰作为标本，置于无菌痰盒内送检。

金胺O荧光染色法对结核病细菌学检验的价值分析

金胺 "O"荧光染色法对结核病细菌学检验的价值分析摘要：目的：对结核病细菌检验采用金胺“0”荧光染色法的应用价值。

方法：研究取90例结核病患者，均为2018年1月-2019年1月来我中心治疗。

对90例患者抽取痰液进行结核病细菌学检验。

随机性分组，对照组采用抗酸染色法检验，共45例患者；实验组采用金胺“0”荧光染色法检验，共45例患者。

比较两组患者在临床上的检验结果。

结果：在检验阳性率方面，实验组为86.67%（39/45），对照组为40.00%（18/45），实验组的检验阳性率比对照组高，组间数据差异性明显，P<0.05。

结论：采用金胺“0”荧光染色法对结核病患者进行细菌学检验，其检出率高，且操作简单快捷，在临床上有较高的应用价值，值得推荐。

关键词：细菌学检验；金胺"O"荧光染色法；结核病The value of auramine "O" fluorescent staining in bacteriological examination of tuberculosisAbstract: Objective: To evaluate the value of auramine "0" fluorescent staining in the detection of tuberculosis bacteria.Methods: A total of 90 patients with TUBERCULOSIS were studied, all of whom came to our center for treatment from January 2018 to January 2019.Sputum was extracted from 90 patients for bacteriological examination of tuberculosis.Randomized grouping. Acid-fast staining test was used in the control group, with a total of 45 patients.In the experimental group, auramine "0" fluorescent staining was used to test a total of 45 patients.The clinical results of the two groups were compared.Results: The positive rate in the experimental group was 86.67% (39/45) and 40.00% (18/45) in the control group. The positiverate in the experimental group was higher than that in the control group.0.05.Conclusion: Auramine "0" fluorescent staining was used for bacteriological examination of tuberculosis patients. The detection rate was high, the operation was simple and fast, and the application value was high in clinic, which was worthy of recommendation.Key words: bacteriological examination;Auramine "O" fluorescence staining;Tuberculosis (TB)结核病是一种常见慢性传染病，主要因结核分枝杆菌感染所致，同时经呼吸道进行传播，对人体健康影响较大。

抗酸染色液(Ziehl-Neelsen热染法)

染色结果：
抗酸菌
红色
背景及非抗酸菌
蓝色Leabharlann 注意事项：1、每次使用后盖紧试剂瓶，以防试剂挥发和污染。 2、上述试剂均对人体有刺激性，请注意适当防护。
操作步骤(仅供参考)：
1、接种环挑取待检样本，涂布于载玱片上，涂片加热固定。 2、滴加 Ziehl－Neelsen 复红染色液，用火焰微热至出现蒸汽，一般该染色过程至少。 3、蒸馏水冲洗。 4、用 Ziehl－Neelsen 脱色液脱色至无红色为止。 5、蒸馏水冲洗。 6、用亚甲蓝染色液染色。 7、蒸馏水冲洗。 8、轻轻吸干水分，自然干燥。 9、油镜镜检。
北京雷根生物技术有限公司
抗酸染色液(Ziehl-Neelsen 热染法)
简介：
分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面, 所以分枝杆菌一般丌易着色。分枝杆菌中的分枝菌酸不染料一旦结合后，就很难被酸性脱色液脱色，故名抗酸染色。抗酸染色液(Ziehl－Neelsen 热染法)属于热染色液，其染色原理是在加热条件下，分枝菌酸不复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。该试剂盒更适用于冷染法效果丌佳的情况。
组成：
编号名称试剂(A): Ziehl－Neelsen 复红染色液试剂(B): Ziehl－Neelsen 脱色液试剂(C): 亚甲蓝染色液使用说明书
DM0034 3×50ml
50ml 50ml 50ml
DM0034 3×100ml
100ml 100ml 100ml
1份
Storage
RT 避光 RT RT 避光

细菌标本形态学检验

细菌标本形态学检验形态学检查方法是细菌检验中极为重要的鉴定手段之一，它不仅有助于细菌的初步识别，同时也是决定进行生化反应鉴定的重要步骤。

如痰中的抗酸杆菌、脑脊液中脑膜炎球菌、泌尿生殖道分泌物中的淋球菌等。

通过形态学检查得到初步的诊断。

由于细菌体积小，无色透明，因此利用光学显微镜直接检查只能观察到细菌的动力，对形态、大小、排列方式、染色特性及特殊结构的判定，还须借助于染色标本的观察。

要研究其细菌的超微结构，还需用电子显微镜。

一、不染色标本检查法不染色标本的检查用于观察活菌状态，常用以检查细菌的动力或运动状况。

1．湿片法：用接种环取细菌培养液两环，置于载玻片中央，轻轻覆以盖玻片。

菌液要适量，不可外溢，不可有气泡。

高倍镜下观察。

2．悬滴法：加一小滴菌液在盖玻片中央，在另一凹玻片凹窝的周围涂少量凡士林，将凹面向下，对准盖玻片中央，盖在凹玻片上，迅速翻转玻片，用小镊子轻压，使盖玻片与凹玻片粘紧，密封凹窝边缘。

高倍镜下观察。

3．毛细管法：本法适用于观察厌氧菌动力。

先将待检菌接种在适宜的液体培养基中，经厌氧过夜培养后，以毛细管（长60～70nm ，管径0．5 ～1．0nm ）接触培养物，使菌液进入毛细管中，用火焰封闭毛细管两端，将毛细管固定在载玻片上，镜检。

二、染色标本检查法（一）基本方法细菌胞浆无色透明，不易识别。

常用适宜的染料使细菌着色后，以观察其形态和特殊构造，且可按染色反应进行分类。

1．原理（1）物理吸附作用：由于毛细管现象和渗透作用，使染料进入细胞内被溶解吸收。

此外，细菌等电点较低，pH值2 ～5，在一般情况下细菌带负电荷，易和带正电荷的碱性染料相结合。

（2）化学反应：菌体内某些化合物和染料相结合，发生化学反应使细菌着色，而且不易被脱色剂所脱色。

（3）其他因素：细胞膜的通透性、膜孔的大小、细胞结构完整与否以及培养基成分，染色液中电解质含量、pH值、菌龄等都是影响细菌着色的因素。

2．方法（1）涂片：临床标本大多可直接涂抹在洁净的载玻片上。

第一类医疗器械备案凭证

第一类医疗器械备案凭证佛山市顺德区德维医疗器械有限公司：根据相关法规要求，对你单位第一类医疗器械：抗酸染色液予以备案，备案号：粤顺械备20150005号。

日期： 2015年 2月 2日第一类医疗器械备案信息表备案号：粤顺械备20150005号备案人名称佛山市顺德区德维医疗器械有限公司备案人组织机构代码55912316-7备案人注册地址佛山市顺德区均安镇均益路194号世友工业城4座501之一生产地址佛山市顺德区均安镇均益路194号世友工业城4座501之一代理人/代理人注册地址/产品名称抗酸染色液型号/规格抗酸染色液（萋尼氏法）中每种染色液单瓶包装规格为：20ml、100ml、250ml、500ml、5000ml，整组染色液包装规格为：4×20ml、3×100ml、4×100ml、3×250ml、4×250ml、3×500ml、4×500ml、6×500ml；抗酸染色液（冷染法）中每种染色液单瓶包装规格为：20ml、100ml、250ml、500ml、5000ml，整组染色液包装规格为：4×20ml、3×100ml、4×100ml、3×250ml、4×250ml、3×500ml、4×500ml、6×500ml；抗酸染色液（荧光金胺O法）中每种染色液单瓶包装规格为：20ml、250ml、500ml，整组染色液包装规格为：3×20ml、3×250ml、4×250ml、3×500ml、4×500ml；抗酸染色液（荧光金胺O-罗丹明B法）中每种染色液单瓶包装规格为：20ml、250ml、500ml，整组染色液包装规格为：3×20ml、3×250ml、4×250ml、3×500ml、3×500ml、4×500ml；抗酸染色液（简易二步法）中每种染色液单瓶包装规格为：20ml、250ml、500ml，整组染色液包装规格为：2×20ml、2×250ml、3×250ml、4×250ml、2×500ml、3×500ml；抗酸染色液（荧光金胺O二步法）中每种染色液单瓶包装规格为：20ml、250ml、500ml，整组染色液包装规格为：2×20ml、2×250ml、3×250ml、4×250ml、2×500ml、3×500ml；产品描述抗酸染色液（萋尼法）由石碳酸复红溶液、酸性酒精溶液、亚甲基蓝溶液组成；抗酸染色液（冷染法）由石碳酸复红溶液、酸性酒精溶液、亚甲基蓝溶液组成；抗酸染色液（荧光金胺O法）由金胺O染液、酸性酒精溶液、复染液组成；抗酸染色液（荧光金胺O-罗丹明B法）由罗丹明B染液、酸性酒精溶液、复染液组成；抗酸染色液（简易二步法）由石碳酸复红溶液、酸性乙醇美蓝溶液组成；抗酸染色液（荧光金胺O二步法）由金胺O染液、荧光脱色复染液组成；预期用途抗酸染液（萋尼法）、抗酸染色液（冷染法）、抗酸染色液（荧光金胺O法）、抗酸染色液（荧光金胺O-罗丹明B法）、抗酸染色液（简易二步法）、抗酸染色液（荧光金胺O二步法）主要用于结核杆菌等抗酸性菌的涂片染色。

抗酸染色Kinyoun染色法

3 用抗酸染液将涂片浸泡 5~10min，不必加热；
4 弃去染液，冷却后用水洗载玻片，在加下一个溶液之前去除多余的水分； 5 加脱色液分色 15~20sec，手持载玻片的一端，是载玻片呈一定的角度，使分色液顺载玻片的另一端流下，直至颜色不再改变；
6 用复染液复染 30sec；
7 用 95%乙醇脱水 2min、100%乙醇脱水 2min、二甲苯透明 2×5min； 8 封片剂封片，显微镜下观察。
结果
抗酸菌染成红色，非抗酸菌及细胞均染成淡蓝色。
注意事项
1 抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，
须掌握复染时间。如果背景过深，影响镜检。
2 诺卡菌可呈弱抗酸性，染色时间比抗酸杆菌稍长。取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象，视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察
时应予注意。
3 如果您第一次使用本试剂盒，建议做 1~2 个预实验。温馨提示
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。
储存温度
室温下避光储存 6 个月。包装清单
货号
品名
包装
ST043A
抗酸染液
100mL
ST043B
脱色液
100mL
ST043C
复染液
100mL
说明书
1份
1
抗酸染色（Kinyoun 染色法）
抗酸染色（Acid-fas，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以
分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌
酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
实验流程

发光二极管荧光法与抗酸染色法查找抗酸菌效果对比

进行抗酸染色显微镜检查，记录检查结果；两种检并将
目前，已有许多型号的ＬＤ显微镜面市，Ｅ其价格与
普通显微镜相当。另外，ＥＬＤ灯泡寿命长约５０ｈ约００，０
为荧光显微镜汞气发生灯泡寿命的２０倍。ＬＤ显微Ｅ镜较好地解决了高仪器购置及维护费用的问题，可大幅度降低荧光染色查找抗酸杆菌方法的检测费用。在检测效果方面，新近有许多研究结果表明，ＥＬＤ方法在
断性能，ＴＩＧＲＳＥＮＡＴ等则对４５个相关研究进行了系统综述，结果表明：荧光染色法具有较高的敏感度和
与抗酸染色同等的特异性，但检查费用相对较高，操作技术要求也相对较高。也正由于检查费用及荧光显微镜维护费用较高的原因，限制了其普及应用。近年来，发光二极管荧光显微镜（ｉｔｍｔｎｉｅ，Ｅ的１ｈｅｉｉｇｄｏｓＬＤ）ｇｔｄ
色法、通荧光显微镜法和ＬＤ法三者间的比较，普Ｅ其
２１阳性检出率比较对１６．３张涂片检查结果进行０了比较。抗酸染色检查法阳性率为３．２，９３％发光二极管荧光法阳性率为４．０）＝．９Ｐ＜．１。６０％（Ｃ９６，００）
其中，ＥＬＤ法对比抗酸染色法提高了１．％，０３比普通荧光显微镜法提高了５２。这些报道充分体现了．％
ＬＤ法的优良性能。Ｅ另外，在两种方法报告结果的差异上，文的研究本结果和尚美等的研究给出了相同的信息：两种方法报告结果差异主要体现在抗酸染色法阴性而ＬＤ法Ｅ报告１同时也正是这种差别显现出ＬＤ法灵敏度＋，Ｅ