SPE固相萃取常见问题解答
固相萃取仪常遇的故障问题处理方法及维护和修理保养
固相萃取仪常遇的故障问题处理方法及维护和修理保养固相萃取仪常遇的故障问题处理方法固相萃取操作过程中常常会碰到筛板堵塞固相萃取装置、流速缓慢、净化效果不理想、重现性差以及回收率不理想等问题，本文拟针对上述问题进行简单分析，并例举一些试验过程中碰到的案例，供应发觉问题和解决问题的方法，一起来探讨下吧。
1、筛板堵塞常见的固相萃取柱通常由柱管、筛板和填料3部分构成，其中筛板是一种具有多孔结构的材料，起到固定填料和过滤溶液的作用。
当上样液中含有较多颗粒杂质时，这些颗粒杂质会在筛板上不断聚集，在筛板上端形成一层颗粒层，随着压力的加添以适时间的延长,颗粒层会越来越严实，最后导致筛板完全堵死，溶液无法通过固相萃取柱。
碰到这种情况，可以在上样前先高速离心或者过滤，然后取上清液或者滤液过固相萃取柱，削减颗粒杂质的影响。
例如食品中人工合成着色剂的测定，当样品为饮料、配制酒等液体时，过聚酰胺固相萃取柱或者G3垂融漏斗还是很轻松的，而当样品为糕点固相萃取装置、谷物制品以及果冻时，上样前需先高速离心或者过滤，否则就很简单显现筛板堵塞的现象。
2、流速缓慢固相萃取过程中流速不能太快，流速太快不利于目标化合物在填料上的保留以及溶剂与目标化合物或者填料的相互作用，从而影响保留或者洗脱过程。
当然流速也不能太慢，否则会大大延长前处理的时间。
原因:2.1样品粘度高，例如食品中碰到浓缩汁、糖果时，需要对样品充分稀释，降低上样液的浓度；2.2填料较多或者太紧密，此时需要加强负压或者削减填料的使用量；2.3溶剂极性不匹配，例如SN/T1924—2023中淋洗固相萃取柱时，先用水、甲醇，接着用正己烷淋洗，正己烷与前两者的极性不同，从而导致流速很慢，碰到这种情况，可以加添负压或者选用合适的溶剂进行过渡Q 3、净化效果不理想通常固相萃取柱有两种净化模式，一种是接受保留目标化合物的模式，另一种是接受保留杂质的模式，不管接受哪种模式都需要选择合适的填料，使得目标化合物或者杂质能吸附在填料中，同时不需要保留的组分尽可能多的随着溶剂一同流出固相萃取柱。
固相萃取萃取技术及难点分析、SPE色谱技术
刚刚看到的一些SPE 理论知识，在此分享给大家，希望对大家的工作有所帮助。
固相萃取技术属于色谱技术的一种。
化合物要么保留要么流过，吸附剂种类选择众多，选择性与 HPLC 类似，但与HPLC 不能等同。
为什么使用固相萃取（Solid Phase Extraction ）技术⏹ 高回收率、高净化效果 ⏹ 快速简便⏹ 减少昂贵、易碎的特殊玻璃装置的使用 ⏹ 减少有机溶剂的大量消耗 ⏹ 样品浓缩，提高分析灵敏度⏹ 避免污染物对色谱柱的伤害，延长使用寿命固相萃取的基本模式活化→上样→淋洗→洗脱液液萃取 固相萃取两种不同方法萃取鸦片样品的效果比较活化：也就是对填料进行溶剂化，使官能团充分展开，为吸附目标化合物提供最佳状态。
在低真空≤-3 in. Hg下向SPE柱中加入有机溶剂，每100 mg填料加入1.5 mL甲醇或乙腈。
然后加去离子水去除多余溶剂（干扰疏水作用），每100 mg 填料加入1 mL水。
如果填料意外干掉，需重新进行（甲醇或乙腈）溶剂化和（水）冲洗。
当使用离子柱时，在（水）冲洗后，加入1mL的缓冲液，以确保填料的pH 处于填料-分析物作用的最佳条件下。
上样：流速是确保样品在通过填料时充分接触的关键，对于离子交换过程尤为重要，因为离子交换动力学过程比反相或正相机理要慢。
建议上样的流速约为1-2 mL/min。
淋洗：建议使用在允许范围内最强和最大体积的淋洗液，却不会导致分离物质的漂移或洗脱。
淋洗后需对柱子进行抽干，以避免淋洗液干扰洗脱的效果。
最简单的方法是在最大的真空度下抽干柱子5min。
洗脱：在洗脱中，最好是用尽可能少的溶剂将提取物完全地洗脱下来。
洗脱溶剂的强度应该是在能完全地破坏分析物的所有结合作用的前提下最弱的。
固相萃取的不同萃取机理反相萃取Non-Polar Extractions 正相萃取Polar Extractions离子交换Ion Exchange Mechanisms 混合模式萃取Mixed Mode/Copolymeric Extractions国标中有些方法根本不可行，很多时候还是需要我们优化。
体内药物分析问答题
SPE：固相萃取(Solid Phase Extraction，SPE)就是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。
1、简述体内药物分析的对象及特点体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物特点：（1）样品量少，不易重新获得（2）样品复杂，干扰杂质多（3）供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施。
（4）实验室拥有多种仪器设备，可进行多项分析工作。
（5）工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易。
需相关学科参与.2、简述血浆中游离型药物浓度测定的方法？平衡透析法、超滤法(UF)、超速离心法和凝胶过滤法3、常见的生物样品有哪些？简述常用的去除蛋白质的方法？常见的生物样品有：血液，尿液，唾液，组织，毛发。
去除蛋白质的方法：（1）加入与水相混溶的有机溶剂加入水溶性的有机溶剂；可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，使与蛋白质结合的药物释放出来。
常用的水溶性有机溶剂有：乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃等。
（2）加入中性盐加入中性盐，使溶液的离子强度发生变化。
中性盐能将与蛋白质水合的水置换出来，从而使蛋白质脱水而沉淀。
常用的中性盐有：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐等。
（3）加入强酸当pH低于蛋白质的等电点时，蛋白质以阳离子形式存在。
此时加入强酸，可与蛋白质阳离子形成不溶住盐而沉淀。
常用的强酸有：10％三氯醋酸、6％高氯酸、硫酸-钨酸混合液及5％偏磷酸等。
（4）加入含锌盐及铜盐的沉淀剂当pH高于蛋白质的等电点时，金属阳离子与蛋白质分子中带阴电荷的羧基形成不溶性盐而沉淀。
常用的沉淀剂有CuSO4-NaWO4、ZnSO4-NaOH等（5）酶解法在测定一些酸不稳定及蛋白结合牢的药物时，常需用酶解法。
最常用的酶是蛋白水解酶中的枯草菌溶素。
固相萃取方法开发和问题解决—非极性
3. 洗脱不充分
症状：分析物的洗脱量≤90% 上样量
解决方案：
a. 确认选择的洗脱剂可以溶解目标分析物。
解决方案：
a. 检查是否需要加大洗脱体积 b. 使用更强的洗脱溶剂或者加入各种缓冲液，以找
到更好的洗脱溶剂来洗脱所有的目标分析物；再 次，要考虑次级相互作用的影响。 c. 确认目标分析物在整个分析过程中不会发生降 解。 d. 基质中可能含有不同水平的干扰萃取的化合物， 如果由于样品中的盐分导致不同的保留结果，可 先用水稀释样品；另外，样品中高含量的脂肪会 降低吸附剂对分析物的保留容量，如有需要，可 更换大柱床 SPE 柱。 e. 调整样品的 pH 值，以抑制分析物的离子化，中性 物质与荷电物质相比，在非极性吸附剂上的保留 效果更好；生物样品中，分析物可能会与蛋白发 生键合，可以通过调整 pH 值、加入改性剂或者对 蛋白进行沉淀以破坏这种键合作用。 f. 确保柱床已经经过正确活化，要确认上样和洗脱 步骤的样品和溶剂流速不会太高。
Solid Phase Extraction
SPE 方法开发和问题解决
非极性萃取过程
一般非极性萃取过程
常见问题解决-硅胶基质吸附剂
带有非极性官能团（芳香环、脂肪链）的化合物， 均可使用非极性吸附剂（C18 、C8、CH、PH、CN-E） 从极性溶液（水、缓冲液）中进行萃取。 典型的萃取应用包括： z 血浆或尿液中的药物 z 水中的杀虫剂 z 血浆中的缩氨酸 z 尿液或血清中的药物滥用监测
1. 吸附剂的活化
SPE-通过固相萃取进行样品富集和纯化-waters
SPE——通过固相萃取进行样品富集和纯化为何使用固相萃取（SPE）技术1. 您需要从样品中去除特定干扰物，以免它们在目标分析物的检测和定量过程中影响实验结果。
在此处所示的示例中，不适当的样品制备方案未能去除干扰物，导致提取物呈现出残留的黄色干扰物，色谱图中目标分析物与多个干扰峰发生了重叠。
2. 您需要提高初始样品中目标分析物的浓度，以便所用的分析技术能够更轻松地对其进行检测和准确定量。
如果目标分析物可被较强地保留，那么可能需要在SPE色谱柱上加载较大的样品量，随后仅以极小体积的洗脱液将此分析物洗脱下来，由此提高样品中分析物的浓度。
3. 您需要去除样品中的干扰物（即使不可见），这些干扰物会在质谱检测中抑制目标分析物的信号。
在此处的示例中，蛋白沉淀法无法去除血浆提取物中的磷脂，从而造成严重的离子抑制。
优化的复合模式SPE方案可获取最纯净的提取物，并可在最大程度上降低离子抑制效应。
What is Solid-Phase Extraction (SPE)?Don't be confused by the term solid-phase extraction [SPE]. A typical SPE device has 50 times more separation power than a simple, single liquid-liquid extraction. SPE is actually column liquid-solid chromatography. Since SPE is liquid chromatography [LC], its practice isgoverned by LC principles. A sample is introduced into a column or a cartridge device containing a bed of appropriate particles, or other form, of a chromatographic packing material [stationary phase]. Solvent [mobile phase] flows through the bed. By choosing an appropriate combination of mobile and stationary phases, sample components may pass directly through the column bed, or they may be selectively retained.Individual compounds in the sample each typically appear to travel at different speeds through the device. Using a weaker solvent causes them to move slowly and/or be strongly retained. A stronger solvent speeds up their passage through the bed and elutes the analyte(s) in a more concentrated volume. Elution from an SPE device is usually done by increasing the strength of the mobile phase in a series of discrete, rather than continuous, steps during which selected analytes or interferences are either fully retained or rapidly eluted-this variation of gradient elution called a step gradient.Most commonly, SPE is practiced using miniature column or cartridge devices. An example is shown here. A mixture of three dyes is loaded onto the cartridge in a weak solvent, causing strong sample retention in a narrow band that appears black at the column inlet. Subsequent gradient steps, each with a successively stronger solvent, are used to elute the dyes individually [yellow, red, then blue].Typical SPE cartridges are low-pressure devices-constructed of solvent-resistant plastic or glass-filled with particles ≥30 µm in diameter. Suitable flow rates may be achieved by gravity or with the assistance of vacuum or low positive pressure. [The latter requires putting a cap on the open inlet of a column or using a sealed device with inlet and outlet fittings.]Importance of Sample PreparationIn the last two decades, dramatic advances in analytical instrumentation and laboratory information management systems shifted the analyst's predominant tasks from assaymeasurements to sample preparation and data processing. As the stringency of requirements for higher sensitivity, selectivity, accuracy, precision, and number of samples to be processed has escalated, the corresponding increases in speed and sophistication of analysis and data collection have outpaced improvements in the many traditional techniques of samplecollection and preparation. By some estimates, 75 to 80% of the work activity and operating cost in a contemporary analytical lab is spent processing and preparing samples forintroduction or injection into an analytical separation and/or measurement device. Clearly, efforts directed and products designed to streamline sample preparation protocols are essential to future progress in analytical science.Goals of Sample PreparationSuccessful sample preparation for most analytical techniques [HPLC, GC, spectrophotometry, RIA, etc.] has a threefold objective: namely, to provide the sample component of interest▪in solution▪free from interfering matrix elements▪at a concentration appropriate for detection or measurement.To accomplish these goals, a sample, or a representative portion thereof [not always easy to obtain], is prepared via traditional methods of dissolution, homogenization, extraction[liquid- or solid-phase], filtration, concentration, evaporation, separation, chemicalderivatization, standardization [internal or external], etc.Usually such methods are used in combinations of multiple steps, which form a sample prep protocol. The fewer steps and methods used in any given protocol, the simpler, moreconvenient, cost effective, and less time consuming it is. Simpler protocols lend themselves more readily to automation and also lead to increased accuracy, reliability, reproducibility, and safety.Innovation in Sample Preparation MethodsThere are many ways to combine standard tools and techniques to accomplish the goals of sample prep. However, it is best to seek innovative means to streamline sample prepprotocols:▪to combine the functions of several steps, if possible, into one operation;▪to eliminate needless sample transfers and manipulations;▪to reduce the scale as much as practicable [gaining economies of time, labor, and cost];▪to use new tools in creative ways.Benefits of Solid-Phase Extraction [SPE] CartridgesWhen compared to other sample preparation processes, solid-phase extraction using SPE cartridges offers:Lower Cost • lower solvent consumption• lower reagent consumption• less apparatusGreater Recoveries • min imal sample transferFaster Protocol • fewer stepsGreater Safety • less exposure to toxic agentsGreater Accuracy • no cross contaminationNo Emulsion Problems • less sample handling• fewer stepsNo Transporting of Samples to Lab • direct field samplingReduced Harm to Labile Samples • minimal evaporationMinimal Glass Breakage • less glassware used, less to washAchieving Sample Preparation Objectives with Solid-Phase Extraction [SPE]▪To remove sample constituents that elute after the analytes of interest or are strongly adsorbed:▪use solid-phase extraction with sorbent surface chemistry that is the same as that in the analytical HPLC column.▪tailor the gradient steps to elute analytes selectively.▪To remove sample constituents that coelute with an analyte of interest:▪use solid-phase extraction with sorbent surface chemistry and/or separation mode different from that in the analytical column.▪tailor the gradient steps to elute analytes selectively.▪To enrich sample components present in low concentration:▪tailor the gradient steps to elute analytes selectively.▪use "large" sample volumes in adsorption-promoting solvent.▪use "small" collection volume in desorption-promoting solvent.▪use sorbent chemistry tailored to the analyte, independent of that in analytical column.▪carefully choose chemistry of solid-phase extraction column so further sample prep will be unnecessary.▪To desalt samples:▪first, adsorb analytes on reversed-phase sorbent while salt breaks through unretained.▪then, after using water to wash away residual salt, desorb analytes using water-miscible organic solvent.▪To exchange solvents:▪adsorb the sample completely onto a strongly retentive sorbent and flush away the original solvent with a weaker eluent.▪elute the analyte with the desired solvent.▪To fractionate classes of compounds:▪use a step-gradient sequence to divide a sample-on the basis of hydrophobicity, polarity, or charge-into fractions containing groups of analytes that share common properties.▪To derivatize analytes using solid-phase reagents:▪adsorb a derivatization reagent on the surface of the sorbent; then, collect the sample (usually a gas) under conditions that favor complete adsorption of the analyte; wait for the reaction to occur and then selectively elute the derivative.SPE is ChromatographyKeep in mind that solid-phase extraction has the same fundamental basis as HPLC. Any knowledge of the chromatographic behavior of the analytes of interest, and of other matrix components, can help in choosing the proper sorbent and eluents. If, for example, you know that certain chromatographic conditions provide excellent separation of your analyte from interferences, then you may choose a similar SPE sorbent and solvent combination. Similarly, if you are trying to remove an interference that coelutes in HPLC, then you know a priori that similar SPE conditions will not be successful.General Elution ProtocolsThere are two general strategies for isolating and cleaning up sample components of interest:▪adsorb matrix interferences while components of interest pass through the cartridge unretained.▪adsorb components of interest while matrix interferences pass through the cartridge unretained.The first strategy is usually chosen when the desired sample component is present in high concentration. When components of interest are present at low levels, or multiplecomponents of widely differing polarities need to be isolated, then the second strategy is generally employed. Trace enrichment of compounds present at extremely low levels and concentration of dilute samples are also achieved by the second strategy.Steps of a Solid-Phase Extraction ProcedureThe following section describes the steps involved in a complete solid-phase extraction procedure. In many applications, one or more of the steps, listed below and subsequently described by general examples, can be omitted, thereby simplifying the procedure. The procedures illustrated here use samples containing dyes so that separations may be easily visualized. Keep in mind that most samples contain colorless components that require some type of detector or test to locate them in the collected fractions. Use the following information as a guideline in the development of your own procedure or when modifying procedures published in the literature.1.Pretreatment of the sample2.Conditioning of the cartridge3.Loading the sample4.Elution of the fractionsPrincipal Separation Modes in Solid-Phase Extraction [SPE]Normal-Phase ChromatographyThis mode is classically used to separate neutral organic compounds whose chemical nature ranges from hydrophobic to moderately polar.To perform normal-phase chromatography with SPE cartridges, use a step gradient of nonpolar solvents with a polar packing material.1.Condition the cartridge with six to ten hold-up volumes of non-polar solvent, usually thesame solvent in which the sample is dissolved.2.Load the sample solution onto the cartridge bed.3.Elute unwanted components with a non-polar solvent.4.Elute the first component of interest with a more polar solvent.5.Elute remaining components of interest with progressively more polar [stronger]solvents.6.When you recover all of your components, discard the used cartridge in a safe andappropriate manner.This procedure is illustrated in the figure below for a sample containing a mixture of three neutral, relatively non-polar organic dyes [yellow, red, and blue] that appears black when initially loaded onto the cartridge bed.Illustration of a General Elution Protocol for Normal-Phase Chromatography on SPECartridges(Silica, Florisil, Alumina, Diol, CN, NH2)Reversed-Phase ChromatographyBecause of the multiplicity of aqueous samples spanning a breadth of applications from environmental water to fruits and vegetables, from beverages to biological fluids, reversed-phase chromatography has become the predominant mode of SPE.To perform reversed-phase chromatography with SPE cartridges, use a gradient of strongly to weakly polar solvents [from weak to strong solvent elution strength] with a non-polar packing material.1.Solvate the silica-bonded phase or polymer packing with six to ten hold-up volumes ofmethanol or acetonitrile. Flush the cartridge with six to ten hold-up volumes of water or buffer. Do not allow the cartridge to dry out [unless using HLB].2.Load the sample dissolved in a strongly polar [weak] solvent [typically water].3.Elute unwanted components with a strongly polar solvent.4.Elute weakly retained components of interest with a less polar solvent.5.Elute more tightly bound components with progressively more non-polar [stronger]solvents.6.When you recover all the components of interest, discard the used cartridge in a safe andappropriate manner.This procedure is illustrated in the figure below for a sample of an aqueous grape drink containing two polar food dyes [red and blue], as well as sugar and artificial flavor [but no real grape juice!]. As prepared, this drink appears light purple in a glass, since the dye concentration is dilute. When a portion is loaded onto a prepared SPE cartridge, the strongly retained dyes become concentrated near the inlet in a dark purple band.Illustration of a General Elution Protocol for Reversed-Phase Chromatography on SPECartridges(C18, tC18, C8, CN, Diol, HLB, Porapak RDX, NH2)Ion-Exchange ChromatographyCompounds that are ionic or ionizable are often best isolated using some form ofion-exchange chromatography. This separation mode is orthogonal to the more widely used normal-phase and reversed-phase modes and provides a powerful, selective second dimension to sample preparation protocols.Illustration of the Two Major Types of Phases—Anion and Cation Exchange—and How They Selectively Attract and Retain Molecules of Opposite ChargeTo perform ion-exchange chromatography with SPE cartridges, use a gradient of pH or ionic strength with an ion exchange packing material.1.Condition the cartridge with six to ten hold-up volumes of deionized water or weak buffer.2.Load the sample dissolved in a solution of deionized water or buffer.3.Elute unwanted, weakly bound components with a weak buffer.4.Elute the first component of interest with a stronger buffer (change the pH or ionicstrength).5.Elute other components with progressively stronger buffers.6.When you recover all of your components, discard the used cartridge in an appropriatemanner.This procedure is illustrated in the figure below for a sample of an aqueous mixture of two ionic dyes with different pK a values. When loaded onto the cartridge, both are strongly retained, and the combination of blue and yellow components appears as a green band near the inlet.Illustration of General Elution Protocol for Ion-Exchange Chromatography on SPE Cartridges (NH2, Accell™ Plus QMA, Accell Plus CM, SCX, SAX, WCX, WAX)Cation and anion exchangers are further categorized as either weak or strong exchangers, depending upon the type of ionic group on their surface. Strong cation exchangers possess an acidic surface moiety such as a sulfonic acid that is always ionized [negatively charged] over the whole pH range. Weak cation exchangers possess an acidic surface moiety such as a carboxylic acid that is negatively charged at high pH but neutral at low pH. Similarly, strong anion exchangers typically bear quaternary ammonium groups that are always positively charged, while weak anion exchangers possess primary, secondary, or tertiary amine groups that may be positively charged at low pH but neutral at high pH.Use the following table as a guideline to choose the appropriate SPE ion-exchange cartridgetype for your particular analyte.Mixed-mode ion exchange chromatography combines the use of reversed-phase andion-exchange modes into a single protocol on a single SPE cartridge. It can be used to isolate and separate neutral, acidic, and basic compounds from a single complex matrix. An ideal mixed-mode SPE sorbent substrate remains water-wettable while exhibiting strong reversed-phase retention of hydrophobic compounds. On its surface are ion-exchange functionalities of one of the four general types just described above. Intermediate washes with organic solvent mixtures of appropriate elution strength may be used to isolate neutral compounds [including ionizable analytes in their neutral state]. Selective elution of ionically bound analytes may be attained by manipulating the charge of either the analyte [when bound to strong ion exchangers] or of the sorbent [for analytes bound to weak ion exchangers].下表汇总了各种SPE模式，为方法开发工作的开展提供了一个良好的起点：固相萃取选择色谱模式及吸附剂分析物中-低极性低-高极性/中性带电荷、可电离分离机制基于疏水性的分离基于极性的分离基于电荷的分离样品基质水溶液非极性有机溶剂水溶液/低离子强度SPE吸附剂的活化/平衡1. 用极性有机溶剂得到的溶剂化物2. 水非极性有机溶剂低离子强度缓冲液初步冲洗步骤水溶液/缓冲液非极性有机溶剂低离子强度缓冲液洗脱步骤增加极性有机溶剂的含量增加混合有机溶剂的洗脱强度更强的缓冲液——通过调节离子强度或pH值而中和电荷AX[阴离子交换]CX[阳离子交换]吸附剂官能团C18, tC18, C8, tC2,CN, NH2, HLB, RDX,Rxn RPSilica, Alumina,Florisil, Diol, CN,NH2Accell Plus QMA,NH2, SAX, MAX,WAXAccell Plus CM,SCX, MCX, WCX,Rxn CX吸附剂表面极性低至中等高至中等高高典型溶剂的极性范围高至中等低至中等高高典型的上样溶剂水、低强度缓冲液正己烷、氯仿、二氯甲烷水、低强度缓冲液水、低强度缓冲液典型的洗脱溶剂MeOH/水、CH3CN/水乙酸乙酯、丙酮、CH3CN缓冲液、高离子强度的盐类，提高pH缓冲液、高离子强度的盐类，降低pH样品洗脱顺序最大极性样品组分最先洗脱出来最弱极性样品组分最先洗脱出来最弱电离样品组分最先洗脱出来最弱电离样品组分最先洗脱出来为洗脱化合物而做的流动相溶剂改变减弱溶剂极性增强溶剂极性增加离子强度或提高pH值增加离子强度或降低pH值This has been a brief introduction to sample enrichment and purification using solid-phase extraction [SPE]. The best way to start using SPE is to first learn what others have done with analytes and/or matrices similar to those of interest to you. You will find > 7,700 references to the use of SPE in the Resource Library on . Fill in the blank with a partial compound or matrix name in the following search phrase:“Sep-Pak” OR “Oasis” AND ______*NOTE: Rather than risk a spelling error, use an asterisk [*] with a root name for best results. Using this same search string, even more references [> 60,000] may be found on GOOGLE Scholar.Further reading:J.C. Arsenault and P.D. McDonald, Beginners Guide to Liquid Chromatography, Waters [2007]; Order P/N 715001531on P.D. McDonald and E.S.P. Bouvier, A Sample Preparation Primer and Guide to Solid-Phase Extraction Methods Development, Waters [2001] Search for WA20300 on Waters, Purity by SPE [2008]; Search for 720001692en on U.D. Neue, P.D. McDonald, Topics in Solid-Phase Extraction. Part 1. Ion Suppression inLC/MS Analysis: A Review. Strategies for its elimination by well-designed, multidimensional solid-phase extraction [SPE] protocols and methods for its quantitative assessment [2005]; Search for 720001273en on 。
关于固相萃取仪的特点是怎样的 固相萃取仪常见问题解决方法
关于固相萃取仪的特点是怎样的固相萃取仪常见问题解决方法固相萃取仪由气压室、收集瓶和萃取柱连接部分构成。
紧要用于液体样品的前处理，萃取其中的半挥发或者不挥发性化合物，或去除样品中对分别分析造成干扰的杂质，还固相萃取仪由气压室、收集瓶和萃取柱连接部分构成。
紧要用于液体样品的前处理，萃取其中的半挥发或者不挥发性化合物，或去除样品中对分别分析造成干扰的杂质，还可以用于处理能预先溶解到溶剂的固体样品。
与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物与干扰组分进行分别，缩短了样品的预处理过程，操作简单，省时省力，广泛应用于医药、食品、环保、商检、化工等领域。
固相萃取仪的特色：高回收率和高富集倍数；搞作简单、快速、易于实现自动化；防交叉污染、防雾化真空槽设计；密封性好、一致性高；无相分别操作，易于收集分析物组合能处理小体积试样；可配大容量采样器、快速浓缩干燥装置、可批量处理样品；除气室、收集瓶使用特硬加厚玻璃外，其它部件均接受四氟及316不锈钢材料，有较强的抗腐蚀性。
固相萃取仪具有高效、简便的特点。
它可通过该装置中的气流调整阀来掌控小柱流速的大小，并可直接吹干小柱，保证每小柱在活化洗脱过程中具有良好的重现性。
—专业分析仪器服务平台,试验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣扬媒体。
相关热词：等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
固相萃取仪的相关适用介绍固相萃取仪用于食品和环境样品的痕量分析中的样品制备。
通过自动化繁琐的清理程序，有助于提高样品通量并提高分析结果的质量。
该仪器每批较多可处理6个样品，5种溶剂可用于色谱柱调整和多步洗脱。
为每个样品收集两个级分。
这些特性使固相萃取分析成为多残留分析中样品制备的理想工具。
固相萃取柱常见问题及对策SPE问题
使用正确的清洗溶剂；选择洗脱能力更弱的溶剂
载样时流速过快
重力自然载样或控制载样流速≤1ml/min
SPE小柱太小
用更大规格的SPE小柱；用选择性更强的SPE小柱；用载样量更大的SPE小柱
洗脱前SPE小柱清洗溶剂抽干不充分
充分抽干冲洗溶剂
洗脱不充分
增加洗脱剂的体积；增加洗脱剂的强度；用更小规格的SPE小柱
固定相残留的干扰物
活化前先用洗脱剂清洗SPE小柱
操作过程流速过低
样品中含有过多的颗粒物质
载样前过滤或离心样品溶液或改用溶解能力更强的样品溶剂
样品溶液粘度过大
使用洗脱力弱的溶剂稀释样品或改用溶解力更强的样品溶剂
真空度不够
检查萃取装置的密封性,检查泵是否正常工作,增加真空度
样品量过大
样品量大于萃取小柱的载样量
洗脱时流速过快或过慢
控制流速1-2ml/min
目标成分不能从SPE小柱上洗脱
固定相对目标组分选择性太强
选择对被分析物保留较弱的小柱；选择洗脱能力更强的洗脱溶剂。对酸碱目标成分,调节洗脱剂的PH值,减弱固定相对目标组分的选择性
SPE小柱规格太大
增加洗脱剂的用量；用更小规格的SPE小柱
洗脱剂用量不足
增加洗脱剂
问题
可能的原因
解决方法
回收率低
柱活化条件不恰当
根据固定相的不同正确活化SPE小柱反相填料：甲醇、乙腈等,1倍柱管体积或3倍柱床体积正相填料：非极性有机溶剂如正己烷等,1倍柱管体积或3倍柱床体积离子交换填料：1倍柱管体积的甲醇、乙腈或异丙醇等与水互溶的极性溶剂。
样品溶剂对目标成分的作用力比固定相强
选择对目标组分具有更强选择性的SPE小柱；调整样品溶剂的PH值,增加目标组分在固定相中的作用力；改变样品溶剂的极性,降低目标组分在溶剂中的作用力。
全自动固相萃取仪遇到问题该如何处理
全自动固相萃取仪遇到问题该如何处理
全自动固相萃取仪一般会遇到的问题：
1、进水阀不能正常打开。
处理方法：
(1)增大左边萃取器上集合气压，由35～50psi增大至50～60psi。
N2气源压力增大可以迫使进水阀打开；
(2)加入几滴仪器自带的润滑油，润湿几分钟，按控制面板上的purge键，将进水阀打开；
(3) 如果进水阀还不能打开，那么需要打开后面板，将后面控制进水阀金属阀用扳手向上扳动一次，同时按控制面板上的purge键，手动打开进水阀。
2、全自动固相萃取仪样品收集瓶中收集的萃取液体积减少或者没有。
可能原因：确认样品收集阀工作状态是否良好。
收集阀即电磁阀，当进行预活化或者淋洗时，电磁阀能正常打开，萃取液能进入收集瓶内。
当长期不用时，电磁阀的陶瓷球会黏住，防止溶剂进入收集瓶。
电磁阀由弹簧、陶瓷球、基座、垫圈组成。
处理方法：
(1)开始萃取前，用电磁阀检查工具疏通，释放电磁阀，因为污染物进入电磁阀时会沉积在球和座之间。
(2)按照以下方法进行清洗：放入带钢丝网的萃取盘，不要放萃取膜，萃取盘内放满热水，使用Abori和Purge键来激活电磁阀，先按Abort键不松开同时按下Purge键，再同时松开两个键后运行指示灯会亮并激活电磁阀，若无效可再做一次，这时热水会快速进入收集瓶中。
奥泰SPE固相萃取常见问题解答汇总
奥泰SPE固相萃取常见问题解答1、选定一种货号应该有多大的上样量？答:这是经常使人混淆的一点--任何特殊的固相萃取柱在进行处理时，上样量的大小并不取决于样品的体积，而是取决于被固相萃取填料保留的样品中混合物总量。
详情参见“交换能力”中各填料的说明。
例如，所有的硅胶型填料都具有1%的吸附能力，一个500mg的C18填充床可以保留5mg的化合物。
要注意的是C18吸附的并不只是所期望的分析物而是样品中所有的物质。
2、对于固相萃取柱应该使用什么冲洗或洗脱溶剂？答:由于每个人的应用不同，所以很难指定一种明确的溶剂。
通常来说：反相填料，以极性溶剂冲洗，用非极性溶剂洗脱正相填料，以非极性溶剂冲洗，用极性溶剂洗脱离子交换，以低离子强度缓冲液冲洗，用高离子强度缓冲液洗脱3、与Waters Oasis或Varian Nexus的产品有那些可比性？答:是的。
我们的PrevailC18能够应用在100%的环境中，同Oasis和Nexus一样。
Oasis和Nexus的产品都是聚合物基质的，而我们是硅胶基质的,所以在容量上稍差些。
不过由于我们的产品生产使用的是工业标准的C18，因此使用时您不需要重新校正方法。
4、有没有一种和固相萃取柱配套使用上面带孔的柱套吗？答:您问的是注射器式的适配器，连接Extract-Clean和Ultra-Clean柱的顶端，可以把1/8英寸的OD管或者任何luer-tip装置(例如注射器或其它固相萃取柱)插入到中心的孔内。
5、现需要货号为2990，但发现它已经停产了，应该怎么办？答:由于3M的过滤薄膜已经停产，所以我们不再提供任何和它类似的产品。
我们提供具有同样用途的固相萃取柱--SuperClean固相萃取柱，货号为299016、什么是固相萃取装置的使用寿命？答:如果装置密封保存，远离热源，光源和化学蒸气，那么它们的使用寿命将可能比较长。
可是这并不是万无一失的，所以如果你保存时间已超过3-4年了，那么请检查并准备随时可能丢弃它。
固相萃取仪常见故障分析 固相萃取仪维护和修理保养
固相萃取仪常见故障分析固相萃取仪维护和修理保养固相萃取仪的气路系统，是一个要求载气只能按指定管线和方向流动的连续系统，在操作过程中要求严格密封。
对整个固相萃取仪的维护，紧要包含以下方面：①进样口维护标样测试进样系统，俗称气化室或样品口，是将样品气化送入萃取系统之前，且分析中保证系统不漏气而设置的一种特别装置。
进样口是仪器的紧要构成部分，也是引入污染、引起干扰的道关。
进样口污染与否，直接表现是萃取特征，准备一份标样进行测试，可以在不确定进样口是否污染时用标样进行验证。
②定期更换进样隔垫进样口隔垫漏气是气相萃取常见故障。
进样次数过多后，进样垫针口磨损扩大老化等，就简单漏气。
漏气一方面损失载气，造成资源的挥霍；另一方面，隔垫的老化降解也会给分析带来干扰，如鬼峰。
因此需要定期适时更换。
一般隔垫可达到使用100次以上的寿命，不同厂家不同材质寿命不一，如BTO低流失隔垫可达400次以上，而红色硅胶隔垫为100次左右。
③适时清洗进样针干净的进样针能避开样品记忆效应的干扰。
更换固相萃取仪样品时要清洗，用同一样品多次进样时也要用溶剂及样品清洗进样针，一般使用甲醇、二氯甲烷、乙腈、丙酮和正己烷等溶剂清洗，清洗时不能堵塞针头，抽出推杆，用另一个进样针把清洗溶剂注入，再插入推杆轻轻地把溶剂从针中推出。
要彻底清洗进样针，一般可用下列溶液依次清洗，5%氢氧化钠水溶液，蒸馏水，丙酮，后抽干，固相萃取仪不宜用强碱性溶液洗涤。
如发觉进样针内有不锈钢氧化物影响正常使用时，可在不锈钢芯子上蘸少量肥皂水塞入进样针内，来回抽拉几次就可去掉，然后再清洗即可，以免残留的样品粘牢针芯，造成进样针报废。
进样针是易碎器械，使用时应多加当心，不用时要洗净存放，不要随便来回空抽，特别是在将干未干的情况下来回拉动，否则会严重磨损，损坏其气密性，降低精准度。
④定期检查并清洗固相萃取仪进样口及衬管进样口衬管长期使用后，由于样品中不挥发性成分残存的原因，会发觉衬管内积有焦油状物质，此外还会有颗粒状物质积存，如隔垫碎屑、样品中的固体物质，这些都会干扰分析的正常进行。
固相萃取常见问题
您在使用SPE的过程中，是否会遇到多种问题，那么今天小编就根据实际案例来给您说道小柱在使用过程中的本底问题的解决方案和苯硼酸小柱的使用原理及疑惑解答，以及应用国标GB5009.191—2016检测氯丙醇脂肪酸酯时需要注意的事项，希望能帮助您的实验顺利进行，一起来看看吧！01标准解决篇问：在应用GB5009.191—2016标准中的氯丙醇脂肪酸酯含量检测时，各步骤的原理是什么，需要注意哪些操作？答：首先我们来看一下，检测的基本原理。
第一步：提取步骤解析：1.试样的提取，做加标回收率测试时，添加的应该是氯丙醇脂肪酸酯混合标准工作液，并加入氘代氯丙醇脂肪酸酯混合标准工作液。
2.使用4mL正己烷提取，超声20min，提取两次，合并正己烷相，N2吹到1mL3. 对于乳粉和咖啡粉等固体粉末，需要加入2ml水，对于香肠等动物等动物性样品，使用乙腈饱和的正己烷提取。
4.为什么还要加D5-1，3DCP和D5-2，3-DCP；因为氘代氯丙醇脂肪酸酯中只有D5-3-MCPD 棕榈酸单酯和D5-2-MCPD硬脂酸双酯，通过酯键断裂，变成了D5-3-MCP和D5-2-MCP，检测需要四种氘代氯丙醇内标，因而加了D5-1，3DCP和D5-2，3-DCP。
第二步：脂肪键断裂反应解析：1.碱脂解反应:氯丙醇脂肪酸酯在甲醇钠-甲醇溶液中酯解成脂肪酸和氯丙醇。
2.甲醇钠的浓度为0.5mol/L，研究表明，氯丙醇的响应随着甲醇钠的用量增大，先增加后降低，最佳用量为1mL，但是使用内标法，峰面积比值降低（As/Ai）一致，因此该方法需要使用内标法，另外内标法虽然响应降低一致，但是增大用量和浓度，可能导致其检测灵敏度降低。
3.室温反应4min，初始水解时间短，则可能水解不完全，随着时间长，水解完全，但是可能导致氯丙醇降解，导致检测灵敏度降低。
4.加入冰乙酸，中和碱，使得脂解反应终止。
5.加入氯化钠萃取时，为什么检测的是氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油酯的总含量，因为缩水甘油酯与氯离子共存，受热情况下可以转化为氯丙醇脂。
固相萃取需要注意的问题
1、固相萃取的五个步骤固相萃取过程要求样品以溶液形式存在，没有干扰，而且有足够的浓度以被检测。
固相萃取的发展过程分为五步：第一步选择萃取管或片注意：建议固相萃取片用于大体积样品、含有大量颗粒或处理时需要很高流速的样品。
选择固相萃取管或片：吸附剂类型选择固相萃取管或片：大小选择固相萃取管或片：大管填料量第二步预处理萃取管或片在萃取样品之前，为了预处理固相萃取管填料，要用一满管溶剂冲洗管子。
对萃取片则用5-10毫升。
反相类型硅胶和非极性吸附剂介质，通常用水溶性有机溶剂，如甲醇，预处理，然后用水或缓冲溶液。
甲醇湿润吸附剂表面和渗透键合烷基相，以允许水更有效地润湿硅胶表面。
有时预处理溶剂在此之前使用甲醇。
这些溶剂通常与洗脱剂一样是用于消除固相萃取管上的杂质及其对分析物的干扰，也可能该杂质只溶于强洗脱溶剂。
正相类型固相萃取硅胶和极性吸附剂介质通常用样品所在的有机溶剂来预处理。
离子交换填料将用于非极性有机溶剂中的样品，并用样品溶剂来预处理。
对极性溶剂中的样品，用水溶性有机溶剂，再用具有适当pH值、适当含量和盐的浓度的有机溶剂的。
为了使固相萃取填料从预处理到样品加入时都保持润湿，允许大约1ml的预处理溶剂在管过滤片或萃取片表面上。
如果样品是从一个贮液管或过滤管引入固相萃取管，则多加入0.5ml最后的预处理液到1ml的固相萃取管中、2ml到3ml管中、多加入4ml到6ml管中等等。
这是为了保证在样品加入之前，填料管干了，重复预处理过程。
在重新引入有机溶液之前，用水冲洗管中缓冲溶液的盐。
如果适当，此时样品贮液管可以用一个接口装在管上。
第三步加入样品用移液管或微量吸液管准确地将样品转移到管或贮液管内，样品必需以适应固相萃取的形式存在。
样品的总体积可以从１微升到数升（见步骤一），当过量体积的水溶液被萃取时，反相硅胶填料渐渐减少预处理时所获得的溶剂化层。
这就会降低萃取效率和样品的回收率。
对样品>250ml，加入少量的水溶性溶剂（大约为100% ）以适当地保持反相填料的湿润性。
【固相萃取柱】固相萃取柱四个常见问题
【固相萃取柱】固相萃取柱四个常见问题1.如何选择固相萃取柱？固相萃取柱是从层析柱进展而来的一种用于萃取、分别、浓缩的样品前处理装置，常见的固相萃取柱大都以聚乙烯为材料的注射针筒型装置，该装置内装有两片以聚丙烯或玻璃纤维为材料的塞片，两个塞片中心装填有确定量的色谱吸附剂（填料）。
选择固相萃取柱的关键除了要求的规格之外，决议分别性能的是它的填料。
在选择萃取柱时，必需依据待检测样品的种类及其物化性质选择合适的填料。
固相萃取填料通常是色谱吸附剂，大致可以分为三大类，分别是以硅胶、高聚物、无机材料为基质。
类是以硅胶为基质，如：Waters Sep—Pak C18固相萃取小柱，硅胶极性很强，呈弱酸性,可被用于正相或反相两种分别模式：正相提取时，极性比硅胶弱，反相提取时非极性比C18 或 C8 的弱。
对于类固醇有着较好的萃取效果通常用于非极性或弱极性化合物的萃取或极性杂质的去除。
紧要用于血样、尿样中药物及其代谢物、多肽脱盐、环境样品中的痕量有机化合物富集、饮料中的有机酸。
第二类是以高聚物为基质，如：聚苯乙烯—二乙烯苯等。
高纯度、高交联度的苯乙烯—二乙烯基苯聚合物为固定相填装的萃取小柱具有高载样量，可耐受极端 pH 条件和不同的溶剂，对极性化合物具有优异的保留本领。
可用作酸性、中性和碱性化合物的通用型吸附剂，通常用于反相条件下保留含有亲水基团的疏水性化合物如：酚类、硝基芳香类、硝胺类、硝酸酯类等。
第三类是以无机材料为主的，如：弗罗里硅藻土、氧化铝、石墨化碳等。
弗罗里硅土是一种氧化镁复合的极性硅胶吸附剂，以此为基质的萃取小柱适合于从非极性基质中吸附极性化合物，如多氯联苯、多环芳烃、有机氯农残等；石墨化碳黑（CARB）萃取小柱, 以石墨化碳黑为填料，萃取过程特别快速。
且对化合物的吸附容量比硅胶大一倍有余，由于石墨化碳黑表面的正六元环结构，使其对平面分子有极强的亲和力，特别适用于很多有机物的萃取和净化，尤其适于分别或去除各类基质如水果、蔬菜中的色素、甾醇、苯酚等物质；以氧化铝为基质的填料有酸、碱、中性三种类型，适用于酸性、碱性、中性溶剂的分别萃取。
SPE小柱流速常见问题
固相萃取（Solid Phase Extraction，简称SPE）技术，发展于上世纪70 年代，由于其具有高效、可靠、消耗试剂少等优点，在许多领域取代了传统的液－液萃取而成为样品前处理的有效手段，在实验室中得到了越来越广泛的应用。
它利用分析物在不同填料中被吸附的能力差将目标物提纯，有效地将目标物与干扰物分离，大大增强对分析物，特别是痕量分析物的检出能力，提高了被测样品的回收率。
万千世界的奇妙，造就了样品基质的千差万别，蔬菜，水果，肉蛋奶，水，土壤，橡胶，纺织品等等，不管是食品还是环境的样品，复杂程度也是各不相同。
复杂程度一般的样品可以用简单提取作为前处理方法，但是对于特别复杂的样品就需要经过特殊的前处理，比如用SPE 小柱，做进一步的净化，把目标物和杂质分离，进而在色谱仪器上得到一个漂亮色谱图，大家看现行的一些标准就会发现，有些样品基质的前处理肯定是会用到SPE 手段的。
在用到SPE 前处理的时候，各位分析检测工程师碰到最烦人最令人抓狂的问题是不是流速慢、流速不均、堵、下不去的情况；过小柱过到令人崩溃，既然流速都保证不了，怎么敢奢求回收率。
没关系，小编今天就教您几招，治疗小柱“便秘”的难题。
SPE 的基本操作，包括活化、平衡、上样、淋洗、洗脱，五个步骤。
问题无外乎出现在这几个步骤里面，别急，我们一个个过来看。
一、活化平衡：一般反相或者离子交换类型的小柱分别用到甲醇和水进行活化和平衡，正相小柱会用到石油醚或者正己烷来活化平衡。
1) 填料装填过紧导致流速过慢。
可以通过加压加快流速，或者购买对流速有严格质控厂家的产品解决。
2) 填料粒径过小导致流速变慢。
比如同样的活化溶剂下，100-200 目的florisil 就会比60-100 目的更慢些。
可以根据样品基质类型和使用习惯选择合适规格的小柱。
3) 柱管体积差异。
500mg 3mL；500mg 6mL，这两种规格形成的填料高度不一样，显然500mg 6mL，直径大，填料高度低，流速相对就快，就像地铁站早高峰，闸口多，通过速率快，闸口少，自然就拥堵，通过速率慢。
9固相萃取法(SPE)作为样品前处理使用介绍
SPE萃取小柱配件
•串联/针筒连接器、盖、出口堵头、筛板 •不锈钢针、聚丙烯针、Teflon针
Extract-Clean使用方法1
Extract-Clean使用方法2
真空多头富集器的使用
•12、16及24头3种 •可配套气体吹扫干燥附件
通用SPE萃取程序
反相填料
A。老化 1。用3-5ml甲醇冲洗填料 2。用3-5ml水或缓冲液冲洗，上样前勿让填料流干。 B。上样 3。样品加到柱床上，以1-5ml/min.低流速通过填料。若 所需样品不会被保留，此时应收集样品作分析。 C。冲洗 4。如果样品被保留，使用约5ml极性溶剂(如水、缓冲液或 有机溶剂/水混合液)将弱保留干扰物洗出。 D。用1-2ml非极性溶剂将所需物质洗脱，收集用于分析。
Extract-Clean RC萃取小柱
•用于Zymark型自动化萃取工作站 •配20ml溶剂槽 •柱床有100mg,200mg, 500mg及1g四种 •填料与Extact-Clean相 同
Maxi-Clean萃取小柱
•精密注塑聚丙烯管体 •Luer式阴进口及阳出口 方便接上注射器和针头 •填料于Extract-Clean 相同 •柱床有300mg,600mg 900mg •可代替Waters SepPak小柱
C arb o g rap h
石墨化碳黑
38-125u m
Extract-Clean萃取小柱
•聚丙烯管体 •20um多孔聚乙烯筛板 •多种柱床填料 -50mg,100mg,200mg, 500mg,1g,2g,5g,10g •多种容量 -1ml,2.8ml,3ml,6ml, 10ml,20ml,60ml
为什么用SPE？
•从基质中消除干扰物 •保护色谱柱 •减少样品与溶剂使用量 •缩短处理时间 •提高回收率
SPE 方法开发和问题解决
5. 以上几种洗脱技术相结合。
附剂不可避免地会发生降解。
SPE Technology
-2-
1. 用比分析物的 pKa 值高 2 个 pH 单位的缓冲液，
去中和分析物上的电荷。
注意：常见的硅胶基体的吸附剂填料的 HPLC 色谱柱，
2. 用高离子强度（＞0.1M）的缓冲液进行洗脱。 所能耐受的 pH 值的范围为 2-8 ，与此相比，Bond
3. 用带有少量酸或者碱的溶剂洗脱分析物，例如： Elut SPE 柱可适用的 pH 值范围要宽的多。在 pH＜2
3. 淋洗/去除干扰物
从弱的阳离子交换吸附剂上洗脱
用合适 pH 的缓冲液淋洗柱管，去除基质干扰物，同 时要维持目标分析物的保留
对下面的洗脱技术和方法进行评估，从而找到一个 可以得到最高回收率的萃取方法。
4. 洗脱
将传输针头插入 Vac Elut 真空装置，并放入贴上标 签的收集管，关闭真空，在柱管中加入洗脱溶剂。 打开真空，收集目标分析物。 洗脱溶剂的流速不超过 4ml/min。常用的洗脱溶剂 有： z 改变洗脱缓冲液的 pH 值 z 高离子强度的洗脱缓冲液 z 在洗脱缓冲液中使用更高选择性的离子对 z 在洗脱溶剂中加入 50%的有机改性剂，常用的
物的回收率。
子强度应小于 0.1M，才会得到最佳保留。
6. 分析物在强离子交换吸附剂上无法洗脱时，可
从强阳离子交换吸附剂上洗脱
对下面的洗脱技术和方法进行评估，从而找到一个 可以得到最高回收率的萃取方法。
以使用弱离子交换吸附剂。注意：离子交换作 用是比极性和非极性相互作用慢的作用过程， 因此，为了保证可靠的萃取结果，流速的控制 至关重要。
4.8
分析物
带有可载正电荷的官能团的化合物，包括：
SPE——精选推荐
一、固相萃取基本原理与操作1、固相萃取吸附剂与目标化合物之间的作用机理固相萃取主要通过目标物与吸附剂之间的以下作用力来保留/吸附的1）疏水作用力：如C18、C8、Silica、苯基柱等2）离子交换作用：SAX, SCX，COOH、NH2等3）物理吸附：Florsil、Alumina等2、p H值对固相萃取的影响pH值可以改变目标物/吸附剂的离子化或质子化程度。
对于强阳/阴离子交换柱来讲，因为吸附剂本身是完全离子化的状态，目标物必须完全离子化才可以保证其被吸附剂完全吸附保留。
而目标物的离子化程度则与pH值有关。
如对于弱碱性化合物来讲，其pH值必须小于其pKa 值两个单位才可以保证目标物完全离子化，而对于弱酸性化合物，其p H值必须大于其pKa值两个单位才能保证其完全离子化。
对于弱阴/阳离子交换柱来讲，必须要保证吸附剂完全离子化才保证目标物的完全吸附，而溶液的pH值必须满足一定的条件才能保证其完全离子化。
3、固相萃取操作步骤及注意事项针对填料保留机理的不同（填料保留目标化合物或保留杂质），操作稍有不同。
1）填料保留目标化合物固相萃取操作一般有四步（见图1）：Ø 活化---- 除去小柱内的杂质并创造一定的溶剂环境。
（注意整个过程不要使小柱干涸）Ø 上样---- 将样品用一定的溶剂溶解，转移入柱并使组分保留在柱上。
（注意流速不要过快，以1ml/min为宜，最大不超过5ml/min）Ø 淋洗---- 最大程度除去干扰物。
（建议此过程结束后把小柱完全抽干）Ø 洗脱---- 用小体积的溶剂将被测物质洗脱下来并收集。
（注意流速不要过快，以1ml/min为宜）此主题相关图片如下11.jpg：2）填料保留杂质固相萃取操作一般有三步（见图2）：Ø 活化--除去柱子内的杂质并创造一定的溶剂环境。
（注意整个过程不要使小柱干涸）Ø 上样--将样品转移入柱，此时大部分目标化合物会随样品基液流出，杂质被保留在柱上，故此步骤要开始收集（注意流速不要过快）Ø 洗脱---用小体积的溶剂将组分淋洗下来并收集，合并收集液。
固相萃取使用过程中的一些常见问题及解决办法
演讲人
2021-01-08
01
以下是固相萃取操作中常见的问题：
以下是固相萃取操作中常见 的问题：
02
回收率低；
回收率低；
03
萃取重现性差；
萃取重现性差；
04
净化效果不理想；
净化效果不理想；
05
SPE柱流速过低。
SPE柱流速过低。
06
回收率低
09
SPE柱流速过低
SPE柱流速过低
使用固相萃取小柱过程中，若出现SPE柱流速过低的情 况，可能的原因及改进办法如下：
感谢聆听
如果目标化合物在洗脱液中正常出现，那么回收率不足的问题应该来自样 品前处理的其他环节。
07
萃取重现性差
萃取重现性差
在使用固相萃取小柱进行样品前 处理时，若出现萃取效果重现性 差，可能的原因及改进办法如下：
08
净化效果不理想
净化效果不理想
净化模式的改进 通常而言采用保留目标化合物的模式比保留杂质的模式净化效果好，如果正在分析
回收率低
在一次完整的SPE操作中，目标化合物可能会存在于样品溶液流出液、淋洗液、洗脱液或吸附剂中， 当“目标物没有回收或回收率低” 现象发生时，可向样品溶液加入标液，然后进行完整的SPE操作 并将样品流出液、淋洗液和洗脱液分别收集并分析，首先确定目标化合物存在于哪一部分，进而确 定问题来自下列哪一环节： 目标化合物在吸附剂上保留不足； 目标化合物未被完全洗脱； 其他环节。 目标化合物在吸附剂上保留不足 目标化合物未被完全洗脱
的项目为某一种或某一类化合物分析，最好是采用保留目标化合物的净化模式；举一 个简单的例子，同样是分析蔬菜中的多菌灵和噻菌灵(一ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ碱性农药)，使用阳离子交 换柱可以专一性地保留这些农药，使它们基本与干扰物完全分离，而使用正相吸附剂 或石墨化炭黑进行保留干扰物的操作仅能把主要的干扰物除去，仍有较多干扰物存留。 另外，如果不止一种SPE柱可用于目标化合物的净化时，应挑选选择性好的吸附剂； 选择性方面，离子交换＞正相＞反相。
SPE小柱填料常见问题
SPE固相萃取小柱广泛应用于医药检测、食品安全、农药残留、预防疾控、环境保护等领域的样品分析及制备。
尤其在食品中三聚氰胺、瘦肉精的检测、《2010中国药典》的应用等，小编今天带你来了解一下SPE小柱的填料的小知识，一起来涨涨知识吧！Q1：硅胶填料的键合封尾是什么意思？Si填料是没有衍生化的硅胶，通常作为所有硅胶键合相的基体。
纯硅胶Si表面的亲水性硅醇基通过硅烷化反应，键合上疏水性的烷基或芳香基从而改变填料的极性。
如C18填料就是在硅胶表面键合了十八烷基的长链。
所有的硅胶键合相都有一定数量未反应的硅醇基，使其导致了次级相互作用。
在萃取或保留强极性分析物或污染物时，这种次级相互作用是非常有用的，但是对分析物的吸附也可能是不可逆的。
为了减少这种未反应的硅醇基的影响，一般在键合反应后用封端剂对填料进行钝化处理，这个过程就叫做封尾。
Q2：为什么反相填料C18使用时建议溶液的PH范围是2-8？C18填料是十八烷基硅烷键合硅胶，pH值超出酸性范围时，键合相十八烷基易发生水解而流失；当流动相pH超出碱性范围时，会加速硅胶的溶解。
这两种反应均是不可逆的反应，会影响填料的性能。
当我们极端pH条件下需要使用反相填料时，建议使用聚合物基质的反相填料，如HLB,PSD 等，聚合物基质的填料pH耐受范围是1-14，适用范围非常广哦。
Q3：氧化铝填料的Brockmann活度等级是什么意思？业界根据氧化铝填料中含水量的不同，划分为五种活度等级。
Brockmann定义Ⅰ级氧化铝为450℃灼烧隔夜的氧化铝，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ级氧化铝是Ⅰ级氧化铝分别加入3%、6%、10%、15%的水而制成。
CNW中性氧化铝的Brockmann活度等级Ⅰ，吸附能力强，对芳香烃和有机胺等富电子化合物的保留能力强。
实例分享：在国标GB5009.27-2016 食品中苯并芘测定的第一法中推荐使用中性氧化铝小柱，很多客户做下来效果不好。
这是因为此版国标中的氧化铝小柱并没有未提及氧化铝的活度，实际上是需要活度为Ⅳ的层析氧化铝来实验。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1.问: 选定一种货号能够有多大的上样量？
答:这是经常使人混淆的一点--任何特殊的固相萃取柱在进行处理时，上样量的大小并不取决于样品的体积，而是取决于被固相萃取填料保留的样品中混合物总量。
详情参见“交换能力”中各填料的说明。
例如，所有的硅胶型填料都具有1%的吸附能力，一个500mg的C18填充床可以保留5mg的化合物。
要注意的是C18吸附的并不只是所期望的分析物而是样品中所有的物质。
2.问: 对于固相萃取柱应该使用什么冲洗或洗脱溶剂?
答:由于每个人的应用不同，所以很难指定一种明确的溶剂。
通常来说：
反相填料，以极性溶剂冲洗，用非极性溶剂洗脱
正相填料，以非极性溶剂冲洗，用极性溶剂洗脱
离子交换，以低离子强度缓冲液冲洗，用高离子强度缓冲液洗脱
3.问: 是否有类似于Waters Oasis或Varian Nexus的产品？
答:是的。
我们的PrevailC18能够应用在100%的环境中，同Oasis和Nexus一样。
Oasis和Nexus的产品都是聚合物基质的，而我们是硅胶基质的,所以在容量上稍差些。
不过由于我们的产品生产使用的是工业标准的C18，因此使用时您不需要重新校正方法。
4.问: 有没有一种和固相萃取柱配套使用的上面带孔的帽子吗？(或者类似的问题)
答:您问的是注射器式的适配器，连接Extract-Clean和Ultra-Clean柱的顶端，可以把1/8英寸的OD管或者任何luer-tip装置(例如注射器或其它固相萃取柱)插入到中心的孔内。
5.问: 现需要货号为2990，但是发现它已经停产了，应该怎么办？
答:由于3M的过滤薄膜已经停产，所以我们不再提供任何和它类似的产品。
我们提供具有同样用途的固相萃取柱--SuperClean固相萃取柱，货号为29901。
6.问: 固相萃取装置的使用寿命如何？
答:如果装置密封保存，远离热源，光源和化学蒸气，那么它们的使用寿命将可能比较长。
可是这并不是万无一失的，所以如果你保存时间已超过3-4年了，那么请检查并准备随时可能丢弃它。
8.问: 不能让水直接通过Ultra-Clean的柱子！
答: Ultra-Clean使用的是极其怕沾水的纯特氟纶玻璃材料。
使用时应该首先通入一些像100%甲醇这样的物质，然后就能够用水通过了。
和传统固相萃取柱中相比，能够以更低的流速通过Ultra-Clean柱。
9.问: 需要预处理这些固相萃取柱吗？
答: 是的。
固相萃取装置必须在加入样品之前进行预处理。
这样就可以去掉任何残留的污染物和润湿填充床来完全的接受样品。
如不对固相萃取填充床进行预处理就会导致固相萃取装置性
能降低，包括通道和降低的交换能力。
通常情况下，使用什么溶剂进行预处理取决于固相萃取填料——有时候需要强的溶剂，有时候简单的去离子水就足够了。
--尽管使用已确定的填料和样品类型时不需要预清洗或预处理，但是这并不是一个好的习惯。
进行预清洗或预处理能够保证更可靠的性能和可重现的结果。
--一些厂商声称有“不需要预处理”的固相萃取填料。
如果你仔细阅读了他们的说明书，那么你就会发现说明书上也指出进样之前先要进行清洗。
无论以上提到的洗涤，清洗和预处理中的哪一种，都是在进样前所推荐使用的方法。
12.问: 固相萃取柱能够任意使用和可恢复吗?
答: 我们推荐装置在使用一次后应该抛弃。
如果顾客有信心能够彻底清洗和恢复固相萃取填料就可以进行第二次的使用。
我们不推荐多次使用，也不保证超过一次使用后性能。
13.问: 在固相萃取柱中遗失了样品。
或没有恢复所有的分析物。
答: 导致这种情况存在许多种可能。
简单罗列如下:
1. 填充床重量太小。
如果分析物要比填充床吸附的多，那么多余的分析物就会仅经过简单的冲洗就通过了。
硅胶型填料就会吸附填充床上化合物中大约1%的量。
这包括了固相萃取填料吸附的成分，还包括干扰成分。
我们推荐先让填充床重量满足1%标准，之后如果还有大量的干扰，就把它的重量再加倍。
一些实验和错误几乎总是会有的。
2. 冲洗溶剂太强。
如果选择干扰冲洗的溶剂相对于固相萃取填料分析物的亲和力比较强，那么这就会破坏分析物并且把它冲洗出来。
3. 洗涤溶剂太弱。
如果选择洗涤分析物的溶剂相对于固相萃取填料分析物的亲和力太弱，那么所有分析物的都不会被洗涤出来。
4. 洗涤溶剂体积太小。
这就会留下一些对固相萃取填充床有吸附作用的分析物。
5. 样品在固相萃取过程以前或以后的某个步骤中遗失了。
6. 分析物对塑料有亲和力吗？也就是指对固相萃取柱或玻璃原料有吸附作用吗吗？如果有,就需要转而使用Ultra-Clean的固相萃取柱，它表面具有类特氟纶涂料和使用固体特氟纶玻璃原料。
7. 在上样的过程中流速太快。
样品需要时间同固相萃取填料充分混合和进行化学作用。
样品通过太快就会减少相互作用时间和导致本该被吸附的化合物通过。
样品进样应该采用每分钟1-5ml的流速；对于离子交换器采用每分钟1ml的流速。
8. 对固相萃取填料进行适当的预处理了吗？若没有这么做就会导致较差的性能，包括通道和减少吸附的效果。
14.问: Florisil 和Florisil-PR有什么不同之处？
答: Florisil-PR对绿色杀虫剂有较高的质量标准，否则他们是相同的化学物品。
Alltech对于不同的筛孔尺寸提供的Florisil-PR胜于标准的Florisil。