1.凝集实验

实验一
凝集实验
一、实验内容
1、直接凝集实验(玻片法)——血型鉴定 直接凝集实验(玻片法)——血型鉴定 每人做 2、间接凝集实验——类风湿因子检测 间接凝集实验——类风湿因子检测 小组做
二、目的要求
1、掌握血清学反应概念、特点、影响条件 掌握血清学反应概念、特点、 及类型； 及类型； 2、了解凝集反应的原理、类型及其用途； 了解凝集反应的原理、类型及其用途； 3、熟悉常用凝集反应的实验方法及结果判定。 熟悉常用凝集反应的实验方法及结果判定。
肉眼可见的 凝集物。 凝集物。
影响条件 1、电解质：0.85% NaCl等； NaCl等 电解质： 2、酸碱度：pH6～9； 酸碱度：pH6～ 3、温度：370C。 温度：
Ag-Ab反应种类： Ag-Ab反应种类： 反应种类 1、凝集反应； 凝集反应； 2、沉淀反应； 沉淀反应； 3、补体结合反应； 补体结合反应； 4、中和反应； 中和反应； 5、免疫标记技术。 免疫标记技术。
在白背景 上观察
A凝集、B不凝集——A型血 凝集、 不凝集——A A不凝集、B凝集——B型血 不凝集、 凝集——B A凝集、B凝集——AB型血 凝集、 凝集——AB型血 A不凝集、B不凝集——O型血 不凝集、 不凝集——O
4、注意事项
(1) RBC悬液浓度 2-5%； RBC悬液浓度 5%； (2) 牙签搅拌混匀时，不能使抗A和抗B血 牙签搅拌混匀时பைடு நூலகம்不能使抗A和抗B 清混合； 清混合； (3)在白色背景上观察效果好。 (3)在白色背景上观察效果好。 在白色背景上观察效果好
直接凝集反应
间接凝集反应
1、直接凝集反应
(1)玻片法： 已知Ab, Ag，为定性实验； (1)玻片法： 已知Ab,测Ag，为定性实验； 玻片法 Ab,测 用途：鉴定菌种、菌种分型、血型检查。 用途：鉴定菌种、菌种分型、血型检查。 (2)试管法： 已知Ag, Ab，为定量实验； (2)试管法： 已知Ag,测Ab，为定量实验； 试管法 Ag,测 用途：诊断肠热症(Widal reaction) reaction) 用途：诊断肠热症( 诊断布氏菌病( 诊断布氏菌病(Wright reaction)
凝集反应： 凝集反应：
颗粒性抗原(细菌、细胞等) 颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体在适当 的条件下凝集成肉眼可见的小块， 的条件下凝集成肉眼可见的小块，称为凝集反 agglutination)。 应(agglutination)。
颗粒性Ag——凝集原 颗粒性Ag——凝集原； 凝集原； 相应Ab——凝集素 相应Ab——凝集素。 凝集素。
乳胶凝集如细沙状。 乳胶凝集如细沙状。 以黑背景观察为佳。 以黑背景观察为佳。
颗粒性抗原： 颗粒性抗原：
凝集反应
光镜下可见，肉眼观呈混浊悬液，如细菌、 光镜下可见，肉眼观呈混浊悬液，如细菌、 RBC等 RBC等。 可溶性抗原： 可溶性抗原： 沉淀反应
光镜下不可见，肉眼观呈澄清透明， 光镜下不可见，肉眼观呈澄清透明，如蛋 白质、多糖抗原等。 白质、多糖抗原等。
凝集反应类型： 凝集反应类型：
(二)类风湿因子检测
间接乳胶凝集试验 Ag: 变性IgG Ag: 变性IgG Ab: 抗变性IgG(类风湿因子) Ab: 抗变性IgG(类风湿因子) IgG(类风湿因子
方法： 方法：
A、取一乳胶凝集实验反应板； 取一乳胶凝集实验反应板； B、加待测血清、阳性和NS对照各一滴； 对照各一滴； 加待测血清、阳性和NS对照各一滴 C、各加一滴致敏乳胶； 各加一滴致敏乳胶； D、5分钟后观察结果。 分钟后观察结果。
2、间接凝集反应
(1)间接凝集试验 (1)间接凝集试验 已知可溶性Ag包被载体,检测未知Ab 已知可溶性Ag包被载体,检测未知Ab。 Ag包被载体 Ab。 例如：间接乳胶凝集试验检测类风湿因子等。 例如：间接乳胶凝集试验检测类风湿因子等。
(2)反向间接凝集试验 (2)反向间接凝集试验 已知Ab包被载体,检测未知可溶性Ag 已知Ab包被载体,检测未知可溶性Ag Ab包被载体 例如：某些传染病和原发性肝癌的早期诊断验 例如：
免 疫 学 实 验
任课教师： 任课教师： 杨晓燕 Tel： 68485813(O) ： E mail： immuneyxy@163.com ：
免疫学试验注意事项
1、必须穿白大衣进实验室； 必须穿白大衣进实验室； 2、实验中注意实验室秩序，禁止喧哗打闹； 实验中注意实验室秩序，禁止喧哗打闹； 3、爱惜实验器材，如发生损坏应及时报告； 爱惜实验器材，如发生损坏应及时报告； 4、节约实验药品； 节约实验药品； 实验结束后，要回收的玻璃器材如载玻片等， 5、实验结束后，要回收的玻璃器材如载玻片等， 放于指定容器内；废品弃于垃圾袋内， 放于指定容器内；废品弃于垃圾袋内，严禁丢弃 在水槽中。 在水槽中。 6、实验完毕，清理桌面，班长安排清洁，老师检 实验完毕，清理桌面，班长安排清洁， 查后，做清洁同学方可离开。 查后，做清洁同学方可离开。
1、材料
已知Ab:标准血清： 已知Ab:标准血清：抗A和抗B血清 Ab:标准血清 和抗B 待测Ag:RBC 待测Ag:RBC血型抗原 Ag:RBC血型抗原
2、方法
(1)取血 无名指尖或耳垂)——NS试管—— (1)取血(无名指尖或耳垂)——NS试管—— 取血( NS试管 5%RBC悬液； RBC悬液 2-5%RBC悬液； (2)加血清各 (2)加血清各1滴； 加血清各1 (3)加RBC各 (3)加RBC各1滴； (4)牙签搅和并摇晃混匀 (4)牙签搅和并摇晃混匀； 牙签搅和并摇晃混匀； (5)结果判断(10-15min (5)结果判断(10-15min后)。 结果判断(10 min后
（3）间接凝集抑制试验 例如： 例如：妊娠试验
（4）协同凝集试验
——用于检测传染病早 ——用于检测传染病早 期血液及分泌液中的微 Ag。 量Ag。
三、试验内容
(一)血型鉴定(每人作)： 血型鉴定(每人作)
ABO血型 ABO血型 A 血型Ag 血型Ag 血型Ab 血型Ab A 抗 -B B B 抗 -A AB A、B 一 O 一 抗-A、B
试验报告书写格式
试 验 题 目
1、试验主要步聚； 试验主要步聚； 2、试验结果； 试验结果； 3、结论； 结论； 4、讨论。 讨论。
血清学反应： 血清学反应：
即体外进行的Ag Ab反应， 即体外进行的Ag-Ab反应，由于抗体主要 Ag- 反应 存在于血清中，故又称血清学反应。 存在于血清中，故又称血清学反应。 特点： 特点： (1)高度特异性； (1)高度特异性； 高度特异性 (2)分子表面的可逆性结合； (2)分子表面的可逆性结合； 分子表面的可逆性结合 (3)Ag Ab比例合适才会出现肉眼可见的反应。 (3)Ag、Ab比例合适才会出现肉眼可见的反应。 Ag、 比例合适才会出现肉眼可见的反应