生化检测中的影响因素

• 试剂间的相互干扰
• 全自动生化分析仪的吸样针、试剂针、 搅拌捧及比色杯是常见交叉污染的原因， 称互为干扰的项目为交叉污染对。①测定 试剂中含有下一测试所要测定的底物，直 接干扰下一检测的测定结果;②试剂中含有 的某种试剂成分与下一反应所要测定的底 物有作用，因而干扰下一反应的测定结 果。；③该试剂中所引导的反应对下一个 项目的反应进程带来间接的干扰，下一项 目所测定的是前后两个项目反应的综合作 用结果。
• 4.标本采集对生化检验结果的影响 • 5.标本处理、储存对生化检验结果的影响 标本的离心速度、时间,离心前放置的时间、 以及标本贮存的温度、时间等都会对生化 检测结果产生影响。
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6.标本状态对生化检验结果的影响
• 6.1 溶血 溶血是临床生化检验中最常见的一种影响因素，它能引起很 多指标明显异常。 • 溶血的干扰机理有以下三种：一是血细胞中高浓度组分逸出，使测定 结果增高,血细胞内浓度比血浆中浓度明显高的物质有LDH、ACP、 AST、K+，只要轻微溶血就可以对这些项目产生很大影响。另外若某 些物质的血细胞内浓度低于血清浓度时，则溶血相当于血清被稀释， 因而使这些血清成分特别是发生重度溶血时的检测值降低，这类项目 主要有Ca2+、Na+、Cl-、UA等。二是血细胞成分进入血清中后因化 学反应而引起其他物质的浓度改变，如溶血后红细胞的磷脂进入血清 被血清中的磷酸酯酶水解，其结果造成血清无机磷浓度显著增高。三 是血红蛋白本身颜色对检测的光学干扰，血红蛋白的颜色在431nm和 555nm波长附近能使比色、比浊法的吸光度增高，如溶血引起重氮单 试剂法胆红素测定结果明显升高。实际上，以上三类干扰在溶血标本 中同时存在并可相互作用，因而使受影响的检项更为复杂，这在超微 量、高精度和多指标的检测分析中显然不可忽视，因此，严控标本溶 血是保证检验质量的重要方面。
• 生化分析仪的校准 • 对测定标本的仪器一定要求进行校准，校 准时要选择合适的（配套的）标准品/校准 品；如有可能，校准品应能溯源到参考方 法或/和参考物质；对不同的分析项目要根 据其特性确立各自的校准频率. • 仪器的精密度检查 • 仪器的维护保养
• 用已糖激酶（HK）法则定葡萄糖标准液时， 葡萄糖的消耗与NADH的生成是等摩尔关系， 校准生化分析仪340nm处NAD(P)H的摩尔吸 光系数。可用ALP测定试剂的缓冲液作为测 定试剂，对硝基苯酚标准液作为血清标本， 实际测定405nm的吸光度值，根据对硝基苯 酚的浓度可计算ε值。
• 项目参数的设置对结果的影响 • 项目参数主要包括:标本用量、试剂的配比 及用量、反应的温度、延迟时间、反应时 间、监测的主波长、次波长、反应类型、 监测的时间、空白吸光度、底物耗尽及前 带现象的监测、额外的清洗。必须要针对 不同类型的反应，不同试剂的性质设置合 理的检测参数。
• 分析后阶段
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关于酶活性测定校准问题
常用K值有以下几种： a) 理论K值：根据理论摩尔消光系数（ε）来计算，如NADH 为6.22×103 b) 实测K值：由于仪器波长的精密及半宽度不同，而应根据 实测ε值来设定K值 c) 厂家给的K值：厂家生产试剂盒说明书上提供的K值（有 的厂家提供6.3×103） d) 校准K值：通过校准物直接校准得到的K值。 从上述K值中不难发现实测K值大于理论K值，这说明 K K K 生化分析仪的测光系统还存在着一定误差，如波长、半宽 度及光径等偏差，使仪器达不到理论上的最佳状态； 校准 K值与实测K值之间也存在一定的差距，即使指示物和仪 器相同，其差异可能由试剂及校准品造成的；校准K值应 有其溯源性。
• 检测方法的选择 不同的检测方法对检测结果的影 响是不言而预的,我们应优先选择国际、国内，行 业内权威机构推荐的方法，没有推荐常规方法的， 应该选择公认的测定方法。 • 试剂的影响 • 生化试剂盒有许多生产厂家，不同厂家产品的质 量、技术含量等常有区别，有时即使同一厂家不 同批号的同种试剂因原料来源、纯度不同以及生 产条件变动，会产生批间变异。同一批号的同种 试剂盒在储存、运输时的情况有所不同，性能也 可能发生变化。同项目试剂盒之间作比较，如果 稳定性好、线性范围宽、正向型试剂空白吸光度 低、反向型试剂空白吸光度高、试剂空白速率低、 瓶间差小者可视为优质试剂。
7.ALT检测中原倍结果远远大于标本稀释的 检测结果； 血清ALT测定，血清中的内源性丙酮酸及 其它酮酸也可与试剂中的指示酶（乳酸脱 氢酶）起反应，使结果偏高。若先加入缺 乏α-酮戊二酸的第一试剂，使其它酮酸与指 示酶反应之后再加入含有α-酮戊二酸的第二 试剂，启动真正的ALT酶促反应生成丙酮酸， 而丙酮酸与乳酸脱氢酶的反应消耗的NAD ＋能真正反映ALT的活性，从而消除以上副 反应的影响。
• 4.3 做好临床常规生化的室内质量控制 • 每日工作前，执行严格的校准程序，先 测定质控血清以监测仪器的工作状态及试 剂的质量，一旦发现失控，及时分析原因， 采取措施，改善后方可进行当天标本的检 测。在每批标本测定的同时，随机测定质 控血清，以监控仪器测定的漂移。为保证 检验质量，使用的质控血清统一向临床检 验中心购买。使用质控品时，实验室要重 复检测以决定每批质控品在本室的统计学 参数。在报告检验结果前，质控品结果必 须达到实验室设定的可接受标准。 •
• 8.部分项目原倍的检测结果正常,稀释后的 结果显著升高; • 9.部分免疫比浊法项目的检测结果 小于＂0＂
• 应对措施
• 1 . 完善制度，认真实施 • 完善的规章制度，规范的文件体系是全面质量管理体系 必须具备的要素，根据实际情况，制定各级管理制度，如: 标本查对制度，仪器校准、保养管理制度，试剂管理制度， 各种实验的标准操作（SOP文件），新项目新方法的评价， 质量控制操作程序，实验操作考核制度，差错登记、安全 管理制度等等。各种制度紧密结合，始终贯穿检验分析前、 分析中、分析后的全过程。 • 2 . 加强与客户的沟通 • 检验科与临床配合的好坏直接影响诊疗的质量，两者结 合是提高临床诊治水平的重要环节。因分析前质量控制大 部分是由临床完成的，这就要求检验科需加强与临床联系， 对标本正确采集及影响测定的各种因素进行告知和培训， 为临床正确分析结果提供参考意见，促进检验医学和谐发 展。 •
• 3.药物对生化检验结果的影响
药物引起生化检 验结果出现误差的原因可分为物理干扰和化学干扰，物理 干扰是由于药物进入体内后使血清的物理性质如颜色等发 生变化进而影响某些项目的检测，而化学干扰是由于药物 本身的化学性质如药物的强还原性等对体内某些物质测定 的影响。此外，许多药物的副作用使肝、肾功能发生改变 而引起检验结果异常。值得注意的是长期静脉点滴的病人 留取标本时可使标本稀释，造成某些项目结果偏低，又因 静点时高浓度的药物进入标本中，使许多检验结果发生巨 大变化。因此护理人员应避免在静点时和用药4h以内采取 检验标本，必要时停药后再查，以防药物的干扰作用。
生化检测中的影响因素
• 一、检测前因素 • 二、检测中因素 • 三、检测后因素
检测前的影响因素
一、 标本的因素 • 1. 生理因素对生化检验结果的影响 影响 检验结果的生理因素可分为可控因素和不 可控因素两种类型。主要有年龄、性别、 运动、情绪、体位改变、生活方式、妊娠、 季节变化、海拔高度、生理性波动等. • 2.饮食对生化检验结果的影响
• 二、环境的因素 包括生化分析仪的用水、 电源以及环境的温湿度等方面对生化检测 的结果都会产生影响。
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• 分析中因素 • 确立测定系统的概念 测定系统包括测定 原理、试剂、仪器、校准品四要素。对于 一个临床检测项目，如果所用方法的测定 原理、试剂、仪器、校准品中任何一个不 同，都可能得到不同的测定结果。如果我 们想要得到准确可靠的测定结果，而该结 果又具有与国际、国内其他实验室的可比 性，应该自己建立一个标准测定系统。
• ６.2脂血对生化检测的干扰:血液脂浊可散 射光线，所以对吸光度一般产生正向干扰， 导致某些项目如ALB、UA、总蛋白（TP） [23]等测定结果。而在pH10以上的环境中， 乳糜中的TG会皂化可使血清逐渐变清，使 许多比色法测定如Ca2+、Cr、ALP、TP等 结果产生负误差。
• 6.3 黄疸 胆红素对反应结果产生黄色化合物的比色分析影 响很大，一般可以用样本空白或两点比色法、连续监测法 来消除胆红素对黄色结果的影响，但由于胆红素不稳定， 随着胆红素被氧化为胆绿素、胆褐素而变色，此时如果使 用两点法、连续监测法同样也不能排除胆红素对结果的干 扰。此外胆红素作为一种还原剂对氧化反应有干扰，如氧 化酶法测定GLU、TG、UA、胆固醇等，因为胆红素可以 与上述过程中H2O2分解产生的新生态氧发生反应，从而 使新生态氧与氧化酶法反应中的色源物质结合减少，导致 结果偏低。此时也可用双波长法或设计样本空白消除干扰， 亦或当外观检查发现是黄疸血清时可先除蛋白，然后加胆 红素氧化酶预先将胆红素氧化成较稳定的氧化产物胆褐素， 可大大减低甚至消除胆红素的干扰。 返回
目前大多数检验科室都实行了计算 机网络管理技术，病人资料、检验数 据网上共享，各实验室当天的测试结 果通过联机即时传达电脑网络，这种 模式提高了工作效率，也避免了以往 由人为抄录结果时发生的误差。由于 标本量大，影响因素多而复杂，加上 审核人员的经验等原因的影响．
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生化检验的几种异常结果的分析 1.体检标本中的Glu结果普遍偏低； 2.体检标本中部分TG,T-CH结果偏低; 3.CK-MB大于CK; 4.Mg、TBA、K等项目的结果在与其它一些 项目在一起检测的结果与单独检测的结果 差距较大； • 5.黄疸标本中的UA、Cr、Glu等结果偏低； • 6.溶血标本中的K、LDH、AST、DBIL、 CRP等结果偏高；
• 4.4 积极参与各级临检中心的室间质控评比活动 • 室间质控是实验室认可的重要依据，是保证实 验室开展项目的基础，反映了实验室的准确度和 可信度。临床常规生化室间质量评比活动是相互 校正各参与实验室测定结果的准确性，并使各实 验室之间的结果有可比性，减少实验室内的系统 误差等。 • 4.5 危机值报告制度的建立与应用 • 危急值是一组代表会危及患者生命的数据，应 采取及时、有效的治疗措施，否则会产生不良后 果，出现危急值的标本必须复查，结果及时报告 临床。 •
校准品（Calibrationmaterials）含有已知量的 欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与 该方法及试剂、仪器是相关联的。校准品的 作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的 系统误差。 在全自动生化分析仪上使用配套的试剂和标 准品，各仪器厂家均有自己的标准测定系统, 对于校准品不能乱用。
• 4.6 提高检验人员自身素质 • 这是生化检验质量的保证。随着检验医 学的发展，检验技术与专业知识的要求越 来越高，要注重建立完善的人才培养制度。 不断加强检验人员的继续教育，加强专业 知识的不断更新。要着眼于本学科的发展 前沿，掌握国内外本专业最新的知识，加 强学术交流合作，提高科室整体业务水平。 增强工作责任心，加强检验设备的维护， 确保长期保证常规生化检验的质量。
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