吉姆萨染色方法
吉姆萨染色的原理
吉姆萨染色的原理之五兆芳芳创作吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成.染色原理和结果与瑞特染色法基底细同.嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉白色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质.PH对细胞染色有影响.细胞各类成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性情况中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性情况中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝.因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染.配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,不然可导致各类细胞染色反响异常,以致识别困难,甚至造成错误.一般性操纵技巧血涂片制备;细胞染色;显微查抄;血液病诊断;染色不良;瑞特(Wright)染色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附作用;PH对细胞染色的影响;甲醇;吉姆(Giemsa)染色法春天要经常使用润肤剂,它含有松香油脂酸和丰厚维生素a,经常使用可放慢皮肤血液循环,剌激面部细胞排泄,有效改良皮肤生理情况,削减气候对皮肤的危害.第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微查抄是血液细胞学查抄的根本办法,临床上应用极其普遍,特别是对于各类血液病的诊断具有重要的价值,近年来血细胞阐发仪的普遍应用,血涂片的不雅察也可作为判断仪器结果的简略单纯办法.比台不雅察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估量血内这些细胞的数量,借以作为仪器结果阐发后质控的参考.但积存涂片制备和染色不良,常使细胞辨别产生困难,甚至导致错误结论.例如,血膜过厚细胞重叠缩小,血膜太薄白细胞多集中于边沿,细胞散布不匀;染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反响异常.因皮制备厚薄适宜,散布均匀,染色良好的血涂片是血液学查抄的重要革本技巧之一.血涂片制备办法及注意事项将在实习指导中详细介绍. 1.瑞特(Wright)染色法:为发不雅察细胞内部结构,识别各类细胞及其异常变更,血涂片必须嘲行染色.血涂片的各类染色办法大多是罗氏染色法衍变来的.目前经常使用瑞特染色法.(1)瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料.亚甲蓝为四甲基硫堇染料,有对醌型和邻醌型两种结构.通常为氯盐,即氯化美蓝.美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料.市售美蓝中部分已被氧化为天青.伊红通常为钠盐.即伊红和伊混杂后,产生一种憎液性胶体伊红美蓝中性沉淀,即瑞特染料.(2)细胞的染色既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用,各类细胞成分化学性质不合,对各类染料的亲和力也不一样.因此,用本染料液染色后,在同一血片上,可以看到各类不合的色彩,例如血红蛋白,嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉白色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质. (3)PH对细胞染色有影响.细胞各类成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性情况中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性情况中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝.因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染.配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,不然可导致各类细胞染色反响异常,以致识别困难,甚至造成错误.新鲜配制的染料偏碱,须在室温或是37℃下贮存一定时间,待染料成熟,主要是美蓝逐渐转变成天青B后才干使用,贮存时愈久,染色效果愈好.EAM GILLILAND等采取吸光度比值作为顼特染液的质量规格.rA测定办法如下:取瑞特染液15-25μl(视染液浓度而定),加甲醇10ml稀释,混匀后以甲醇为空折管,辨别以波长650nm和25nm比色.Ra=a650/a525.因为美蓝吸收峰小组长为650nm,伊红吸收峰波长为525nm ;天青B吸收峰也为650nm但吸光度A约为美蓝的一半.所以新配染料rA接近2,随着美蓝逐渐氧化为天青B,RA也相应下降.RA下降到1.3±0.1时便可使用.瑞特染液贮存进程中,必须塞严,以避免甲醇挥发和被氧化成甲酸.有人主张在配方中参加甘油30ml,避免甲醇挥发,关可合细胞染色清晰.甲醇必须纯净,如甲醇中丙酮含量过量,染色偏酸,使白细胞着色不良.2.吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成.染色原理和结果与瑞特染色法基底细同.但本法对细胞核和寄生虫着色较好,结构显示更不清晰,而胞质和中性颗粒则着色较差.为统筹两者之长,可用复合染色法.即以稀释吉姆萨液代替缓冲液,按瑞特染色法染10min.或先用瑞特染色法染色后,再用稀释吉姆萨复染.。
吉姆萨染色鉴定细胞凋亡实验方法
吉姆萨检测细胞凋亡实验方案1 材料及器具吉姆萨染料(粉剂)、甘油、甲醇、KH2 PO4、Na2 HPO4、蒸馏水、封闭型棕色瓶2 试剂配制吉姆萨母液:吉姆萨染料粉剂0.75g甘油50ml甲醇50ml将粉剂放于甘油内搅匀,放入60℃温箱24h,经常摇匀,取出待冷再加甲醇混匀,配成母液,封闭棕色瓶保存。
吉姆萨工作液:使用时以原液10ml加入pH为6.4-6.8的磷酸盐缓冲液100ml稀释成工作液。
磷酸盐缓冲液:A液Na2HPO4 0.946g,蒸馏水100mlB液KH2PO4 0.907g,蒸馏水100ml临用时取A液40ml,B液60ml混合,pH值约为6.64。
3 染色步骤(1)常规脱蜡至水;(2)蒸馏水洗;(3)在37℃温箱中吉姆萨染色30min;(4)蒸馏水洗2min;(5)PBS分色适度;(6)将切片从PBS中拿出,甩掉切片上的水分,放在空气中略干燥,以肉眼观察组织上的水分消失为度;(7)入100%酒精中30s至1min;(8)二甲苯透明5min;(9)中性树胶封片。
4 预期结果背景淡蓝色,核为深蓝色,凋亡细胞为深蓝色。
5 体会在染色中第6步是关键,不经过此步骤直接入100%酒精脱水,脱色会很严重,无法控制,使染色失败;在第6步后入95%的酒精中脱水,脱色也非常快;若将切片从PBS中拿出,甩掉切片上的水分,放在空气中略干燥,以肉眼观察组织上的水分消失后再入100%酒精脱水,效果良好。
因此,用吉姆萨染料染料检测细胞凋亡操作简便、色彩鲜艳、对比度好、细胞核和凋亡细胞着色清晰,能够长期保存、不褪色,为一种值得推广的方法。
参考文献:《吉姆萨染色法对大脑组织凋亡细胞的染色》-徐广有,2005年。
吉姆萨染色方法及结果
1.材料
1g的姬姆色素染料加入66ml甘油,混匀,60度保温溶解两小时,再加入66ml甲醇混匀,即配成姬姆色素原液,此原液用前用PBS(6.8)稀释十倍左右就可以使用(此为姬姆萨工作液)。
工作液可保存一个月左右,Camon固定液(3体积乙醇+1体积冰乙酸);
PBS缓冲液配制:在基因工程手册里,网上的不大准确!
2.方法
①涂片的制作与固定:用移液枪吸取10-20μL待检溶液滴在载玻片上,均匀涂布,室温下阴干后,用Camon固定液固定涂片10min。
②染色:置姬姆萨工作液30min。
③洗脱:染色完成后,涂片立即用ddH2O洗脱。
④显微镜观察:用甘油压片,指甲油封固。
在100×油镜下观察。
吉姆萨染色原理
吉姆萨染色原理吉姆萨染色原理是一种常用的细胞染色方法,它通过使用吉姆萨染料将细胞核和细胞质染色,从而使细胞结构清晰可见。
吉姆萨染色原理的应用范围非常广泛,包括生物学、医学、生物工程等领域。
下面我们将详细介绍吉姆萨染色原理的相关知识。
首先,我们需要了解吉姆萨染料的特性。
吉姆萨染料是一种碱性染料,它能够与细胞核中的DNA结合,使细胞核呈现出深蓝色或紫色。
同时,吉姆萨染料还可以与细胞质中的RNA结合,使细胞质呈现出浅蓝色或粉红色。
这种双重染色的特性使得吉姆萨染色在观察细胞结构时非常有用。
在进行吉姆萨染色时,首先需要将待染细胞固定在载玻片上,然后使用甲醇或乙醇进行固定。
接下来,将吉姆萨染料溶液滴在载玻片上,让其与细胞接触。
随后,将载玻片在空气中风干,使吉姆萨染料充分渗透到细胞内部。
最后,用显微镜观察载玻片上的细胞,就可以清晰地看到细胞核和细胞质的染色情况。
吉姆萨染色原理的优点在于它简单易行,不需要复杂的操作步骤和昂贵的设备。
同时,吉姆萨染色还能够提供对细胞结构的清晰、直观的观察结果,有助于科研人员对细胞的形态和结构进行研究。
因此,吉姆萨染色在生物学和医学领域得到了广泛的应用。
除了用于一般细胞的染色外,吉姆萨染色原理还可以应用于染色体的观察。
在观察染色体时,吉姆萨染色可以使染色体的形态和数量清晰可见,有助于对染色体异常的检测和分析。
因此,吉姆萨染色在遗传学和生殖医学领域也具有重要的意义。
总的来说,吉姆萨染色原理是一种简单有效的细胞染色方法,它通过利用吉姆萨染料对细胞核和细胞质进行双重染色,使得细胞结构清晰可见。
吉姆萨染色不仅在生物学和医学领域有着广泛的应用,而且在遗传学和生殖医学领域也具有重要的意义。
希望本文对吉姆萨染色原理有所帮助,谢谢阅读!。
吉姆萨染液—病理切片常用染色方法
当疾病侵入人体,会引起相应病灶部位的病理性改变,对于相应病灶部位的观察经大量应用于临床工作及科学研究。
20世纪90年代病理检查进入组化、免疫组化、分子生物学及癌基因检查。
随着自然科学的迅速发展,新仪器设备和技术应用到医学中来,超微结构病理、分子病理学、免疫病理学、遗传病理学等方法也都应用到病理检查中。
癌细胞活体切片图为探讨器官、组织或细胞所发生的疾病过程,可采用某种病理形态学检查的方法,检查他们所发生的病变,探讨病变产生的原因、发病机理、病变的发生发展过程,最后做出病理诊断。
今天我们要介绍的产品,就是在病理学以及疾病研究中常用的染色剂——吉姆萨染液。
(abs47047618)吉姆萨染液别名姬姆萨染色液,吉姆萨染色液,姬姆萨染原液。
为天青色素、伊红、次甲蓝的混合物,本染色液最适于血液涂抹标本、血球、疟原虫、立克次体以及骨髓细胞、脊髓细胞等的染色。
染前用蛋白酶等进行处理,然后再用姬姆萨染液染色,在染色体上,可以出现不同浓淡的横纹样着色。
姬姆萨染液可将细胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色,在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。
吉姆萨染色图吉姆萨染色原理及结果与瑞氏染色基本相同,从图中可以看出,吉姆萨染色液(Giemsa stain)对胞浆着色力较强,能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒,着色清晰,但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳,故吉姆萨染色常与瑞氏染色联合使用。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
在使用时,pH对细胞染色有影响。
细胞各种成分均含蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液pH而定,在偏酸性环境中正电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏碱性环境中负电荷增多,易与天青结合,染色偏蓝。
吉姆萨染色的原理
吉姆萨染色的原理吉姆萨染色是一种常用的细胞染色技术,主要用于在细胞中观察和研究细胞结构和功能。
吉姆萨染色主要通过染色剂吉姆萨(Giemsa)在细胞中与特定的分子结合而实现。
它能够显著地染色细胞的核和细胞器,便于观察和分析。
吉姆萨是一种由甲酸、溴化酚和胰蛋白消化产生的溴化物复合物。
它主要通过与细胞中的DNA、RNA和蛋白质等结合,形成吉姆萨染色体,从而在显微镜下直观地显示出核和染色体的结构和形态。
吉姆萨染色通过改变细胞内核和细胞器的颜色,使它们在显微镜下更易于观察和分析,有助于研究细胞的生物学特性和病理学改变。
吉姆萨染色的过程主要包括固定、染色和洗涤等步骤。
首先,细胞需要被固定在载玻片上,以保持细胞的形态结构和细胞器的分布。
固定一般使用乙醛、乙醇或甲醛等试剂进行。
固定后,使用吉姆萨染液将固定的细胞染色剂覆盖在细胞上,染剂很快渗入细胞内,与核酸和蛋白质发生结合反应。
染剂的浓度和染色时间要控制在合适的范围内,以获得明确和清晰的染色效果。
染色结束后,对载玻片进行洗涤,清除掉未结合的染剂和杂质。
洗涤的目的是提高显微观察的分辨率和减少背景干扰。
通常使用缓冲溶液和蒸馏水洗涤多次,确保载玻片表面的纯净化程度。
经过洗涤后,载玻片可以通过显微镜观察。
在显微镜下,吉姆萨染色的细胞呈现出直观的形态和结构,显示出核、染色体、细胞质和其他细胞器等部分。
吉姆萨染色的原理主要是由于吉姆萨染剂和细胞内的核酸以及其他细胞成分的相互作用。
吉姆萨染剂可以在酸性条件下与DNA和RNA结合,形成吉姆萨染色体。
吉姆萨染色体的形成可以改变细胞的颜色,使其在显微镜下更容易观察和分析。
此外,吉姆萨染剂还可以与蛋白质结合,改变蛋白质的结构和性质,从而更好地显示细胞内的细胞器和组分。
吉姆萨染色的应用非常广泛。
在生物学研究中,吉姆萨染色可以用来观察染色体、细胞核和细胞质结构等,研究细胞的形态学和细胞器的功能。
在临床医学中,吉姆萨染色可以用来诊断和鉴别疾病,例如诊断白血病、骨髓生成障碍等。
he染色吉姆萨染色试剂方法[精华]
两种染色试剂和方法如下。
000000一、HE染色000000试剂:000000苏木素染液:苏木精1g;无水乙醇25mL;硫酸铝钾10g;蒸馏水350mL;碘酸钾0.1g;冰醋酸10mL。
A 液:用25mL 无水乙醇溶解1g苏木精,摇动即可溶解。
B 液:用350mL 蒸馏水溶解10g硫酸铝钾,摇动或振荡即可溶解。
把A 液和 B 液混合,加入碘酸钾摇动至颜色加深。
最后加入10mL冰醋酸,摇动颜色变为深葡萄酒红色。
染液配制当日即可应用于染色。
酸化液:醋酸20-35mL加蒸馏水至700mL。
000000伊红染液:储液:取1g伊红,溶于100mL 95%的乙醇,待溶解完全后加几滴冰醋酸至染液呈半透明状,避光保存备用。
工作液:取一定量的伊红储液,加入等量70%乙醇,此液即为伊红染液的工作液。
000000染色步骤:000000(1)细胞爬片放用PBS漂洗3次,每次5min,无水乙醇固定5min,风干。
000000(2)95%乙醇1min,75%乙醇1min,三蒸水1min。
000000( 3 ) 浸洗5 % 的醋酸液 ( 酸化液 ) 数秒。
000000( 4 ) 苏木精染液 3 - 5 m i n,胞核呈橙红色。
000000( 5 ) 自来水冲洗至颜色变蓝。
000000( 6) 盐酸乙醇液分化数秒,颜色再次返红。
000000(7) 自来水再次冲洗,返蓝。
000000( 8) 伊红染液5min,流水漂洗15min左右。
000000二、吉姆萨染色000000试剂:000000吉姆萨染液配制:取吉姆萨粉末1g溶于66ml甘油中研磨混匀,然后放置55-60℃水浴2h,冷却后加入66ml甲醇中混匀,过滤后棕瓶分装保存。
0000 00PBS甲醇液:PBS与甲醇一比一混合。
000000染色步骤:000000(1)细胞爬片使用PBS漂洗3次,每次5min。
000000(2)加PBS甲醇液静置2min,去掉PBS甲醇液。
000000(3)加甲醇固定10min,去掉甲醇,加入新无水甲醇漂洗去掉。
医学真菌生化鉴定方法
医学真菌生化鉴定方法关键词:真菌生化试剂甲醇亚甲蓝假丝酵母标准溶液化学试剂北京标准物质网医学真菌的生化鉴定主要指通过生化试剂对真菌进行着色,随后显微镜下检测其菌丝和孢子的形态特征,进行分类鉴定。
常用的医学真菌染色方法如下:1.吉姆萨染色主要用于组织或血涂片中的荚膜组织胞质菌和马尔尼菲青霉菌酵母细胞染色。
将血液样本推片或组织涂片,自然干燥:100%甲醇脱水固定后,滴加吉姆萨染色剂,蒸馏水洗片后自然干燥后镜检。
2.乳酸酚棉蓝染色用于多种真菌的染色,显微观察真菌时,乳酸酚棉蓝溶液常作为固定液。
将接种物在载玻片上涂片:滴加乳酸酚棉蓝染色剂;彻底分散真菌,加盖玻片,进行镜检。
3.亚甲蓝染色主要用于检测汗斑皮屑的病原菌。
将感染皮屑置于载玻片上,滴加亚甲蓝染液:混合充分,加盖玻片进行镜检,可进行油镜检测。
4.过碘酸雪夫(PAS)染色主要用于组织内真菌染色,在PAS染色下真菌为淡红色或紫红色。
使用清蛋白涂布载玻片,制备的玻片可长期保存。
5.显色鉴别培养是近年来真菌诊断的新技术,其原理是利用真菌特异的生化反应,即真菌分解培养基中的底物,致使真菌菌落呈现不同的颜色,因此也属于医学真菌生化鉴定方法的范畴。
该种方法可以方便快速地分离鉴定主要的致病性真菌,同时不影响药敏实验结果,目前在临床上被应用于假丝酵母等真菌的检测。
科玛嘉念珠菌显色培养基(CHROMagar)结合VITEK2Compact-YBC全自动微生物鉴定仪可以实现医学真菌的快速高通量的鉴定。
采取患者的痰、尿、分泌物、咽拭子等标本,于沙保弱培养基上37℃培养1~2天,初步镜检确定有孢子和菌丝的真菌阳性标本。
将阳性标本分别接种CHR显色培养基和VITEK2Compact-YBC 鉴定卡,37℃培养1~2天记录结果,比照CHROMagar直接鉴定法与VITEK2Compact仪器法的鉴定结果,可以确定医学真菌的鉴定结果。
血涂片的常用染色方法
血涂片的常用染色方法血涂片的染色方法是临床诊断中常用的一项技术,它通过染色剂的作用,使细胞在显微镜下呈现出不同的颜色和形态,从而帮助医生准确地判断病情。
本文将介绍血涂片染色的常用方法。
一、尤氏涂片染色法尤氏涂片染色法是血涂片染色中最常用的一种方法之一。
首先,将待染物涂布在玻璃片上,然后滴加尤氏染液,使其完全覆盖待染细胞。
然后将玻璃片轻轻晃动,使染液均匀分布,然后放置10-15分钟。
随后,用蒸馏水洗净杂质,待玻璃片干燥后,就可以观察染色效果了。
二、吉姆萨涂片染色法吉姆萨涂片染色法也是一种常用的血涂片染色方法。
操作步骤与尤氏染色类似,首先涂布待染物,然后滴加吉姆萨染液,均匀分布后放置10分钟。
之后,用蒸馏水冲洗去除杂质,使染液清洁。
最后,晾干玻璃片后即可进行观察和分析。
三、偏心涂片偏心涂片是一种染色方法,适用于血液细胞计数和形态学观察。
首先取一滴新鲜的血液,放在玻璃片上,并用另一片玻璃片迅速稀释成适当浓度。
然后,将玻璃片倾斜45度角,一端接触滴液的一侧,另一端则呈现一个斜纹,形成了一个狭长的涂片。
静置片约20分钟后,用尤氏染液染色,然后冲洗并晾干后观察。
四、格里芬-斯旺涂片染色法格里芬-斯旺涂片染色法也常用于血涂片染色,尤其适用于染色胶原纤维和核酸。
操作方法为将待染物与格里芬-斯旺A液混合,制成一个湿的涂片。
然后,将格里芬-斯旺B液滴于涂片上,并用滤纸渗透干,最后观察染色效果。
五、格朗-古达染色法格朗-古达染色法用于观察白细胞和细菌。
操作方法为先将带菌纸蘸入患者血液中,然后迅速涂布在玻璃片上。
待玻璃片干燥后,将其放入格朗-古达染液中静置15分钟。
之后,用蒸馏水洗净杂质,待干燥后可进行观察。
综上所述,血涂片的染色方法有很多,尤氏涂片染色、吉姆萨涂片染色、偏心涂片、格里芬-斯旺涂片染色法和格朗-古达染色法是其中常用的几种。
选择适当的染色方法,可以帮助医生更加准确地进行疾病的诊断与治疗,为患者提供更好的医疗服务。
瑞氏-吉姆萨染液配法
瑞⽒-吉姆萨染液配法英⽂拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料,溶于甲醇。
后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离⼦。
使⽤⽅法瑞⽒(Wright's staim;美蓝-伊红Y)染⾊:1.瑞⽒染料是由碱性染料美蓝(Methvlem blue)和酸性染料黄⾊伊红(Eostm Y)合称伊红美蓝染料即瑞⽒(美蓝-伊红Y)染料。
2.⽤甲醇作瑞⽒染料溶剂,即成瑞⽒染液。
甲醇是瑞⽒染料良好溶剂,有两种作⽤:(1)甲醇使瑞⽒染料中美蓝(M)与伊红(E)在溶液中离解,可使细胞成分选择性吸附其中的有⾊物质⽽着⾊。
甲醇ME(瑞⽒染料)----→M+ + E-在配制的瑞⽒染液中美蓝如放置过久即可氧化⽽含有天青,美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红⾊,但不能使胞浆染为蓝⾊,多余美蓝就可以使胞浆染成蓝⾊,染⾊主要是化学作⽤,是离⼦彼此结合的反应。
(2)甲醇具有强⼤的脱⽔⼒,可将细胞固定在⼀定形态及增加细胞结构的表⾯积,提⾼细胞对染料吸收作⽤,同时由于甲醇吸附染⾊液中的⽔,使染⾊液升温,加速染⾊反应。
染液配制(1) 瑞⽒染液配制:瑞⽒染料 830gm或1g甲醇(AR)500ml或600ml○先称⼲燥(事先放⼊温箱⼲燥过夜)瑞⽒染料放置乳钵内,⽤乳棒轻轻敲碎染料成粉末,再⾏研磨⾄听不到研芝⿇声即呈细粉末,加少许⽢油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸内显“⼀⾯镜”光泽,⽽⽆染料粉粒沉着。
○再加较多量甲醇研磨呈⼀⾯镜光亮,静置⽚刻,将上层液体倒⼊⼀清洁储存瓶内(最好⽤甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重复数次,⾄乳钵内染料及甲醇⽤完为⽌,摇匀,密封瓶⼝。
○存室温暗处,储存愈久,则染料溶解、分解就越好,⼀般储存3个⽉以上为佳。
(2) 缓冲液:●缓冲液作⽤:○染⾊对氢离⼦浓度是⼗分敏感的,据观察pH值的改变,可使蛋⽩质与染料形成的化合物重新离解。
○缓冲液须保持⼀定的pH使染⾊稳定,PBS的pH ⼀般在6.4~6.8,○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作⽤,偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作⽤,使pH恒定。
Giemsa染色
Sorensen磷酸缓冲液配制A液:0.067mol.L-1磷酸二氢钾溶液,称取KH2PO4 9.118g,用少许鲜蒸馏水60℃下溶后,定溶至1000ml。
B液:0.067mol.L-1磷酸氢二钠溶液,称取Na2HPO.12H2O,23.995g,用少许鲜蒸馏水60℃下溶后,定溶至1000ml;根据使用时pH值的要求按下例比例混合。
pH值:6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 7.3 7.4A液:68.7 62.8 57.0 51.0 44.8 38.8 33.0 27.6 22.3 18.2B液:31.3 37.2 43.0 49.0 55.2 61.2 67.0 72.5 77.7 81.8Sorensen缓冲液的配制:pH6.81:Na2HPO4(1/15M) 50mL + KH2PO4(1/15M) 50mL;pH6.98:Na2HPO4(1/15M) 60mL + KH2PO4(1/15M) 40mLpH7.17:Na2HPO4(1/15M) 70mL+ KH2PO4(1/15M) 30mL;pH7.38:Na2HPO4(1/15M) 80mL + KH2PO4(1/15M) 20mL。
pH的影响(pH6.4~pH6.8)细胞各种成分均属蛋白质,因蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液pH而定,在偏酸性环境中正电荷增多,易与伊红结合,红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红,细胞核呈淡蓝色或不染色;在偏碱性环境中负电荷增多,易与美蓝结合,所有细胞呈灰蓝色,颗粒呈深暗,嗜酸性颗粒呈暗褐,甚至棕黑色,中性颗粒偏粗,呈紫黑色。
稀释染液必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致细胞染色呈色异常,形态难以识别,甚至错误。
大型真菌Giemsa染色:1.准备染液。
吉姆萨浓缩液:吉姆萨稀释液(1:9),现配现用,2-8℃可保存一个月。
2.固定。
用卡诺氏固定液或乙酸:乙醇(1:3)固定(1.5mlEP管内加500μl固定液)5h,5℃。
巨噬细胞与淋巴细胞的瑞氏吉姆萨染色-概述说明以及解释
巨噬细胞与淋巴细胞的瑞氏吉姆萨染色-概述说明以及解释1.引言1.1 概述瑞氏吉姆萨染色是一种常用的细胞染色技术,广泛应用于巨噬细胞和淋巴细胞的研究中。
巨噬细胞和淋巴细胞作为免疫系统中的两大重要细胞类型,对维持机体的免疫功能和免疫应答起着至关重要的作用。
瑞氏吉姆萨染色是利用吉姆萨染料对细胞染色的一种方法,该染色方法可使细胞核显色为蓝色,细胞质呈粉红色。
这种染色技术具有简单、快速、可靠的优点,因此在细胞学研究领域得到了广泛的应用。
巨噬细胞是一类具有噬菌、清除损伤细胞和产生炎症因子等功能的专门免疫细胞。
通过瑞氏吉姆萨染色可以清晰地观察巨噬细胞的形态特征、数量分布以及细胞内的器官结构,从而更好地了解巨噬细胞在炎症反应、感染和免疫调节中的作用机制。
淋巴细胞是免疫系统中的另一类重要细胞,分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞等多个亚群。
瑞氏吉姆萨染色技术可以帮助研究者观察淋巴细胞的数量比例、形态特征以及细胞发育和分化状态,有助于深入了解淋巴细胞的免疫功能和免疫调节机制。
瑞氏吉姆萨染色在巨噬细胞和淋巴细胞研究中的应用广泛,为科研工作者提供了一种方便、可靠的观察和分析工具。
通过深入研究巨噬细胞和淋巴细胞的瑞氏吉姆萨染色结果,可以进一步揭示它们在免疫学、肿瘤学、感染病理学等领域的重要作用,为相关疾病的研究和临床治疗提供有力支持。
未来,随着细胞研究的不断深入和技术的不断发展,瑞氏吉姆萨染色将继续发挥重要作用。
同时,结合其他高级细胞学和分子生物学技术的发展,我们可以更全面、深入地理解和阐释巨噬细胞和淋巴细胞在免疫反应和疾病发生发展中的作用机制,为新型诊断和治疗策略的研发提供理论基础。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容:文章结构部分的主要目的是为读者提供对整篇文章的概览和组织结构的理解。
通过清晰地描述文章的结构,读者可以更好地理解文章的主要内容和思路,并能够更方便地查找感兴趣的信息。
在本篇文章中,文章结构包括三个主要部分:引言、正文和结论。
吉姆萨染色
吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成。
染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
PH对细胞染色有影响。
细胞各种成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝。
因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染。
配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成错误。
一般性操作技术血涂片制备;细胞染色;显微检查;血液病诊断;染色不良;瑞特(Wright)染色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附作用;PH对细胞染色的影响;甲醇;吉姆(Giemsa)染色法春天要常用润肤剂,它含有松香油脂酸和丰富维生素a,常用可加快皮肤血液循环,剌激面部细胞分泌,有效改善皮肤生理环境,减少气候对皮肤的危害。
第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法,临床上应用极为广泛,非凡是对于各种血液病的诊断具有重要的价值,近年来血细胞分析仪的广泛应用,血涂片的观察也可作为判定仪器结果的简易方法。
比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量,借以作为仪器结果分析后质控的参考。
但积压涂片制备和染色不良,常使细胞鉴别发生困难,甚至导致错误结论。
例如,血膜过厚细胞重叠缩小,血膜太薄白细胞多集中于边缘,细胞分布不匀;染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常。
因皮制备厚薄适宜,分布均匀,染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。
血涂片制备方法及注重事项将在实习指导中具体介绍。
瑞氏吉姆萨和NBT染色
吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成。
染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
PH对细胞染色有影响。
细胞各种成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝。
因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染。
配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成错误。
一般性操作技术血涂片制备;细胞染色;显微检查;血液病诊断;染色不良;瑞特(Wright)染色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附作用;PH对细胞染色的影响;甲醇;吉姆(Giemsa)染色法春天要常用润肤剂,它含有松香油脂酸和丰富维生素a,常用可加快皮肤血液循环,剌激面部细胞分泌,有效改善皮肤生理环境,减少气候对皮肤的危害。
步骤:瑞士染液染2-3min,不冲掉后加吉姆萨染液染3min。
瑞士染液用原液,吉姆萨染液稀释10倍用。
瑞氏染料是由碱性染料美蓝(Methvlem blue )和酸性染料黄色伊红(Eostm Y )合称伊红美蓝染料即瑞氏(美蓝-伊红Y)染料。
1.伊红钠盐的有色部分为阴离子,无色部分为阳离子,其有色部分为酸性,故称伊红为酸性染料。
美蓝通常为氯盐是碱性的,美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐,其有色部分为阳离子,无色部分为阴离子,恰与伊红钠盐相反。
2.用甲醇作瑞氏染料溶剂,即成瑞氏染液。
甲醇是瑞氏染料良好溶剂,有两种作用:(1 )甲醇使瑞氏染料中美蓝(M )与伊红( E )在溶液中离解,可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。
姬姆萨染色法
吉姆萨染色液说明书【产品名称】吉姆萨染色液【包装规格】货号:DM0002单瓶包装规格分别为:A液吉姆萨染液:20ml、100ml、250ml、500ml;B液磷酸盐缓冲液:250ml、500ml、5000ml;每套/盒包装规格分别为:A液20ml+B液250ml/盒、A液100ml+B液4×250ml/盒、A液250ml+B液5×500ml/盒、A液500ml+B液5000ml/盒。
【预期用途】用于组织细胞学染色从而鉴别骨髓和其他造血组织(淋巴结)中的白细胞,还可用于鉴定某些微生物。
【检验原理】吉姆萨染色原理及结果与瑞氏染色基本相同,吉姆萨染色液(Giemsa stain,又称姬姆萨染色液)对胞浆着色力较强,能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒,着色清晰,但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳,故吉姆萨染色常与瑞氏染色联合使用。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
血细胞染色:吉姆萨染料中含有美蓝和伊红两种染料,前者为碱性,后者为酸性,它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力,从而使其呈现出不同的色调,以便于辨认。
染色体染色:也称G显带,染色体上富舍A-T碱基对的DNA和组蛋白结合紧密,胰酶处理时不易高度抽提,和染料亲和力较强,呈深带;而富含G-C碱基对的区段结合的蛋白质被胰酶抽提,和染料亲和力降低,呈浅带。
【主要组成成分】试剂组成主要成分1、A液吉姆萨染液吉姆萨染料2、B液磷酸盐缓冲液磷酸盐【储存条件及有效期】5℃~35℃环境保存,原包装未开封染色液的有效期为24个月,在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完,每次用后应及时拧紧瓶盖,以免挥发或变质。
细菌常用的染色方法
细菌常用的染色方法细菌是一类微生物,它们在自然界中广泛存在,包括空气、土壤、水体等各种环境中。
为了研究细菌的形态、结构和功能,科学家们发明了各种染色方法。
本文将介绍细菌常用的染色方法,包括革兰氏染色、抗酸染色和吉姆萨染色。
一、革兰氏染色革兰氏染色是最常用的细菌染色方法之一,它是根据细菌细胞壁的组成差异来区分细菌的。
革兰氏染色的步骤包括:将细菌涂片烘干,然后用碘酒浸泡,再用乙醇洗涤,最后用碱性颜料(如紫色染料)染色。
通过革兰氏染色,细菌可分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两类。
革兰阳性菌的细胞壁较厚,能保持紫色,而革兰阴性菌的细胞壁较薄,易被乙醇洗去紫色染料,然后再染红色。
革兰氏染色可以帮助科学家们快速区分细菌的类型,对于细菌的鉴定和分类具有重要意义。
二、抗酸染色抗酸染色是一种特殊的染色方法,用于检测结核菌和分枝杆菌等抗酸杆菌。
这些细菌具有特殊的脂质组分,使它们不易被一般染色方法染色。
抗酸染色的步骤包括:将细菌涂片加热,然后用碱性染料(如碱性红染料)染色,再用酸洗去多余染料,最后用蓝色染料(如甲基蓝)染色。
通过抗酸染色,结核菌和分枝杆菌等抗酸杆菌可呈现红色,而其他细菌则呈现蓝色。
这种染色方法对于抗酸杆菌的检测非常重要,可以帮助医生快速诊断结核病等疾病。
三、吉姆萨染色吉姆萨染色也是一种常用的细菌染色方法,它可以帮助科学家们观察细菌的形态和结构。
吉姆萨染色的步骤包括:将细菌涂片用吉姆萨染料(由蓝色和红色组成)染色,然后用水洗去多余染料,最后在显微镜下观察。
通过吉姆萨染色,细菌的细胞壁、细胞质等结构可以呈现出不同的颜色,帮助科学家们研究细菌的形态和结构特征。
吉姆萨染色在细菌学研究中应用广泛,对于揭示细菌的性状和特性非常重要。
细菌染色方法的研究和应用对于细菌学的发展和医学诊断具有重要意义。
除了上述介绍的革兰氏染色、抗酸染色和吉姆萨染色,还有许多其他的染色方法,如苏木精-伊红染色、格拉姆-玛尔基纳染色等。
这些方法都有各自的特点和适用范围,在细菌学研究和临床诊断中起到重要的作用。
吉姆萨染色
高剂量组:118.8mg生药量/ml;
中剂量组:59.4mg生药量/ml;
低剂量组:29.7mg生药量/ml;
阳性药(阿霉素):32μg/ml和16μg/m l;
空白组:等量培养基稀释;
生药含量:100g/10ml;
配药方案:
108μl 4.5ml 237.6mg/ml;
2ml 4ml 118.8mg/ml;
1.5ml 3ml 59.4mg/ml;
阿霉素:10mg规格
10mg 7.8ml 1280μg/ml
500μl 10ml 64μg/ml;
1.5ml 3ml 32μg/ml;
瑞士吉姆萨染色步骤
取对数生长期细胞,胰酶消化并吹打,使细胞脱壁悬浮。
用培养液(10%胎牛血清,1%双抗的1640培养基)调整浓度为2×105个/ml,用1ml加样枪接种于6孔板,每孔2ml。
分好后于5%CO2、饱和湿度37℃培养。
待24小时后细胞完全贴壁,用1ml加样枪分别加入各浓度测试品溶液2 ml(此时各浓度药品对倍稀释),阴性对照组加入等量培养基。
继续于5%CO2、饱和湿度37℃培养。
我们的方法:48小时候直接进行瑞士吉姆萨染色,3分钟后,将染色好的标本在缓冲液中浸数秒钟,用去离子水洗涤后,晾干,然后用显微镜观察。
传统方法:48小时后用胰酶消化吹打,并涂片。
涂片后的标本用甲醇固定5分钟。
瑞士吉姆萨染色20-30分钟,染色后的标本在缓冲液中洗涤后,在0.004%柠檬酸中浸数秒钟。
用去离水洗涤后,晾干,然后用显微镜观察。
吉姆萨染色的原理
吉姆萨染色的原理之阿布丰王创作吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成.染色原理和结果与瑞特染色法基秘闻同.嗜酸性颗粒为碱性卵白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核卵白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质.PH对细胞染色有影响.细胞各种成份均不卵白质,由于卵白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝.因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必需清洁,无酸碱污染.配制顼特液必需用优质甲醇,稀释染色必需用缓冲液,冲刷用水应近中性,否则可招致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成毛病.一般性把持技术血涂片制备;细胞染色;显微检查;血液病诊断;染色不良;瑞特(Wright)染色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附作用;PH对细胞染色的影响;甲醇;吉姆(Giemsa)染色法春季要经常使用润肤剂,它含有松香油脂酸和丰富维生素a,经常使用可加快皮肤血液循环,剌激面部细胞分泌,有效改善皮肤生理环境,减少气候对皮肤的危害.第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法,临床上应用极为广泛,特别是对各种血液病的诊断具有重要的价值,近年来血细胞分析仪的广泛应用,血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法.比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数年夜致估计血内这些细胞的数量,借以作为仪器结果分析后质控的参考. 但积压涂片制备和染色不良,常使细胞鉴别发生困难,甚至招致毛病结论.例如,血膜过厚细胞重叠缩小,血膜太薄白细胞多集中于边缘,细胞分布不匀;染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常.因皮制备厚薄适宜,分布均匀,染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一.血涂片制备方法及注意事项将在实习指导中详细介绍.1.瑞特(Wright)染色法:为发观察细胞内部结构,识别各种细胞及其异常变动,血涂片必需嘲行染色.血涂片的各种染色方法年夜多是罗氏染色法衍变来的.目前经常使用瑞特染色法.(1)瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料.亚甲蓝为四甲基硫堇染料,有对醌型和邻醌型两种结构.通常为氯盐,即氯化美蓝.美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料.市售美蓝中部份已被氧化为天青.伊红通常为钠盐.即伊红和伊混合后,发生一种憎液性胶体伊红美蓝中性沉淀,即瑞特染料. (2)细胞的染色既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用,各种细胞成份化学性质分歧,对各种染料的亲和力也纷歧样.因此,用本染料液染色后,在同一血片上,可以看到各种分歧的色彩,例如血红卵白,嗜酸性颗粒为碱性卵白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核卵白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质.(3)PH对细胞染色有影响.细胞各种成份均不卵白质,由于卵白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝.因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必需清洁,无酸碱污染.配制顼特液必需用优质甲醇,稀释染色必需用缓冲液,冲刷用水应近中性,否则可招致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成毛病.新鲜配制的染料偏碱,须在室温或是37℃下贮存一按时间,待染料成熟,主要是美蓝逐渐转酿成天青B后才华使用,贮存时愈久,染色效果愈好.EAM GILLILAND等采纳吸光度比值作为顼特染液的质量规格.rA测定方法如下:取瑞特染液15-25μl(视染液浓度而定),加甲醇10ml稀释,混匀后以甲醇为空折管,分别以波长650nm和25nm比色.Ra=a650/a525.因为美蓝吸收峰小组长为650nm,伊红吸收峰波长为525nm ;天青B吸收峰也为650nm但吸光度A约为美蓝的一半.所以新配染料rA接近2,随着美蓝逐渐氧化为天青B,RA也相应下降.RA下降到1.3±0.1时即可使用.瑞特染液贮存过程中,必需塞严,以防止甲醇挥发和被氧化成甲酸.有人主张在配方中加入甘油30ml,防止甲醇挥发,关可合细胞染色清晰.甲醇必需纯洁,如甲醇中丙酮含量过多,染色偏酸,使白细胞着色不良.2.吉姆萨(Giemsa)染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成.染色原理和结果与瑞特染色法基秘闻同.但本法对细胞核和寄生虫着色较好,结构显示更不清晰,而胞质和中性颗粒则着色较差.为兼顾二者之长,可用复合染色法.即以稀释吉姆萨液取代缓冲液,按瑞特染色法染10min.或先用瑞特染色法染色后,再用稀释吉姆萨复染.。
吉姆萨染色的原理ea
吉姆萨染色的原理吉姆萨〔Giemsa〕染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成。
染色原理和结果与瑞特染色法根本相同。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
PH对细胞染色有影响。
细胞各种成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝。
因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染。
配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否那么可导致各种细胞染色反响异常,以致识别困难,甚至造成错误。
一般性操作技术血涂片制备;细胞染色;显微检查;血液病诊断;染色不良;瑞特〔Wright〕染色法;酸性染料;伊红;碱性染料;亚甲蓝;吸附作用;PH对细胞染色的影响;甲醇;吉姆〔Giemsa〕染色法春天要常用润肤剂,它含有松香油脂酸和丰富维生素a,常用可加快皮肤血液循环,剌激面部细胞分泌,有效改善皮肤生理环境,减少气候对皮肤的危害。
第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的根本方法,临床上应用极为广泛,特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值,近年来血细胞分析仪的广泛应用,血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。
比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量,借以作为仪器结果分析后质控的参考。
但积压涂片制备和染色不良,常使细胞鉴别发生困难,甚至导致错误结论。
例如,血膜过厚细胞重叠缩小,血膜太薄白细胞多集中于边缘,细胞分布不匀;染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反响异常。
因皮制备厚薄适宜,分布均匀,染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。
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吉姆萨染色液说明书
【产品名称】
吉姆萨染色液
【包装规格】
货号:DM0002
单瓶包装规格分别为:
A液吉姆萨染液:20ml、100ml、250ml、500ml;B液磷酸盐缓冲液:250ml、500ml、5000ml;
每套/盒包装规格分别为:
A液20ml+B液250ml/盒、A液100ml+B液4×250ml/盒、
A液250ml+B液5×500ml/盒、A液500ml+B液5000ml/盒。
【预期用途】
用于组织细胞学染色从而鉴别骨髓和其他造血组织(淋巴结)中的白细胞,还可用于鉴定某些微生物。
【检验原理】
吉姆萨染色原理及结果与瑞氏染色基本相同,吉姆萨染色液(Giemsa stain,又称姬姆萨染色液)对胞浆着色力较强,能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒,着色清晰,但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳,故吉姆萨染色常与瑞氏染色联合使用。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
血细胞染色:吉姆萨染料中含有美蓝和伊红两种染料,前者为碱性,后者为酸性,它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力,从而使其呈现出不同的色调,以便于辨认。
染色体染色:也称G显带,染色体上富舍A-T碱基对的DNA和组蛋白结合紧密,胰酶处理时不易高度抽提,和染料亲和力较强,呈深带;而富含G-C碱基对的区段结合的蛋白质被胰酶抽提,和染料亲和力降低,呈浅带。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分
1、A液吉姆萨染液吉姆萨染料
2、B液磷酸盐缓冲液磷酸盐
【储存条件及有效期】
5℃~35℃环境保存,原包装未开封染色液的有效期为24个月,在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完,每次用后应及时拧紧瓶盖,以免挥发或变质。
【样本要求】
血细胞:要求新鲜全血或EDTA.2K抗凝血。
染色体:中期染色体。
疟原虫:耳垂或指尖采血作薄血膜或厚血膜涂片。
【检验方法】
(一)疟原虫、血细咆染色:
1、血涂片晾干后用甲醇固定;
2、配制吉姆萨染色液:取适量的A1吉姆萨染液和A2磷酸盐缓冲液,按一定比例混合,即为吉姆萨染色液,即配即用;
3、将固定的血涂片置于吉姆萨染色液浸染;
4、浸染后取出用水冲洗;若滴染,冲洗时不能先倒掉染色液,可缓慢从玻片一端冲洗,以防有沉渣沉淀在标本上;
5、干燥,镜检。
(二)染色体染色:
1、将制片标本用胰蛋白酶进行处理;
2、配制吉姆萨染色液:取适量的吉姆萨染液和磷酸盐缓冲液,按一定的比例混合,即为吉姆萨染色液,即配即用;
3、入吉姆萨染色液浸染,干燥,镜检。
【检验方法的局限性】
仅供形态学初检观察染色使用。
【注意事项】
1、血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀,必须充分干燥,否则在染色过程中容易脱落,以免影响染色效果。
2、细胞培养为获得染色体标本的关键,应严防污染。
3、如用滴染法染色,冲洗时不能先倒掉染色液,应以流水冲去,以防有沉渣沉淀在标本。
4、本产品仅用于体外诊断,应由专业人士使用及进行结果的判读。
5、使用前应详细阅读说明书,并做好个人卫生防护,在有效期内使用,生产日期、生产批号和失效日期见包装。
6、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
【基本信息】
备案人/生产企业名称:安徽雷根生物技术有限公司
生产地址:淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房。