黄豆芽和绿豆芽的生化成分分析

黄豆芽和绿豆芽的生化成分分析

摘要：测定果蔬中维C含量、糖含量和蛋白质含量对于其营养价值的研究有着重要意义。通过过氧化物酶的测定，能了解植物体内代谢情况的变化。

关键词：豆芽、维C、糖、蛋白质、含量、酶

前言：如今果蔬作为健康食物被越来越多的人食用并推崇，所以测定果蔬中维C 含量、糖含量和蛋白质含量对于果蔬营养价值的研究有着非常重要的基础意义。过氧化物酶作为植物体内普遍存在的一种酶，与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化密切相关。通过测定过氧化物酶，可以反映某一时期植物体内代谢变化情况。1实验材料和方法：

1.1实验材料：绿豆芽和换豆芽

1.2 实验方法：

1.2.1维生素C的定量测定

1、制备新鲜果蔬液：如洗净新鲜橘子，擦干表面水分，剥去外皮，称20.0g 橘子放入50mL量筒中，加2%草酸液至40mL刻度处（即稀释1倍）。用玻璃棒搅拌，静置10分钟，过滤，滤液即是（若样品中含大量铁，可用8%醋酸溶液提取，可在一定程度上延缓Fe2+还原染料）。

2、染料液装入滴定管中：应驱除滴定管中的气泡，调整好零点。

3、滴定维生素C标准液：吸取1.0mL维生素C标准液放入锥形瓶中，加9mL1%草酸溶液，摇匀，用染料液滴定至微红色保持15秒不褪色即为终点。记下所用去染料液数量，可算出1mL染料相当于多少mg维生素C。

4、滴定样品液：吸取10.0mL样品液放入锥形瓶中，同上操作进行滴定。可做两份，求平均值。

1.2.2总糖及还原糖含量的测定

——蒽酮比色法

1、样品中还原糖的提取和测定

称取1g实验材料，加水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30mL蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。于50℃水浴中保温约0.5h（使还原糖浸出），取出，过滤，取10ml滤出液，定容至100mL。

取1mL最终稀释液置于试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4mL蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。

2、样品中总糖的提取、水解和测定

称取1g实验材料，加水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12mL蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。再向三角烧瓶中加入6mol/L盐酸10mL，搅拌均匀后在沸水浴中水解0.5h，冷却后用20%NaOH 溶液中和至pH呈中性。过滤，取10ml滤出液，定容至100mL。

取1mL总糖的最终稀释液同上法进行还原糖测定。

1.2.3蛋白质含量测定

——考马斯亮兰法

1、标准曲线绘制

取6支试管，按下表加入各试剂。

012345

管号

试剂

100μg/mL牛血清白蛋白溶液／mL 00.20.40.60.8 1.0

蒸馏水／mL 1.00.80.60.40.20

考马斯亮蓝液／mL 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0加入考马斯亮蓝G-250蛋白试剂后，摇匀，放置2min后，在595nm波长下比色测定，记录A

。

595

为纵坐标，绘制标准曲线。

以各管相应标准蛋白质含量（ g）为横坐标、A

595

2、样品制备

称取1g待测植物鲜样置于冰浴上的研钵内，加入1mLH

O或0.05mol/L Tris

2

－HCl缓冲液（pH6.8）研成匀浆，转入离心管，再用2mL水或缓冲液将附着在研钵壁上的研磨样品洗下并全部转入离心管，3500rpm离心15～20min，其上清液即为蛋白质的提取液，供分析用。

3、样品测定

试管中加自制蛋白质样品1.0mL ，再加入5.0mL考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀，放置5min后，在595nm波长下比色，记录A

。

595

根据所测A595从标准曲线上查得蛋白质含量。

1.2.4过氧化物酶分析

1.2.4.1过氧化物同工酶的分离（聚丙烯酰胺凝胶电泳）

1.贮液配制

按上表配制贮液，但应注意

（1）配好的贮液用棕色瓶盛装置冰箱内保存，可放1～2个月。

（2）过硫酸铵应当天配制。

2. 电泳槽的安装

垂直板电泳槽的式样很多，目前流行的是用有机玻璃做的两个“半槽”组成的方形电泳槽，中间夹着凝胶模子，是由成套的两块玻璃板装入一个用硅酮橡胶做成的模套而构成，由硅酮橡胶套决定两玻璃板之间距离约为1.5mm，形成一个“胶室”，胶就在这两板之间的胶室内聚合成平板胶。当凝胶模子与两半槽固定在一起后，凝胶槽子两侧形成前后两个槽，供装电极缓冲液和冷凝管用。

将两块玻璃板用去污剂洗净，再用蒸馏水冲洗，直立干燥（勿用手指接触玻璃板面，可用手夹住玻璃板的两旁操作），然后正确放入硅胶条中，夹在电泳槽里，按对角线顺序旋紧螺丝，注意用力均衡以免夹碎玻璃板。安装好电泳槽用pH8.9缓冲液配制的1.5％琼脂溶液封底，待琼脂凝固后即可灌制凝胶。

3. 制胶

将贮液由冰箱取出，待与室温平衡后再配制工作液。

（1）配制分离胶

A 3mL

C 6mL

0.14%过硫酸铵12mL

水3mL

TEMED 15μL

将分离胶沿长玻璃板加入胶室内，小心不要产生气泡，加至距短玻璃板顶端3cm处，立即小心地覆盖2～3mm的水层，静置待聚合（约40min），当胶与水层的界面重新出现时表明胶已聚合。

（2）配制浓缩胶

B 1.5m L

D 3m L

E 1.5m L

F 6m L

TEMED 18μL

注：TEMED在灌胶前加，或者加完之后放在黑暗的环境中。

先倒掉分离胶上的水层，用吸水纸将水层吸干，但不要弄坏分离胶。立即加入浓缩胶，插入梳子（即样品槽模板），待胶凝后，小心取出梳子。将稀释10倍的电极缓冲液倒入两槽中，上槽（短板侧）缓冲液要求没过样品槽，下槽（长板侧）缓冲液要求没过电极，备用。

4．样品的制备

称取果蔬2g，剪碎，放入研钵中，加适量石英砂及5mL的样品提取液研磨成匀浆，置于离心管中，研钵用少量提取液清洗，洗液并入离心管，以14 000r/min 的转速离心15min，取上清液定溶至10mL，贮存于低温冰箱备用。

5．点样

先向上槽液中加入0.1%溴酚蓝3～4滴，搅匀。用微量注射器（50μL）吸取10～20μL样液，在浓缩胶上层点样。点样时须小心，防止样品液扩散。

6．电泳