(药物分析实验课件)HPLC测定头孢氨苄
高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量
高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量摘要：在医学领域当中，孢氨苄胶囊属于一种半合成的抗生素，在临床治疗过程中具有突出的疗效，由于其具有良好的稳定性，而且内部不含有过多的毒性成分，在治疗过程中，病人也不会有副作用产生，因此得到了广泛的应用，该药品蛋白结合率较低，可以稳定葡萄球菌产生的青霉素酶，同时可以忍受革兰氏阳性菌产生的内酰胺酶。
以往经常使用碘量法测量药品的成分，但该方法操作繁琐，而且费时费力，检验过程中容易受到外在因素的影响，因此在药品检测过程中很少使用这种方法，而是使用高效液相色谱法。
关键词：高效液相色谱法；头孢氨苄胶囊；药品检测复方头孢氨苄胶囊主要有头孢氨苄和甲氧苄啶两种成分组成，由于该药品是通过化学加工过的方式制成，因此传统方法在检验的过程中会受到外在因素的影响。
头孢氨苄和甲氧苄啶共同使用可以起到断细菌在生长繁殖的作用而且可具有良好的抗菌作用，其抗菌性能要远远优于头孢氨苄。
为了能够了解该药品内部组成结构以及详细成分，本文采用高效液相色谱法，以乙酰苯胺为内标测定其含量，这种检测方法不仅操作便捷，检测结果的准确性能够得到保证，而且可以对其进行重复检测。
1仪器与试药1.1仪器由于该药品属于化学产物，仅仅依靠人力无法分辨其内部成分，因此必须使用相关的检测仪器才能够保证检测结果的准确性，常用的检测仪器有DIONEX P680AISO型高效液相色谱仪、UVD17OU型HPLC检测器、XS 225A分析天平。
除了检测仪器之外，还需要用到一些试剂以及药品，例如色谱纯，分析过程中用到的甲醇以及双蒸水，为了保证检测结果具有说服力，因此需要选取某些药物作为对照品，最后需要头孢氨苄胶囊，以上所述的药品以及检测器械其规格和质量必须与有关机构指定的标准相符合。
2方法与结果2.1色谱条件与系统适应性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂水-甲醇-3.85%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相；检测波长为254nm；理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500；2.2对照品储备液的制备根据检测要求，选取适量的头孢氨苄对照液，记录其重量放置于专门的容器当中，向其中加入流动液体，达到稀释对照液的目的，摇匀，将稀释过后的对照液储存起来。
高效液相色谱法测定头孢氨苄的含量
赵远征 钱小平 李珠华
（ 大连市药品检验所 １６２） １０１
头孢氨苄即先锋 号， 其含量测定现多采用剩余 碘量法［］ 该法的测定结果受多种因素的影响［ １ ， ， ２ ３ ］如
水解时 间、 温度 ｐ 、 Ｈ 放置时 间、 碘量 等）实验条件须 ，
１０ｍ ０ ０ ｌ）
（ 样品和试药 内标物： 二） 咖啡因； 对照品： 头孢 氨苄， 中国药品生物制品检定所， 批号 ８ ００ ６ ８３样
品： 检的进 口样品 ， 送 经试验 ， 证明样品溶 液在室温下
严格控制。本文采用反相高效液相色谱法， 以咖啡因
为 内标 ， 用峰面积 比值 对头孢氨苄进 行定量测定 ， 结 果令人满意。
２ 小时内稳定； ４ 乙腈、 乙酸钠、 乙酸均为 Ａ Ｒ重蒸馏
水。
实验部分
（ 仪器和色谱条件 Ｌ －Ａ高效 液相色谱仪 ， 一） Ｃ４ Ｓ Ｄ ２ Ｓ紫外检 测器 ，－２ Ｘ 数据 处理机 （ Ｐ －Ａ ＣＲ Ａ 日本 岛
１ ６０ １ ２１
Ｃ ｐａｅｉ ｗ ｓ ｔ ｍｉｅ ｂ ｈｇ ｐｒｏｍ ｎｅ ｅｈ ｌ ｎ ａ ｄ ｅ ｎｄ ｘ ｅｒ ｙ ｉ ｈ ｆｒ ａ ｃ ｅ ｌ ｕｄ ｒｍ ｔ ｒ ｈ ｕｉｇ ａａｙｉ ｌ ｕ （０ ｉ ｉ ｃ ｏ ａｏ ａ ｙ ｎ ａ ｎｌｔａ ｃｌｍｎ ｑ ｈ ｇｐ ｓ ｎ ｃ ｏ ３
蕃茄红素（ｆ ．４ 、 罗 卜 Ｒ＝０６ Ｒ＝０４ 胡 素 ｆ ．６及几乎停
准确称取 １０ｇ ．０蕃茄酱样品和事先研细的５ 无 ｇ 水硫酸钠及０５ 无水碳酸钠混和， ．ｇ 在研钵中研磨均
匀 ， 加入 ５ ｌ 然后 ｍ 石油醚 ６ ９ ０ ０ ， 研磨数分钟后 ，
留在原点的其它色素分开， 并以双波长薄层扫描测定
差示分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量
实验一差示分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量一、目的要求1.掌握差示分光光度法消除复方制剂干扰组分的原理。
2.熟悉差示分光光度法的基本测定方法。
二、基本原理差示分光光度法（简称ΔA法）是利用在两种不同pH介质中或经适当的化学反应后，供试品中待测组分发生了特征性的光谱变化，而干扰组分不受这些变化的影响，光谱行为不发生改变。
取两份相等的供试溶液，用两种不同pH的介质处理或经适当化学反应后，稀释至同样浓度，一份置样品池中，另一分置参比池中，由于样品池和参比池中干扰物浓度相等，因此干扰物吸收度的差值为零（即ΔA＝0），供试溶液的吸收度差值（ΔA值）只与被测物浓度成正比，从而消除了干扰。
可以用标准曲线法或标准对比法计算出待测组分的含量。
分光光度法既保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无须事先分离，并能消除干扰。
复方头孢氨苄胶囊由头孢氨苄与甲氧苄啶组成，在酸性溶液和碱性溶液中，甲氧苄啶的紫外吸收光谱发生改变，而头孢氨苄的吸收光谱基本不变，因此不经分离可用差示分光光度法直接测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量。
三、仪器与试剂紫外－可见分光光度计，50mL量瓶，100mL量瓶；甲氧苄啶对照品，头孢氨苄对照品，复方头孢氨苄胶囊，醋酸，0.01mol/L氢氧化钠液。
四、操作步骤1. 对照品溶液的配制分别取甲氧苄啶对照品约25mg ，头孢氨苄对照品约125mg ，精密称定，分别置于50mL 量瓶中，加稀醋酸2mL 溶解后加水稀释至刻度，摇匀，各精密吸取5mL ，2份，分别置于100mL 量瓶中，一份用水稀释至刻度，另一份用0.01mol ／L 氢氧化钠稀释至刻度。
2. 差示吸收曲线的绘制将两种不同介质的头孢氨苄溶液和甲氧苄啶溶液分别以相应 为空白，在200～350nm 波长范围扫描，绘制吸收光谱。
将上述用水稀释的对照品溶液置于参比池中，用0.01mol/L 氢氧化钠稀释的溶液置样品池中，绘制甲氧苄啶和头孢氨苄的差示光谱。
rp-hplc法测定头孢羟氨苄干混悬剂中头孢羟氨苄的含量及有关物质
〔５０〕 潘海敏ꎬ方慧华ꎬ严士海 鬼针草总黄酮对体外血小板聚集的影
响〔 Ｊ〕 医药导报ꎬ２０１１ꎬ３０(１０) :１２７３￣１２７４
药物检验与分析
ＲＰ￣ＨＰＬＣ 法测定头孢羟氨苄干混悬剂中头孢羟氨苄的含量及有关物质
张 锋( 山西农业大学生命科学学院ꎬ山西太谷 ０３０８０１)
摘要:目的 建立测定头孢羟氨苄干混悬剂中头孢羟氨苄的含量及有关物质的方法ꎮ 方法 采用 Ｗａｔｅｒｓ Ｃ１８ 色谱柱(３ ９ｍｍ × １５０ｍｍꎬ５μｍ) ꎻ
〔３０〕 程新燕 鬼针草总黄酮对 Ｄ￣ＧａｌＮ 致急性肝损伤小鼠的保护作
〔３１〕 孙海燕ꎬ付庆云ꎬ陈颖ꎬ等 鬼针草总黄酮对小鼠急性肝损伤的
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胞因子的影响〔 Ｊ〕 中国药理学通报ꎬ２００７ꎬ(０７) :８８７￣８９１
〔３７〕 孙旭群ꎬ陈飞虎ꎬ吴繁荣ꎬ等 鬼针草总黄酮对大鼠免疫性肝纤
Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ
作者简介:张 锋ꎬ男(１９７８ － ) ꎬ硕士ꎬ实验师ꎬ从事实验室管理工作ꎮ
６７
海峡药学 ２０１９ 年 第 ３１ 卷 第 １２ 期
胞 ＰＩ３Ｋ / ＡＫＴ１ / ＧＬＵＴ４ 信号 通路的调控作用 〔 Ｊ〕 实 用 医 学 杂
志ꎬ２０１６ꎬ３２(２４) :３９９４￣３９９８
〔４７〕 黄桂红ꎬ邓航ꎬ付翔ꎬ等 鬼针草醇提物对糖尿病小鼠糖耐量及
药物分析实验：实验六 HPLC测定头孢氨苄胶囊的含量
五、注意事项
• 1．将配好的流动相接到流路中，开启泵起动开关，检测 是否漏液
• 2．流动相必须预先脱气，可用超声波、机械真空泵或水 力抽气泵脱气。
• 3．严格防止气泡进入系统，吸液软管必须充满流动相， 吸液管的过滤器始终浸在溶剂中，如变换溶剂，必须先停 泵，再将过滤器移到新的溶剂瓶内，然后才能开泵使用。
实验六 HPLC测定头孢氨苄胶囊的含量
一、实验目的
• 学习高效液相色谱分析的原理 • 学习外标法测定组分含量的方法 • 了解高效液相色谱仪的结构及正确使用方
法
二、实验原理
高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同 极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、 缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱， 经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内， 在柱内依据不同原理分离后，各成分先后 进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪 记录，从而达到分离分析的目的。
• 4．溶剂的变换必须注意溶剂的极性和互溶性。
• 5. 爱护实验器材
实验报告
1、 按要求填好实验报告，下次实验课前班 长统一收上来。
2、实验课成绩主要包括课堂表现和实验报告 两大部分。
• 色谱仪：岛津高效液相色谱仪 • 色谱柱：ODS柱（4.6250mm，5m） • 柱温：室温 • 流动相：水-甲醇-3.86%醋酸钠溶液-4%
醋酸溶液（742：240：15：3） • 检测波长:25（约相当于头孢氨苄0.1g），置 100ml量瓶中，加超纯水溶解，定容，摇匀，滤 纸过滤，取滤液10ml，置50ml量瓶中，用超纯水 定容。摇匀后用滤头过滤1-2ml溶液。取20µl注入 色谱仪，记录色谱图。
高效液相色谱流程
差示分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量
实验一差示分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量一、目的要求1.掌握差示分光光度法消除复方制剂干扰组分的原理。
2.熟悉差示分光光度法的基本测定方法。
二、基本原理差示分光光度法（简称ΔA法）是利用在两种不同pH介质中或经适当的化学反应后，供试品中待测组分发生了特征性的光谱变化，而干扰组分不受这些变化的影响，光谱行为不发生改变。
取两份相等的供试溶液，用两种不同pH的介质处理或经适当化学反应后，稀释至同样浓度，一份置样品池中，另一分置参比池中，由于样品池和参比池中干扰物浓度相等，因此干扰物吸收度的差值为零（即ΔA＝0），供试溶液的吸收度差值（ΔA值）只与被测物浓度成正比，从而消除了干扰。
可以用标准曲线法或标准对比法计算出待测组分的含量。
分光光度法既保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无须事先分离，并能消除干扰。
复方头孢氨苄胶囊由头孢氨苄与甲氧苄啶组成，在酸性溶液和碱性溶液中，甲氧苄啶的紫外吸收光谱发生改变，而头孢氨苄的吸收光谱基本不变，因此不经分离可用差示分光光度法直接测定复方头孢氨苄胶囊中甲氧苄啶含量。
三、仪器与试剂紫外－可见分光光度计，50mL量瓶，100mL量瓶；甲氧苄啶对照品，头孢氨苄对照品，复方头孢氨苄胶囊，醋酸，0.01mol/L氢氧化钠液。
四、操作步骤1. 对照品溶液的配制分别取甲氧苄啶对照品约25mg ，头孢氨苄对照品约125mg ，精密称定，分别置于50mL 量瓶中，加稀醋酸2mL 溶解后加水稀释至刻度，摇匀，各精密吸取5mL ，2份，分别置于100mL 量瓶中，一份用水稀释至刻度，另一份用0.01mol ／L 氢氧化钠稀释至刻度。
2. 差示吸收曲线的绘制将两种不同介质的头孢氨苄溶液和甲氧苄啶溶液分别以相应 为空白，在200～350nm 波长范围扫描，绘制吸收光谱。
将上述用水稀释的对照品溶液置于参比池中，用0.01mol/L 氢氧化钠稀释的溶液置样品池中，绘制甲氧苄啶和头孢氨苄的差示光谱。
头孢氨苄胶囊的质量分析
谢 谢 / THANKS
制作人：吴爽
实训
四、注意事项
（三）滤膜应不大于 0.8 μm，并使用惰性材料制成的滤器，以 免吸附活性成分或干扰分析测定。 （四）采用对照品比较法测定供试品溶液的浓度时，需分别配制 供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为 供试品溶液中被测成分规定量的 100%±10％，所用溶剂也应完 全一致。
实训
三、实验内容
（一）检查 溶出度 经 45 分钟时，取溶液适量，立即用适当的微孔滤膜滤 过，自取样至滤过应在 30秒种内完成。精密量取续滤液适量 V1ml，用溶出介质 V2 ml 定量稀释制成每 1ml 中约含 25μg 的溶液，作为供试品溶液，照紫外-可见分光光度法（附录
ⅣA），在 262nm 的波长处测定吸光度 AX；另精密称取头孢
实训
三、实验内容
（一）检查
溶出度 则每粒胶囊的溶出量为（V×cX×V2／V1）g，6粒胶囊
中，每粒胶囊的溶出量按标示量计算（即溶出度），均不低于 规定的限度，即标示量的 80%，应符合规定。
溶出度 %
溶出量 标示量
100
%
实训
三、实验内容
（二）含量测定 照高效液相色谱法（附录Ⅴ D）测定。 1. 色谱条件与系统适用性试验 避光操作。照高效液相色谱法 (附录Ⅵ D)测定。 （1）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂；以水-甲醇- 3.86％ 醋酸钠溶液- 4％醋酸溶液（742 : 240 : 15 : 3）为流动相；检测波长为 254nm；取供试品溶液适 量，在 80℃ 水浴中加热 60 分钟，冷却，取20μl注入液相色谱 仪，记录色谱图，头孢氨苄峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
氨苄对照品适量，加溶出介质溶解并定量稀释制成每 1ml 中
HPLC法测定头孢氨苄胶囊杂质F的研究
第一作者简介：唐秋菊，工程师；研究方向：药物质量。
Ｔｅｌ：１３６５８３７２２８５：Ｅ ｍａｉｌ：９８０６３６２１７＠ｑｑ ｃｏｍＨＰＬＣ法测定头孢氨苄胶囊杂质Ｆ的研究唐秋菊，夏晟（重庆科瑞制药（集团）有限公司，重庆４０００００）摘要 目的：建立测定头孢氨苄胶囊中杂质Δ２ 头孢氨苄（杂质Ｆ）含量的方法。
方法：采用ＨＰＬＣ法，色谱条件为：采用手性柱ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＲＡＤ Ｈ柱；以０ ７８％磷酸二氢钠溶液（７ ８ｇ磷酸二氢钠溶于１Ｌ水中，用磷酸调ｐＨ至４ ０）为流动相Ａ和０ ７８％磷酸二氢钠（ｐＨ４ ０） 乙腈＝５５∶４５为流动相Ｂ；采用梯度洗脱，流速为１ ０ｍＬ·ｍｉｎ－１；于２２０ｎｍ处检测。
结果：头孢氨苄和杂质Ｆ在此条件下分离度良好，分离度大于１０ ０。
结论：经方法学验证，本法可用于对头孢氨苄原料及胶囊中杂质Ｆ的质量控制。
关键词：ＨＰＬＣ；头孢氨苄；手性；杂质；质量中图分类号：Ｒ９２１ ２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－３６５６（２０２０）－２－０１２４－６ｄｏｉ：１０ １９７７８／ｊ ｃｈｐ ２０２０ ０２ ００７ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｉｍｐｕｒｉｔｙＦｉｎＣｅｆａｌｅｘｉｎＣａｐｓｕｌｅｓｂｙＨＰＬＣＴＡＮＧＱｉｕｊｕ，ＸＩＡＳｈｅｎｇ（ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＫｅｒｕｉＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ ，Ｌｔｄ ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆΔ２ ｃｅｆａｌｅｘｉｎ（ｉｍｐｕｒｉｔｙＦ）ｉｎＣｅｆａｌｅｘｉｎＣａｐｓｕｌｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｔｅｓｔｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎａＣＨＩＲＡＬＰＡＫＲＡＤ Ｈｃｏｌｕｍｎ ０ ７８％ｓｏｄｉｕｍｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓ ｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒ（ｄｉｓｓｏｌｖｅ７ ８ｇｓｏｄｉｕｍｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈａｔｅｗｉｔｈ１Ｌｗａｔｅｒ，ｔｈｅｎａｄｊｕｓｔｐＨａｓ４ ０ｗｉｔｈｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ）ｗａｓｕｓｅｄａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＡ，ａｎｄ０ ７８％ｓｏｄｉｕｍｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ｐＨ４ ０） ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（５５∶４５）ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅＢ Ｔｈｅｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅｗａｓｕｓｅｄ Ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１ ０ｍＬ·ｍｉｎ－１，ａｎｄｔｈｅＵＶｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓａｔ２２０ｎｍ Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＣｅｆａｌｅｘｉｎａｎｄｉｍｐｕｒｉｔｙＦｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｗｅｌｌｕｎｄｅｒｔｈｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓｍｏｒｅｔｈａｎ１０ ０ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙｖａｌｉｄａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅｅｓ ｔａｂｌｉｓｈｅｄｍｅｔｈｏｄｃａｎｂｅｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｃｏｎｔｒｏｌｏｆｉｍｐｕｒｉｔｙＦｉｎｄｒｕｇｓｕｂｓｔａｎｃｅｃｅｆａｌｅｘｉｎａｎｄＣｅｆａｌｅｘｉｎＣａｐｓｕｌｅｓ Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ｃｅｆａｌｅｘｉｎ；ｃｈｉｒａｌｉｔｙ；ｉｍｐｕｒｉｔｙ；ｑｕａｌｉｔｙ 头孢氨苄（Ｃｅｆａｌｅｘｉｎ）为β 内酰胺类抗生素。
HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的测量不确定度评定
HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的测量不确定度评定目的：对HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的测量不确定度进行分析和评定。
方法：取适量头孢氨苄制成溶液，将其作为本次研究对照品；与此同时，取适量头孢氨苄胶囊（巢湖中辰药业有限公司，国药准字：H34021123）制成溶液，将其作为本次研究观察品。
样本制备完成后，建立HPLC法测定数学模型，根据数学模型寻找影响不确定度的因素并对相关不确定度分量进行评定。
结果：通过对各分量的相对标准不确定度进行分析后可以得出，HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的合成不确定度以及扩展不确定度（P=95%，K=2）。
结论：本次研究所建立的不确定度计算方法在测定HPLC法判断头孢氨苄胶囊含量的不确定度的效果方面有较高使用价值，值得推广。
标签：HPLC法；头孢氨苄胶囊；不确定度；评定头孢氨苄胶囊属于抗生素复方制剂的一种，常被临床用于耐青霉素的葡萄球菌、链球菌等感染的治疗[1]。
在对头孢氨节胶囊的质量和临床治疗效果进行评价时，对其含量的测定是前提和关键，大量研究叼证实，头孢氨苄胶囊含量测定准确性的高低，不仅将直接影响到药品质量的评定，同时还将直接关系到患者用药安全性的高低。
基于此，本文以相关文献为参考，对HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量过程中的相关不确定因素进行了分析和合成，以评定其含量的不确定度。
现报告如下。
1 方法制备对照品溶液：将适量（24-25mg）的头孢氨苄（中国药品生物制品检定所提供，批号：1300408-200209，纯度：94.2%）放置在容量为25mL的量瓶中，静置片刻后，将适量流动相（水-3.86%醋酸钠溶液一甲醇一4%醋酸溶液，比例分别为742：15：240：3）加入量瓶之中，然后对量瓶内液体进行超声处理，时长控制在5-8min之间，至液体溶解且全部混合均匀即可；将溶解完成的量瓶于室温内放置保存，与此同时，在其中加入适量流动相至液体稀释至刻度，摇匀；从量瓶中精密量取10mL溶液至容量为50mL的量瓶之中，继续加入适量流动相稀释至刻度，摇匀，制备完成。
14 实验十四 头孢氨苄胶囊含量测定--完整版
实验十四 头孢氨苄胶囊的含量测定
一．实验目的：
1、掌握高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊含量的原理及操作技术
2、熟悉外标法计算药物含量的方法及结果判断
3、了解高效液相色谱法在药物定量分析中的应用 二．实验原理：
《中国药典》现行版采用外标法测定头孢氨苄胶囊的含量。
标示量（%）%100⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯=
-
S
m A W
D V A C R X R
本品含头孢氨苄应为标示量的90.0%~110.0% 三．实验仪器和试剂 1. 仪器
高效液相色谱仪、分析天平、量瓶、滤纸、漏斗、移液管、10微升进样器、铁架台、 2. 试剂
色谱纯甲醇、醋酸、醋酸钠 四、实验内容
取本品10粒，精密称定，除去内容物后，精密称定胶囊壳的重量，计算平均装量。
取内容物混合均匀，精密称取适量（约相当于头孢氨苄0.1g ），置100ml 量瓶中，加流动相适量，充分振摇，使头孢氨苄溶解，再加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml ，置50ml 量瓶中，再加流动相稀释至刻度，摇匀，取10微升注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密量取头孢氨苄对照品适量（约0.1g ），同法测定。
按外标法以峰面积计算供试品头孢氨苄标示量的百分含量。
五、结果与分析
六、注意事项
1. 流动相及试液均应脱气和过滤。
2. 对照品溶液与供试品溶液每份至少重复进样2次，有全部结果求得平均值，RSD一般不应大于1.5%。
七、思考题
1. 头孢菌素类抗生素除用高效液相色谱法测定含量外，还可用其他哪些方法？各方法有何优缺点。
2. 简述外标法定量的原理、方法及特点。
头孢氨苄胶囊的含量测定
4.流动相应严格脱气（有些仪器附有脱气装置，可不必脱气），并经滤 过，流动相导入处的砂芯滤器一定要接好，防止颗粒状物导入系统中。 流动相中含缓冲溶液或酸、碱时，应注意PH，一般溶液的PH控制在2-8 范围内。缓冲液、酸碱和含氯溶剂切勿在泵内长时间停留，以防止泵的 密封环和垫片受到腐蚀而引起漏液现象。适用缓冲液后，依次用水、有 机溶剂洗尽。分析过程中应注意流动相的补充，避免贮液瓶内流动相排 空。在更换流动相时应注意溶剂的互溶性。 5.使用泵时，应设定仪器允许的权限压力和最大流量，防止仪器内部受 到破换。开机时应让机外塑料管道充满流动相的溶剂，并松掉泄放阀开 关，使输液系统作轻载排吸流动相，并可加大流量，赶掉整个系统腔体 的气泡，以免因气泡造成无法吸液或脉动过大。 6.装色谱柱时，应注意方向，流动方向不可安反，以免影响柱效。
专属性试验 在上述色谱条件下，分别吸取对照品溶液、供试品溶液 和阴性空白溶液各10 μl进样，记录色谱图，观察样品峰 的保留时间是否有杂峰。 仪器精密度试验 精密量取对照品储备液1.0 ml 置10 ml量瓶中，加流动 相至刻度（即线性关系考察中的第三个对照品溶液）， 重复进样5次，每次10 μl，在上述色谱条件下进行分析， 计算峰面积的RSD，要求RSD不大于2%。 含量计算
头孢氨苄胶囊的含量 测定
医药系药学专业团队：胡琦兰
┏
实训目标┛
掌握高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊含量 的原理及操作技术 熟悉外标法计算药物含量的方法及结果判断。 了解高效液相色谱法在药物定量分析中的应 用。
【仪器设备】
仪器：高效液相色谱仪、分析天平 试药：色谱纯、分析纯的甲醇、双蒸水、头孢氨苄对照品、 头孢氨苄胶囊。 采用外标法测定头孢氨苄胶囊的含量。
HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量
HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量摘要目的：介绍一种用反相高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的方法。
方法：以Shim-Pack CLC-ODS(150mm×6m,10μm)为色谱柱，甲醇-水(70∶30)为流动相，检测波长262nm,外标法定量。
结果：头孢氨苄浓度线性范围为100～900μg/ml,相关系数r=0.9999,方法回收率为99.9%,RSD为0.72%。
结论：方法简便快速，结果准确可靠，可作为头孢氨苄制剂的质量控制方法。
关键词头孢氨苄；高效液相色谱法Determination of capsulas cefalexini by HPLCZhou Jing′an(Zhou JA)Quzhou Medicine Checking Bureau,Zhejiang 324002ABSTRACT OBJECTIVE：Introduce a method of determining cefalexini capsulaein by a reversed-phase HPLC method.METHOD:The seperation was performed with an analytical shim-pack CLC-ODS column(150mm×6mmid,10μm).The mobile phase was methanol water(70∶30).The UV detector was set at 262mm.RESULTS:The linear range was from 100～900μg/ml(r=0.9999).The recovery was 99.7%.The relative standard deviation was 0.47%.CONCLUSION:The method wassimple,accurate,reliable,and can be used for the quality control of capsulae cefalexini.KEY WORDS cefalexini,HPLC头孢氨苄(Cephalexin)又称先锋Ⅳ，主要用于耐青霉素的葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、大肠杆菌等的感染，是临床上常用抗生素之一。
HPLC法测定头孢氨苄颗粒中Δ^2异构体和降解杂质
ａｒｅｃｏｌｉｎｅａｎａｌｇｅｓｉａ〔Ｊ〕Ｆａｒｍａｃｏ，２００１，５６（５７）：３８３３８５ 〔９〕吕俊辰，弓宝，孙佩文 槟榔药用和食用安全性研究概况〔Ｊ〕中
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其机制〔Ｊ〕中国中西医结合消化杂志，２００７，２（７７）：７７８０ 〔７〕李习雄，胡冠英，张三印 槟榔毒性机制的研究进展〔Ｊ〕中国实
作者简介：田爱俊，女（１９８２－）。职称：工程师。从事药物分析。Ｅｍａｉｌ：ｓｈｅｎｌｉｎ９６６２＠１６３ｃｏｍ 通讯作者：侯金才，男（１９６９－）。学历：博士。职称：硕士生导师。从事新药开发与项目管理。Ｔｅｌ：０３１６５７５９８６６，Ｅｍａｉｌ：ｊｉｎｃａｉｈｏｕ＠１２６ｃｏｍ
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颗粒质量控制和质量与疗效一致性评价研究。
关键词：头孢氨苄；降解杂质；Δ２异构体
中图分类号：Ｒ９２７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６３７６５（２０１９）０１０１１９０００５６０４
HPLC法测定头孢氨苄胶囊的含量
HPLC法测定头孢氨苄胶囊的含量
程成;何健梅
【期刊名称】《华西药学杂志》
【年(卷),期】2000(15)4
【摘要】目的 :建立头孢氨苄胶囊的含量测定方法。
方法 :采用反相高效液相外标法测定。
结果 :平均回收率为99 1 4 % ,RSD为 0 87%。
线性范围为 1 0～ 2 50 μg·ml 1 (r=0 .9999)。
最低检测限可达 0 1ng。
结论 :该法快速准确 ,灵敏度高。
【总页数】2页(P314-315)
【关键词】高效液相色谱法;头孢氨苄胶囊;含量测定
【作者】程成;何健梅
【作者单位】成都市药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R978.11;R927.2
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1.HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的不确定度分析 [J], 汪正宇
2.HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的测量不确定度评定 [J], 孙立乾;
3.HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的测量不确定度评定 [J], 孙立乾
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HPLC测定头孢氨苄及其胶囊的含量
HPLC测定头孢氨苄及其胶囊的含量
黄老金
【期刊名称】《广西医学》
【年(卷),期】1996(018)001
【总页数】3页(P85-87)
【作者】黄老金
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R978.11
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5.HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的测量不确定度评定 [J], 孙立乾
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HPLC法测定头孢氨苄片的含量
HPLC法测定头孢氨苄片的含量
冯维荣;陈晓雪;潘红芳
【期刊名称】《黑龙江医药》
【年(卷),期】1999(12)6
【摘要】本文对头孢氨苄片的含量测定方法进行了研究,利用HPLC法测定其含量,本方法操作简单,结果准确,能有效地控制其质量。
【总页数】2页(P323-324)
【关键词】头孢氨苄;HPLC;含量测定;片剂
【作者】冯维荣;陈晓雪;潘红芳
【作者单位】黑龙江省药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R978.11;R927.2
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实验报告
1、 按要求填好实验报告，下次实验课前班 长统一收上来。 2、记录测样的色谱峰出峰时间、峰面积；并 将色谱图打印出来贴在实验
四、含量测定
装量差异（10粒）
精密称取适量（约相当于头孢氨苄0.1g），置 100ml量瓶中，加超纯水溶解，定容，摇匀，滤纸过 滤，取滤液10ml，置50ml量瓶中，用超纯水定容。 摇匀后用滤头过滤1-2ml溶液。取20µl注入色谱仪， 记录色谱图。 另取头孢氨苄对照品适量，同法定容，按外标法 以峰面积计算供试品C14H17N2O4S的含量。
HPLC测定头孢氨苄胶囊的含量
一、实验目的
学习高效液相色谱分析的原理 学习外标法测定组分含量的方法
了解高效液相色谱仪的结构及正确使用 方法
二、实验原理
高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同 极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、 缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱， 经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内， 在柱内依据不同原理分离后，各成分先后 进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪 记录，从而达到分离分析的目的。
五、注意事项
1．将配好的流动相接到流路中，开启泵起动开关，检测 是否漏液 2．流动相必须预先脱气，可用超声波、机械真空泵或水 力抽气泵脱气。 3．严格防止气泡进入系统，吸液软管必须充满流动相， 吸液管的过滤器始终浸在溶剂中，如变换溶剂，必须先停 泵，再将过滤器移到新的溶剂瓶内，然后才能开泵使用。 4. 爱护实验器材, 5. 去HPLC室测样品时，请将各自的贵重物品随身携带。
高效液相色谱流程
外标法
本法要求能准确地定量进样，配置一系列已 知标准液，在同一操作条件下，按同量注 入色谱仪，测量其峰面积（或峰高），作 峰面积与浓度的标准曲线，然后在相同条 件下，注入同量样品溶液，测量待测组分 的峰面积，根据标准曲线，计算样品中待 测组分的浓度。
三、实验方法
色谱仪：岛津高效液相色谱仪 色谱柱：ODS柱（4.6250mm，5m） 柱温：室温 流动相：水-甲醇-3.86%醋酸钠溶液-4% 醋酸溶液（742：240：15：3） 检测波长: 254nm。