实验一植物体内游离脯氨酸含量的测定
实验：植物体内游离脯氨酸含量的测定
实验：植物体内游离脯氨酸含量的测定摘要：本实验采用比色法对植物体内游离脯氨酸含量进行了测定。
首先将草莓叶片样品经过水浴加热提取液体，然后通过硫酸和丙酮的共同作用使游离脯氨酸转化为紫色的脯氨酸-丙酮复合物。
测定复合物的吸光度，通过标准曲线得出样品中的游离脯氨酸含量。
实验结果表明，草莓叶片中的游离脯氨酸含量为3.87μg/g。
引言：脯氨酸是一种非常重要的代谢产物，在植物生长和逆境适应中都扮演着重要角色。
在逆境胁迫下，植物体内会产生大量的脯氨酸，起到保护细胞膜和抗氧化等作用。
因此，对植物中脯氨酸的含量进行准确测定具有重要意义。
材料与方法：实验材料：草莓叶片样品、95%的乙醇、2%的硫酸溶液、5%的丙酮溶液、比色管、恒温水浴、分光光度计实验步骤：1.称取0.2g新鲜草莓叶片样品，加入10ml 95%的乙醇，放入恒温水浴中，60℃水浴1小时。
2.将提取液过滤，取上清液转移到10ml量筒中，用96%的乙醇补至刻度。
3.取出2ml的标准液注入比色管中，分别加入0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml的氢氧化钠溶液，用96%的乙醇补至刻度，充分混合。
4.在每个标准管中加入0.5ml的2%硫酸溶液和1ml的5%丙酮溶液，立即迅速搅拌均匀。
5.将每个标准管与草莓叶片提取液比色管同时放置于25℃的水浴中，15min后，分别测定其吸光度。
结果与分析：标准曲线绘制如图1所示，其中R2为0.998。
测得草莓叶片提取液的吸光度为0.287。
从标准曲线上查得对应的游离脯氨酸含量为3.87μg/g。
绘制标准曲线：游离脯氨酸含量/μg/mL 吸光度0 020 0.139100 0.664结论：本实验采用比色法测定了草莓叶片中游离脯氨酸的含量为3.87μg/g。
该方法操作简便、准确性高，可用于多种植物样品中脯氨酸含量的测定。
最新植物生理指标测定方法
实验一植物叶绿素含量的测定（分光光度法）(张宪政，1992)一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，则反之。
二、材料、仪器设备及试剂试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）三、实验步骤称取剪碎的新鲜样品0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直至无绿色为止。
把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm和645nm下测定吸光度。
四、实验结果按计算丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的计算】叶绿素a的含量（mg/g）=（12.71⨯OD663– 2.59⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(22.88OD645– 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(8.04⨯OD663+20.29⨯OD645) V/1000*W 按Inskeep公式叶绿素a的含量（mg/g）=（12.63⨯OD663– 2.52⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(20.47OD645– 4.73OD663) V/1000*W叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(7.90⨯OD663+ 17.95⨯OD645) V/1000*W 注：1、叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用率【1】比如阳生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较大【2】阴生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较小2、丙酮-------熔点:-94℃；沸点:56.48℃；是一种无色透明液体，有特殊的辛辣气味易溶于水和甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、吡啶等有机溶剂.下一步实验方法比较【1】95%乙醇直接提取（√）【2】95%乙醇加热提取（冯瑞云，1985）【3】无水酒精和80%丙酮等体积混合提取实验二、不良环境对植物细胞膜的伤害（(张宪政，1992)）一、原理植物组织在受到各种不利的环境条件（如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染）危害时，细胞膜的结构和功能首先受到伤害，细胞膜透性增大。
实验三十六 植物体内游离脯氨酸的测定,更改
实验三十六植物体内游离脯氨酸的测定,更改本实验旨在测定植物体内游离脯氨酸的含量。
脯氨酸是一种常见的非蛋白氨基酸，在植物中广泛存在，具有调节植物生长和逆境适应等重要生理作用。
因此，了解植物体内的脯氨酸含量对于研究植物生长发育和逆境耐受机制具有很重要的意义。
实验所需材料：1. 植物样品（例如油菜籽、小麦、水稻等）2. 冰乙酸3. 丙酮5. 次氯酸钠6. 清水7. 去离子水8. 绝对乙醇9. 氯仿10. 水杨酸11. 毛细玻璃管12. 离心管13. 取样管14. 毒理性废物桶操作步骤：1. 取适当的植物材料，如茎或叶片，用清水洗净并晾干。
2. 将清洁的植物样品切成小片，并置于离心管中。
称取一定重量的样品，通常为0.5g。
3. 在样品中加入丙酮，使样品完全浸泡在溶液中。
放置室温下浸泡12小时，以提取植物中的游离脯氨酸。
4. 将提取的液体离心10分钟，将上清液取出并过滤，以去除残渣。
5. 将上清液分别转移入不同的试管中，备用。
6. 为了去除植物中的蛋白质、多酚和色素等干扰物，需要加入一定量的三氯乙酸。
加入三氯乙酸后，样品变成了米黄色混浊液。
7. 将加入三氯乙酸后的样品冷藏4℃下静置60分钟，使游离脯氨酸沉淀。
离心5分钟，将上清液放出并倒掉。
8. 向沉淀中加入10ml冰乙酸，使其彻底溶解。
在加入冰乙酸时需小心，避免冲击。
然后离心5分钟，取上清液进行后续检测。
9. 取出一定量的上清液，加入等量的氯仿。
深橙色的游离脯氨酸会迅速转移到氯仿层，并形成清晰的分界线。
10. 将氯仿层转移入干燥的试管中，加入少量水杨酸溶液，并充分振荡。
待其完全混合后，待其沉淀，即可进行下一步检测。
11. 将上述样品溶液分别取出20μl，分别加入已经标定好的质谱仪或高效液相色谱仪中。
12. 高效液相色谱仪以270nm来检测并分析样品中的脯氨酸含量。
质谱仪则将游离脯氨酸质谱信号转换成游离脯氨酸含量。
实验注意事项：1. 在实验过程中，所有的器具和溶液需严格按照实验要求进行洗涤和消毒。
植物中脯氨酸含量的测定
植物中脯氨酸含量的测定实验目的：测定不同植物中脯氨酸的含量，并比较它们之间的差异。
实验原理：脯氨酸是一种非必需氨基酸，广泛存在于植物中，具有多种生物学功能。
在光合作用过程中，植物体内光合色素的降解产物中可以生成脯氨酸。
本实验使用比色法对不同植物中脯氨酸的含量进行测定。
实验步骤：1.收集不同植物的叶片样品，如红细胞苔藓、菠菜和小麦。
2.将收集到的样品冷冻在液氮中。
3.将样品取出，立即用离心机将其制成细胞匀浆。
4.在一个试管中加入适量的离心细胞匀浆，再加入几滴三氯乙酸，充分混合。
5.离心测得脯氨酸在样品提取液中的浓度。
6.制备标准曲线，将一系列不同浓度的脯氨酸溶液与苏丹黑R混合，测量吸光度。
7.根据标准曲线计算出各样品提取液中脯氨酸的浓度。
实验结果：以菠菜、小麦和红细胞苔藓为样品进行测定得到如下结果：菠菜中的脯氨酸含量为0.27 mg/g。
小麦中的脯氨酸含量为0.15 mg/g。
红细胞苔藓中的脯氨酸含量为0.08 mg/g。
讨论与结论：根据实验结果，可以看出不同植物中的脯氨酸含量存在差异。
菠菜中的脯氨酸含量最高，小麦次之，红细胞苔藓最低。
这可能是由于植物的基因差异、生长环境、生长阶段等因素导致的。
脯氨酸作为一种抗氧化物质和氮源，对植物的生长发育、抗逆性等都有重要影响。
因此，研究不同植物中脯氨酸含量的差异，对于了解植物的生理功能及其适应策略具有一定意义。
实验中使用的比色法测定脯氨酸含量的方法简便、快速，并且可以同时测定多个样品。
然而，该方法在样品预处理过程中会导致一定的失真，且对其他物质的干扰较大。
因此，在进行进一步的研究时，需结合其他方法进行验证。
注：以上为生成的实验报告假象，并非真实数据。
植物体内游离脯氨酸含量的测定
目的意义植物在正常条件下游离脯氨酸（proline，Pro）含量很低，但在干旱、高温、低温、盐碱、水涝等逆境条件下便会大量积累，并且积累指数与植物的抗逆性呈正相关关系。
因此，脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标，测定其含量也成为抗性生理研究的重要内容之一。
本实验的目的是掌握游离脯氨酸含量的测定方法、原理及操作技术。
一、酸性茚三酮法（一）原理植物体内的氨基酸只有脯氨酸能与酸性茚三酮发生反应，生成稳定的红色产物。
该产物在515nm有一最大吸收高峰，其吸收值与脯氨酸的含量呈直线关系。
因此，样品中的脯氨酸含量可用酸性茚三酮法测定。
除脯氨酸外，酸性和中性氨基酸不能与酸性茚三酮形成红色产物，碱性氨基酸对这一反应只有轻度干扰，在同类样品的测定中可忽略不计，在不同样品的测定中可加入人造沸石排除这种干扰。
（二）实验材料、仪器与试剂1. 实验材料：正常生长与经逆境处理的植物茎、叶、穗等器官或组织。
2. 仪器：分光光度计、分析天平、离心机、温箱、冰箱、移液管、容量瓶、剪刀、镊子、纱布、研钵、漏斗、滤纸、具塞刻度试管、量筒、培养皿等。
3. 试剂：（1）酸性茚三酮试剂：称取重结晶茚三酮放入烧杯，加冰醋酸60mL、6mol·L-1磷酸40mL 于70℃下溶解，冷却后装入棕色瓶内贮于4℃冰箱中，24h内稳定。
现用现配。
（2）100μg·mL-1脯氨酸母液：精确称取脯氨酸溶于少量80％乙醇中，用蒸馏水定容至100mL。
（3）其他试剂：人造沸石、活性炭粉、冰醋酸、80％乙醇。
（三）操作步骤1. 标准曲线制作：（1）取7个50mL容量瓶，分别放入脯氨酸母液、、、、、、，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为、、、、、、μg·mL-1。
（2）另取具塞刻度试管8只（0～7号），0号加入2mL蒸馏水，1～7号分别加入不同浓度的标准系列各2mL，再分别加入冰醋酸2mL和茚三酮试剂2mL，充分摇匀，加盖，沸水浴10～15min。
脯氨酸含量测定
逆境胁迫下植物体脯氨酸含量测定【实验目的】1.了解脯氨酸在植物抗逆性决定中的作用。
2.掌握脯氨酸提取和测定的方法。
【实验原理】1.逆境条件下（干旱、盐碱、热、冷害、冻害）,植物体内脯氨酸含量会显著增加，并且积累指数与植物的抗逆性有关，因此脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。
2.测定脯氨酸含量目前一般使用的方法是茚三酮法。
酸性条件下,茚三酮和脯氨酸反应生成稳定的红色化合物,产物在520nm 波长下具有最大吸收峰。
用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中,然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色,再用甲苯萃取，则色素全部转移至甲苯中,颜色的深浅即表示脯氨酸含量的高低。
【实验材料】1.材料：小麦幼苗：（1）对照（2）100mM、200mM NaCl处理48h（3）5%、15% PEG-6000处理48h2.试剂：3%磺基水杨酸；冰醋酸；甲苯；2.5% 酸性茚三酮溶液；脯氨酸母液50 μg/ml3.器材：天平，烧杯，分光光度计，研钵，容量瓶，具塞试管，移液管，胶头滴管，水浴锅【实验内容】1.脯氨酸标准曲线的测定（2）分别吸取1ml系列标准浓度的脯氨酸溶液于6个试管中,加入1ml水、1ml冰乙酸、2ml 2.5％的酸性茚三酮,于沸水浴中加热30min。
（3）冷却后准确加入4ml甲苯,振荡30S,静置片刻,使色素全部转至甲苯溶液。
（4）轻轻吸取各管上层甲苯溶液至比色杯中,以甲苯为空白对照,于520nm进行比色。
2.样品的测定（1）称取不同处理的小麦叶片各0.5 g，于2.5 ml 3%磺基水杨酸试管中，沸水浴中提取10 min。
（2）吸取1ml上清于另一试管中，加入1 ml水、1 ml冰乙酸、2 ml 2.5％的酸性茚三酮，混合液于沸水中显色30 min。
（3）冷却后加入4 ml甲苯，摇荡30S，萃取完全后用吸管轻轻吸取上层红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，在520nm比色。
【实验结果】查标准曲线，得脯氨酸含量c（µg）脯氨酸含量（µg.g-1）＝c ×(v／a )／w其中V为提取液总体积ml; a为测定液体积ml；W为样品质量g。
脯氨酸含量的测定
脯氨酸含量的测定在逆境条件下，植物体内脯氨酸〔proline，Pro〕的含量显著增加。
植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。
因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。
另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低凝固点，有防止细胞脱水的作用。
在低温条件下，植物组织中脯氨酸含量增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。
一、原理当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即为红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。
在520nm波长下比色，从标准曲线上查出〔或用回归方程计算〕脯氨酸的含量。
二、材料、仪器设备及试剂〔一〕材料待测植物叶片〔二〕仪器设备1. 722型分光光度计；2.研钵；小烧杯；4.容量瓶；5.大试管；6.普通试管；7.移液管；8.注射器；9.水浴锅；10.漏斗；11.漏斗架；12.滤纸；13.剪刀。
〔三〕试剂1.酸性茚三酮溶液：将茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol/l 磷酸中，搅拌加热〔70℃〕溶解，贮于冰箱中。
2. 3%磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。
3.冰醋酸。
4.甲苯。
三、实验步骤1.标准曲线的绘制〔1〕在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯中内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每毫升含脯氨酸100ug。
〔2〕系列脯氨酸浓度的配置：取6个50ml容量瓶，分别加入脯氨酸原液、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml及，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml、4ug/ml、5ug/ml及6ug/ml。
〔3〕取6支试管，分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml冰醋酸和2ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30min。
植物组织中游离脯氨酸含量的测定
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实现方式：要求ATM柜员机模拟程序利用面向对象的方法以及C++的编程思想来完成系统的设计。
C++相对众多的面向对象的语言，具有相当高的性能。
C++引入了面向对象的概念，使得开发人机交互类型的应用程序更为简单、快捷。
在设计的过程中，建立清晰的类层次，各个类中要有各自的属性和方法，运用面向对象的机制（继承、派生及多态性）来实现系统功能，基于Microsoft visual C++6.0条件下实现的.。
各生理指标的测定方法
各生理指标的测定方法一、脯氨酸含量的测定1.茚三酮法1.1原理在正常环境条件下，植物体内游离脯氨酸含量较低，但在逆境（干旱、低温、高温、盐渍等）及植物衰老时，植物体内游离脯氨酸含量可增加10-100倍，并且游离脯氨酸积累量与逆境程度、植物的抗逆性有关。
用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。
在520nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。
1.2步骤试剂：（1）25%茚三酮：茚三酮------------0.625g冰乙酸------------15ml6mol/L磷酸--------10ml70°C水浴助溶；（2）6mol/L磷酸：85%磷酸稀释至原体积的2.3倍；（3）3%磺基水杨酸：磺基水杨酸------3g加蒸馏水至------100ml实验步骤：（1）称取0.1g样品放入研钵，加5ml3%磺基水杨酸研磨成匀浆，100°C沸水浴15min；（2）冰上冷却，4000rpm离心10min；（3）提取液2ml+冰醋酸2ml+25%茚三酮2ml混合均匀，100°C沸水浴30min，冰上冷却；（4）加4ml甲苯混合均匀，震荡30，静置30min；（5）以甲苯为空白对照，再520nm下测定吸光值。
1.3计算方法脯氨酸含量（μg/gFW）＝某某提取液总量（ml）/样品鲜重（g）某测定时提取液用量（ml）某10^6公式中：某-----从标准曲线中查得的脯氨酸含量（μg）提取液总量---------------------------5ml测定时提取液用量---------------------2ml问题及质疑：1.酸性体系下，脯氨酸与茚三酮加热反应后的最终产物为红色，再实验过程中，仅有少数时候能发现红色产物。
原因有待确定。
植物中脯氨酸含量的测定实验报告及结果
植物中脯氨酸含量的测定实验报告及结果摘要
本文介绍了有关植物中脯氨酸含量的测定实验报告。
首先，对脯氨酸
的性质和结构进行简要的介绍。
然后介绍了设计用于测定植物脯氨酸含量
的试验方法。
最后，本文提供了一系列实验结果，以表明所采取的实验方
法是正确的。
关键词：脯氨酸，测定，实验报告
1引言
脯氨酸（Proline）是一种结构上尤其复杂的氨基酸。
它具有异构和
加氧作用，在蛋白质调节中起着重要作用。
脯氨酸在植物体内具有多种功能，如参与胞内多种代谢过程，从而提高植物的抗逆能力。
为了评估植物
的调节性能，有必要定量研究它们在体内的脯氨酸含量。
2材料与方法
2.1实验材料
本实验采用新鲜的植物材料，自土壤中收集30份样品，每份样品重
约3克。
样品在实验室内放置，经过24小时的调节，以保证其质量和完
整性。
2.2试验方法
2.2.1样品处理
将每份样品加入15ml的酒精，用搅拌机搅拌30秒，然后用水或乙醇
冲洗，以去除样品表面残留的酒精，冷冻干燥样品，记录样品残留的重量。
2.2.2经碱水合、脱羧和油酸酰胺处理。
植物游离脯氨酸含量的测定
植物游离脯氨酸含量的测定植物游离脯氨酸含量的测定呀，这可真是个有趣又有点小复杂的事儿呢。
咱就先来说说为啥要测定植物游离脯氨酸的含量吧。
你看啊，脯氨酸在植物里可有着大作用呢。
它就像是植物的一个小卫士，当植物遇到干旱呀、盐碱地这种不太好的环境时，脯氨酸的含量就可能会发生变化。
就好像植物在跟这些恶劣环境做斗争的时候，脯氨酸是它的秘密武器。
如果我们能知道脯氨酸含量是多少，就像知道了植物的健康密码一样。
那怎么测定这个含量呢？这可就有一套有趣的办法啦。
有一种方法是用一些化学试剂去跟脯氨酸发生反应。
就像是给脯氨酸找个小伙伴，它们一见面就会产生一些特别的变化，这个变化我们就能通过一些仪器或者颜色的变化看出来呢。
不过这过程中也有不少小麻烦。
比如说在取样的时候，得特别小心。
你不能随便从植物上揪下一块就去测，要选对部位，就像医生给病人看病要找准穴位一样。
而且在操作那些化学试剂的时候，要像对待小宝贝一样小心翼翼的，稍微出点差错，可能整个结果就不准了。
我还记得有一次做这个测定，在等待反应结果的时候，那心情就像等待拆盲盒一样，既紧张又兴奋。
当看到颜色慢慢变化的时候，那种感觉就像是发现了新大陆。
测定植物游离脯氨酸含量虽然不容易，但是每一次成功的测定，就像是解开了植物的一个小秘密。
这也让我们更加了解植物的生存智慧，它们在面对各种挑战的时候，用脯氨酸这样的物质来调节自己，就像我们人类在困难面前调整自己的心态一样。
这小小的脯氨酸，背后可是蕴含着大大的生命奥秘呢。
每次想到这些，就觉得植物可真是神奇的生物呀。
我们做这个测定，也是在和植物进行一场特别的对话，去了解它们的需求，它们的适应策略，感觉自己就像是植物的知心朋友呢。
植物体内游离脯氨酸的测定
植物体内游离脯氨酸的测定在正常环境条件下生长的植物，体内游离脯氨酸的含量较低。
但在逆境（如旱、寒、盐等）条件下，植物体内游离脯氨酸的含量可增加10-100倍，因此有人提出游离脯氨酸的含量可作为植物抗逆性指标。
植物体内的游离脯氨酸用磺基水杨酸或酒精提取。
在酸性条件下，脯氨酸和茚三酮反应生成稳定的红色产物（结构如下），用比色法于520um波长下测定脯氨酸的含量。
仪器设备：分光光度计、析天平、恒温水浴、研钵、容量瓶、具塞试管：25毫升9支、移液管：2毫升4支、5毫升2支、漏斗、滤纸。
1．称取0.5000g剪碎烟叶加入试管，加5ml 3%磺基水杨酸，封口，沸水浴10min；过滤后备用。
2．吸取2ml提取液加入试管（对照管用2ml水代替），各加入2ml冰醋酸，4ml 茚三酮，摇匀，煮沸30min，冷却比色（OD520）试剂配制：1．3%磺基水杨酸：称3.000g磺基水杨酸溶解，定容至100ml。
2．茚三酮：称2.50g茚三酮，加60ml冰醋酸和40ml 6M磷酸，在热水（70°C）溶解，一般现用现配（24小时）6M磷酸：吸取86ml磷酸，定容至250ml.试剂酸性茚三酮：称取2.5克弗三酮，加入60毫升冰醋酸和40毫升6M磷酸（冰乙酸和6mol/L磷酸以3︰2混合，作为溶剂进行配制），于70℃下加热溶解。
冷却后贮于棕色试剂瓶中备用。
4℃下2～3日内有效。
脯氨酸标准溶液：称取0.0250克脯氨酸，溶解在250毫升蒸馏水中，其浓度为100微克／毫升。
再取此液10毫升，用蒸馏水稀释至100毫升，即为10微克／毫升之脯氨酸标准液。
冰醋酸甲苯若用磺基水杨酸提取，需要配制3%的磺基水扬酸溶液。
（若用酒精提取，需要80%的酒精，活性炭，人造沸石）。
采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减小了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态（干或鲜样）限制。
在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长520nm处有一最大吸收峰。
游离脯氨酸测定
在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳 定的红色缩合物，此缩合物在520nm处有最大 吸收峰，可以用分光光度法测定。
3 主要仪器、试剂、实验材料
仪器设备：分光光度计，水浴锅，试管， 试剂:1 2.5%酸性茚三酮显色液：冰乙酸和 6M磷酸以3:2混合， 作为溶剂进行配置，搅拌加热（低于70℃）溶解，冷却后置 棕色瓶中，4℃保存可使用2~3d。 2 甲苯（分析纯），3%磺基水杨酸溶液。 3 脯氨酸标准溶液：称取25mg脯氨酸，用少量80%乙醇溶 解，蒸馏水定容至250mL（100μg/mL）。再取10ml用 蒸馏水释定容至100ml （10μg/mL） 。 材料：水稻苗。
植物生理学实验湖北民族学院湖北民族学院生命科学学院生命科学学院田国政田国政多媒体课件多媒体课件湖北省生物实验教学示范中心实验实验2727植物体内游离脯氨酸含量的测定实验类型
植物生理学实验
（多媒体课件）
田国政
湖北民族学院生命科学学院 湖北省生物实验教学示范中心
实验27 植，冷却，向各管加入5ml 甲苯，充分震荡，以萃取红色物质，静止待分层后吸收 甲苯层以0号管为对照在520nm下比色，作标准曲线。
4.2 样品的测定
4.2.1 脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶 片各0.5g，分别置大管中，向各管加入5ml3％的磺基水 杨酸溶液，在沸水浴中提取10min，（提取过程中要经 常摇动），冷却后过滤。 4.2.2 吸取2ml提取液于另一干净的试管中，加2ml冰醋 酸及2ml酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热40min，溶 液即呈红色。冷却，向各管加入5ml甲苯，充分震荡， 以萃取红色物质，静止待分层后吸收甲苯层以0号管为 对照在520nm下比色，得吸光度值。
实验类型：基础验证型 实验学时：3学时
脯氨酸测量
植物体内游离脯氨酸含量的测定二、原理磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应，当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。
然后用酸性茚三酮加热处理后，茚三酮与脯氨酸反应，生成稳定的红色化合物，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。
在520nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。
三、材料、仪器及试剂1. 材料：植物叶片。
2 .试剂及配制：2.5﹪酸性茚三酮溶液配制：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol·L－1磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中。
3％磺基水杨酸配制：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。
10μg·ml-1脯氨酸标准母液配制：精确称取20mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，再倒入200ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度（为100μg·ml－1脯氨酸母液），再吸取该溶液10ml, 加蒸馏水稀释定容至100ml, 即为10μg·ml-1脯氨酸标准液。
冰醋酸；甲苯。
四、实验步骤1.脯氨酸标准曲线的制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～12μg的脯氨酸标准液。
加入表中试剂后，置于沸水浴中加热30min。
取出冷却，各试管再加入4ml甲苯，振荡1.2用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，在520mm波长处测定吸光度（A）值。
1.3标准曲线的绘制以1～5号管脯氨酸含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品的测定2.1脯氨酸的提取称取不同处理的植物叶片各0.5g，液氮处理保存，材料放入研钵中并加入5ml 3％的磺基水杨酸溶液研磨匀浆，然后转入10mL离心管中，在沸水浴中提取10min（提取过程中要经常摇动），冷却后于3000 rpm离心10min，上清转入5mL离心管中，上清即为脯氨酸的提取液（于4℃中保存）。
植物中脯氨酸含量的测定(实验分析报告及结果)
（3）取6支试管，分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml冰醋酸和2ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30min。
（4）冷却后各试管准确加入4ml甲苯，振荡30S，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。
（5）用胶头滴管轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520nm波长处进行比色。
实验分析：
植物体内的脯氨酸含量直接反映了植物的耐寒能力，因此植物耐寒性越高，体内所含脯氨酸含量也越高。遗憾的是，由于我们学校地处南方，气候温暖，我们没能在附近找到能在北方广泛存在的常绿植物如小麦高粱等，所以只能采用一些南方的常绿植物来进行实验。使用茚三酮溶液本该要小心，但是染色过程中手还是被茚三酮溶液染成了紫色。另外在过滤操作的过程中比较难过滤充分，总是有部分滤液残留于滤渣中可能导致结果偏小。并且过滤所得的提取液非常少，大概勉强达到2ml，给吸取工作造成很大的麻烦。后来的吸光度测定工作，都是多次重复进行测定，取数次测定的平均值，以减少实验的误差使实验结果更精确。第二和第三梯度的浓度偏低有可能是因为配制时加入的甲苯溶液太多而造成的。此外，我们没有料到木瓜叶片内含的脯氨酸含量高，而导致测的数值超出我们所制作的标准曲线图，浓度配得太稀。实验的其他步骤都没有出现其他差错，因此实验结果应该比较可靠。
根据标准曲线上查出2ml测定液中脯氨酸的含量（Xμg/2ml），根据公式y=0.222x+0.0036，得脯氨酸含量为21.86μg/2ml。
植物体内脯氨酸含量测定
植物体内脯氨酸含量测定植物体内脯氨酸含量测定是评估植物生理状态的重要方法，也是研究植物逆境适应性的关键指标。
脯氨酸是一种氨基酸，能够调节植物的生长发育和逆境响应。
因此，准确测定植物体内脯氨酸含量对于探究植物生理机制和优化植物生长具有重要意义。
脯氨酸是一种含有羧基和氨基的氨基酸，通常以游离态的形式存在于植物体内。
衡量植物体内脯氨酸含量的方法有多种，其中较常用的是酸水解法和直接检测法。
一、酸水解法酸水解法是一种常用的测定植物体内脯氨酸含量的方法，具体步骤如下：材料准备：样品、5%三氯乙酸溶液、2M氢氯酸溶液、0.2M醋酸钠缓冲液、酚酞指示液。
1. 取适量样品，磨碎成粉末，并过筛筛掉颗粒均匀的样品。
2. 取约0.2g的样品加入10ml 5%三氯乙酸溶液中，放在80℃恒温水浴中加热1小时。
酸水解旨在将脯氨酸从蛋白质中释放出来。
3. 将样品冷却后，在离心管中以8000rpm的速度进行离心5分钟。
4. 从上层液体中取出约1ml的提取液，放在烧杯中加入1.2ml的2M氢氯酸溶液，并在水浴中加热沸腾10分钟，旨在保持脯氨酸的游离态。
5. 再将烧杯中的液体冷却后，在其中加入1ml醋酸钠缓冲液和2滴酚酞指示液，并加入1ml 1M氢氧化钠溶液，旨在使酸碱度中和。
6. 最后，以0.1M硼酸溶液进行稀释，将反应液稀释至适宜的浓度，使用分光光度计测量脯氨酸的吸光度值，然后按一定的公式计算出样品中的脯氨酸浓度。
二、直接检测法材料准备：样品、4%硫酸溶液、10%二氧化硫溶液、巴氏试剂。
1. 取适量样品，磨碎成粉末，并称取约0.1g的样品加入10ml的4%硫酸溶液中，放在温度为80℃的恒温水浴中加热5分钟。
3. 从上层液体中取出约2ml的提取液，放在试管中，并加入10%二氧化硫溶液和巴氏试剂。
在这个过程中，二氧化硫旨在使脯氨酸分子与巴氏试剂分子结合，使过氧化氢水平升高。
4. 然后，将试管振荡混合，并用分光光度计测量波长为550nm处的吸光度值。
实验一 植物体内游离脯氨酸含量的测定
实验一植物体内游离脯氨酸含量的测定一、目的在逆境条件下（旱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸的含量显著增加，植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种积累的脯氨酸多。
因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。
另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低冰点，有防止细胞脱水的作用。
在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。
二、原理磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应，当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。
然后用酸性茚三酮加热处理后，茚三酮与脯氨酸反应，生成稳定的红色化合物，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。
在520nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。
三、材料、仪器及试剂1. 材料：植物叶片。
2. 仪器：分光光度计；电子分析天平；离心机；小烧杯；普通试管；移液管；注射器；恒温水浴锅；漏斗；漏斗架；滤纸；剪刀；洗耳球。
3 .试剂及配制：2.5﹪酸性茚三酮溶液配制：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol·L－1磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中。
3％磺基水杨酸配配制：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。
10μg·ml-1脯氨酸标准母液配制：精确称取20mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，再倒入200ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度（为100μg·ml－1脯氨酸母液），再吸取该溶液10 ml, 加蒸馏水稀释定容至100ml, 即为10μg·ml-1脯氨酸标准液。
冰醋酸；甲苯。
四、实验步骤1.脯氨酸标准曲线的制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～12μg的脯氨酸标准液。
加入表中试剂后，置于沸水浴中加热30min。
取出冷却，各试管再加入520mm 波长处测定吸光度（A）值。
脯氨酸含量测定
脯氨酸含量的测定——水分胁迫下植物的渗透调剂【实验目的】1.了解植物对环境胁迫的抗性生理作用，及植物对胁迫的阻碍机制；2.了解脯氨酸对植物水分胁迫下的抗性生理。
【实验原理】在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。
植物体内脯氨酸含量在必然程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积存较多的脯氨酸。
因此测定脯氨酸含量能够作为抗旱育种的生理指标。
另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳固原生质胶体及组织内的代谢进程，因此能降低冰点，有避免细胞脱水的作用。
在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。
在酸性条件下，茚三酮和脯氨酸反映生成稳固的红色化合物，产物在520nm 波长下具有最大吸收峰。
用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处置后，溶液即成红色，再用甲苯处置，那么色素全数转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。
【材料、仪器及试剂】1.实验材料：小麦幼苗：对照；100mM、200mM NaCl处置48h；5%、15% PEG-6000处置48h2.仪器：天平，烧杯，分光光度计，研钵，容量瓶，具塞试管，移液管，胶头滴管，水浴锅3.要紧试剂：3%磺基水杨酸、冰醋酸、甲苯（利用完勿弃入下水道，请回收）、% 酸性茚三酮溶液（60 ml冰醋酸、ml磷酸加蒸馏水定容至100 ml，再加入2.5 g茚三酮，溶解后避光保留）、脯氨酸标准母液：精准称取25 mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入500 ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中脯氨酸浓度50 μg /ml。
【实验步骤】（一）、样品的测定1.脯氨酸的提取：准确称取不同处置的待测植物叶片各0.2g（每种处置至少做三个平行），用3%磺基水杨酸研磨提取，别离转移至试管中，然后向各试管别离加入5ml 3％的磺基水杨酸溶液，在滚水浴中提取10min，（提取进程中要常常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液用3%磺基水杨酸定容至5mL，即为脯氨酸的提取液（预先湿润滤纸，尽可能全数搜集Pro提取液）。
脯氨酸含量的测定方法
植物体内游离脯氨酸含量的测定一、原理磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应，当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。
然后用酸性茚三酮加热处理后，茚三酮与脯氨酸反应，生成稳定的红色化合物，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。
在520nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。
二、仪器及试剂1. 仪器：分光光度计；电子分析天平；离心机；10ml+2ml离心管；恒温水浴锅；2 .试剂及配制：冰醋酸；甲苯。
2.5﹪酸性茚三酮溶液配制：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol·L －1磷酸(7ml磷酸+13ml蒸馏水)中，37度摇床摇动溶解，贮于4℃冰箱中。
3％磺基水杨酸配配制：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。
1mg·ml-1脯氨酸标准母液配制三、实验步骤1. 脯氨酸标准曲线的制作1.1 取6支10ml离心管编号，按下表配制每管含量为0～25μg的脯氨酸标准液。
加入表中试剂后，标准曲线样品和待测样品一起置于沸水浴中加热60min （注意管盖需要压住，不然会爆开挥发液体），取出冷却，各试管再加入2ml 甲苯，振荡30秒钟，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。
1.2 以甲苯溶液为空白对照，在520mm波长处测定吸光度（A）值。
1.3 标准曲线的绘制以1～5号管脯氨酸含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品的测定2.1 脯氨酸的提取液氮研磨样品材料，称取适当重量样品粉末（0.1-0.2g）于2ml离心管, 然后向各管分别加入1.5ml3％的磺基水杨酸溶液，振荡混匀。
（注意：样品一定要精确称量并记录）离心12000g，10min，上清液1ml移至新10ml离心管中。
2.2 测定加入1ml冰醋酸及1ml 2.5﹪酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热60min，溶液即呈红色。
冷却后加入2ml甲苯，摇荡30秒钟，静置片刻，用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，在520mm波长处测定吸光度（A）值。
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实验一植物体内游离脯氨酸含量的测定
一、目的
在逆境条件下（旱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸的含量显着增加，植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种积累的脯氨酸多。
因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。
另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因
而能降低冰点，有防止细胞脱水的作用。
在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗
寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。
二、原理
磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应，当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。
然后用酸性茚三酮加热处理后，茚三酮与脯氨酸反应，生成稳定的红色化合物，再用甲
苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。
在520nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。
三、材料、仪器及试剂
1.材料：植物叶片。
2.仪器：分光光度计；电子分析天平；离心机；小烧杯；普通试管；移液管；注射器；恒温水浴锅；漏斗；漏斗架；滤纸；剪刀；洗耳球。
3 .试剂及配制：
2.5 %酸性茚三酮溶液配制：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol • L_磷酸中，搅拌加热（70C）溶解，贮于冰箱中。
3%磺基水杨酸配配制：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。
10卩g - ml-1脯氨酸标准母液配制：精确称取20mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，
再倒入200ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度（为100卩g • m「脯氨酸母液），再吸取该溶液10 ml,加蒸馏水稀释定容至100ml,即为10卩g • ml-1脯氨酸标准液。
冰醋酸；甲苯。
四、实验步骤
1. ?????脯氨酸标准曲线的制作
1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0〜12卩g的脯氨酸标准液。
加入表中试剂后，置于沸水浴中加热30mi n。
取出冷却，各试管再加入
4ml甲苯，振荡30秒钟，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。
1.2 用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，在520mm 波长处测定吸光度（A）值。
1.3 标准曲线的绘制
以1〜5号管脯氨酸含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品的测定
2.1脯氨酸的提取
称取不同处理的植物叶片各0.5g ，分别置大试管中，然后向各管分别加入5ml 3 ％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min （提取过程中要经常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。
2.2测定
吸取2ml提取液于带玻塞试管中，加入2ml冰醋酸及2ml 2.5 %酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热30min,溶液即呈红色。
冷却后加入4ml甲苯，摇荡30秒钟，静置片刻，取上层液至10ml离心管中，在3000r/min 离心5min。
用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，在520mn波长
处测定吸光度（A）值。
五、计算结果
从标准曲线上查出样品测定液中脯氨酸的含量，按下公式计算样品中脯氨酸含量：
X X 提取液总量（ml）
脯氨酸含量（卩g • g tw = -----------------------------------------
样品鲜重（g）X 测定时提取液用量（ml）公式中：X —从标准曲线中查得的脯氨酸含量（卩g）
五、注意事项:
1.配置的酸性茚三酮溶液仅在24 h 内稳定，因此最好现用现配。
2.测定样品若进行过渗透胁迫处理，结果会更显着。
3.试剂添加次序不能出错。