实验报告-高效液相色谱法测定VE含量
高效液相色谱法测定白芷维生素E乳膏中维生素E 的含量
高效液相色谱法测定白芷维生素E乳膏中维生素E 的含量何荣芬
【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2013(017)003
【摘要】目的建立高效液相色谱法测定白芷维生素E乳膏中维生素E 的含量.方法Waters e2695 HPLC色谱系统;Empower Waters 工作站;Waters 2489 UV检测器;Platisil ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流速:1.0 mL·min-1 ;流动相:甲醇;检测波长284 nm,进样量为20 μL.结果维生素E在82.76～1 655.2 mg·L-1 的范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9).维生素E的平均加样回收率为
100.5%(n=9),RSD=0.87%.结论该方法操作简便、准确、稳定、灵敏度高,适用于白芷维生素E乳膏中维生素E的质量控制.
【总页数】2页(P399-400)
【作者】何荣芬
【作者单位】安徽省淮北市人民医院,安徽,淮北,235000
【正文语种】中文
【相关文献】
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5.HPLC法测定维生素E尿囊素乳膏(Ⅱ)中维生素E和尿囊素的含量 [J], 王琤帅;戴拥燕;舒展;郑篮君;应斌斌;金芩
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高效液相色谱法测定血清中维生素A、E、β-胡萝卜素
在5ml棕色具塞玻璃离心管中，加入 0.25ml血清、1ml 10％邻苯三酚乙醇溶 液、0.5ml 60％KOH，用氮气将管内空 气置换，37℃水浴1h。
冷水浴3min后加入5％NaCl 1ml，己烷 /乙酸乙酯(9:1)3ml，用氮气将管内空 气置换，盖紧塞子，水平振荡器上振 荡5min(40次/min)；
β-胡萝卜素遇光和氧会被迅速破坏， 所以应临用新配，并注意避光保存。 样品的提取液比较稳定，可以隔夜 后进行分析。
五、思考题
1. 维生素A、D 、E的生理作用、缺乏表
现及食物来源。
2. 哪些B 族维生素与能量代谢有关？
β-胡萝卜素以氯仿配制成不同浓 度的标准液，同样品一样处理。
分别以标准应用液浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标，绘制工作曲线。
三、数据处理
将样品中三种待测组分平行测定的峰面 积均值分别代入各自的工作曲线，求得 测定样液中各自的含量。
再乘以样品处理时的稀释倍数，即得 到血清样品中维生素A、维生素 E及β胡萝卜素的含量。
四、质量控制
1. 配制标准液时：
若有条件应对配制好的标准稀释液 维生素A、维生素E、β-胡萝卜素 200～600nm扫描，观察最大吸收峰 的波长。
如果所用HPLC仪能作波长变换，则 在测定组分的最大吸收波长下测定 可取得较高的灵敏度。
2. 吸取上清液时：
注意不可触及界面；
否则： 一方面会吸入水，影响分析和柱 的分离能力； 另一方面，界面上的脂肪层可能 会影响分析结果。
高效液相色谱法测定血清中高效液相色谱法测定血清中维生素维生素aaee胡萝卜素胡萝卜素南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心一原理?本实验应用hplc法测定人血清中维生素a维生素e及胡萝卜素
高效液相色谱法测定火龙果茎中VE的含量
Ｖ 亦称 生育酚 ， 一组有 生物活性 的 、 是 化学结 构 相近 的酚类化合物的总称 。按其结构可分为生育酚和
一
下火龙果 茎 中 Ｖ 各种异构体 含量 的高效液相色谱
测定方法。 １ 材料与方法
生育三烯酚两大类 ，每类又包括 ０、 ＾ ８ 【 ｙ ４种 ，其 中 、 、
一
生 育酚的生物活性最强ｆ 】 ］ 。Ｖ 能促进性激 素分泌从
ｄ ｔｒ ｉ ａｉｎｏ ／ ｔｃ ｐ ｅ ｏ ｓ４ ｅｅ ｎ ｔ ｆ￣－ｏ ｏ ｈ ｒｌｗａ ０ ｍ ｏ Ｌ ｎ ｈ ｖ ｒｇ ｅ ｏ ｅ ｓ１ ． ％ ． ａ ｄｔ ｅａ ｅ ａ ｅｒｃ ｖ ｒ ｗａ ０１５ ｙ
Ｋｅ ｏ ｄ ： ｙｗ ｒ ｓ ＨＰＬ Ｓｅ ｆｐｔｙ ；ｏ ｏ ｈ ｒ ｌ Ｃ； ｔｍｓｏ ｉ ａ ｔｃ ｐ ｅ ｏ ａ
在 Ｋ ０ Ｓ【 １０ １色谱柱上 ， Ｒ ＭＡ Ｉ ｏ ８ 广 柱温 ３ ￣ ， ０Ｃ检测波长 ２ ５ ｍ条件下，一 Ｅ ９ｎ 仅 Ｖ 线性方程为 Ａ ０ ７ ０ Ｃ ０ ２ ２ 线性相 关 ＝． ７ ９ － ． ６３ ， １ ０
系数 为 ０ ９ ５ 检 出限 为 ６ ｇ ， 均 回收 率 １７ ． ９６ ， ９ ５ ， 平 Ｌ ０． ４％。＾ Ｖ 线 性 方 程 为 Ａ＝ ．２ ２ 一 ．３ ６ 线 性 相 关 系数 为 ｙ Ｅ — Ｏ１９ Ｃ ０ ５ ， ０ ０ ０ ０ ９ ７检 出限为 ４ Ｌ 平 均 回 收 率 １ １ ． ９８ ， ９ ０ ， ０． ５％。
ｓ ｔ ｐ ｈ ｅ ｅｍｉ ａｉｎ ｗａ ｅ ｆｒ ｅ ｎ ＫＲＯＭＡＳ Ｌ一１ ０－Ｃ１ｃ ｌ ｍ ｔ３ ℃ ｗｉ ｂｌ ｈ ｓ ｆ９ ｅ ．Ｔ ｅ ｄ ｔｒ ｎ ｔｏ ｓｐ ｒｏ ｕ ｍ ｄｉ Ｉ ０ ８ ｏｕ ａ ０ ｔｕ ｎ ｚ ｏ ｃ ｕ ａｉｎ ｌ ｉ ａｅ ｒｖ ｎｉｎａ ｄＴ ｅ ｔ ｎ ｅ ｔｒ Ｇｕ ｎ ｚｏ ６ ０ Ｇ ａ ｇ ｏ ｇ Ｃ ｉａ Ｇ ａ ｇｈ ｕＯ ｃ ｐ ｔ ａ ｓ ｓ ｓ ｅ ｅ ｔ ｎ ｒａｍｅ ｔ ｎｅ ， ａ ｇｈ ｕ５ ０ ２ ， ｕ ｎ ｄ ｎ ， ｈｎ ） ｏ Ｄ ｅ Ｐ ｏ Ｃ １
反相高效液相色谱法测定食用植物油中维生素E的含量
无水乙醇: 检查是否含有醛类物质，方法: 加一定量的氨水于硝酸银溶液(50g/L) 中，直至生成的沉淀重新溶解，再加入几滴氢氧化钠溶液(100g/L) ，如再产生沉淀，则再加入氨水直至沉淀消失，此溶液则为银氨溶液。
吸取2ml 银氨溶液于干净试管中，加入0.5ml 乙醇，摇匀，再加入几滴氢氧化钠溶液(100g/L) ，于沸水浴上加热，放置冷却后，试管壁出现少量片状银镜，则乙醇需经过处理后使用。
脱醛方法：称取4g硝酸银溶解于少量水中，称取8g氢氧化钠溶于温热的乙醇中，然后将两者倒入1L的乙醇中，充分震摇后，放置暗处2d(期间不时摇动)，过滤后，于水浴中蒸馏，弃去初滤液，收集滤液，然后再检查。
1.1.3 仪器与设备Waters高效液相色谱仪e2695配2489紫外检测器美国沃特斯有限公司色谱柱 C 柱(150mm< 4.6mm 5um) 181.2 试验方法1.2.1 标准溶液的配制天然维生素 E 同系物通常为透明、淡黄色粘稠油状物，无臭无味，比重为0.950(25?) ，不溶于水，可溶于油、丙酮、乙醇、三氯甲烷和乙醚等脂溶[8] 性溶剂。
因为乙醇要进行脱醛处理，故选择甲醇配制标准溶液。
将100m①-生育酚、100m a -生育酚、25mgr -生育酚用甲醇分别定容至100ml、100ml、50ml棕色容量瓶中，将其作为1mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml 的储备液，放置冰箱保存;移取一定体积的三种生育酚储备液，配制成1mg/ml、10mg/ml，40ug/ml，60mg/ml，100mg/ml, 140mg/ml的浓度梯度的混合标准溶液。
1.2.2 单因素试验1.2.2(1 波长的确定试验以色谱条件为流动相：甲醇+水(V+V)=98+2,柱温:30?，流速:1.0ml/min ，，在紫外检测波长为280nm 290nm 292nm 294nm 300nm条件下进样量10uL做单因素试验。
实验六 维生素E的含量测定-液相色谱
实验六高效液相色谱法分离和测定α-ＶE一、实验目的1. 了解高效液相色谱仪的基本结构，掌握液相色谱仪的基本操作方法。
2. 掌握液相色谱分析的定性及外标定量方法。
二、原理1. 高效液相色谱的特点高压泵输送流动相，梯度洗脱，可在柱后直接检测流出液成分，通过改变溶剂极性或强度进而改变色谱柱效能，分离选择性和组分的容量因子，实现改善色谱系统分离度的目的。
2. 高效液相色谱仪(1) 高压输液系统，是提供足够恒定的高压，使流动相以稳定的流量快速渗透通过固定相。
(2) 进样系统，一般采用旋转式六通阀在高压下进样。
(3) 分离系统，在液相色谱柱中完成。
(4) 检测系统，液相色谱常见检测器有：紫外光度检测器，示差折光检测器、荧光检测器电化学检测器。
3. 高效液相色谱的类型根据固定相和分离机理的不同，高效液相色谱如下几种类型(1) 液—固吸附色谱：基于各组分在固体吸附剂表面上具有不同吸附能力而进行分离。
(2) 液—液分配色谱：组分在两相间经过反复多次分配各组分间产生差速迁移，从而实现分离。
(3) 化学键合相色谱：通过共价键将有机固定液结合到硅胶载体表面得到各种性能的固定相。
(4) 离子交换色谱：离子交换树脂上可电离的离子与流动相中带相同电荷的组分离子进行可逆交换，由于亲和力的不同彼此分离。
(5) 离子色谱：用离交换树酯作为固定相，电解质溶液为流动相，用电导检测器检测。
(6) 凝胶色谱：基于试样中各组分分子的大小和形状不同来实现分离。
4. 实验原理反向色谱与正相色谱组成相反，是以非极性或弱极性的固定液制成的固定相，以极性或相对强的极性溶剂作为流动相组成的液—液分配色谱。
但目前多是采用化学反应的方法将非极性或弱极性的有机物分子键合到载体表面，制成键合相的固定相，所以也称键合相色谱。
这种色谱的分离机理比较复杂，一般认为是液—固吸附和液—液分配并存。
在反向HPLC中常用的键合相有十八烷基硅烷(Ｃ18）、辛基硅烷(Ｃ8)氰基硅烷、氨基硅烷等。
〖医学〗高效液相色谱法测定血清中维生素A、E、β-胡萝卜素
五、思考题
1. 维生素A、D 、E的生理作用、缺乏表 现及食物来源。
2. 哪些B 族维生素与能量代谢有关？
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1. 配制标准液时：
若有条件应对配制好的标准稀释液 维生素A、维生素E、β-胡萝卜素 200～600nm扫描，观察最大吸收峰 的波长；
如果所用HPLC仪能作波长变换，则 在测定组分的最大吸收波长下测定 可取得较高的灵敏度。
2. 吸取上清液时：
注意不可触及界面；
否则： 一方面会吸入水，影响分析和柱 的分离能力； 另一方面，界面上的脂肪层可能 会影响分析结果。
多种 肺炎
细菌均可引起大叶性肺炎，但绝大多 数为肺 炎链球 菌，其 中以Ⅲ 型致病 力最强 。肺炎 链球菌 为革兰 阳性球 菌，有 荚膜， 其致病 力是由 于高分 子多糖 体的荚 膜对组 织的侵 袭作 用。少数为肺炎杆菌、金黄*色葡萄球 菌、溶 血性链 球菌、 流感嗜 血杆菌 等。肺 炎链球 菌为口 腔及鼻 咽部的 正常寄 生菌群 ，若呼 吸道的 排菌自 净功能 及机体 的抵抗 力正常 时， 不引发肺炎。当机体受寒、过度疲劳 、醉酒 、感冒 、糖尿 病、免 疫功能 低下等 使呼吸 道防御 功能被 削弱， 细菌侵 入肺泡 通过变 态反应 使肺泡 壁毛细 血管通 透性增 强，浆 液及 纤维素渗出，富含蛋白的渗出物中细 菌迅速 繁殖， 并通过 肺泡间 孔或呼 吸细支 气管向 邻近肺 组织蔓 延，波 及一个 肺段或 整个肺 叶。大 叶间的 蔓延系 带菌的 渗出液 经叶支 气管 播散所致。 编 辑 本 段 临 床表现
多数起病急骤，常有受凉淋雨、劳累、 病毒感 染等诱 因，约1/3患病 前有上 呼吸道 感染。 病程7~ 10天。 （一 ）寒战 、高热 ：典型 病例以 突然寒 战起病 ，继之 高热， 体温可 高达39℃~40℃，呈 稽留热 型，常 伴有头 痛、全 身肌肉 酸痛， 食量减 少。抗 生素使 用后热 型可不 典型， 年老体弱者可仅有低热或不发热。
高效液相色谱法测定复方维胺酯维E乳膏中维生素E的含量
前美国药典24版大部分采用细菌内毒素检查法,两年后,基本上不再利用热原检查法。
英国、意大利、德国药典、欧洲药典以及日本药局方都已收载细菌内毒素法,我国2000年版药典对细菌内毒素检查法已作了更进一步的修订,使之更合理,更与国际标准接轨。
3.2 通过对浙江三九邦而康药业有限公司生产的注射用盐酸普鲁卡因连续三个批号分别用三个厂家生产的鲎试剂进行干扰试验,结果表明注射用盐酸普鲁卡因无干扰作用。
认为可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法。
细菌内毒素检查法具有快速、简便、费用低且灵敏度高、重现性好的优点,尤其是在药品生产过程中可快速准确地检测出中间体热源,缩短检验时间,节约成本,值得推广应用。
3.3 根据实验结果,确定注射用盐酸普鲁卡因细菌内毒素检查方法如下:取本品,依法检查(中国药典2000年版二部附录XIE ),每1mg 注射用盐酸普鲁卡因中含细菌内毒素不得超过0.6EU 。
收稿日期:2003205227高效液相色谱法测定复方维胺酯维E 乳膏中维生素E 的含量基金项目:国家药典会地标升国标课题郑国钢1,王一微2(1.浙江省药品检验所,浙江 杭州310004;2.台州医药有限公司,浙江 台州318000)摘要:目的 采用HPLC 测定复方维胺酯维E 乳膏中维生素E 的含量。
方法 以Symmetry C 18为分析柱,甲醇为流动相,检测波长为285nm 。
结果 平均回收率分别为99.8%。
结论 方法简便,结果准确,可用于该制剂质量控制。
关键词:维胺酯;维生素E ;高效液相色谱法中图分类号:R286;R917.01 文献标识码:B 文章编号:100727693(2004)0420321202Determination of vitamin E in compound viaminate and vitamin E creamZHEN G Guo 2gang 1,WAN G Y i 2wei 2(1.Zhengjiang Institute f or Drug Cont rol ,Hangz hou 310004,China )ABSTRACT :OB JECTIVE To establish a method for the determination of vitamin E in compound viaminate and vitamin E cream by HPLC.METH OD The Symmetry C 18column was used.The mobile phase was methanol.The detection wavelength was set at 285nm.RESU LTS The average recovery was 99.82%.CONC L USION Results obtained showed that it ’s a reliable and accurate method for the quality control of compound viaminate and vitamin E cream .KE Y WOR DS :viaminate and vitamin E cream ;vitamin E ;HPLC 复方维胺酯维E 乳膏用于痤疮,颜面播散性粟粒狼疮,毛发红糠疹,毛囊角化症等皮肤病。
高效液相色谱法测定维生素E胶囊中α-VE的含量(2015)
高效液相色谱法测定VE胶囊中α-VE的含量一、目的要求1．了解高效液相色谱仪的基本构造和工作原理。
2．掌握高效液相色谱仪的正确操作方法。
3．学习维生素E的定量分析方法。
二、实验原理色谱法的分离原理是：溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号被检测。
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)。
按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。
RPC一般用非极性固定相（如C18、C8），在现代液相色谱中应用最为广泛，约占整个HPLC应用的80%左右。
维生素E又称生育酚，目前已经确认的有8种异构体，αβγδ生育酚和αβγδ生育三烯酚，天然存在的α-生育酚的维生素E活性最强。
α-生育酚醋酸酯是α-生育酚的酯化产品，常用在维生素胶囊中，具有很强的氧化稳定性。
样品以乙醇溶解，采用RPC法，以乙醇为流动相，C18色谱柱分离，紫外检测器284 nm 波长检测，外标法定量，测定维生素E胶囊中α-生育酚醋酸酯的含量。
三、仪器和试剂维生素E醋酸酯标准品、色谱纯乙醇、分析纯四氢呋喃、无水乙醇。
HPLC高效液相色谱仪（日本岛津，LC-10A 泵，SPD-20A 紫外双波长检测器）、KQ5002B型超声波清洗器、、紫外可见分光光度计。
四、实验条件色谱柱为Eclipse XDB-C18柱( 150 mm × 4. 6 mm，5 μm i. d. ) ; 流动相为乙醇，流速0.5 mL /min; 进样量20 μL; UV 检测器，检测波长为284 nm(通过紫外分光光度计扫描确定)。
饲料中维生素E的测定 高效液相色谱法-最新国标
饲料中维生素E的测定高效液相色谱法1范围本文件描述了饲料中维生素E的高效液相色谱测定方法。
本文件中“第一法皂化提取法”适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、复合预混合饲料和维生素预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚）的测定，“第二法直接提取法”适用于维生素预混合饲料、复合预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）的测定。
本文件“第一法皂化提取法”的定量限为1mg/kg，“第二法直接提取法”的定量限为20mg/kg。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。
4第一法皂化提取法注意：使用的器皿不含有氧化性物质；分液漏斗活塞玻璃表面不涂油，处理过程在避光下操作；提取过程在通风柜中操作。
4.1原理试样用碱溶液皂化后，经液液萃取或固相萃取净化后，用高效液相色谱仪分离测定，外标法定量。
4.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
4.2.1水：GB/T6682，一级。
4.2.2无水乙醇：色谱纯。
4.2.3无水乙醇。
4.2.4石油醚（沸程30℃-60℃）。
4.2.5甲醇：色谱纯。
4.2.6乙腈：色谱纯。
4.2.7甲酸。
4.2.8L-抗坏血酸。
4.2.9二丁基羟基甲苯（BHT）。
4.2.10无水硫酸钠。
4.2.11氢氧化钾溶液（500g/L）：称取500g氢氧化钾，加水溶解，冷却后用水定容至1000mL，混匀。
4.2.1270%乙醇溶液：取无水乙醇70mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。
4.2.1310%甲醇溶液：取甲醇10mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。
4.2.140.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水稀释，定容至1000mL，混匀。
高效液相色谱法测定血清中维生素A、E、β-胡萝卜素
血清样品在采血后立即离心，分离 血清； 置5ml塑料试管中，充氮、密封，于 -40℃保存备用。
在5ml棕色具塞玻璃离心管中，加入 0.25ml血清、1ml 10％邻苯三酚乙醇溶 液、0.5ml 60％KOH，用氮气将管内空 气置换，37℃水浴1h。
冷水浴3min后加入5％NaCl 1ml，己烷 /乙酸乙酯(9:1)3ml，用氮气将管内空 气置换，盖紧塞子，水平振荡器上振 荡5min(40次/min)；
β-胡萝卜素遇光和氧会被迅速破坏， 所以应临用新配，并注意避光保存。 样品的提取液比较稳定，可以隔夜 后进行分析。
五、思考题
1. 维生素A族维生素与能量代谢有关？
四、质量控制
1. 配制标准液时：
若有条件应对配制好的标准稀释液 维生素A、维生素E、β-胡萝卜素 200～600nm扫描，观察最大吸收峰 的波长。
如果所用HPLC仪能作波长变换，则 在测定组分的最大吸收波长下测定 可取得较高的灵敏度。
2. 吸取上清液时：
注意不可触及界面；
否则： 一方面会吸入水，影响分析和柱 的分离能力； 另一方面，界面上的脂肪层可能 会影响分析结果。
β-胡萝卜素以氯仿配制成不同浓 度的标准液，同样品一样处理。
分别以标准应用液浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标，绘制工作曲线。
三、数据处理
将样品中三种待测组分平行测定的峰面 积均值分别代入各自的工作曲线，求得 测定样液中各自的含量。
再乘以样品处理时的稀释倍数，即得 到血清样品中维生素A、维生素 E及β胡萝卜素的含量。
高效液相色谱法测定血清中 维生素A、E、β-胡萝卜素
维生素E含量测定方法
高效液相色谱法对维生素E粉、E油含量的测定色谱条件色谱柱：采用C18柱(长150 mm，内径4.6mm，粒径4-5μm)流动相：甲醇(色谱醇)+水(去离子水) 比例：(98 + 2 )流速：1.2 ml/min检测波长:285 nm柱温: 25±2 ℃进样量：20 μL溶液制备标准溶液的制备：本实验室的标准品为液体油状物，因此用注射器抽取直接滴加到容量瓶中称量，把容量瓶放在分析天平托盘上然后滴加，称取维生素E标准品约0.1g(准确至0.0002),置50mL棕色量瓶中,加甲醇适量溶解并稀释至刻度,摇匀。
绘制标准曲线把制成2.008 mg/mL的溶液作为贮备液。
分别准确移取0.5、1.25、2.5、3.75、5mL 至10mL 的棕色量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀；得到浓度分别为0.1004、0.251、0.502、0.753、1.004mg/ml的五种溶液，分别经0.45μm 滤膜滤过,滤液作为标准溶液。
用100μL的进样针分别从制备的不同浓度的标准溶液抽取60μL溶液，注意不能带有气泡，注入液相色谱仪,按色谱条件操作,从0.1004——1.004mg/ml依次进样，记色谱峰面积以标准品溶液浓度(C)为纵坐标,峰面积(A)为横坐标,按照外标法过5点绘制标准曲线。
样品溶液的制备：维生素E粉样品溶液的制备制备步骤为：研磨→称量→水浴溶解→定容→过滤1.研磨把试样E粉倒入研钵中适量，用研磨棒轻度研磨至颜色有变化为止。
2.称量把称量纸放到分析天平上然后置零，把研磨好的试样用药匙转移到称量纸上，称取维生素E 粉约1g(约相当于维生素E 0.5g，准确至0.0002g),置50mL棕色量瓶中。
3.水浴溶解加甲醇适量,置超声波水浴器中助溶20 min。
4.移取定容冷却至室温,用甲醇稀释至刻度,充分摇匀，从制备好的溶液中移取1mL到10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度,充分摇匀;再从制备好的10mL容量瓶中的溶液中移取2.5mL放置到10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度,充分摇匀。
高效液相色谱法测定海泥中的维生素E
收稿日期：!""!#$"#"%作者简介：方奕文，男，$&’%年生，硕士，副教授，()*：（"+,-）!&"!+-"，.#/01*：234056!789:);9:<5:基金项目：广东省海洋渔业局资助（项目编号：=!"""",>"!）:高效液相色谱法测定海泥中的维生素!方奕文，余坚，余林，郝志峰，江慧娟（汕头大学分析测试中心，广东汕头,$,"’?）关键词：萃取；高效液相色谱法；维生素.；海泥中图分类号：@’,%文献标识码：=文章编号：$"""#%+$?（!""?）",#",?!#"$"实验部分"#"仪器和试剂高效液相色谱仪（A B =C C #B A $"=，日本岛津公司）；C D E #$"=紫外检测器。
维生素.（F .）标样和维生素.酯标样（美国A G )/C )H #I 1<)公司，固态，纯度&&J ）；石油醚、乙醚、环己烷、乙醇和甲醇均为国产分析纯。
海泥样品取自于粤东近岸海域。
"#$色谱条件A $%色谱柱；流动相为甲醇#水（体积比为&%K !），流速$L ,/B ／/15；检测波长!+-5/；进样量$""B；室温下操作。
"#%标准溶液的配制准确称取"L ""-!6F .标样于$"/B 棕色容量瓶中，用甲醇溶解定容，配制成质量浓度为-!"/6／B 的贮备液，分别取一定量的F .贮备液用甲醇稀释配制成浓度为,，$"，!"，!,，,"，$""，!""，-""/6／B 的标准溶液系列。
实验报告-高效液相色谱法测定VE含量
实验四高效液相色谱法测定V E含量1 实验目的1.1了解高效液相色谱仪的基本操作；1.2了解高效液相色谱仪测定V E的原理。
2 实验原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
V E（维生素E）又名生育酚或产妊酚，在食油、水果、蔬菜及粮食中均存在。
有抗氧化作用，能增强皮肤毛细血管抵抗力，并维持正常通透性；有改善血液循环及调整生育功能、抗衰老作用等。
V E通过高效液相色谱柱进行分离，PDA检测器检测，外标法定量。
3实验器材3.1 实验样品V E样品溶液3.2 实验试剂浓度为50µg/ml的V E标样3.3 实验仪器高效液相色谱仪附PDA检测器4 色谱条件色谱柱：C18柱；流动相速度：0.3ml/min；进样量：5µl；柱温：30℃。
5 实验结果与讨论5.1实验结果本次实验采用的是单点法测定。
实验结果见表1。
表1. 液相色谱仪测定苹果的VE含量样品中VE的浓度=乙烯标样的总量×苹果的峰面积/乙烯标样的峰面积=5µl×50μg/mL×17369/（5µl×42217）=20.57μg/mL5.2实验讨论本次实验中，测定标样溶液V E含量时，在指定的保留时间内并未出峰。
讨论分析原因：样品溶液在上周实验后，一直置于离心管中，未避光低温保存，导致样品中V E氧化，液相测定时没有在相应的时间出峰。
本次实验时间较短，且主要目的是了解高效液相色谱仪的基本操作，以及液相色谱仪测定V E的原理，故结合前组同学对V E含量的测定数据进行讨论与分析。
高效液相色谱法测定维生素E胶囊中αVE的含量
高效液相色谱法测定维生素E胶囊中α-VE的含量高效液相色谱法测定维生素E胶囊中α-VE的含量一、实验目的本实验旨在采用高效液相色谱法（HPLC）测定维生素E胶囊中α-生育酚（α-VE）的含量，为药品质量控制提供依据。
二、实验原理高效液相色谱法是一种分离和分析技术，利用色谱柱将样品中的各组分进行分离，然后通过检测器对分离后的组分进行检测和定量。
本实验采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，荧光检测器检测维生素E。
维生素E在流动相中的分配系数不同，因此各组分在色谱柱上的保留时间也不同，从而实现分离。
三、实验步骤1.试剂与仪器准备：甲醇（色谱纯）、维生素E标准品、维生素E胶囊样品、C18色谱柱、荧光检测器、高效液相色谱仪。
2.标准溶液制备：精确称取适量维生素E标准品，用甲醇溶解并定容至刻度，制成一定浓度的标准溶液。
3.样品溶液制备：取适量维生素E胶囊样品，破碎后混合均匀，精确称取适量样品，用甲醇溶解并定容至刻度，制成一定浓度的样品溶液。
4.色谱条件：色谱柱为C18柱，流动相为甲醇-水（90:10，v/v），流速为1.0mL/min，荧光检测器激发波长为295nm，发射波长为330nm。
柱温为室温。
5.标准曲线绘制：分别精密吸取不同浓度的标准溶液，按上述色谱条件进样测定，记录峰面积。
以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
6.样品测定：精密吸取样品溶液，按上述色谱条件进样测定，记录峰面积。
根据标准曲线计算样品中α-VE的含量。
7.数据处理与分析：将实验数据录入表格，进行数据处理与分析，得出实验结果。
四、实验结果与讨论1.实验结果：通过高效液相色谱法测定维生素E胶囊中α-VE的含量，得到如下数据：标准曲线方程：y = ax + b相关系数：r样品中α-VE的含量：X μg/粒回收率：Y%相对标准偏差（RSD）：Z%2.实验讨论：本实验采用高效液相色谱法测定维生素E胶囊中α-VE的含量，方法简便、准确、重现性好。
高效液相色谱法测定维生素E乳中维生素E的含量
高效液相色谱法测定维生素E乳中维生素E的含量目的建立测定维生素E乳中维生素E含量测定的方法。
方法采用SHISEIDO CAPCELL PAK MGⅡC18色谱柱，以甲醇为流动相；流速：1.0 ml/min；检测波长：285 nm。
结果维生素E在浓度在0.133～0.931 mg/ml内与峰面积具有良好的线性关系，平均回收率为100.5%，RSD = 1.0%。
结论本方法测定维生素E乳中维生素E含量简便、快速、准确。
标签：维生素E乳；高效液相色谱法；含量测定市售的维生素E乳由维生素E和其他基质组成，具有治疗皮肤干燥及因季节变化所引起的皮肤瘙痒的作用。
原标准中维生素E的含量测定分别采用紫外分光光度法和气相色谱的方法。
为了更有效地控制该药品的质量，本研究采用了反相高效液相色谱法测定维生素E乳中維生素E的含量，方法准确、简便。
1 仪器与试药1.1 仪器岛津高效液相色谱仪（SPD-10Avp检测器，岛津LC-10ATvp泵，LC-Solution 色谱数据工作站）；XS105型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。
1.2 试药维生素 E 标准品（中国药品生物制品检定所，批号：100062-201008），维生素E乳（北京吉康利通医药科技有限公司自制，批号：20110302，20110303，20110304）。
甲醇为色谱纯，水为纯化水，无水乙醇为分析纯。
2 方法与结果2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：SHISEIDO CAPCELL PAK MGⅡC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温：室温；流动相：甲醇；流速：1.0 ml/min；检测波长：285 nm；进样量：20.0 μl。
理论塔板数按维生素E峰计算应大于2400。
2.2 供试品溶液的制备精密量取本品5 ml（样品标示量为10 mg/ml），置100 ml量瓶中，加入无水乙醇至刻度，振摇使充分溶解后过0.45 μm有机滤膜滤过，作为供试品溶液。
高效液相色谱法测定蛋黄油软膏中维生素E的含量
速，可用于蛋黄油软膏中维生素 Ｅ（γ生育酚、α生育酚）的含量测定。
关键词：蛋黄油；维生素 Ｅ；γ生育酚、α生育酚；高效液相色谱法
中图分类号：Ｒ９２７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６３７６５（２０１８）１００２０２７００６１０２
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＶｉｔａｍｉｎＥｉｎＥｇｇＹｏｌｋＯｉｌＯｉｎｔｍｅｎｔＢｙＨＰＬＣ
蛋黄油软膏中的主要成分是蛋黄油，蛋黄油是鸡蛋黄中 脂溶性物质的总称〔１，２〕，其主要成分包括脂肪酸类、蛋白质氨 基酸类及多种 维 生 素 和 矿 物 质 〔３〕，营 养 结 构 自 然 合 理，经 济 价值较高，其质量的好坏直接关系到复方蛋黄油软膏的药用 价值。因此为了分析测试蛋黄油软膏中维生素的含量，控制 蛋黄油软膏的质量，建立一种快速、准确测定维生素含量的方 法是十分必要的。
作者简介：吴志珊。Ｅｍａｉｌ：ｗｕｚｈｉｓｈａｎ０６４６７１４＠１６３ｃｏｍ
１２ 试药 γ生育酚、α生育酚标准品：均来自 ｓｉｇｍａ公司； 水为重蒸水，其余 试 剂 均 为 分 析 纯；复 方 蛋 黄 油 软 膏 （自 研， 批号：ＣＨ：１００１１２）。 ２ 方法与结果 ２１ 色谱条件 色谱柱：ＳｕｎＦｉｒｅＣ１８（２５０×４６ｍｍ，５μｍ）；流 动相：乙 腈水 （９６∶４）；柱 温：３０℃；检 测 波 长：２９２ｎｍ；流 速： １０ｍＬ·ｍｉｎ－１；进样体积：２０μＬ。 ２２ 溶液的制备 ２２１ 样品溶液的制备： ２２１１ 皂化：准确称取 ３０ｇ样品于锥形瓶中，加 １５ｍＬ无 水乙醇，搅 拌 均 匀，加 入 ５ｍＬ１０％ 抗 坏 血 酸，混 匀。加 入 １０ｍＬＫＯＨ（１＋１），混匀。于 １００℃ 中皂化 ３０ｍｉｎ使皂化完 全，皂化后立即放入冰水浴中冷却。 ２２１２ 提取：将皂化后的试样移入分液漏斗，用 ２５ｍＬ水 分 ２次荡洗锥形瓶，洗液并入分液漏斗，再用 ５０ｍＬ无水乙醚 分 ２次洗锥形瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗，轻轻振摇分液 漏斗，静置 １５ｍｉｎ分层，弃去水层。 ２２１３ 洗涤：用约 １００ｍＬ水分 ５次水洗乙醚层，直至用 ｐＨ
HPLC法测定维生素E片含量
HPLC法测定维生素E片含量【摘要】目的建立测定维生素E(VitE)含量的高效液相色谱法。
方法采用Shimadzu C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇为流动相；检测波长为284 nm，流速1.5 ml・min-1。
结果维生素E在0.125～5.0 mg・ml-1范围内，峰面积与其浓度线性关系良好（r＝0.999 9），高、中、低3种浓度的平均加样回收率为101.4％～102.7%，RSD为0.46％～0.71%，最低检测限为0.4μg・ml-1。
结论本法准确、简便、快速，适用于维生素E片的含量测定。
【关键词】维生素E；高效液相色谱法；含量测定Abstract：Objective To establish a RP-HPLC for determination of Vitamin E.Method Vitamin E was determinated on HPLC instrument fixed a Shimadzu C18 column (4.6mm×250mm，5μm) with UV detection at 284nm，and the mobile phase was MeOH， the flow rate was 1.5ml・min-1.Results The calibration curve was linear(r=0.9999)within the range of 0.125～5.0 mg・ml-1 for Vitamin E， the average recovery rates were from 101.4% to 102.7% for three different levels of the amount of Vitamin E，RSD was from 0.46％ to 0.71%，and LOD was 0.4μg・mL-1.Conclusion This method was simple，quick，accurate and effective for determination of Vitamin E.It was suitable for the quality control for tabella Vitamin E.Key words:Vitamin E;HPLC;determination维生素E又称生育酚，是一种脂溶性物质，在人体内主要参与生育功能、肌肉代谢等过程，具有强大的抗氧化性，是人体必须的微量元素之一。
天然维生素E软胶囊中维生素E的含量测定
天然维生素E软胶囊中维生素E的含量测定[摘要] 目的应用高效液相色谱法（HPLC）建立天然维生素E软胶囊的含量测定方法。
方法采用Alltima C18色谱柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm），以甲醇为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长285 nm。
结果在本方法中，维生素E的线性关系良好，线性相关系数为0.9999；专属性强，精密度和稳定性良好，相对标准偏差（RSD）分别为0.17%和0.87%；平均加样回收率（n = 6）为100.8%，加样回收率良好。
含量测定结果显示3个批号样品中维生素E的含量分别为标示量的101.2%、100.8%、102.7%。
结论该方法准确、简单、快速，可用于天然维生素E软胶囊的含量测定。
中国论文网/6/view-12954781.htm[关键词] 天然维生素E软胶囊；维生素E；高效液相色谱法；含量测定[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）10（c）-0136-04Determination of narural vitamin E in Natural Vitamin E Soft CapsulesXU Wenfeng XU Shuo HE Xiaorong JIANG Wenqing WU Xuejun KUANG Yongmei JIN PengfeiDepartment of Pharmacy，Beijing Hospital National Center of Gerontology，Beijing 100730，China[Abstract] Objective To establish a high performance liquid chromatography （HPLC）method for the determination of narural vitamin E in Natural Vitamin E Soft Capsules. Methods An Alltima C18 column （150 mm× 4.6 mm，5 μm）wasused for the separation，with methanol as the mobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 285 nm. Results The method showed good linearity with correlation coefficient of 0.9999 for vitamin E. The assay method showed good specificity. The precision and stability were satisfactory with the relative standard deviations （RSD）of 0.17% and 0.87% respectively. The average spiked recovery was 100.8% （n = 6），the recovery rate was good. The determination results was 101.2%，100.8% and 102.7% of the labeled amount of the three batches of samples respectively. Conclusion The established method is accurate，simple and fast，and can be used for determination of narural vitamin E in Natural Vitamin E Soft Capsules.[Key words] Natural Vitamin E Soft Capsules；Natural vitamin E；HPLC；Determination维生素E为微黄色至�S色澄清的黏稠液体，几乎无臭，遇光色渐变深，不溶于水，溶于无水乙醇、丙酮等有机溶剂，在空气中会缓慢氧化，紫外线照射可使其分解。
维生素e的含量测定方法 -回复
维生素e的含量测定方法-回复维生素E（Vitamin E）是一种重要的脂溶性维生素，对人体健康有许多益处。
它具有较强的抗氧化性能，能够保护细胞免受自由基的损害，从而减缓衰老的过程，维护血管、肌肤以及眼睛的健康。
要正确测定维生素E的含量，有许多可行的方法。
在此，我们将介绍一种常用的方法高效液相色谱法（HPLC），以及步骤和要点。
步骤一: 样品准备首先，我们需要准备样品。
这可以是食物中提取的维生素E，或者是维生素E补充剂。
将样品粉碎，以获得更好的分散性。
根据样品资料，选择合适的样品量，常规情况下为0.2~0.5克。
然后，将样品置于适当的容器中，并密封以防止维生素E的挥发或氧化。
步骤二: 提取过程接下来，我们需要进行维生素E的提取。
这是一种溶剂萃取的方法。
加入适量的萃取溶剂，常见的有乙醇、醚类、氯仿等。
注意，选择合适的萃取溶剂不仅要考虑溶解度，还要考虑其在分析过程中对仪器设备的影响。
样品和溶剂的比例一般为1:10。
然后，利用涡旋振荡器或超声波清洗机将样品与溶剂充分混合，进行提取过程。
提取时间一般为15~30分钟，提取温度可以控制在10~30摄氏度之间。
步骤三: 净化过程提取得到的提取液中可能还包含一些杂质，需要进行净化处理。
通常，我们会利用固相萃取柱（SPE）来进行净化。
选择合适的SPE柱根据维生素E的物理性质和样品特点。
将样品溶液转移至SPE柱中，注意控制流速以保证良好的净化效果。
一般来说，首先使用无极性固相材料进行预洗，然后再使用高极性固相材料进行后处理。
此过程可有效去除大部分杂质。
步骤四: 色谱分析在样品处理完成后，我们就可以进行色谱分析了。
将经过净化的样品溶液注入色谱柱中。
常见的色谱柱是正相色谱柱，填充物可以是矽胶或其他材料。
在色谱分析中，通常会选择适当的流动相，如正己烷/乙酸乙酯/异丙醇。
根据维生素E的特征峰，设置合适的检测波长，通常为280纳米。
然后，利用高效液相色谱仪（HPLC）进行分离和定性分析。
高效液相色谱法测定人血清中维生素E
高效液相色谱法测定人血清中维生素E实验目的：1.了解高效液相色谱的结构、原理及其应用范围。
2. 掌握仪器分析的研究方法和基本操作实验耗材与仪器：实验仪器：Agilent高效液相色谱仪1260系列实验设备：MX-F漩涡混合器、TGL-16G高速离心机，BF2000氮气吹干仪实验试剂：无水乙醇（分析纯）、正己烷（色谱纯）、甲醇（色谱纯）超净水、异丙醇（分析纯）实验步骤：一、样品前处理：1. 准确吸取血清0.1mL于2mL朔料离心管中，加入1μg/mL内标液（δ-VE）0.2mL。
2. 加入无水乙醇0.3mL，盖塞，用漩涡混合器充分混匀2min。
3. 加入正己烷0.6mL，盖塞，用漩涡混合器充分混匀2min。
4. 样品取出后立即离心（3000r/min，5mim），去上层（正己烷层）于另外的朔料管中（一定不要取下层）。
5. 对下层溶液重复提取2次。
6. 氮气吹干正己烷7. 立刻加入200μL无水乙醇，用漩涡器充分混合，使提取物完全溶解于无水乙醇中。
取溶解物100μL至带内衬管的进样瓶中待测。
二、标准曲线配置1.分别取γ-VE10μg/mL、α-VE20μg/mL、和内标δ-VE10μg/mL的标准工作液，用无水乙醇配置成1μg/mL的单标工作液。
2. 用α、γ-VE标准工作液配制工作曲线，使每个混合标准液中含有内标（δ-VE）1μg/mL，并用无水乙醇补足至1mL。
见下表1标准曲线配置工作表（直接配置于进样瓶）表1 标准曲线配置浓度与取样量三、用高效液相色谱法测定vit-E1. 过滤流动相2. 上机测定a)测定δ、γ、α-VE、和内标单标，保留时间定性b）测定α、γ-VE标准曲线，用他们与δ-VE内标的峰高比或面积比定量。
c）测定未知样品3. 仪器分析条件色谱柱：ZORBAX SB-Aa 5μm250*4.6mm流动相：甲醇：水=90：10流速：1.0μg/mL紫外线检测波长：295nm荧光激发波长：295nm，发射波长350nm进样量：20μL柱温：35℃实验结果与数据分析1. 定性保留时间见表2。
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实验四高效液相色谱法测定V E含量
1 实验目的
1.1了解高效液相色谱仪的基本操作；
1.2了解高效液相色谱仪测定V E的原理。
2 实验原理
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
V E（维生素E）又名生育酚或产妊酚，在食油、水果、蔬菜及粮食中均存在。
有抗氧化作用，能增强皮肤毛细血管抵抗力，并维持正常通透性；有改善血液循环及调整生育功能、抗衰老作用等。
V E通过高效液相色谱柱进行分离，PDA检测器检测，外标法定量。
3实验器材
3.1 实验样品
V E样品溶液
3.2 实验试剂
浓度为50µg/ml的V E标样
3.3 实验仪器
高效液相色谱仪附PDA检测器
4 色谱条件
色谱柱：C18柱；流动相速度：0.3ml/min；
进样量：5µl；柱温：30℃。
5 实验结果与讨论
5.1实验结果
本次实验采用的是单点法测定。
实验结果见表1。
表1. 液相色谱仪测定苹果的VE含量
样品中VE的浓度=乙烯标样的总量×苹果的峰面积/乙烯标样的峰面积
=5µl×50μg/mL×17369/（5µl×42217）=20.57μg/mL
5.2实验讨论
本次实验中，测定标样溶液V E含量时，在指定的保留时间内并未出峰。
讨论分析原因：样品溶液在上周实验后，一直置于离心管中，未避光低温保存，导致样品中V E氧化，液相测定时没有在相应的时间出峰。
本次实验时间较短，且主要目的是了解高效液相色谱仪的基本操作，以及液相色谱仪测定V E的原理，故结合前组同学对V E含量的测定数据进行讨论与分析。
因时间有限，实验采用了单点法进行测量分析，且无平行重复，这样误差较大。
我们以后实验时，V E标样可以选择5个浓度，每个浓度分别测定3-4次，取其峰面积的平均值后作标准曲线，这样误差更小。
6知识扩展
6.1高效液相色谱仪包括哪几个部分组成？
答：高效液相色谱仪主要由输液系统、进样系统、色谱分离系统、检测器这四个部分组成，其流程图见图1。
输液系统包括贮液槽和输液管道、高压泵和梯度洗脱装置。
贮液槽，通常是由玻璃或不锈钢等材料制成的，用来存贮足够数量、符合分析要求流动相的容器。
输液管道是管道内径很小的用于连接高效液相色谱仪各主要流路系统。
高压泵是将流动相在高压下连续送入色谱柱，使样品在色谱柱内完成分离过程。
高效液相色谱仪采用的是往复式恒流泵，是具有输出压力高、流量稳定、流量可调范围宽、泵内死体积小、具有梯度洗脱及耐酸碱腐蚀、溶剂更换迅速等性能。
梯度洗脱装
置是在分离过程中，随时间函数程序改变流动相组成，有分低压梯度和高压梯度两种装置。
图1 高效液相色仪流程图
进样系统有由进样口、注射器、流通阀和定量管等组成，其作用是使样品有效地送入色谱柱。
进样系统是柱外效应的重要来源之一，为了减少对柱高的影响，避免由柱外效应而引起峰展宽。
进样口要求死体积小，这样能使样品各组分几乎同时进入色谱柱。
色谱分离系统由色谱柱、柱恒温器组成。
色谱柱由柱管和固定相构成，分为普通分析柱（内径大约4~5mm）、半制备或制备柱（内径大于8mm）、窄柱（内径在2mm左右）以及微径柱（内径小于1mm），内径小的色谱柱相对更省溶剂，相对灵敏度更高。
柱恒温箱是另一个重要的组成，柱温是液相色谱的重要操作参数。
高精度的温度控制对保证色谱柱性能，进行高精度、高重现性的分析是比不可少的。
高效液相色谱仪的检测器有紫外-可见光检测器、荧光检测器、示差折光检测器和二极管阵列检测器。
6.2操作高效液相色谱仪时需要注意哪些问题？
答：操作高效液相色谱仪时应注意：
1）配置样品时要严格按照标准配制对照品浓度（低浓度），不可超过或低于一倍。
2）所需玻璃仪器和容器，尽量选用棕色容量瓶进行配制。
每次临用前需要用纯水清洗干净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后方可使用。
3）实验前要检查仪器是否存在漏液现象、压力是否稳定、柱子是否安反。
检查完毕后，打开电脑、工作站电源开关后，再打开泵电源开关、控制面板上泵
开关。
先用色谱甲醇冲洗柱子，等待机器平稳后，再打开检测器电源开关、控制面板上检测器开关。
30分钟后方可进针做实验。
4）对照品与样品进样量要尽量保持一致，样品峰面积与对照品峰面积尽量保持一致（不要超过一倍，可适当调整进样量或稀释倍数）。
5）注意系统评价：理论板数（达到标准要求）、分离度（大于1.5）、拖尾因子（0.95-1.05之间）。
6）平行进针要求RSD<2％，进样针每次改进不同样品或对照品时，需用色谱甲醇涮洗五次以上，涮洗位置要超过进样量位置。
7）操作过程中，应注意机器异常情况的发生（声音），压力是否过高（超过200Bar 不可再做实验），流动相是否流空、废液瓶是否已满等等。
8）实验结束后，用甲醇冲洗一小时，如果流动相中含有酸或缓冲盐，则先用新鲜纯水冲洗0.5小时，再用甲醇冲洗一小时。
9）由于实验时间加长，导致对照品与样品保留时间不一致时，在实验最后加进一针对照品，或采用对照品加样品同时进样的叠加法进样，对照峰面积是否为两者之和。
6.3 简述高效液相色谱仪常用的检测器及其特点。
答：高效液相色谱仪常用的检测器有紫外-可见光检测器、荧光检测器、示差折光检测器和二极管阵列检测器。
其具有：①灵敏度高；②对各类组分化合物都有响应或有特殊的选择性；③线性范围宽；④死体积小；⑤不破坏样品；⑥性能稳定，对温度和流速的变化不敏感；⑦能连续工作，可靠方便。
紫外-可见光检测器是高效液相色谱中应用最广的的检测器，它对许多样品具有高的灵敏度，最小检测量可达10-9g。
荧光检测器是选择性检测器，用于测定能发出荧光的物质。
示差折光检测器是通用型检测器，其利用纯流动相与含有被测组分的流动相之间折射率的差别进行检测。
凡具有与流动相折射率不同的组分，均可适用这种检测器。
二极管阵列检测器是一种新型检测器相当于紫外-可见光检测器，进入流动池的不是单色光，得到的信号是在所有波长上的三维色谱光谱信号。
用以判别色谱分离的状况及强化定量和定性分析。
6.4高效液相色谱的应用——氨基酸分析
答：氨基酸分析是生命科学研究中最重要的技术之一。
多数氨基酸无紫外吸收和荧光发射特性，示差折射检测器对氨基酸也无足够的灵敏度，为提高分析灵敏度和分离选择性，需氨基衍生，衍生的方式有柱前衍生和柱后衍生。
因此，反相高效液相色谱法与各种柱前衍生相结合的氨基酸分析技术，构成了具有广泛适
用性的现代氨基酸分析技术
柱后衍生离子交换色谱仪具备很高的自动化水平，分离氨基酸在特有柱后氧化及衍生中按固定程序与衍生试剂迅速反应并检测，消除由衍生时间、温度等因素的差异带来的测试误差。
衍生试剂不直接进入色谱柱使柱寿命延长，同时还可再生延长离子交换树脂固定相的使用时间。
衍生中最常用的是茚三酮柱后衍生法，这种方法几乎能分析所有氨基酸和氨基酸衍生物，蛋白质水解氨基酸之间不存在明显的衍生后灵敏度变化，该法分析技术手段繁多，对样品中存在的杂质适应性好，不足是分析周期时间长。
柱前衍生反相分配色谱分析法突出的优点是灵敏度高，分析时间短。