食品微生物检验无菌取样技术
微生物无菌取样方法
微生物无菌取样方法概述：微生物无菌取样是一种重要的实验操作，用于采集样品中的微生物，并保持其在取样和处理过程中的无菌状态。
本文将介绍几种常用的微生物无菌取样方法，以帮助实验人员正确进行无菌操作。
无菌取样方法：1. 火焰消毒法火焰消毒法是最常见的无菌取样方法之一。
首先，将待取样的工具（如镊子、培养皿等）放置在火焰中，直至工具表面完全变红；然后，将待取样的区域靠近工具焰口，让火焰的热量将其消毒。
在取样前后，务必将工具放回火焰中进行再次消毒，以确保无菌状态的维持。
2. 酒精消毒法酒精消毒法适用于对火焰敏感的材料。
首先，将待取样的工具浸泡在酒精中片刻，使其充分浸润；然后，将工具从酒精中取出，迅速挥发酒精。
在取样前，务必等待工具表面干燥，避免酒精残留对微生物生长的影响。
3. 紫外线消毒法紫外线消毒法利用紫外线的辐射杀灭微生物。
首先，将待取样的工具放置在已配备紫外线灯管的消毒设备中；然后，将设备关闭，开启紫外线灯管。
在一定时间内，让紫外线对工具表面进行照射，以杀灭潜在的微生物。
取样前后，务必使用前述火焰或酒精方法进行消毒。
4. 过滤法过滤法适用于液态样品的无菌取样。
首先，选用0.2微米的微孔过滤膜，将其装配在过滤器上；然后，将待取样的液态样品通过过滤器，使样品中的微生物被截留在过滤膜上。
取样后，将过滤膜移至培养基上，使截留的微生物在培养基上生长，并进行后续分析。
注意事项：1. 取样器具及培养皿等实验工具需提前进行高温高压灭菌，以确保其无菌状态。
2. 取样时要防止被周围空气中的微生物污染，避免把手触碰到取样区域。
3. 在无菌取样过程中，务必避免交叉污染，每次取样前后都要对工具进行消毒。
4. 注意避免取样过程中发生气溶胶扩散，防止微生物通过空气传播。
5. 紫外线辐射对人体有一定危害性，使用紫外线消毒法时要注意安全。
结语：微生物无菌取样是实验操作中的重要步骤，为了得到准确和可靠的实验结果，实验人员需要选择适合的无菌取样方法，并严格遵守操作规程。
微生物检验样品的采集步骤
微生物检验样品的采集步骤样品的采集是微生物检验的重要组成部分，用于检验的样品数量和状况具有重要意义。
这对取样人员和制样人员提出了很高的专业要求，既要保证样品的代表性和一致性，又要保证整个微生物检验过程在无菌操作的条件下进行。
微生物检验样品的采集大致分为取样、包装密封、标识、样品的运输、接收、保存几个环节。
一、样品的取样取样是指在一定质量或数量的产品中，取一个或多个代表性样品，用于感官、微生物和理化检验的全过程。
首先在取样之前应确认货、证是否相符。
其次取样工具要达到无菌的要求，对取样具和一些试剂材料应提前准备、灭菌。
如果使用不合适的采集工具，可能会破坏样品的完整性，甚至使样品采集毫无意义。
应根据不同的样品特征和取样环境，对取样物品和试剂进行事先准备和灭菌等操作。
另外要保证样品能够代表整批产品，其检测结果应具有统计学有效性，样品到达实验室时的状况应能反映出取样时产品的真实情况。
取样时应根据不同的产品类型、产品状态等选择不同的取样方法和标准。
①包装食品：对于直接食用的小包装食品，尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。
对于桶装或大容器包装的液体食品，取样前应摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质；取样时应先将取样用具浸入液体内略加漂洗，然后再取所需量的样品，装入灭菌容器的量不应超过其容量的3/4，以便于检验前将样品摇匀；取完样品后，应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度，并作记录。
尽可能不用水银温度计测量，以防温度计破碎后水银污染食品；如为非冷藏易腐食品，应迅速将所取样品冷却至0～4℃。
对于大块的桶装或大容器包装的冷冻食品，应从几个不同部位用灭菌工具取样，使样品具有充分的代表性；在将样品送达实验室前，要始终保持样品处于冷冻状态样品一旦融化，不可使其再冻，保持冷却即可。
②生产过程中的取样：划分检验批次，应注意同批产品质量的均一性；如用固定在贮液桶或流水作业线上的取样龙头取样时，应事先将龙头消毒；当用自动取样器取不需要冷却的粉状或固体食品时，必须履行相应的管理办法，保证产品的代表性不被人为地破坏。
食品微生物检验技术 车间空气等检测和粮食微生物
（3）采样注意事项：
擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。对每个擦拭 点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节 的消毒时间
空气的沉降菌指标与平皿的大小和沉降的时间有关
目前食品行业经常引用的标准是GB15979-2002《一次性 使用卫生用品卫生标准》，其规定生产环境卫生指标指标 为﹕ a)装配与包装车间空气中细菌菌落总数应<2500cfu/m3 b)工作台表面细菌菌落总数应<20 cfu/cm2, c)工人手表面细菌菌落总数应<300 cfu/只手，并不得检 出致病菌。
（2）待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃ 培养48 h 后计数。
（3）结果报告：报告每cm2食品接触面中或每只手的菌落 数
粮食微生物及粮食防霉
一、粮食微生物
定义：寄付在粮食和粮食食品上的微生物的统称。 种类：细菌、放线菌、酵母菌、真菌等 危害：导致粮食霉变，而且有的还可以产生具有 强烈的毒性和致癌性的毒素 粮食霉变：粮食微生物在环境适宜的条件下，可 以分解粮食中的有机物质，使之变质、霉腐，因而 使粮食出现变色、变味、发热、生霉等症状，这就 是粮食霉变。
（2）霉菌
据报道粮食上分离出来的霉菌约200种。其中 曲霉属就有26种，青霉属67种，毛霉目30种。 此外毛壳菌属和丝梗孢目15属。霉菌侵染粮食 时能分泌出活性很强的酶系，分解粮食的有机 物质，生长繁殖很快，对储粮危害极大。危害 最严重的而普片的是曲霉和青霉和镰刀菌。
霉菌对粮食的污染难于避免，而防霉，即防止 粮食上的霉菌危害，则是完全可能的。防重于 治，不仅是卫生工作的基本原则，也是粮食储 藏工作的重要方针。
成品及原辅料的微生物检验方法
成品及原辅料的微生物检验方法一.样品的采集和处理：1.采样方法1.1采样必须在无菌操作下进行1.2根据样品种类：袋装、瓶装和罐装食品，应采取完整的未开封的样品；如果样品很大，则需用无菌取样器取样；固体粉末样品，应边取边混合；液体样品通过振摇混匀；冷冻食品应保持在冷冻状态，非冷冻食品需在0-5℃中保存。
2.样品的处理：塑料或纸盒装样品，用75％酒精棉球消毒盒盖或袋口。
二.菌落总数的测定1.检验目的和范围：对无菌操作条件下获得的样品原液配制的样品稀释液进行细菌总数测定。
本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
2.操作程序：2.1培养基制备：1）检查预先经过灭菌处理的营养琼脂培养基是否处于正常、可用状态。
2）将灭菌培养基用电炉加热2分钟，或用水浴融化后，在40-45℃水浴中保温待用。
2.2以无菌操作将检样10mL(或g)入于含有90mL灭菌生理盐水的灭菌三角瓶中，经充分振摇后做成1：10的稀释液2.3用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，没管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液2.4另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管2.5选择2-3个适宜的稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
2.6稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基注入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照2.7待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h2.8菌落计数的报告2.8.1平板菌落数的选择：1）选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。
2）一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数。
微生物样品的取样方法及取样要求
微生物样品的取样方法及取样要求样品取样的要求1）在取样之前应确认货、证是否相符。
2）取样过程中应避免与水等环境的不良因素影响，防止样品被污染。
3）取样用具（如注射器、采血管、试管、探子、铲子、匙、取样器、剪子、样品袋等）必须是经过灭菌的。
4）对采集的样品一般要求随机取样。
若怀疑最有可能受病原体污染或者带有病原体的样品，可以进行选择取样。
5）根据样品种类（如盒装、袋装、瓶装和罐装），应取完整密封的样品。
如果样品很大，则需用无菌取样器取样；若样品是粉末，应边取边混合；若样品是液体的，通过振摇即可混匀；若样品是冷冻的，应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），而非冷冻动物产品须保持在0℃~5℃中保存。
6）取样前或取样后应在盛装样品的容器或样品袋上立即贴上标签，每件样品必须标记清除（包括品名、来源、数量、取样地点、取样人及取样日期）。
7）获取有关取样产品的信息：如样品名称、批量大小、包装类型、包装容器体积、生产线、产品编号或控制号、批量号、标签内容、包装破损状况、产品存放地点或建筑物的基本情况等。
8）当客户对所规定的取样程序有偏离、添加或删节的要求时，应详细记录这些要求和相关的取样资料，并记入包含检测结果的所有文件中，同时告知相关人员。
9）当取样作为检测一部分时，实验室应有程序记录与取样有关的资料和操作。
这些纪录应包括所用的取样程序、取样人的识别、环境条件（如果相关）、必要时有抽样地点的图示或其他等效方法，如果合适，还应包括取样程序所依据的统计方法。
食品微生物学的取样点食品微生物的取样计划中常包括以下取样点：原料、生产线（半成品、环境）、成品、库存样品、零售商店、或批发市场、进口或出口口岸。
原料的取样包括食品生产所用的原始材料、添加剂、辅助材料及生产用水等。
生产线样品是指食品生产过程中不同加工环节所取的样品，包括半成品、加工台面、与被加工食品接触的仪器面以及操作器具等。
对生产线样品的采集能够确定细菌污染的来源，可用于食品加工企业对产品加工过程卫生状况的了解和控制，同时能够用于特定产品生产环节关键控制点的确定和HACCP的验证工作。
食品微生物检验的采样方案取样方案有
×××××采样单
样品编号：━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 产品名称（商品名）______规格型号__________注册商标_____________ 生产厂家_______________通讯地址__________邮政编码□ □ □ □ □ □ 受检地点_______________通讯地址__________邮政编码 □ □ □ □ □ □ 采样地点_______________采样日期__________采样基数______________ 生产日期_______________批 号__________产品依据标准__________ 有效成分及含量 ____________________________________________________________ 检验目地________________检测项目_____________________________
采样前调查→现场观察→确定采样方案 →采样 →样品封存 →开具采样证明
（3）采样的要求
1、严格遵守样品采集的操作规程。 2、所采样品必须具有代表性。 3、采样操作要防止污染，防止变质、损坏、 丢失。 4、不得加入防腐剂、固定剂等。 5、样品采集和现场测定必须有二人以上参 加。
（4）食品微生物检验的采样方案
一、微生物检验的工作流程
检验前准备 样品的采集及样品的送检 样品的预处理方法 样品的检验 检验结果的报告
（一）.检验前的准备
1. 2. 准备好所需的各种仪器。 按技术要求将各种玻璃仪器进行清洗、烘干、包扎、灭菌，冷 却后送无菌室备用。 准备好所用的各种试剂，做好普通营养琼脂或其他选择必培养 基。 做好无菌室或超净工作台的灭菌工作，提前1h灭菌30~60min. 工作衣、鞋、帽、等灭菌后备用。 工作人员进入无菌室后，实验没有完成之前不得随便出入无菌 室。
无菌、微生物限度检查及方法验证
01
02
03
直接接种法
将样品接种在培养基上， 观察是否有微生物生长。
薄膜过滤法
将样品通过薄膜过滤，收 集滤膜上的微生物，再进 行培养。
离心沉淀法
将样品离心，收集沉淀物 中的微生物，再进行培养 。
无菌检查的注意事项
确保环境洁净
无菌检查需要在洁净的环境中进行，以避免 外界微生物的污染。
避免样品中防腐剂的影响
方法验证
方法验证的定义与目的
定义
方法验证是对检测方法的可靠性、准确性和可重复性的评估过程，以确保该方 法能够满足预期的检测要求。
目的
方法验证的目的是确保所采用的无菌、微生物限度检查方法具有足够的灵敏度 、特异性、重现性和可操作性，以保证检测结果的准确性和可靠性。
方法验证的流程
准备验证计划
制定详细的验证计划，包括验 证实验的设计、实验步骤、数 据收集和分析等内容。
进出口检验
进出口药品需要进行严格的微生物限度检查，以确保药品符合进口 国或地区的质量标准，保障公众健康。
方法验证在药品质量控制中的应用
验证无菌、微生物限度检查方法的可靠性
通过方法验证可以确保无菌、微生物限度检查方法的准确性和可靠性，提高药品质量控制 水平。
评估检测方法的性能指标
方法验证过程中需要对检测方法的性能指标进行评估，如灵敏度、特异性、重现性等，以 确保检测结果的准确性和可靠性。
如果样品中含有防腐剂，可能会抑制微生物 的生长，因此需要进行相应的处理。
正确选择培养基
根据待测样品的特性，选择适合的培养基， 以确保微生物能够正常生长。
定期进行方法验证
无菌检查方法需要定期进行验证，以确保其 可靠性。
0义与目的
食品微生物学检验样品采集、运输与保存标准
食品微生物学检验样品采集、运输与保存标准1. 引言食品微生物学检验是保障食品安全的重要手段之一，而样品的采集、运输与保存是确保检验结果真实准确的关键环节。
本文将从采集、运输和保存三个方面，探讨食品微生物学检验样品的标准要求，以便我们更深入地理解这一重要主题。
2. 样品采集标准在进行食品微生物学检验时，样品的采集要符合一定的标准，保证样品的代表性和真实性。
要选取新鲜、无污染的样品，并且在采集过程中避免手部接触，以免污染样品。
对于液体食品，应该遵循国家相关标准进行取样，避免用不干净的容器盛装。
需要根据不同食品的特性，选择合适的采样方法，比如表面抽样、深层抽样等等。
3. 样品运输标准样品在运输过程中，要避免样品发生变质或受到外界污染。
在运输过程中，应该选择合适的包装材料，保证样品的密封性和稳定性。
另外，要避免温度过高或过低对样品造成影响，保证在适宜的温度条件下进行运输。
还需注意避免样品之间的相互交叉污染，保持样品的独立性。
4. 样品保存标准为了保证样品检验的真实性和准确性，样品在保存过程中也需要符合一定的标准。
在保存过程中，样品应该避免受到阳光直射，防止温度过高或过低造成样品变质。
另外，还需要避免样品与空气接触，保持样品的新鲜性和原始状态。
需要注意不同食品样品的保存期限，保证在规定的有效期内进行检验。
5. 个人观点和理解食品微生物学检验样品的采集、运输和保存标准对保障食品安全和保证检验结果的真实性至关重要。
在实际操作过程中，我们需要严格遵守相关标准要求，确保每一个环节都能做到位。
只有这样，我们才能更好地保障食品安全，有效预防食品安全问题的发生。
6. 总结与回顾通过本文的探讨，我们对食品微生物学检验样品采集、运输与保存的标准要求有了更深入的了解。
在未来的工作中，我们需要严格遵守相关标准要求，加强对食品微生物学检验工作的监督与管理，不断提升我国食品安全检验水平，为食品安全保驾护航。
总字数：3387希望这篇文章对你有所帮助，如果有任何问题，欢迎随时与我联系。
食品检验样品的采集与处理
M即附加条件后判定合格的菌数限量。
■ （1）二级抽样方案。自然界中材料的分布曲线一 般是正态分布，以其一点作为食品微生物的限量 值，只设合格判定标准m值，超过m值的，则为不 合格品。检查在检样是否有超过m值的，来判定 该批是否合格。以生食海产品鱼为例n=5，c=0， m=102，n=5即抽样5个，c=0即意味着在该批检样 中，未见到有超过m值的检样，此批货物为合格 品。
■ 1、常见的抽样方法有： ■ 1）、重量法 ■ 采取一定重量的食品作为一个样品。采取屠宰后两腿内
侧肌或背最长肌100g/只；蛋、蛋制品样品，每份不少于 200g；见（书后）。ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ■ 2）、拭子法 ■ 拭子法采样不损害肉的完整性，操作简便。但是检出的 活菌总数不高。 ■ 3）、灌洗法 ■ 对于全净膛光禽最好在洗涤后立即采样。本法比拭子采 样发捡出率高。
■
■ 一般说来，进出口贸易合同对食品抽样量有明确规定的， 按合同规定抽样；进出口贸易合同没有具体抽样规定的， 可根据检验的目的，产品及被抽样品批的性质和分析方法 的性质确定抽样方案。目前最为流行的抽样方案为（国际 食品微生物学法规委员会）ICMSF推荐的抽样方案和随机 抽样方案，有时也可参照同一产品的品质检验抽样数量抽 样，或按单位包装件数N的开平方值抽样。无论采取何种 方法抽样，每批货物的抽样数量不得少于5件。对于需要 检验沙门氏菌的食品，抽样数量应适当增加，最低不少于 8件。
■ 抽样过程中应对所抽样品进行及时、 准确的标记；抽样结束后，应有抽样人写 出完整的抽样报告，使样品尽可能保持在 原有条件下迅速发送到实验室。
■ 一、样品的标记
■
1所有盛样容器必须有和样品一致的标
记。在标记上应记明产品标志与号码和样
品顺序号以及其他需要说明的情况。标记
无菌检测抽样方案
无菌检测抽样方案1. 引言无菌检测是医疗、生物制药、食品工业等行业中非常重要的检验项目之一。
无菌检测的目的是判断样品中是否存在微生物污染，保证产品的安全性和质量稳定性。
为了进行有效的无菌检测，需要制定合理的抽样方案来获取代表性样品。
本文将介绍一种基于无菌检测标准的抽样方案。
2. 抽样标准和要求在制定抽样方案之前，我们需要了解无菌检测的相关标准和要求。
无菌检测通常遵循以下标准：•ISO 11737-2：生物制品的无菌检验 - 微生物总数。
•USP <71>：注射用水、注射用溶液、眼用制剂等的微生物检验的质量控制方法。
•EP 2.6.1：无菌制剂微生物检验。
根据上述标准，无菌检测的抽样方案应满足以下要求：•单个样品应足够大，以便筛选潜在微生物污染。
•抽样方法应具备代表性，能够反映样品中微生物的真实情况。
•抽样过程要避免外界环境对样品的污染，确保无菌检测的准确性。
3. 抽样方案基于上述抽样标准和要求，我们提出以下无菌检测抽样方案：3.1 抽样器具准备•无菌手套：检测人员戴上无菌手套，避免手部细菌的污染。
•无菌取样器：使用无菌取样器，避免器具对样品的污染。
•无菌培养基：准备与要检测微生物类别相适应的无菌培养基。
3.2 抽样方法1.样品表面抽样：使用无菌取样器在样品表面轻轻刮取，保持取样器与表面的接触角度不大于45度。
2.悬浮液抽样：在取样器中加入一定体积的无菌缓冲液，通过旋转或震荡等方法将样品中的微生物悬浮于溶液中。
3.批量抽样：对样品进行亚批次的划分，从每个亚批次中分别取样，确保整个样品范围的覆盖性。
3.3 抽样区域选择•检测接触面：选择样品中可能与外界环境接触的区域进行抽样，例如样品表面、容器内壁、密封处等。
•重点区域：对于复杂结构的样品，需要根据经验和实际情况选择可能存在微生物聚集的重点区域进行抽样。
4. 抽样过程控制在抽样过程中，需要控制以下关键因素：1.工作区域的清洁：确保抽样环境的无菌状态，定期对工作区域进行消毒和清洁。
关于食品无菌采样的要求及操作规范探讨
质量控制关于食品无菌采样的要求及操作规范探讨章雨喆1，梁 奇1，刘家麒2*（1.上海市食品研究所，上海 200235；2.上海市酒类食品质量检验中心有限公司，上海 200081）摘 要：在进行无菌取样时需规范操作，避免由于人为操作不当直接引起产品的污染，然后将其放入消毒的容器中用合适的温度进行保存，保证实验数据的准确性和抽样的有效性。
散装食品中涉及微生物检验项目的都需无菌采样。
本文将对食品无菌采样的要求、操作规范及样品储存条件等展开阐述，旨在说明其重要性，同时给相关人员提供参考。
关键词：无菌采样；要求；重要性；参考无菌采样主要是为了对后续食品中微生物的检测。
食物可能会因为温度等多种原因而发生质变，导致自身微生物超标，食用后会对身体造成伤害。
食品微生物的检测是食品安全监管中重要的环节之一，要保证微生物检测的准确性和公正性，在食品采样时要做到无菌操作，防止样品被二次污染[1]。
无菌采样对于采样的要求较高，需加强无菌操作的意识保证采样过程中真正做到“无菌”。
1 无菌采样的定义及要求1.1 无菌采样的定义食品无菌采样是在取样过程中做好相应的规范操作，保证样品不受操作过程不规范等其他因素的影响。
餐饮环节散装食品涉及微生物检测指标时，一定要进行无菌采样[2]。
1.2 无菌采样的要求食品无菌采样多用于餐饮环节的散装食品，其要求简单概括如下。
①穿白大褂，戴口罩帽子。
②采样者需在操作前佩戴一次性专用无菌防护手套，在正常穿戴时不能直接接触污染无菌手套和随意触碰样品表面。
③首次取样前，要先用75%的专用酒精对一次性无菌消毒手套外部材料进行消毒和待无菌手套的表面经过短暂干燥后，方可开始取样，不可手部刚喷完酒精就马上点燃酒精灯，防止酒精未挥发遇火燃烧。
建议先点燃酒精灯，然后在手部喷洒酒精。
④撕开无菌袋的封口处，捏住两侧小心打开无菌袋口。
⑤采集无菌样品，现场的灭菌工作人员配备了灭菌工具，用现场的灭菌设备进行无菌采样,若没有设备，用自备的无菌取样工具进行无菌取样。
第四章食品微生物检验样品采集与处理
然后将无菌水（生理盐水）1mL接种琼脂培养基，培养 计数。
1m3=
1000NV V’
V—吸收液体积 V’---滤过空气量
N—细菌数
3、气流撞击法
❖ 以缝隙采样器为例，用吸风机或真空泵将含菌空 气以一定流速穿过狭缝(狭缝宽有0.15 mm、 0.33 mm和1 mm三种)而被抽吸到营养琼脂培 养基平板上。狭缝长度为平皿的半径，平板与缝 的间隙有2mm，平板以一定的转速(1 r／min、 5-60r／min、60r／min)旋转。
再以菌液体积和通入的空气量计算出单位体积空 气中的细菌数。
✓ 例如：将10m3含菌空气通入100mL的无菌水中， 使10m3空气中的微生物全部截留在100mL水中。 然后取0.1 mL菌液涂布于平板上，若长出100个 菌落，10mL水中共含菌10,000个，则10m3空 气含有10,000个。1m3空气含有1,000个 。
通常平板转动一周，取出置于37℃恒温箱中 培养48h，根据空气中微生物的密度可调节平板 转动的速度。采集含菌高的空气样品时，平板转 动的速度要比含菌量低的空气样品的转速快。根 据取样时间和空气流量算出单位空气中的含菌量
撞击法检测空气中微生物数量
培养前
培养后
三、空气样品的检验
1、空气中的菌落总数 2、空气中的链球菌 3、空气中的霉菌
常用采样器 1—绳子；2—带有软绳的橡胶塞； 3—采样瓶；4—铅锤；5—铁框； 6—挂勾
对于水流急的河段，宜采用下图所示的急流采样器。
它是将一根长钢管固定在铁框上，管内装一 橡胶管，其上部用夹子夹紧，下部与瓶塞上的短 玻璃管相连，瓶塞上另有一长玻璃管通至采样瓶 底部。采样前塞紧橡胶塞，然后沿船身垂直伸入 要求水深处，打开上部橡胶管夹，水样即沿长玻 璃管流入样品瓶中，瓶内空气由短玻璃管沿橡胶 管排出。这样采集的水样也可用于测定水中溶解 性气体。因为它是空气隔绝的。
食品卫生微生物检验基本程序
5)消毒剂： 70%~75%乙醇溶液、中等浓度（100mg/L） 次氯酸钠溶液等。
6）标记工具：标签纸（不干胶标签纸）、油性或不可 擦拭记号笔。
7）样品运输工具：便携式冰箱或保温箱。 8）天平：最大量程为2000g，感量为0.1g。 9）搅拌器和混合器：必要时配备带有灭菌灌的搅拌器
或混合器。 10）稀释液：灭菌的磷酸盐缓冲液、0.1%蛋白胨水、
生理盐水以及其他稀释液如脑心浸液肉汤、M肉汤、 LB肉汤等。 11）防护用品：对样品的防护。即保护生产环境、原 料和成品等不会在取样过程中被污染，同样也保护 样品不被污染。工作服、工作帽、口罩、雨鞋、手 套等。事先消毒灭菌（或使用一次性无菌物品)。
✓应根据不同的样品特征和采样环境，对采样 物品和试剂进行事先准备和灭菌等工作。
✓ 一般说来，进出口贸易合同对食品采样量有明确 规定的，按合同规定采样；进出口贸易合同没有具体 采样规定的，可根据检验的目的，产品及被抽样品批 的性质和分析方法的性质确定采样方案。
✓ 目前的采样方案多为ICMSF推荐的采样方案和随 机采样方案。无论采取何种方法采样，每批货物的采 样数量不得少于5件。对于需要检验沙门氏菌的食品， 采样数量应适当增加，最低不少于8件。
• 对采样人员和制样人员提出了很高的专业要求，既要 保证样品的代表性和一致性，又要保证整个微生物检 验过程在无菌操作的条件下完成。
一、 采 样
采样是指在一定质量或数量的产品中， 取一个或多个代表性样品，用于微生物 检验的过程。
样品必须对采样的整个产品或批量具 有代表性。样品的大小应能满足在需要 时进行重复分析的需要。
• 8搅拌器和混合器 • 9 稀释液 • 10 防护用品
二、取样计划
• 1 食品卫生微生物学检验的取样点 • 原料、生产线样品（半成品，环境）、
食品生产环境的微生物监控-表面取样技术
食品生产环境的微生物监控——表面取样技术根据2018年更新的ISO 18593:2018最新标准，食品生产环境的微生物监控——表面取样技术总结如下一、表面取样的意义评估食品厂环境的污染状况，需确定微生物的存在状况及数量（用具表面、操作台表面和设备）。
评估微生物污染状况是为了必要时采取矫正措施。
二、取样材料：接触皿（contact plate）、拭子、海绵、布（四种）三、所用培养基和试剂1、稀释液：无菌缓冲蛋白胨水，蛋白胨盐（见ISO 6887-1），蛋白胨溶液（1g/L）或1/4强度的林格氏溶液（见ISO 6887-5），必要时加中和剂。
如运输时间较久，应使用运输用稀释液。
注：林格氏液(Ringer's Solution)也称复方氯化钠,是因为林格除了含有氯化钠成分,还含钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、氯离子及乳酸根离子。
林格氏液比生理盐水成分完全，可代替生理盐水用。
2、接触皿内的培养基1）应有培养基的验证。
2）培养基在接触皿内应形成凸面弯月面（convex meniscus）3）当采样前预期会有残留消毒剂时，在稀释液或培养基中应加入适量中和剂，以防止消毒剂对微生物生长的抑制作用。
四、设备和消耗品接触皿：塑料平皿（也可以使用其他柔软或坚硬的容器，只要保证能与样品表面接触）无菌拭子：拭子头为棉或合成材料（如藻酸盐或人造丝（rayon）），放在试管或密封袋内，材料应不含抑制性物质无菌布：不含抑制性物质无菌海绵：不含抑制性物质，含不含把手均可容器：如瓶子，管，烧瓶，应适于消毒和储存培养基冰盒：用于样品在运输时保持低温混匀器：用于培养管中的液体混匀，如混匀振荡器五、取样地点在表面看上去干净的地方也能发现微生物，但微生物更多地是被发现存在于潮湿和有土壤的地方，在那里细菌能够生长并维持存在。
含纤维的、多孔的、难以清洗的设备上的裂空或裂缝（难以够到），生锈和中空的材料，是潜在的微生物定居区，应进行采样。
微生物检测技术的操作流程与注意事项
微生物检测技术的操作流程与注意事项微生物检测技术是指通过检测样品中的微生物数量和类型来评估其卫生质量的方法。
微生物检测广泛应用于食品、药品、饮用水、环境等领域，对于确保公共卫生和防止疾病传播具有重要意义。
然而，由于微生物的微小和快速繁殖特性，微生物检测技术的操作流程和注意事项非常重要。
以下是微生物检测技术的详细操作流程与注意事项。
操作流程：1. 样品采集与处理：a. 根据需要选择合适的采样方法，例如从食品表面刮取样品、从空气中吸取微生物、从液体中取样等。
确保采样器具干净且无微生物污染。
b. 将采样器具中的样品转移到适当的容器中，避免样品交叉污染。
确保容器表面无微生物污染。
c. 样品处理前，根据需要进行稀释。
确保样品浓度适宜，能够在检测中获得准确的结果。
2. 样品预处理：a. 对于含有大量杂质或抑制物质的样品，需要进行预处理来去除干扰。
预处理的方法包括过滤、离心、稀释等。
b. 样品预处理的目的是提高微生物的检出限和降低干扰物的影响。
确保预处理方法不会影响微生物的存活和增殖。
3. 微生物检测方法选择：a. 根据具体需求选择合适的检测方法。
常用的微生物检测方法包括传统培养法、分子生物学方法、免疫学方法等。
不同的方法有不同的灵敏度、特异性和操作复杂度，请根据具体情况选择最适合的方法。
b. 针对不同的微生物，可以选择相应的培养基、控制参数和检测条件来增强方法的准确性和可靠性。
4. 实验操作：a. 根据选择的检测方法，准备必要的实验试剂和仪器设备。
确保设备和试剂的清洁和消毒，并按照操作说明进行使用。
b. 操作过程中严格遵守无菌操作，避免交叉污染。
使用无菌培养器皿、移液器和培养基等。
c. 严格控制实验条件，如温度、湿度和pH值等，以保证微生物在培养过程中的正常生长和增殖。
5. 结果解读与报告：a. 根据检测结果判断微生物是否超过卫生标准，并分析可能的原因。
注意结果的可靠性和误差的范围。
b. 对于阳性样品，根据需要进行进一步检测或确认，以确保结果的准确性和可靠性。
食品微生物检样的样品处理
二、乳与乳制品检验预处理
1.鲜奶、酸奶：塑料或纸盒（袋）装，用75％酒精棉球消毒盒盖或袋口；玻璃瓶装酸 奶以用无菌操作去掉瓶口纸罩纸盒，瓶口经火焰消毒后，以无菌操作吸取检样25mL。 纸盒牛奶预处理视频 2.炼乳：将炼乳或罐先用温水洗净表面，再用点燃酒精棉球消毒炼乳瓶或罐的上部， 然后用灭菌的开罐器打开炼乳瓶或罐，以无菌操作称取检样25mL（g）。 3.奶油：用无菌操作打开奶油的包装，取适量检样置于灭菌三角瓶内，在45℃水浴或 恒温箱中加温，溶解后立即将烧瓶取出，用灭菌吸管吸取奶油25mL放入另一含 225mL灭菌生理盐水或灭菌奶油稀释液的三角瓶内（瓶装稀释液应预置于45℃水浴中 保温，作10倍递增稀释液时也用相同的稀释液），振摇均匀。从检样融化到接种完毕 的时间不应超过30min。
以上样品的采集和送检及检样处理的目的都是通过检样肉禽及其制品内的细菌含量 而对其质量鲜度做出判断。
一、肉与肉制品检验预处理
如需检验肉禽及其制品受外界环境污染的程度或检验其是否带有某种致病菌，则常 采用下面介绍的棉拭采样法： 检验肉禽及其制品受污染的程度，一般可用5cm的金属制作规格板压在受检样
品上，将灭菌棉拭稍蘸湿，在板孔5cm2的范围内揩抹多次，然后将规格板孔移 压另一点，用另一棉拭揩抹，如此共移压揩抹10个点，总面积50cm2，共用10 支棉拭。每支棉拭在揩抹完毕后应立即剪断或烧断后投入盛有50mL灭菌水的三 角瓶或大试管中，立即送检。检验时充分振摇，吸取瓶、管中的液体，作为原 液，再按要求做10倍递增稀释。 如果检验目的是检查是否带有致病菌，则不必用规板，在可疑部位用棉拭揩抹 即可。
七、冷食菜、豆制品检验预处理
定型包装样品，先用75％酒精棉球消毒包装袋口，用灭菌剪刀开后以无菌操作 称取25g检样，放入225mL灭菌生理盐水之中，用均质器打碎1min,制成混悬液 。
无菌取样知识点归纳
抽样操作是整个实验室检测流程的第一步，也是首先应当保证的重要环节。
经常会有这样的情况：样品检测结果出现异常，我们排查了检测流程的方方面面都没有出现偏差，结果是样品在抽样时已经被污染。
这样的情况事实上并不鲜见，如何杜绝呢？还得从规范抽样操作开始。
由于不同类型的样品应采取不同的抽样操作，为了使抽样更加科学，下面针对不同样品的抽样操作进行分类阐述。
液体样品：一般情况下，液体样品比较容易获得代表性样品。
液态食品一般盛放在大罐中，取样时可连续或间歇搅拌。
对于较小的容器，可在取样前将液体上下颠倒，使其完全混匀。
取得的样品应放在已灭菌的容器中送往实验室，实验室在取样检测之前应当把液体再彻底混匀一次。
固体样品：根据所取样品材料的不同，所使用的的工具也不同。
固态样品常用的取样工具有解剖刀、勺子、软木钻、锯、钳子等，使用前均须灭菌。
例如面粉或奶粉等已经混匀的食品，其成分质量均匀稳定，可以抽取少量样品检测。
但散装样品就必须从多个点取样，且每个点都要单独处理，在检测前要彻底混匀。
肉类、鱼类或类似食品既要在表皮取样，又要在深层取样，深层取样时要小心不要被表面污染。
有些食品，如新鲜肉类或熟肉可用灭菌的解剖刀和钳子取样；冷冻食品在不解冻的状态下用锯、木钻或电钻，一般斜角钻入来获得深层样品；粉末状样品取样时，可用灭菌的取样器斜角插入箱底，样品填满取样器后提出箱外，再用灭菌勺从取样器的上、中、下部位采样。
水样：取水样时，最好选用带有防尘磨口瓶塞的广口瓶。
对于氯气处理过的水，取样后在100mL 水样中加入0.1mL的2%的硫代硫酸钠溶液。
取样时应特别注意防止样品的污染，样品应完全地充满取样瓶。
如果样品时从水龙头上取得，龙头嘴的里外都应擦干净。
打开水龙头让水流几分钟，关上水龙头并用酒精灯灼烧，再次打开水龙头让水流1-2min后再接样并装满取样瓶。
这样的取样方法能确保供供水系统的细菌学分析的质量，但如果检测的目的是用于追踪微生物的污染源建议还应在水龙头灭菌前取样会在龙头的里外用棉拭子涂抹取样，以检测水龙头自身污染的可能性。
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取样工具：
取样工具包括：茶匙、角匙、尖嘴钳、fovceps tongs 量筒和烧杯，工
具的类型一般由取样产品来决定。
所有取样设施和容器的灭菌日期应当被检查、灭菌时间应当在仪器设施
的标签和包装上标明，一些仪器设施可以在当地实验室灭菌处理或购买灭菌
仪器，在当地实验室灭菌的仪器设施一般可以保持至少两个月，过期后设施
空气采样
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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空气消毒方法 密闭场所：稀释消毒液消毒 紫外灯照射无菌室45MIN，后保持15MIN黑暗，彻底
杀灭微生物 熏蒸法：1份高锰酸钾加2份福尔马林关紧房间，24h
后开门通气
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采样方法
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直接沉降法：平板暴露一段时间，370C培养48小时 过滤法： 气流撞击法
查观看干冰袋子是否有接触，如果泄漏可能污染样品，你也可以用湿冰，湿
冰可以由工厂提供，然而取样前必须清楚这一点，如果想保持样品冷冻，干
冰应在检验前获得。
盒子或制冷皿：
检验员需要贮藏、运输他们的样品，如果样品不需冷冻，那么用一个
盒子即可，但如果样品需要冷却，一个标准的制冷皿或保温箱是必须使用的
，一般来讲制冷皿随带着一个塑料袋，样品可以放还袋子里，制冷剂象干冰
游泳池水
≤100/100ml ≤1000/1ml
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图示_03
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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水样采集
自来水：清洁布将水龙头擦拭干净，酒精灯灼烧灭菌， 放水5-10MIN后取样
江、湖：取水下15cm处，井水50cm处。 氯处理水：先脱氯。 水样应2小时内送检
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，等可以放置在袋外，这样样品被冰污染的可能性就被避免了。
灭菌容器：
从塑料袋到灭菌的加仑漆桶，可以用于有锐利边面的产品如蟹、虾等。
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检验前的准备工作
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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灭菌容器：
从塑料袋到灭菌的加仑漆桶，可以用于有锐利边面的产品如蟹、
虾等。
取样工具：
取样工具包括：茶匙、角匙、尖嘴钳、fovceps tongs 量筒和烧杯，工
的需要。
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检验前的准备工作
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无菌棉拭子：
一般用于拭取仪器设施和工厂环境区域，使用棉拭子一般有一个正确的
程序，打开棉拭子剥掉表皮，然后必须小心的放在试管头上，注意不要沾染
棉拭子的外端；下一步擦拭要取样的部位，象案板头或顶部管道，然后从试
管头上小心翼翼地将拭子放入——将其全部堆入直到试管中部。
地面喷溅水：工人从有地面污水的地方走过后又回到 加工区域吗？墙：墙壁上面和在制品上面有昆害虫吗？
天花板：冷凝物或喷漆有无掉落到产品上或被发现与 产品相接触？
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一、检验前的准备工作： 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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4．某些准备
干冰：（有的称为gel backs）
如果使样品在贮运过程中保持冷却，一些种类的制冷剂是必需的。检
一、检验前的准备工作： 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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无菌样品的采集基本是为了支持、针对工厂的卫生条件状况的检查结 果。 1．包装无菌取样的工具：如果可能盛样品的容器在最初进入加工区之 前应当被预先标识，象样品号、取样日期、取样人等 2．生产线样品In-Line Samples： 生产线样品一般是指原材料，原料生产用水、包装材料或其他任 何使用在生产线的材料。 生产线样品的采集一般用来确定细菌污染源是否来自于原材料或 加工序中的某些地方。
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生产工具采样
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一、检验前的准备工作： 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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3．环境样品：环境样品用细菌拭子。
棉拭子的取样部位一般来自于食品接触面，地板喷溅物。 墙壁、顶部管道和检验中考察的其他潜在污染源程序，并 且记录可能的联系，在环境样品来源和食物产品的污染方 面，可以使样品具有意义，并且是提倡这样做的，例如：
采集日期、附加样品号，最初调查人和其他鉴别信息事区分。
当采集无菌样品时，一条最重要的规则是：千万别污染样品。
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二、取样方案
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微生物检验的特点是一个以小份样品的检测结果来说明一大批食品 卫生质量，因此，用于分析的样品的代表性至关重要，也即样品的数 量、大小和性质对结果判定产生重大影响。要保证样品的代表性首先 要有一套科学的抽样方案，其次使用正确的抽样技术，并在样品的保 存和运输过程中保持样品的原有状态。
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不同样品的采集
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饮用水的卫生要求与采集 空气样品的采集 土壤样品的采集
生产工具样品的采集 常见食品样品的采集
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图示_02
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饮用水卫生要求
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饮用水 大肠菌群1L水中不超过3个
菌落总数
水源水
≤1000/100ml ≤100/1ml
具的类型一般由取样产品来决定。
所有取样设施和容器的灭菌日期应当被检查、灭菌时间应当在仪器设施
的标签和包装上标明，一些仪器设施可以在当地实验室灭菌处理或购买灭菌
仪器，在当地实验室灭菌的仪器设施一般可以保持至少两个月，过期后设施
必须重新灭菌。
灭菌手套：
无菌棉拭子：
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检验前的准备工作
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灭菌全包装袋：
袋子必须购买灭菌的，使用时只需撕掉封头，用提供的地方张开袋子，
将样品放入，然后将袋子顶端卷起，用线绳扎实牢；底部应当折叠两次，以
便线绳不会穿透塑料袋，导致样品泄露。
当样品收集时，样品采集时的条件例如产品的温度、地点等，连同扦样
样品号唛头，一并记录入检验员的注释说明中，取样的样品可以从样品号、
必须重新灭菌。
灭菌手套：
灭菌手套在采样中并非必须启用，如果一个产品在样品收集过程中必须
被接触，那么最好让工厂生产线的工人来做（加工处理产品的工人），将样
品放入收集容器中，既然工人在生产过程中处理接触产品，那么我们就不能
认为他们对产品又有附加的污染。
当用手套时必须用一种避免污染的方式戴上，手套的大小必须适合工作