水飞蓟种壳中水飞蓟素提取及生物活性的研究

第45卷第23期2017年12月
广州化工
Guangzhou Chemical Industry
Vol.45 No.23
Dec.2017
水飞蓟种壳中水飞蓟素提取及生物活性的研究*汪绪龙，朱红薇，贾阳月，赵白丽，姚予嘉，吴梓凤，朱长俊
(嘉兴学院生物与化学工程学院，浙江嘉兴314001)
摘要：以水飞蓟种壳为材料，研究乙醇、乙酸乙酯、丙酮对水飞蓟素的提取效果、生物活性，采用高效液相色谱检测水 飞蓟宾的含量。

超声波法中95%乙醇、乙酸乙酯、丙酮提取得到水飞蓟宾含量16.02、8.56、9.86 mg/g，以无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮为溶剂多次回流提取得到水飞蓟宾含量18.53、17. 10、15.66 mg/g。

无水乙醇为溶剂有机溶剂多次回流得到的水飞蓟宾含量 最多，有一定的抗菌抗氧化能力。

关键词：水飞蓟种壳；超声提取；索氏提取；水飞蓟素；生物活性
中图分类号：Q819 文献标志码：A文章编号：1001-9677(2017)23-0097-03 S t u d y o n E x t r a c t i o n a n d B i o a c t i v i t y o f S i l y m a r i n f r o m S e e d S h e l l*
W ANG X u-lo n g,Z H U H o n g-w e i,JIA Y a n g-y u e,Z H A O B a i-l i,YAO Y u-j i a,W U Z i-f e n g,Z H U C h a n g-ju n
(C o lle g e o f B io lo g y a n d C h e m ic a l E n g in e e r in g,J ia x in g U n iv e r s it y,Z h e jia n g J ia x in g 314001, C h in a)
Abstract：T a k in g s ily b u m s e e d-c a s e as m a t e r ia l,th e e x tr a c tio n e ffe c ts a n d b io a c t iv it y o f e th y l a lc o h o l,e th y l a c e ta te a n d a c e to n e o n s ily m a r in w e re s tu d ie d.H ig h p e rfo r m a n c e li q u i d c h r o m a to g ra p h y w a s u s e d to d e te r m in e th e c o n te n t o f s i l i b i n i n.I n th e u ltr a s o n ic m e t h o d, 95 %e th y l a lc o h o l,e th y l a c e ta te a n d a c e to n e w e re e x tr a c te d to o b ta in s ili b i n i n c o n te n t o f 16. 02，8. 56 a n d 9. 86 m g/g.T h e c o n te n t o f s ili b i n i n w e re 18. 53, 17. 10, 15. 66 m g/g b y r e f lu x in g w it h a n h y d ro u s e t h a n o l,e th y l a c e ta te a n d a c e to n e f o r m a n y tim e s.U s in g th e a n h y d ro u s e th a n o l as s o lv e n t c o u ld o b ta in th e h ig h e s t c o n te n t o f s ili b i n i n a n d i t h a d c e r ta in a n tib a c t e r ia l a n d a n tio x id a n t c a p a c ity.
Key words：s e e d-c a s e；u ltr a s o n ic e x t r a c t io n；S o x h le t e x t r a c t io n；s ily m a r in；a n tib io s is a n tio x id a tio n
水飞蓟（S ilyb um m arianum G a e rtn)果实中含有大量的黄酮类 化合物，主要为水飞蓟素，多存在水飞蓟种壳中。

具有保肝、降血脂、抗癌、抗炎、治疗高血脂症、预防缺血性心脑血管疾 病、防治糖尿病慢性并发症以及抗结核等作用[1-2]。

目前国内 的研究仅限于水飞蓟粗品的初步提取，产量和质量都比较低。

因此本实验通过对水飞蓟素提取工艺、水飞蓟宾含量测定、水 飞蓟素的生物活性的研究，从而确定出最佳的提取工艺，为后 续工作者提供理论基础和参考依据。

1实验
1.1材料、试剂与仪器
水飞蓟种子，购于亳州市养生堂药业。

实验菌种：金葡菌 (S aureus),大肠杆菌（E.c o li),黑根霉（R.nig ro ca n s),黑曲 霉（A.niger)。

石油醚、95%乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮、水飞蓟 宾标准品、1,1-二苯基-2-苦苯肼、二甲亚砜、甲醇、邻苯三 酚、T r is粉等，均为分析纯。

R E-52A A旋转蒸发仪；F L2200高效液相色谱仪；U V-1100紫外分光光度计等。

1.2实验方法
1.2. 1实验流程
图1实验流程图
Fig. 1The flow chart of experiment
1.2.2水飞蓟素的提取[3-5]
(1)种壳粉碎，用适量石油醚进行脱脂，静置过夜，抽滤得滤渣；
*基金项目：嘉兴学院重点SRT资助项目（No:851716043) 第一作者：汪绪龙（1995-)，男，制药工程
151班学生。

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广州化工
2017年12月
(a )水飞蓟宾标准品HPLC
■1
40.0035.0030.0025.00
<
20.00 S 15.00
10.00
5.00
'0.00 3.00 6.00 9.00
12.00 15.00 18.00 21.00
t/m in
图
3水飞蔚宾标准品（a )和无水乙醇（b )的HPLC
Fig. 3 The HPLC of standstad material of silibinin(a) and
absolute ethyl alcohol ( b)
从表3可以看出无水乙醇有机回流中的水飞蓟宾的含量最 高，为18.53 m g /g ，乙酸乙酯超声提取的产率最低，为9.88 m g /g ， 因此综上所述无水乙醇有机溶剂多次回流提取工艺相对最佳。

2.2 DPPH
•的清除实验和超氧阴离子自由基 (O
- •)清除实验结果
图4分别是不同浓度的D PPH •的清除率和超氧阴离子自 由基（〇- •)清除率。

2. 1
水飞蓟素中水飞蓟宾含量确定
图2和表3为各方法获得的水飞蓟素粗提物及含量，利用
高效液相色谱（H P L C )(图3,以无水乙醇为例），算出不同方
法提取的水飞蓟素中水飞蓟宾的含量。

乙酸乙酷
丙酮
95%乙醇(超声） 乙酸乙酷 丙酮 无水乙醇
(有机回流)
图2使用不同提取方法获得的水飞蓟素粗提物
Fig. 2 Silibinin extrats by different extration methods
表3水飞蓟素粗提物的质量和水飞蓟宾的含量
Table 3 The q u a lity o f silym a rin and s ilib in in ,s content
水飞蓟素粗 水飞蓟宾
提物/(g /100 g
)含量/(m
g /g )乙酸乙酯
3. 958. 56超声提取
丙酮
6.709. 8695%
乙醇
7.3516.02乙酸乙酯 6.8017. 10有机溶剂回流
丙酮9.9015.66无水乙醇
8.50
18.53
(2)
超声提取：将20 g 滤渣倒入锥形瓶中，加120 m L 溶剂 (所用提取溶剂为95%乙醇、乙酸乙酯、丙酮，超声对应温度
分别为60、55、55益，功率为80%，60 m in )，抽滤，重复
3次，滤液旋蒸；
(3) 有机溶剂索式提取：取20 g 滤渣，每次溶剂用量为 60 m L (所用提取溶剂为无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮），回流 60 m in ，重复3次，提取液旋蒸；
(4) 倒入适量的石油醚进一步脱脂，回收石油醚，加入相 应的提取溶剂，水浴蒸干，烘箱烘干，即得相应的提取物。

1.2.3水飞蓟宾含量的测定[6]
采用外标法检测水飞蓟宾的含量：色谱柱为C m (5滋m ， 4.6 m m x 250 m m )，流动相甲醇-水-乙腈-磷酸（45:50:5:0. 5)，流速为1. 0 m L /m in ，检测波长为288 n m ，柱温为室温。

1.2. 4
抗氧化测定
样品溶液的浓度（滋g /m L )分别为10、20、40、60、100, 以抗坏血酸做对比。

(1)D P P H •的清除实验[7]
D P P H 溶液：精密称取D P PH 10 m g ，用无水乙醇溶解并定
容至250 m
L
容量瓶中，得0. 08 m m ol /L 的D P P H 溶液，按照表1操作。

表1
D P PH •清除实验溶液添加情况
Table 1 The solution a d d itio n circum stance o f
D P PH • e lim in a te experim ent
溶液
A i
AJ
A 0DPPH •溶液/m L
2.00
2. 0
样品/m L 2.
02. 0
0无水乙醇/m L
2. 0
2.
注：A i 代表实验组；A j 代表样品的本底颜色组（样品本身显淡黄 色）；A 。

代表空白对照组。

(2)超氧阴离子自由基（02-.)清除实验[8]配制浓度为0.05 m m ol /m L 的T r is -H C l 缓冲液和浓度为
6 m m ol /L 的邻苯三酚溶液，按表2操作。

表2
超氧阴离子自由基（0- •)的清除实验溶液添加情况
Table 2 The S olution ad d itio n circum stance o f superoxide anion
ra d ica l elim in a te experim ent
溶液
A i
AJ
A 0Tris-HCl 缓冲液/m L 5.7
5. 7 5. 7
25益水浴锅预热10 min
样品/m L 0. 20. 20邻苯三酚溶液/m L 0. 100. 1
蒸馏水/m L 00. 10. 2
混匀，水浴锅（温度：25益）反应2 m in 立即检测
注：A i 代表实验组；A j 代表样品的本底颜色组（样品本身显淡黄 色）；A 。

代表空白对照组。

1.2.5水飞蓟素的抗菌测定
抑菌定性实验：用牛津杯法进行抗菌实验；最小抑菌浓度 实验，二倍稀释法测最小抑菌浓度；抑菌率的测定使用平板菌 落计数法：抑菌率=(对照组-实验组)/对照组伊100%。

2结果与讨论
S 6
卜-e R X
(
N S 9T (T V
T 6//S T
(O T )C C ^
(6
)<^
第45卷第23期汪绪龙，等：水飞蓟种壳中水飞蓟素提取及生物活性的研究99
(a)DPPH .的清除率
浓度/(|Jig/mL)
10
20
40
60
100
浓度/(|Jig/mL)
图4
DPPH •的清除率和超氧阴离子自由基（0-.)清除率 Fig. 4 DPPH • clearance rate ( a ) and superoxide anion
radical clearance rate ( b )
从图4可以看出随着粗提物的浓度增加，D PPH •的清除 率也随着相应的增加，最高浓度的清除率为63. 39%，说明水 飞蓟素粗提物有一定的清除D PPH •自由基的能力；超氧阴离 子自由基（O - •)清除率也随着浓度增加相应的增加，但并不像 D P P H •的清除率那么明显。

2. 3抗囷的结果
以D M S O 为溶剂做对照，水飞蓟素对实验菌种均有一定的 抗菌效果，且对金葡菌的效果高于大肠杆菌，见图5。

采用浓 度梯度稀释法，以D M S O 为溶剂，得出水飞蓟素粗提物对金黄 色葡萄球菌的最小抑菌浓度50 mg /m L ;采用平板菌落计数法 得到的抑菌率为79. 35%，故得知水飞蓟素粗提物有一定的的 抑菌能力。

图
5
水飞蓟素粗提物对金色葡萄球菌、大肠杆菌、黑根、黑曲
的抑菌结果
Fig. 5 The antibacterial result of S. a u r e u s ，
E. c o li ，R. n ig ro ca n s and A. n ig e r
3结论
无水乙醇为提取溶剂的多次回流来提取水飞蓟素为 8.50g /100g ，且水飞蓟宾的含量最高为18.53mg /g ，因此米 用无水乙醇有机多次回流得到的水飞蓟素较高。

但同时明确提
取工艺还需进行优化实验，以期有更好的提取率。

经大量的抗 氧化重复试验证明水飞蓟素粗提物有一定的抗氧化能力；对实 验细囷和真囷均有一^定的抗囷效果。

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