一种简便的丹参丹酚酸提取工艺

一种简便的丹参丹酚酸提取工艺

水塔（）老醋生物科学

车建途小珺于雷丕馥中才

摘要：丹参中药材取自唇形科植物丹参的根，在中医临床上，丹参主要用来治疗冠心病、脑血栓、肝炎及肝硬化等。该药长期的临床应用背景及在治疗疾病方面的明显效果，引起了国外学者对其水溶性酚类化合物的重视。丹酚酸B是丹参水溶性成分中最主要的活性物质，其含量较高，占丹参药材的2%-8% 。丹酚酸B的活性很强，对脂质过氧化引起的细胞膜损伤有明显的保护作用，还具有抗血小板聚集并对血栓形成的作用。因此，丹酚酸B的提取技术的研究受到了医药界的关注。本实验简化了丹参中丹酚酸B的提取方法，以简单低成本的提取方法得到丹酚酸B纯度较高的干粉。

实验原料和仪器

1. 主要原料：丹参饮片。本次实验使用的丹参为：

中江丹参（药材批发市场）

岭野生丹参（网上药店）

2. 其它材料或试剂：去离子水，乙醇，10%盐酸，乙酸乙酯

3. 实验仪器：电炉，水浴锅，冷凝管，真空泵，低温高速离心机，旋转蒸

发仪，冷冻干燥器，以及烧杯等常用玻璃仪器。

基本提取工艺流程图

提取工艺具体操作步骤

1. 取丹参饮片，加10-12倍量的30%-40%的乙醇溶液，浸泡1-2小时，煮

沸回流提取1.5-2小时，过滤，滤渣加8-10倍量的相同浓度乙醇溶液，煮沸回流提取1.5-2小时，过滤，将两次提取液合并。

2. 将上述提取液55℃以下浓缩至1-1.5倍量，用10%的盐酸酸化至pH为

2.5-3，抽滤或离心去掉悬浮颗粒不溶物。

3. 滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，50℃以下减压浓缩回收

乙酸乙酯。

4. 将浓缩后的浸膏（干粉）溶于1.5倍量去离子水中，继续浓缩至干，重

复两次，即可去除产品中残留乙酸乙酯。浓缩液取出经真空冷冻干燥，既得丹酚酸总提物。

提取物质量控制指标

提取物功效成分检测方法

HPLC法测定丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹参素钠

1.色谱条件

色谱柱：Agilent Zorbax C18;流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水

(30:10:1:59)；流速：1.0ml/mL；检测波长：286nm；进样量：20μL

2.对照品溶液制备

精密称取丹酚酸B对照品，用水溶解，并稀释成浓度为0.20mg/mL的溶

液，作为对照品溶液。

3.供试品溶液制备

精密称取适量固形物，加适量水溶解，用水稀释样本溶液浓度为

0.4mg/mL，则作为供试品溶液。

4.计算方法

以峰面积，外标法计算含量。

实验过程及结论

一、检测酸化对提取物中丹酚酸B含量的影响

取丹参200g，加入2400mL 40%的乙醇溶液按照方案二的方法提取。

浓缩后平均分四份，分别酸化至2、2.5、3、3.5。将四组置于相同条件

下萃取，并冷冻干燥，检测所得物。

以下为检测结果：

第一次测试结果明显表明随着pH从2-3.5的增长，丹酚酸提取物中丹酚酸B的含量也在上升。且pH为2.5、3、3.5时丹酚酸B纯度相差很小；而干粉质量（得率）却在直线下降。

以下为第二次检测结果（实验方法相同，丹参质量为300g，添加了pH=4以及不进行酸化的对照组，其余条件均与第一次一致）

第二次测试结果与第一次测试结果反应一致，而pH为4以及未经酸化（pH值大约为4.4-4.6）时提取物很难溶于水，用传统冷冻干燥方法难以检测，故不采用。

经测试，丹参在pH为2.5-3.5条件下提取纯度较高，而由于pH=3.5的时候有较少不溶于水的杂质，且提取干粉质量较低，故选取酸化pH 为2.5至3。

二、检测去除乙酸乙酯残留过程对丹参提取物中有效成分含量的影响

实验步骤：取丹参300g，做丹参丹酚酸提取。乙酸乙酯萃取后，浓缩回收部分乙酸乙酯，剩余的有机溶液平均分为三组，标记A、B、C。

分别浓缩至干，在相同环境下做去除乙酸乙酯残留实验。

A组为对照组，B组C组分别加超纯水溶解，在55℃下减压蒸馏4次、8次，每次加水10mL并减压蒸馏一小时，检测其冻干产物中有效成分含量。以下为测试结果：

重复实验得出结论：B和C组比较可得，经过多次减压蒸馏，丹酚酸

A、丹酚酸

B、迷迭香酸、丹参素钠的含量会随减压蒸馏次数和时间的增

多而有所减少，但减少量并不显著，可忽略不计。B组由于去掉大量乙

酸乙酯，有效成分的纯度与A组比有较大提高。

实施例

实施例1

取丹参90g，加12倍量的40%乙醇，浸泡2小时，回流提取2小时，提取两次。过滤提取液并合并滤液，53℃减压浓缩至150mL，将浓缩液酸化至pH=3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，48℃减压浓缩，浓缩液去除残留乙酸乙酯，并进行冷冻干燥，得到得到丹酚酸总提物3.04g，其中丹酚酸B的含量为81.1%，丹酚酸得率为2.74% 。

实施例2

取丹参100g，加12倍量的40%乙醇，浸泡1.5小时，回流提取2小时，提取两次。过滤提取液并合并滤液，52℃减压浓缩至150mL，将浓缩液酸化至pH=3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，48℃减压浓缩，浓缩液去除残留乙酸乙酯，并进行冷冻干燥，即得到得到丹酚酸总提物

3.32g，其中丹酚酸B的含量为81%，丹酚酸得率为2.69% 。

实施例3

取丹参100g，加12倍量的40%乙醇，浸泡1.5小时，回流提取2小时，提取两次。过滤提取液并合并滤液，52℃减压浓缩至150mL，将浓缩液酸化至pH=3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，48℃减压浓缩，浓缩液去除残留乙酸乙酯，并进行冷冻干燥，得到得到丹酚酸总提物