定性免疫检验室内质量控制方法

Levey-Jennings质控图方法
也称Shewhart质控图，是由美国的 Shewhart于1924年首先提出，并用于工业 产品的质量控制。
二十世纪五十年代初，Levey-Jennings将 其引入临床检验的质量控制 。经Henry和 Segalove的改良，即为目前常用的LeveyJennings质控图。
重复性 准确性（定量：回收率、标准物质等；定性：方法学比较等） 分析特异性 测定下限（病原体特异抗体要用转化血清盘） 抗干扰能力
实验室质量管理的“灵魂”
标准操作程序（SOP）是实验室的“最高标准”！
SOP等于试剂盒说明书吗？
源于一些标准文件（如仪器试剂说明书、国际国内标准文件） 和实验室实际工作经验积累。 因此高于相关标准文件！！！
Do
• 按照 新的 室内 质控 SOP 执行
Check
• 是否有 同样的 失控发 生？
• 是否执 行了新 SOP？
Action
• 总结，并 将质控品 的分装要 求写进室 内质控 SOP。
• 是否出现 新的问题？
FAME-1（吐板数=299,总板数=5692
酶标仪读值异常 11%
模块冲撞 1%
酶标仪锁定 5%
1-[P(0)+P(1)+P(2)+P(3)+P(4)]=1-[(1-0.1)25+25(1-0.1)240.1+300(10.1)230.12+2300(1-0.1)220.13+12650(1-0.1)210.14+53130(10.1)200.15]=0.0334
则在这个实验室一次检测25个标本获得6个或6个以上阳性结果的 概率为3.34%，小于5%，属于小概率事件，即发生的可能性很小 ，可能有污染所致假阳性结果的可能。
标本间交叉污染的概率计算
如果所有阳性结果的出现是连续性的，则可能存在标 本间的交叉污染，即阳性样本污染了它邻近的阴性样 本，这种情况的概率计算公式如下：
P=(n-r+1)/[n!/r!(n-r)!] （3）
其中n为当次实验检测标本数，r为连续出现阳性的 个数。 当某次实际测定标本连续阳性的概率大于所计算 的概率，则判为失控。阴性标本结果可以发出，阳性 标本要考虑标本间交叉污染的问题。
标本间交叉污染的概率计算
如在一次检测100个标本的HBsAg ELISA检测中，所有两个阳性结果 连续出现的概率为： P=(100-2+1)/[100!/2!(100-2)!]=99/4950=0.02 概率为2.0%。
因此，如在100个标本中，连续出现两个为阳性次数有3次，即概率为 3.0%，则为失控。
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PDCA的特点
小环合成大环 不断循环，阶梯式上升 “A”是改进的动力之源
AP
A PC D CD
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甲胎蛋白（AFP）质控失控发现质控结果超出均值−3SD）
Plan
• 问题：质控 品结果偏低
• 原因：质控 品分装后体 积不够（300 μl、质控品不 稳定？
• 措施：加大 质控品分装 量至400 μl。
阴性质控品：日常检验的阴性标本
ANA均质型
较强阳性样本
1:100 1:640
1:160 1:1000
1:320 弱阳性样本
每块板质控物的数量及位置
至少1份弱阳性质控 至少1份阴性质控 随机放置于血液标
本中间
统计质控方法
Levey-Jennings质控图方法 “假阳性”的统计质控方法
温度 湿度
不只是为了仪器设备运行
抗原抗体结合反应与环境温度和湿度均有关系
实验室仪器设备及管理
加样器：维护、校准 全自动免疫分析仪：维护、校准 荧光显微镜：维护、校准 水浴箱：维护、校准 酶标仪：维护、校准 洗板机：维护 离心机：维护 生物安全柜：维护 冰箱：维护
理想的试剂
试剂方法的性能验证及每批试剂的质检 性能指标：
有可操作性的SOP是质量管理的“灵魂”！
定性测定的室内质控方法
非统计学方法 统计学方法
非统计学方法
在检测临床标本的同时，检测一定数量（与临 床样本的数量相适应）的已知阳性（或存在靶 微生物或靶细胞）和阴性的质控样本
检测有效的质控判断方法：阳性检测为阳性， 阴性检测为阴性。
“批（RUN）”的概念
Levey-Jennings质控图
Levey-Jennings质控图 基本的统计学含义
稳定条件下，在20个IQC结果中不应有多于1 个结果超过2SD（95.5%可信限）限度；在 1000个测定结果中超过3SD（99.7%可信限） 的结果不多于3个。
如以±3s为失控限，假失控的概率为0.3%。
IQC的失控不能做为处罚的依据，应建设性的 找出失控的原因，针对其采取措施加以改进。
对IQC应定期进行评价。
分析用质控（图）
控制用质控（图）
问题实例
失控处理的20字原则
查出异因 采取措施 保证消除 不再出现 纳入标准
预防！
防止同样的问题出现第二 次是质量管理的“精髓”！
我国雾霾的最主要原因：工厂、汽车尾气、烧烤、工地扬尘…..
常用质控规则的符号及定义
符号
12S 13S 22S R4S
41S 7T 10X
定义
1个质控测定值超出均值±2SD控制限 1个质控测定值超出均值±3SD控制限 2个连续的质控测定值同时超出均值+2SD或−2SD控制限 同一批测定中，2个不同浓度质控品测定值之间的差值超出 4SD控制限 4个连续的质控测定值同时超出均值+1SD或−1SD控制限 7个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变化 10个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧
根据泊松分布的概率计算
在病原体特异抗原和抗体检测中，许多实验室或检测项目 如抗-HIV、抗-HCV的阳性结果率均较低，这时虽然可以 使用公式（1）计算概率，但如果标本量很大，使用泊松 分布来估计二项式分布是一种更为简便的方法。根据泊松 分布，可使用下式计算概率：
P(X=k) =(np)ke-np/k!
试剂量不足 2% 系统崩溃 7%
主传输架故障
2%
洗板头感应故障
7%
分配单元丢步 4%
（2号）单元锁定 6%
孵育超限 34%
废液管道堵塞 2%
注液针堵塞 19%
ELISA各项目总失控率比较（08.03-12）
3.50% 3.00%
49/1569
2.50%
2.00% 1.50% 1.00%
26/1589
IQC就是每批检测时加入一个外部质控品同时检测吗？
实验室环境条件（温度、湿度、振动、洁净、通风、噪声 等）？
仪器设备的日常维护和定期校准？ 试剂方法的性能验证？性能确认？ 可操作性的SOP（质量管理的“灵魂”）？、 人员培训？ 室内质控品随机放在临床标本中的同时检测？
实验室环境条件的控制
而在一次检测100个标本，所有三个阳性结果连续出现的概率为： P=(100-3+1)/[100!/3!(100-3)!]=98/161700=0.0006 概率为0.06%。 因此，如果如在100个标本中，连续出现三个为阳性次数有1次，即概率 为1.0%，为失控。
室内质量控制的评价
IQC是一个集体活动，不光是对实验室一次测 定的有效性的判断，也反应了实验室测定趋势 的变化。
定性免疫检验室内质量控制 及质量持续改进
李金明 国家卫生计生委临床检验中心
全国临床免疫检验质量保证大会 2016.5.17-19 南宁
问题？
为什么要有室内质量控制（IQC）？ IQC就是每批检测时加入一个外部质控品同时检测吗？ 定性免疫检验与定量检验在室内质控的方法上有何根本性
不同吗？ 定性免疫检验的室内质控品从哪能得到？ 定性免疫检验的“非统计学方法”与“统计学方法”有矛
在一个实验室中某检测项目结果的阳性率为p,计算在n 个血液样本中有k个阳性结果的概率。根据二项式分 布的概率计算公式如下： P(X=k)=n!/[k!(n-k)!]pk(1-p)n-k (1) 其中n为当次实验检测标本数，k为阳性个数，p为阳性 率。
P(X=k)5%为失控。此时，阴性标本可以发出报告， 所有阳性标本在查清原因后重做。
由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价 本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室 工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检 验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告
的一项工作。
可概括为: 1.执行者（Who）：实验室技术人员； 2.目 的（Why）：①监测实验室测定的精密度（重复 性）；②提高常规检测结果一致性（质量的持续改进）； ③ 决定了当批测定的有效性，报告可否发出。是对实验 室测定的即时性评价。
在相同的条件下（地点、仪器、试剂、人员、 时间）所进行的一组测定。
特异抗原和抗体、自身抗体等定性检测质 控品从哪来？
日常检验阳性样本的收集 弱阳性质控品：ELISA、CLIA等（S/CO比
值1.5~4.0的样本）；ANA（有临床意义的 起始稀释度样本）；LIA（能见到可判断为 阳性条带的样本）；基因检测为测定下限 浓度2-4倍。 较强阳性质控样本？
根据二项式分布的概率计算
如果一个实验室检测HBsAg，平常病人结果的阳性率为10%，即 p=0.1, 在某一次检测25个样本出现6个阳性结果，19个阴性结果， 则检测过程中是存在污染的可能性可通过下述方法计算。即计算 在25个样本中出现6个或6个以上阳性结果的概率，此时的概率为 1-（获得0个或1个或2个或3个或4个或多5个阳性结果的概率）即 ：
直接概率计算法
按统计学规律，一个事件发生的概率小于5%被 称为小概率事件，即发生的可能性很小。
当一个小概率事件发生时，则可能有误差存在 ，有必要对其发生的原因进行分析。