HPLC检测器大全
高效液相色谱法所用的检测器
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高效液相色谱法所用的检测器
高效液相色谱法通常使用以下检测器:
1. 紫外光吸收检测器(UV检测器): 这是最常用的检测器之一。
它利用样品分子在特定波长下吸收的紫外光的数量来检测分离出来的化合物。
2. 荧光检测器:此检测器利用分离出来的化合物的荧光强度来检测分离出来的化合物。
这可以使它有效地检测探测极小浓度的化合物。
3. 电导检测器: 此检测器通过检测样品中离子的电导率来检测分离出来的化合物。
这种检测器通常用于离子交换色谱。
4. 质谱检测器(MS检测器):在某些情况下,需要识别和定量化合物。
在这种情况下,使用质谱检测器非常有用。
它将化合物的分子质量与一个反应谱库进行比较,以进行准确的定量和鉴定。
5. 折射率检测器(RI检测器): 检测样品分子与溶剂的差异折射率。
该检测器对于不具有紫外吸收或荧光的化合物是很有用的。
不同液相检测器的区别
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不同液相检测器的区别公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]高效液相色谱仪的常用检测器有哪几种,有什么区别高效液相色谱仪常用检测器种类及分析检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号,常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet_visibledetector,UVD)紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一,几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。
其特点是灵敏度较高,线性范围宽,噪声低,适用于梯度洗脱,对强吸收物质检测限可达1ng,检测后不破坏样品,可用于制备,并能与任何检测器串联使用。
紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似,实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
(1)紫外吸收检测器紫外吸收检测器常用氘灯作光源,氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长,并安装一个光栅型单色器,其波长选择范围宽(190nm-800nm)。
它有两个流通池,一个作参比,一个作测量用,光源发出的紫外光照射到流通池上,若两流通池都通过纯的均匀溶剂,则它们在紫外波长下几乎无吸收,光电管上接受到的辐射强度相等,无信号输出。
当组分进入测量池时,吸收一定的紫外光,使两光电管接受到的辐射强度不等,这时有信号输出,输出信号大小与组分浓度有关。
局限:流动相的选择受到一定限制,即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相,每种溶剂都有截止波长,当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时,溶剂的透光率降至10%以下,因此,紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector,PDAD)也称快速扫描紫外可见分光检测器,是一种新型的光吸收式检测器。
它采用光电二极管阵列作为检测元件,构成多通道并行工作,同时检测由光栅分光,再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号,然后对二极管阵列快速扫描采集数据,得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。
hplc法测定蛋白所需要的仪器和试剂
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hplc法测定蛋白所需要的仪器和试剂
HPLC法是一种常用的蛋白质分析方法,需要使用特定的仪器
和试剂。
本文将介绍HPLC法测定蛋白所需要的仪器和试剂。
一、仪器
1.高效液相色谱仪
高效液相色谱仪是HPLC法测定蛋白的核心仪器。
它由进样器、色谱柱、检测器和数据处理系统组成。
进样器用于将待分析的蛋白样品引入色谱柱,色谱柱则用于分离蛋白质,检测器则用于检测分离后的蛋白质峰,数据处理系统则用于处理并分析检测结果。
2.离心机
离心机用于将蛋白样品离心,去除悬浮在液体中的杂质。
3.超声波清洗器
超声波清洗器用于清洗色谱柱和其他实验器具,以保证实验结果的准确性。
4.微量分光光度计
微量分光光度计用于测定蛋白样品的浓度,以便进行标准曲线的绘制和样品浓度的计算。
二、试剂
1.缓冲液
缓冲液用于调节样品的pH值,以使其适合于HPLC分析。
2.色谱柱填料
色谱柱填料用于填充色谱柱,根据不同的实验需求可以选择不同的填料材料。
3.溶剂
溶剂用于溶解蛋白样品和制备缓冲液。
4.标准品
标准品用于绘制标准曲线,以便计算样品中蛋白质的浓度。
以上就是HPLC法测定蛋白所需要的仪器和试剂。
在进行实验前,需要根据实验需求选择合适的仪器和试剂,并严格按照操作规程进行实验,以保证实验结果的准确性。
hplc检测器种类及特点
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hplc检测器种类及特点HPLC检测器种类及特点HPLC(高效液相色谱法)是一种常用的分离和分析技术,广泛应用于各个领域的实验室。
HPLC系统由多个部分组成,其中检测器是其中之一,用于监测样品在色谱柱中的分离和识别。
不同类型的HPLC检测器具有不同的特点和适用范围,本文将详细介绍一些主要的HPLC检测器种类及其特点。
紫外检测器(UV检测器):紫外检测器是使用紫外线(UV)光源照射样品,并测量样品吸收/透射的紫外光强度的一种检测器。
这种检测器适用于大多数化学物质,因为大多数有机化合物和某些无机化合物(如金属离子)对紫外线具有吸收能力。
紫外检测器的工作原理是通过比较进样溶液和参比溶液对紫外光的吸收量来确定样品的存在和浓度。
UV检测器具有极高的检测灵敏度和广泛的线性范围,且对各种溶剂和化合物的稳定性较好。
然而,该检测器不能提供化合物的结构信息,因为它只是根据吸收强度进行检测。
荧光检测器:荧光检测器是在分离柱后的样品流中使用荧光探针,通过测量样品产生的荧光强度来检测化合物。
这种检测器适用于大多数有荧光性质的化合物,包括天然化合物、药物、色素等。
荧光检测器的工作原理是在激发光源(通常是紫外线)的作用下,分子从低能级跃迁到高能级,然后放射出荧光光子。
荧光检测器具有较高的检测灵敏度和特异性,且具有多通道检测的能力,可以同时测定多个组分。
然而,荧光检测器对环境和溶剂的要求比较高,并且需要选择合适的激发波长和荧光波长。
电化学检测器:电化学检测器是使用电化学技术进行检测的一种检测器。
电化学检测器可以测量样品中的电子转移反应、电荷转移反应、离子传递等电化学过程。
常见的电化学检测器有电导检测器(CD)和安培检测器(AD)。
电导检测器是通过电荷传递反应量测样品离子浓度的一种方法,适用于带电离子和非离子。
安培检测器则是通过测量样品中电流强度来识别化合物的一种方法,适用于具有可测电流的化合物。
电化学检测器具有非常高的选择性和灵敏度,能够检测到微量的化合物,但它们对电极的选择和维护要求较高。
HPLC中常用的检测器
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能会掩盖前期脱洗的色谱峰
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注意事项: a: 洗脱液的组成一定要恒定,不能使用梯度洗脱。 b: 不能使检测池带压工作,在与其它检测器串联使用时应放在最
后。 c: 流速要恒定,泵的流速波动要小于0.5%,使用往复泵时要用阻
尼装置。 d: 温度要恒定,恒温控制要达±10-4℃,在使用时预热时间要充足
,否则基线漂移十分严重 。
通用型检测器 约有80%的分析样品具有紫外吸收,可以使用这种检测器检测。
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优点: a: 灵敏度高,检测下限约为 10-6 g/ml b: 线性范围广 C: 对温度和流速不敏感,适于进行梯度洗脱
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限制: a: 没有紫外吸收的物质不能检测 b: 应尽可能选择在检测波长下没有背景吸收的流动相 (限制了一些 一些截止波长在200~300nm之间的良好溶剂的使用 )
阵列的每一单元有一只光敏二极管和一只与之并联的电容器. 光电二极管紫外检测器n个单元同时检测,从而使采样时间减 少到普通的1/N.使用211个二极管的阵列元件,最快时,每 10ms可完成一次测量.每秒中可以收集20000~10000 0个数据.
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与普通UV-VIS检测器不同之处:
a: 普通UV-VIS检测器是先用单色器分光,只让特定波长的光进入 流动池。 而二极管阵列UV-VIS检测器是先让所有波长的光都通过流动池,然 后通过一系列分光技术,使所有波长的光在接受器上被检测.
率乘以各自的摩尔浓度之和. 溶有样品的流动相与流动相本身之间折射率之差就表示样品
在流动相中的浓度.原则上,凡是与流动相折射指数有差别的样品 都可以测定它的浓度.
通用型检测器 (浓度检测器 ) 检测限可达10-6 ~10-7g/ml
高效液相色谱仪组成及检测器种类
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高效液相色谱仪组成及检测器种类HPLC主要由四个核心组成部分:溶剂系统、进样系统、分离柱和检测器。
下面将详细介绍HPLC的组成部分及常见的检测器种类。
1.溶剂系统:溶剂系统是HPLC的基础部分,主要由溶剂瓶、溶剂泵和混合器组成。
溶剂系统的主要功能是提供流动相,使待分离物质在分离柱中迅速传递,并保持色谱的稳定。
常见的溶剂选择有水、有机溶剂(如甲醇、乙醇)和酸碱溶液等。
2.进样系统:进样系统主要由进样装置和进样口组成。
进样系统的主要功能是将待测样品溶液精确地进样到分离柱中,进行分离分析。
常见的进样方式有手动进样、自动进样和微量进样等。
3.分离柱:分离柱是HPLC用于分离待测物质的核心部分,其主要作用是将混合物中的化合物按照其化学性质进行分离。
分离柱通常由不同类型的填料填充而成,包括反相色谱柱、离子交换色谱柱、凝胶过滤柱等。
根据填料粒径的不同,分离柱可以分为常规柱和超高效柱。
4.检测器:检测器是HPLC中用于检测分离柱中物质浓度的装置。
根据不同的原理和应用要求,常见的HPLC检测器包括:(1) 紫外可见检测器(UV-Vis Detector):紫外可见检测器是HPLC常用的检测器之一,主要通过测量样品在紫外或可见光区域的吸收来确定成分的浓度。
该检测器具有灵敏度高、通用性强、操作简单等特点。
(2) 荧光检测器(Fluorescence Detector):荧光检测器主要通过测量分析物在激发光源作用下发射出的荧光信号来确定成分的浓度。
该检测器具有灵敏度高、选择性好、检测限低等特点,广泛应用于药物分析、环境分析、食品安全等领域。
(3) 折射率检测器(Refractive Index Detector):折射率检测器主要通过测量分析物引起的溶剂折射率变化来确定成分的浓度。
该检测器适用于不含色团的非极性物质的检测,具有灵敏度较低、通用性强的特点。
(4) 质谱检测器(Mass Spectrometer):质谱检测器将柱前的液相分离与质谱技术相结合,可实现化学物质的分离和结构表征。
各种液相色谱检测器介绍
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各种液相色谱检测器介绍各种液相色谱检测器介绍液色迷人/紫外吸收检测器ultraviolet absorption detector紫外吸收检测器ultraviolet absorption detector 简称紫外检测器(UV),是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器。
因为大部分常见有机物质和部分无机物质都具有紫外吸收性质,所以该检测器是液相色谱中应用最广泛的检测器,几乎所有液相色谱仪都配置了这种检测器。
它不仅有较好的选择性和较高的灵敏度,而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感,因此既可用于等度洗脱,也可用于梯度洗脱。
其检测灵敏度在mg/L至mg/L范围。
可见光检测器visible light detector可见光检测器visible light detector 又称分光光度检测器,是基于溶质分子吸收可见光的原理设计的检测器。
能够直接采用可见光检测的溶质不是很多,而且多数灵敏度也不高,但采用具有高摩尔吸光系数的有机试剂(配位体和螯合剂)作为衍生化试剂进行柱前或柱后衍生操作的衍生化光度检测法是相当有用的,特别是在金属离子配合物液相色谱中的应用是相当成功的。
低压梯度low-pressure gradient低压梯度low-pressure gradient 又称外梯度,是在低压状态下完成流动相强度调整的梯度装置。
只需一个高压泵,与等度洗脱输液系统相比,就是在泵前安装了一个比例阀,混合就在比例阀中完成。
因为比例阀是在泵之前,所以是在常压(低压)下混合之后再增压输送到色谱柱的。
蒸发光散射检测器克服常见的HPLC检测难题虽然阵法光散射检测器(Evaportive light Scattering,ELSD)已经开发生产15年,但是对于许多色谱工作者来说,它仍是一个新产品。
第一台ELSD是由澳大利亚的Union Carbide研究实验室的科学家研制开发的,并在八十年代初转化为商品,八十年代以激光为光源的第二代ELSD面世。
仪器分析技术w6202-2高效液相谱仪常用检测器的分类及工作原理和应用
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高效液相色谱仪常见检测器分类及工作原理和应用
主讲教师:长春职业技术学院 王磊
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检测器的分类 常用检测器的工作原理及应用
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1
检测器的分类
高效液相色谱仪常用检测器分类及工作原理和应用
— 4—
高效液相色谱仪常用的检测器
主要特点
池体积可制作的很小,检测后不破坏杨品, 可用于制备
灵敏度比紫外检测器高,噪音低,线性范围 宽,适用梯度洗脱及制备色谱;紫外吸收大 的溶剂不能做流动相
易受背景荧光、pH和溶剂的影响,适用于痕 量分析
可检测所有物质,不适合微量分析
蒸发光散射检测器 ELSD 纳克级激光计数检测器NQAQ
任何挥发型低于流动想的样品均能 被检测
高效液相色谱仪常见检测器分类及工作原理和应用
— 14 —
常见检测器的工作原理及应用
荧光检测器的应用
环境中的污染物
– 多环芳烃(PAH),多酚, 氨基甲酸酯等
食品、饮料 – 食品中的毒素;例如:黄 曲霉毒素
– 染料 – 维生素及衍生氨基酸 生物技术及制药
多环芳烃(PAH)
H3C CH3
CH3
— 13 —
常见检测器的工作原理及应用
荧光检测原理
原理:发荧光的化合物吸收光使其分子达 到激发态,当其返回到基态时发射光的现象即 荧光。
检测过程:由光源发出的光,经激发光单 色器后,得到所需波长的激发光。经过样品池 被样品吸收,并使其被激发后发射出荧光。再 经选择发射波长的单色器分光后,单一波长的 发射光波被送至检测器进行检测,吸光强度与 激发光强度成正比。
紫外可见吸收检测器
高效液相色谱仪常用的检测器及其性能
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高效液相色谱仪常用的检测器及其性能(1)紫外吸收(UV)检测器UV检测器是目前HPLC应用最广泛的检测器。
它是依据光吸收原理,以适当的光路和电路,输出一个与试样组分浓度成正比的紫外一可见光吸收信号,其结构与一般光度计相似。
其流通池是组分流过的光学通道,池体积一般为8μl,内径小于lmm,长度10mm左右。
这种检测器灵敏度高,线性范围宽,对流速和温度变化不敏感,可用于梯度洗脱分离。
紫外吸收检测要求被检测样品组分有紫外一可见光吸收,而使用的流动相无吸收,或在被测组分吸收波长处无吸收。
一般选择在欲分析物有最大吸收的波长处进行检测,以获得最大灵敏度和抗干扰能力。
在没有最大吸收时,可采用末端吸收。
检测波长的选择除取决于待测物质的成分和分子结构外,还必须考虑流动相组成、共存组分干扰等因素。
特别是各种溶剂都有一定的透过波长下限值,超过这个波长,溶剂的吸收会变得很强,以至于不能很好地测出待测物质的吸收强度。
表1列出了HPLC中一些常用的溶剂透过波长的下限。
(2)光电二极管阵列(IJDA)检测器PDA检测器又称为二极管阵列检测器(diode array UV detector,DAD),这种检测器以光电二极管阵列作为检测元件,可进行多通道并行检测,在一次色谱测量中,可同时获得时间、波长、吸光度三者的关系,通过计算机处理,在荧光屏上显示出三维图谱,也可作出任意波长的吸光度一时问曲线和任意时间的吸光度一波长曲线。
DAD的光路与紫外检测器不同,光源发出的光聚焦后先通过检测池,通过检测池的透射光由全息光栅色散成多色光,不同波长的色散光按波长顺序聚焦在阵列元件上,每个元件对应一定的纳米数。
当光照射到光电二极管时,光电二极管产生讯号。
由于色散过程及透射光的检测是全波长范围的,可在瞬间检测流经检测池的全吸收光谱,得到三维色谱一光谱图。
计算机化的数据处理,还可进行色谱峰光谱相似性比较、峰纯度检测及利用谱图库对掣定样品进行检索等,为定性、定量分析提供更丰富的信息。
高效液相色谱仪的分类
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高效液相色谱仪(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是一种常用的分析仪器,可以用于物质的分离、纯化和定量分析。
根据其分析模式、柱型和检测方式等因素,HPLC可以分为以下几类:1. 按分析模式分类:-反相色谱(Reverse Phase Chromatography,RPC):样品以非极性或弱极性的固定相上进行分离,常用于非极性化合物的分析。
-正相色谱(Normal Phase Chromatography):样品以极性的固定相上进行分离,常用于极性化合物的分析。
-离子交换色谱(Ion Exchange Chromatography):基于离子交换原理进行分离,分离物质通过阳离子交换柱或阴离子交换柱进行分离。
-手性色谱(Chiral Chromatography):用于分离手性化合物,通过手性柱实现对手性化合物的不对称分离。
2. 按柱型分类:-液固色谱(Liquid-Solid Chromatography):固定相是在柱子表面涂上一层液体固定相材料。
-液液色谱(Liquid-Liquid Chromatography):固定相是液体,主要通过液体相互分配来实现分离。
-离子交换色谱(Ion Exchange Chromatography):基于离子交换原理进行分离,分离物质通过阳离子交换柱或阴离子交换柱进行分离。
3. 按检测方式分类:-紫外检测器(UV Detector):利用分析物质在紫外光区域的吸收特性进行检测。
-荧光检测器(Fluorescence Detector):利用分析物质的荧光性质进行检测。
-电化学检测器(Electrochemical Detector):利用电化学原理进行检测,如电流和电位的变化。
-质谱联用(Mass Spectrometry,MS):将质谱仪与HPLC联用,通过分析分子的质量和碎片信息进行检测。
这些分类方式可以根据具体的实验需求进行选择,并根据分析物质的性质进行优化和调整。
高效液相色谱检测器的种类及特点
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一、概述高效液相色谱(HPLC)是一种常用的分析化学技术,广泛应用于化学、生物、医药和食品等领域。
在HPLC技术中,检测器是至关重要的一部分,它负责检测样品中化合物的浓度,并将其转化为可读的信号输出。
本文将对HPLC检测器的种类及特点进行详细介绍。
二、紫外-可见光(UV-Vis)检测器1. 原理:UV-Vis检测器利用化合物中的紫外或可见光吸收特性来检测化合物。
2. 特点:1)广泛适用:UV-Vis检测器适用于大多数有机化合物和许多无机化合物的分析。
2)灵敏度高:对于绝大多数有机化合物,UV-Vis检测器的灵敏度较高。
3)简单易用:UV-Vis检测器的操作相对简单,适合实验室常规分析。
三、荧光检测器1. 原理:荧光检测器利用化合物在受激光照射下产生荧光的特性来检测化合物。
2. 特点:1)高灵敏度:荧光检测器对于有荧光活性的化合物具有极高的灵敏度。
2)特异性强:由于荧光本身具有较高的特异性,荧光检测器可以用于分析中对混杂物的忽略。
3)应用广泛:在生物学、医学和环境领域,荧光检测器得到了广泛的应用。
四、蒸发光散射检测器1. 原理:蒸发光散射检测器通过样品与蒸发后的溶剂之间的差异来检测化合物。
2. 特点:1)通用性强:蒸发光散射检测器对于大多数非吸收性化合物都具有较好的检测能力。
2)无需色谱柱:相比于其他检测器,蒸发光散射检测器可以不需要色谱柱,适用于高分子化合物的检测。
3)灵敏度较低:蒸发光散射检测器的灵敏度通常较低,需要较高浓度的样品才能进行检测。
五、质谱检测器1. 原理:质谱检测器通过将化合物转化为离子,并对离子进行质量分析来检测化合物。
2. 特点:1)高分辨率:质谱检测器具有极高的分辨率,可以准确确定化合物的质荷比。
2)特异性强:质谱检测器对于复杂混合物的成分分析具有很强的特异性。
3)操作复杂:相比于其他检测器,质谱检测器的操作和维护较为复杂,需要专业的操作人员。
六、综述HPLC检测器种类繁多,每种检测器都有其特定的适用场景和优势。
HPLC检测器大全
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HPLC检测器大全检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号,常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet-visible detector,UVD)紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一,几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。
其特点是灵敏度较高,线性范围宽,噪声低,适用于梯度洗脱,对强吸收物质检测限可达1ng,检测后不破坏样品,可用于制备,并能与任何检测器串联使用。
紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似,实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
(1)紫外吸收检测器紫外吸收检测器常用氘灯作光源,氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长,并安装一个光栅型单色器,其波长选择范围宽(190nm~800nm)。
它有两个流通池,一个作参比,一个作测量用,光源发出的紫外光照射到流通池上,若两流通池都通过纯的均匀溶剂,则它们在紫外波长下几乎无吸收,光电管上接受到的辐射强度相等,无信号输出。
当组分进入测量池时,吸收一定的紫外光,使两光电管接受到的辐射强度不等,这时有信号输出,输出信号大小与组分浓度有关。
局限:流动相的选择受到一定限制,即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相,每种溶剂都有截止波长,当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时,溶剂的透光率降至10%以下,因此,紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
(2)光电二极管阵列检测器(photodiode array detector,PDAD)也称快速扫描紫外可见分光检测器,是一种新型的光吸收式检测器。
它采用光电二极管阵列作为检测元件,构成多通道并行工作,同时检测由光栅分光,再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号,然后对二极管阵列快速扫描采集数据,得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。
由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据,从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。
HPLC中常用的检测器分有如下几种
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HPLC中常用的检测器分有如下几种液相检验HPLC中常用的检测器分有如下几种,紫外吸收检测器(UVD)、二极管阵列检测器(PDAD)、荧光检测器(FLD)、示差折光检测器(RID)、蒸发光散射检测器(ELSD)、质谱检测器(MSD)等。
下面就分别介绍简单介绍一下。
光学类检测器1、紫外吸收检测器(UVD)是目前HPLC中应用最广泛的检测器。
它的主要特点是灵敏度高,线性范围宽,对流速和温度变化不敏感,可用于梯度洗脱。
它要求被检测样品组分有紫外吸收,属于选择性检测器。
2、二极管阵列检测器(PDAD)是20世纪80年代才出现的一种光学多通道检测器,它可以看作是UVD的一个分支。
在对每个洗脱组分进行光谱扫描,经计算机处理后,得到光谱和色谱结合的三维图谱。
其中吸收光谱用于定性(确证是否是单一纯物质),色谱用于定量,常用于复杂样品(如生物样品、中草药)的定性定量分析。
3、荧光检测器(FLD)同样属于选择性检测器,其灵敏度在目前常用的HPLC检测器中是最高的,应用也较多,仅次于UVD。
它适用于能激发荧光的化合物。
很多与生命科学有关的物质,如氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测。
荧光检测器在生物样品痕量分析中很有用,尤其在用荧光衍生后,可以检测很微量的氨基酸和肽。
通用型检测器1、示差折光检测器(RID)是一种通用型检测器,只要被测组分与洗脱液的折光指数有差别就可使用。
生命科学中常遇到各类糖类化合物,没有紫外吸收,一般常用示差折光检测器。
它的通用性比UVD广,但灵敏度要低,对温度变化敏感,并与梯度洗脱不相容,因而限制了它的使用。
2、蒸发光散射检测器(ELSD)也是一种通用型的检测器,可检测挥发性低于流动相的任何样品,而不需要样品含有发色基团。
ELSD的响应值与样品的质量成正比,因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物。
ELSD灵敏度比RID高,对温度变化不敏感,基线稳定,可用于梯度洗脱。
现在ELSD已被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测。
液相色谱仪检测器类型及原理
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液相色谱仪检测器类型及原理
液相色谱仪检测器类型及原理如下:
1. 紫外检测器:该检测器适用于吸收波长在200-400nm的物质。
样品溶液通过进样管进入流动相,进入紫外检测器前经过一条石英衬里的检测池。
紫外辐射通过溶液时,被样品分子吸收,吸收的光强度被检测器测量。
2. 荧光检测器:该检测器适用于荧光性物质。
样品溶液通过进样管进入流动相,经过紫外激发后,样品分子发生激发态,脱离激发态时会放出发射波长固定的荧光。
该荧光被荧光检测器检测并转换为电信号。
3. 漂移时间检测器:该检测器适用于分子量小的有机物。
样
品溶液经过进样管进入流动相,在漂移时间管中流动,被高电压加速后通过泄漏孔,被带电终点接收器捕获。
根据分子质量的不同,分子的漂移时间也不同,漂移时间越短,质量越大。
4. 折射率检测器:该检测器适用于非紫外吸收物质,如糖类,蛋白质等。
样品溶液经过进样管进入流动相,经过一条单色光源后,进入折射率检测器。
折射率的变化导致被检测到的偏折角度发生变化,进而被检测器检测和记录。
5. 电化学检测器:该检测器适用于可被氧化还原的物质。
样品通过进样管进入流动相,经过电化学池后,从阳极溶出的电子被电流计测量。
随着溶出的电子数增加,电流也随之增加。
根据电流的变化反映出样品组分的浓度。
常见气相色谱检测器及应用范围
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常见气相色谱检测器及应用范围
气相色谱检测器是用于检测气相色谱分离出的成分的设备。
以下是一些常见的气相色谱检测器及其应用范围:
1. 热导检测器(TCD):通用性好,几乎对所有物质都有响应,常用于检测永久性气体和低沸点有机物。
2. 火焰离子化检测器(FID):对大多数有机物有高灵敏度响应,是应用最广泛的检测器之一,适用于检测烃类、醇类、酮类等有机物。
3. 电子捕获检测器(ECD):选择性高,对电负性物质如卤代烃、含氮化合物等有很高的灵敏度,常用于检测农药、环境污染物等。
4. 火焰光度检测器(FPD):对含硫、含磷化合物有高选择性和高灵敏度,常用于检测硫化物、磷化物等。
5. 质谱检测器(MSD):具有高灵敏度和高选择性,能够提供化合物的分子量和结构信息,广泛应用于复杂混合物的分析。
这些检测器在气相色谱分析中具有不同的特点和优势,可以根据分析的需求选择合适的检测器。
气相色谱检测器的应用范围涵盖了环境监测、食品分析、医药研究、化工等多个领域。
HPLC几种最常用的主要检测器(四)
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HPLC几种最常用的主要检测器(四)(4)目前用法最多的几种非挑选性(通用性)HPLC检测器。
①示差折光检测器(RID)。
示差折光检测器在20年前是一种用法最多的非挑选性检测器;它是一种利用物质的折射率变幻,来做定性或定量测量的仪器。
图2-66是一种典型的示差折光检测器。
1-微调器;2-粗调器;3-池棱镜;4-参比溶液;5-样品;6-检测池;7-透镜;8-光检测器(光接收器) 图2-66 反射式折光仪光路图②蒸发光散射检测器(ELSD)。
ELSD 是目前HPLC中用法最广泛的一种非挑选性的通用型检测器。
我国2010版药典中十分重视它的应用。
我国上海通微公司近几年推出了一种UM5000型ELSD,已经销售100多台,深受广阔用户欢迎。
下面容易介绍UM5000型ELSD的有关状况。
a.国产UM 5000型ELSD工作原理:UM 5000型ELSD是我国“+五”国家科技攻关方案重大项目研发成绩,是我国首台国产化的ELSD,其性能指标达到国际同类产品先进水平。
它可检测挥发性低于流淌相的任何样品,而不需要样品含有发色基团。
ELSD的敏捷度比示差折光检测器高,对温度变幻不敏感,基线稳定,适合干梯度洗脱液相色谱联用。
UM 5000型ELSD的形状2-67所示。
图2-67 UM 5000型ELSD的形状图雾化原理为液体流淌相在载气压力的作用下在雾化室内改变成细小的液滴,从而使溶剂更易于蒸发。
液滴的大小和匀称性是保证检测器的敏捷度和重复性的重要因素。
UM5000型蒸发光散射检测器,通过对气压和温度的精确控制,确保在雾化室内形成一个较窄的液滴尺寸分布,使液滴蒸发所需要的温度大大降低。
蒸发原理为载气把液滴从雾化室运输到漂移管举行蒸发。
在漂移管中,溶剂被除去,留下微粒或纯溶质的小滴。
UM5000型ELSD采纳低温蒸发模式,维持了颗粒的匀称性,对半挥发性物质和热敏性化合物同样具有较好的敏捷度。
检测:光源采纳650nm激光,溶质颗粒从漂移管出来后进入光检测池,并穿过激光光束。
气相液相色谱仪最常见的检测器
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气相色谱仪最常见的检测器1)热导检测器热导检测器(TCD)属于浓度型检测器,即检测器的响应值与组分在载气中的浓度成正比。
它的基本原理是基于不同物质具有不同的热导系数,几乎对所有的物质都有响应,是目前应用最广泛的通用型检测器。
由于在检测过程中样品不被破坏,因此可用于制备和其他联用鉴定技术。
2)氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID)利用有机物在氢火焰的作用下化学电离而形成离子流,借测定离子流强度进行检测。
该检测器灵敏度高、线性范围宽、操作条件不苛刻、噪声小、死体积小,是有机化合物检测常用的检测器。
但是检测时样品被破坏,一般只能检测那些在氢火焰中燃烧产生大量碳正离子的有机化合物。
3)电子捕获检测器电子捕获检测器(ECD)是利用电负性物质捕获电子的能力,通过测定电子流进行检测的。
ECD具有灵敏度高、选择性好的特点。
它是一种专属型检测器,是目前分析痕量电负性有机化合物最有效的检测器,元素的电负性越强,检测器灵敏度越高,对含卤素、硫、氧、羰基、氨基等的化合物有很高的响应。
电子捕获检测器已广泛应用于有机氯和有机磷农药残留量、金属配合物、金属有机多卤或多硫化合物等的分析测定。
它可用氮气或氩气作载气,最常用的是高纯氮。
4)火焰光度检测器火焰光度检测器(FPD)对含硫和含磷的化合物有比较高的灵敏度和选择性。
其检测原理是,当含磷和含硫物质在富氢火焰中燃烧时,分别发射具有特征的光谱,透过干涉滤光片,用光电倍增管测量特征光的强度。
5)质谱检测器质谱检测器(MSD)是一种质量型、通用型检测器,其原理与质谱相同。
它不仅能给出一般GC检测器所能获得的色谱图(总离子流色谱图或重建离子流色谱图),而且能够给出每个色谱峰所对应的质谱图。
通过计算机对标准谱库的自动检索,可提供化合物分析结构的信息,故是GC定性分析的有效工具。
常被称为色谱-质谱联用(GC-MS)分析,是将色谱的高分离能力与MS的结构鉴定能力结合在一起。
6)氮磷检测器(NPD),用于检测含磷含氮化合物;7)火焰光度检测器(FPD),用于检测含磷含硫化合物;8)原子发射检测器(AED),可用于多种元素检测。
气相色谱仪有哪些检测器
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1、氢火焰离子化检测器FID用于微量有机物分析
2、热导检测器TCD用于常量、半微量分析,有机、无机物均有响应
3、电子捕获检测器ECD用于有机氯农药残留分析
4、火焰光度检测器FPD用于有机磷、硫化物的微量分析
5、氮磷检测器NPD用于有机磷、含氮化合物的微量分析
6、催化燃烧检测器CCD用于对可燃性气体及化合物的微量分析
7、光离子化检测器PID用于对有毒有害物质的痕量分析
FID氢火焰检测器居多;
它几乎对所有的有机物都有响应,而对无机物、惰性气体或火焰中不解离的物质等无响应或响应很小,它的灵敏度比热导检测器高100-10000倍,检测限达10-13g/s,对温度不敏感,响应快,适合连接开管柱进行复杂样品的分离,线性范围为10的7次方是气体色谱检测仪中对烃类如丁烷,己烷灵敏度最好的一种手段,广泛用于挥发性碳氢化合物和许多含炭化合物的检测;
TCD热导池检测器;
热导池检测器TCD是一种结构简单、性能稳定、线性范围宽、对无机、有机物质都有响应、灵敏度适宜的检测器;其与FID、ECD、FPD等检测器并列为色谱法中最常用的检测器;
FPD 火焰光度检测器
FPD的原理是基于样品在富氢火焰中燃烧,使含硫、磷的化合物经燃烧后又被氢还原, 产生激发态的S2S2的激发态和HPOHPO的激发态,这两种受激物质反回到基态时幅射出400nm和550nm左右的光谱,用光电倍增管测量这一光谱的强度,光强与样品的质量流速成正比关系;FPD是灵敏度很高的选择性检测器,广泛地用于含硫、磷化合物的分析;。
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检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号,常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet-visible detector,UVD)
紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一,几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。
其特点是灵敏度较高,线性范围宽,噪声低,适用于梯度洗脱,对强吸收物质检测限可达1ng,检测后不破坏样品,可用于制备,并能与任何检测器串联使用。
紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似,实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
(1)紫外吸收检测器
紫外吸收检测器常用氘灯作光源,氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长,并安装一个光栅型单色器,其波长选择范围宽(190nm~800nm)。
它有两个流通池,一个作参比,一个作测量用,光源发出的紫外光照射到流通池上,若两流通池都通过纯的均匀溶剂,则它们在紫外波长下几乎无吸收,光电管上接受到的辐射强度相等,无信号输出。
当组分进入测量池时,吸收一定的紫外光,使两光电管接受到的辐射强度不等,这时有信号输出,输出信号大小与组分浓度有关。
局限:流动相的选择受到一定限制,即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相,每种溶剂都有截止波长,当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时,溶剂的透光率降至10%以下,因此,紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
(2)光电二极管阵列检测器(photodiode array detector,PDAD)
也称快速扫描紫外可见分光检测器,是一种新型的光吸收式检测器。
它采用光电二极管阵列作为检测元件,构成多通道并行工作,同时检测由光栅分光,再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号,然后对二极管阵列快速扫描采集数据,得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。
由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据,从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。
单光束二极管阵列检测器,光源发出的光先通过检测池,透射光由全息光栅色散成多色光,射到阵列元件上,使所有波长的光在接收器上同时被检测。
阵列式接收器上的光信号用电子学的方法快速扫描提取出来,每幅图象仅需要10ms,远远超过色谱流出峰的速度,因此可随峰扫描。
2.荧光检测器(fluorescence detector,FD)
荧光检测器是一种高灵敏度、有选择性的检测器,可检测能产生荧光的化合物。
某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生成荧光衍生物,再进行荧光检测。
其最小检测浓度可达0.1ng/ml,适用于痕量分析;一般情况下荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数量级,但其线性范围不如紫外检测器宽。
近年来,采用激光作为荧光检测器的光源而产生的激光诱导荧光检测器极大地增强了荧光检测的信噪比,因而具有很高的灵敏度,在痕量和超痕量分析中得到广泛应用。
3. 示差折光检测器(differential refractive Index detector,RID)
示差折光检测器是一种浓度型通用检测器,对所有溶质都有响应,某些不能用选择性检测器检测的组分,如高分子化合物、糖类、脂肪烷烃等,可用示差检测器检测。
示差检测器是基于连续测定样品流路和参比流路之间折射率的变化来测定样品含量的。
光从一种介质进入另一种介质时,由于两种物质的折射率不同就会产生折射。
只要样品组分与流动相的折光指数不同,就可被检测,二者相差愈大,灵敏度愈高,在一定浓度范围内检测器的输出与溶质浓度成正比。
4. 电化学检测器(elec)chemical detector,ED)
电化学检测器主要有安培、极谱、库仑、电位、电导等检测器,属选择性检测器,可检测具有电活性的化合物。
目前它已在各种无机和有机阴阳离子、生物组织和体液的代谢物、食品添加剂、环境污染物、生化制品、农药及医药等的测定中获得了广泛的应用。
其中,电导检测器在离子色谱中应用最多。
电化学检测器的优点是:
①灵敏度高,最小检测量~般为ng级,有目可达pg级;
②选择性好,可测定大量非电活性物质中极痕量的电活性物质;
③线性范围宽,一般为4~5个数量级;
④设备简单,成本较低;
⑤易于自动操作。
5. 化学发光检测器(c。
iluminescence detector,CD)
化学发光检测器是近年来发展起来的一种快速、灵敏的新型检测器,因其设备简单、价廉、线性范围宽等优点。
其原理是基于某些物质在常温下进行化学反应,生成处于激发态势反应中间体或反应产物,当它们从激发态返回基态时,就发射出光子。
由于物质激发态的能量是来自化学反应,故叫作化学发光。
当分离组分从色谱柱中洗脱出来后,立即与适当的化学发光试剂混合,引起化学反应,导致发光物质产生辐射,其光强度与该物质的浓度成正比。
这种检测器不需要光源,也不需要复杂的光学系统,只要有恒流泵,将化学发光试剂以一定的流速泵入混合器中,使之与柱流出物迅速而又均匀地混合产生化学发光,通过光电倍增管将光信号变成电信号,就可进行检测。
这种检测器的最小检出量可达10-12g。
6.蒸发光散射检测器(EvaporativeLight-scatteringDetector,ELSA)
ELSA是通用型检测器,可以检测没有紫外吸收的有机物质,如人参皂苷、黄芪甲苷等。
优势:
1) 可检测挥发性低于流动相的任何样品;
2) 流动相低温雾化和蒸发,对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度;
3) 广泛的梯度和溶剂兼容性,无溶剂峰干扰;
4) 辅助载气提高了检测灵敏度,保持检测池内的清洁,避免污染;
5) 高精度雾化和蒸发温度控制,保证高精度检测;
6) 可与任何HPLC系统连接。
ELSD与几种常用的检测器之间的对比
ELSD UV RID MS
应用范围通用有光吸收的化合物通用通用
响应质量相关化学相关折光度相关质量相关
灵敏度高高低高
未知物检测能不能能能
流动相影响/梯度不影响本底影响影响不影响
基线稳定性好较好差好。