核酸血液筛查(上海浩源)
血站开展核酸检测介绍
数量:约84742份(2010.6-2011.4.21) 结果：HBV-DNA阳性13例（1/6517）
HIV-RNA阳性1例
总结:2008.8-2011.4.21检测数据
总共检测约238428万份标本
2008.8~2011.4.21检测数据
EIA全部合格的全血及未经过EIA检测的血小板
8 检验科核酸实验室异常结果分析报告
LNBC/D-618-JY
9 检验科核酸实验室质量控制记录
LNBC/D-621-JY
10 检验科核酸检测报告单
LNBC/D-622-JY
11 检验科核酸检测原始记录
LNBC/D-623-JY
12 辽宁省血液中心检验科核酸实验质控图
LNBC/D-625-JY
版本号 0/A 0/A 0/A 0/A 0/A 0/A 0/A 0/A 0/A 0/A 0/A 0/A
离心时间 4小时内
计算机控制—保证标本、血液同源
标本采 集人员 采用 PDA 对 血袋、 标本管 等实物 进行核 查
离心处理
1、标本采集后离心
离心处理
2、标本接收后实验室再离心
标本接收时质量检查
实验室对标本采集的控制是否有效？
采取系列措施：
专人负责标本质量检查,标识不合格标本 通过血袋血型检测发现与血袋不同源的标本 对不符合检测要求的标本,慎重给予检测结论 增加阳性标本的血袋再留样检测 计算机核对实物信息及数量等
第一阶段：科研,2003年
项目:HCV 形式:科研 数量:8万份
第二阶段：常规检测,2008.8- 2010.5
项目:HBV、HCV、HIV 09.7月前---检测全血 09.7月后---增加血小板检测
丙型肝炎病毒实验室检测技术(63页)
重组免疫印迹法 （RIBA）
凯荣、MP、厦大与万泰合作的。
HCV抗原检测试剂
试剂名称 生产厂商
丙型肝炎病毒抗原测定试剂盒（化学发光微粒子免 疫检测法） Murex Ag/Ab combination assay(Abbott） *Monolisa HCV 丙型肝炎病毒核心抗原诊断试剂盒（酶联免疫法） 丙型肝炎病毒抗原检测试剂盒（酶联免疫法）
丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)水平变化可反映肝细胞损害程度，但ALT、 AST水平与HCV感染引起的肝组织炎症分度和病情 的严重程度不一定平行； 急性丙型肝炎患者的ALT和AST水平一般较低，但 也有较高者。 急性丙型肝炎患者的血清白蛋白、凝血酶原活动 度和胆碱酯酶活性降低较少，但在病程较长的慢 性肝炎、肝硬化或重型肝炎时可明显降低，其降 低程度与疾病的严重程度成正比。
试剂名称生产厂商最低检测限iuml备注cobasampliscreenhcv20roche罗氏25cobastaqscreenmpxroche罗氏107cobastaqscreenmpx20roche罗氏107与一代相比二代能够直接鉴别出hbvhcv或hiv阳性procleixultrioassaychiron诺华血源筛查hbvhcvhiv一1病毒核酸检测试剂盒pcr一荧光探针法100hbvhcvhiv1bloodscreeningrealtimepcrkit916nucleicacidtestkithbvhcvhivrealtimepcr100人类免疫缺陷病毒hiv1丙型肝炎病毒乙型肝炎病毒核酸检测试剂盒pcr荧光法233hcv核酸定性检测血筛试剂尚未在中国上市试剂名称生产厂商最低检测限iuml线性范围iumlcobasampliprepcobastaqmanhcvtestroche罗氏1543e0169e07cobasampliprepcobastaqmanhcvtest20roche罗氏国内未见此资料amplicorhcvmonitor20roche罗氏内未见此资料50e0250e05cobastaqmanhcvhpsroche罗氏1528e0114e09abbottrealtimehcv1212e0110e08versanthcvrna30西门子国内未见此资料615e0277e06丙型肝炎病毒hcv核酸定量检测试剂盒pcr荧光探针法50010e0350e07丙型肝炎病毒核酸扩增荧光pcr定量检测试剂盒50010e0310e07丙型肝炎病毒rna定量荧光pcr检测试剂盒艾康生物50010e0380e08丙型肝炎病毒rna定量检测试剂盒磁珠法东北制药2510e0210e08hcv核酸定量检测试剂试剂名称生产厂商区分亚型丙型肝炎病毒基因分型检测试剂盒pcr反向点杂交法1b2a3a3b6ahcv基因分型测定试剂盒荧光pcr法上海之江生物仅能区分i型versanthcvgenotypeassaylipa20西门子6个型均能区trugenehcvgenotypingassay西门子6个型均能区abbottrealtimehcvgenetyping仅能区分1a和1b中国公共卫生杂志河南数据河南省175岁人群的hcv抗体hcvrna调整流行率分别为064035
国产高精度乙肝病毒载量检测的临床应用评价
浩源
阴性(未检出) 临界阳性(<20 IU/ ml)
阳性(≥20 IU/ ml) 合计
表 1 浩源与罗氏检测结果一致性分析表
Bland-Altman 图。 乙肝病毒载量≥2×101IU/ml 且两 种试剂都有定量 值 时 ， 浩 源 与 罗 氏 结 果 偏 差 ≤± 0.4Log 范围内， 一致性为 73%； 病毒载量高于 1× 103IU/ml 时， 浩源与 罗氏结果偏差≤±0.4Log 范 围 内， 一致性为 79.5%。
（四川绵阳四○四医院检验科， 四川绵阳 621000）
[摘要]目的： 比较国产上海浩源高精度乙肝病毒定量系统与罗氏 COBAS Ampliprep/ COBAS TaqMan 48 定量系 统检测乙肝病毒载量的一致性， 评价国产乙肝病毒定量系统的临床适用性。 方法： 收集 2019 年 3 月~5 月在我院检 测高精度 HBV-DNA 的患者血清样本， 采用国产浩源和罗氏高精度乙肝定量系统分别测量样本浓度， 通过 Kappa 值、 R2 值和临床可接受范围评价两种检测系统的相关性。 结果： 以罗氏结果为标准， 浩源结果的阳性符合率 95%， 阴性符合率 75%， 总符合率 93%， Kappa 值为 0.794， 与罗氏结果一致性良好； 两种检测系统结果呈线性相关 （y= 0.954x + 0.185， R2= 0.951， P<0.01）； 乙肝病毒载量≥2×101IU/ml 且两种试剂都有定量值时， 浩源与罗氏结果偏 差≤±0.4Log 范围内， 一致性为 73%； 病毒载量高于 1×103IU/ml 时， 浩源与罗氏结果偏差≤±0.4Log 范围内， 一 致性为 79.5%。 结论： 浩源与罗氏高精度乙肝定量检测系统具有较好的一致性， 国产高精度乙肝定量系统可满足临床 需要。
核酸及血清学检测在乙肝病毒血液筛查中的价值探讨_1
核酸及血清学检测在乙肝病毒血液筛查中的价值探讨发布时间：2022-10-28T10:29:37.555Z 来源：《中国医学人文》2022年16期作者：张柳英姚仟[导读] 目的：血液安全性是人们都非常关注的问题，随着血液、血清病毒检测新技术的出现张柳英姚仟贵州省黔南州中心血站 558000摘要：目的：血液安全性是人们都非常关注的问题，随着血液、血清病毒检测新技术的出现，优化和提升了检测灵敏度及特异性，很大程度的减少了输血感染病毒的风险。
然而“窗口期”、隐匿性肝炎低病毒载量等因素的存在，导致输血感染病毒风险问题时有发生，特别是乙型肝炎病毒血液方面的检测，本次就针对核酸及血清学检测在乙肝病毒血液筛查中的价值进行了探究。
方法：研究过程中从献血者的血液标本中筛选了研究标本，共计37106份，血液标本均实施了核酸和血清学检测，对检测结果进行了评估和分析。
结果：检测结果分析显示，有36481份标本合格，不合格标本为625份。
HBsAg不合格数162份,核酸（PCR）不合格数51份,HBV-DNA不合格数50份,HIV RNA不合格数1份；华益美HBV-DNA不合格数34份，上海浩源HBV-DNA不合格数16份，HIV-RNA不合格数1份。
结论：血清学阴性HBV感染血液标本运用核酸检测提升检出率，但是对于HBV病毒载量较低患者方面的检测，这类方式临床价值有一定的限制，所以，使用核酸检测血液标本时，应联合运用两种方式为佳，能够防止漏诊问题出现。
关键词：核酸及；血清学检测；乙肝病毒；筛查；价值前言临床上很多疾病的治疗无法用药物、手术等治疗方面达到消除病症的目的，必须借助输血治疗方式才能改善病症，但是给患者治疗期间所输入的血液属于他人体内的血液，因为多方面的因素可能会发生血液感染风险，不仅会影响患者身体健康，严重者会丧失生命，目前临床上利用血清学检测技术检测输血有关传染性病毒标志物的抗原和抗体，有效减少了患者感染情况的发生。
抗HCV筛查实验设置“灰区范围”的探讨
图1 抗 HCV阴性样本Cov值频数由表4结果，分别对各样本不同稀释倍数的检测结果绘制抗 HCV阳性样本稀释Cov曲线图，并对相同稀释倍数的不同样本计算平均值绘制抗 HCV阳性样本稀释Cov平均值曲线图，结果见图3。
由结果可知，阳性样本，经过稀释，最终使筛查实验无法检出。
但是，阳性样本稀释到一定程度，虽然Cov值持续下降，结果呈阴性反应，在阳性和阴性结果转换期间，曲线总体趋势逐渐由陡峭到平坦，进入1个相对稳定的平台期。
统计表4中Cov均值＜2 0的数据，Cov平均值=0 731、s=0 410、平均值+2s=1 552。
图3 抗 HCV阳性样本稀释Cov平均值图3 讨论综合阴性、阳性样本和阳性稀释样本统计数据，两者灰区范围结果吻合，均在0 70左右，该值远高于多数阴性样本Co v值（表2结果中94 48%的阴性样本Cov值＜0 70），足以区识阴阳性，可以作为分界线，弥补ELISA试剂盒单纯以cut off值判断阴阳性的缺陷，因此把筛查结果Cov值下浮30%范围视为“灰区”较为合适。
对该区样本需要增补试验联合检测，以防漏检。
把“灰区范围”设置为30%，处于该区域内的样本占本项研究全部样本的0 49%，“灰区范围”内的这些样本经文中方法鉴定后的真阳性率为10 0%。
由此表明确实存在灰区样本漏检情况发生，故而有必要对这些样本进行确认。
而处于“灰区范围”内的样本仅占全部样本的0 49%，即便增加试验联合检测，也不会过多增加工作量，在实际工作中是现实可行的。
另外，结果不一致的样本，Cov平均值、s和Cov平均值+2s分别为2 13、0 77、3 67，从而表明结果不一致的样本多为弱阳性样本，一般情况下Cov值＜4 0。
在常规检测过程中，可能会有一些阳性样本，由于抗体浓度较低而出现假阴性结果的现象。
所以，设置1个适当的“灰区范围”，对处于该范围的样本做进一步的检测，采用多种试剂联合检测，只有当结果均为阴性时方可发出检验报告，必要时需再次取样随访调查，以避免漏检现象的发生。
各药品上市公司及主要产品
首仿药系列：1、恒瑞医药（600276）奥沙利柏、多西他赛、伊利替康；2、恩华医药（002262）齐拉西酮，原研厂家辉瑞；3、白云山（000522）福泰（仿达菲）；4、海药（000566）紫杉醇注射液、头孢西丁钠；5、信立泰（002294）泰嘉（硫酸氢氯吡格雷）；6、医药（601607）仿达菲；7、海正药业（600267）达菲中间体；8、堂（600085）3个仿制品种已进入审批生产程序；9、双鹤药业（600062）2009年3月27日正式推出了公司最新仿制药研发成果—“冠爽通用名：匹伐钙”；10、高新（000661）艾塞那肽产品在国首家通过国家食品药品监督管理局的审批，该药被国际糖尿病专家列为四大潜力药物之首；11、康芝药业（300086）瑞芝清（尼美利颗粒）。
独家中药系列：1、白药（000538）白药系列，国家绝密配方，国家一类中药保护品种；2、片子癀（600436）片子癀系列，国家绝密配方，国家一类中药保护品种；3、沃华医药（002107）心可舒片，国家中药保护品种；4、东阿阿胶（000423）阿胶系列，国家首批非物质文化遗产扩展项目名录；5、精华制药（002349）王氏保赤丸、季德胜蛇药片，国家中药品种；6、中恒集团（600252）血栓通注射液；7、千金药业（600479）妇科千金片；8、中新药业（600329）速效救心丸，国家级中药品种；9、药业（600332）消渴丸；10、马应龙（600993）麝香痔疮膏；11、独一味（002219）独一味系列；12、金陵药业（000919）脉络宁注射液；13、天士力（600535）复方丹参滴丸；14、华润三九（000999）999感冒灵、皮炎平、正天丸、胃泰，华蟾注射液，国家配；15、九芝堂（000989）驴胶补血冲剂、乙肝宁冲剂，国家二级中药保护品种。
赤丹退黄颗粒，国家配方；16、堂（600085）六味地黄丸；17、太极集团（600129）急支糖浆；18、桐君阁（000590）桂枝合剂、四君子合剂、驱虫消食片，国家中药保护品种；19、海药（000566）枫蓼肠胃康颗粒剂，国家中药保护品种；20、嘉应制药（002198）双料喉风散；21、三金（002275）三金片，西瓜霜系列；22、奇正藏药（002287）奇正消痛贴膏，国家中药保护品种，国家品种；23、药业（600211）诺迪康系列；24、羚锐制药（600285）通络去痛膏、壮骨麝香止痛膏；25、美罗药业（600297）伤科接骨片、鱼鳞病片、珠珀安神丹，国家中药保护品种；26、亚宝药业（600351）丁桂脐贴；27、康缘药业（600557）热毒宁注射液、痛安注射液；28、康恩贝（600572）可达灵，国家中药保护独家品种。
2013—2016年太原市无偿献血人群人类免疫缺陷病毒检测结果分析
2013—2016年太原市无偿献血人群人类免疫缺陷病毒检测结果分析窦丽霞人类免疫缺陷病毒（HIV）1981年在美国首次发现，侵犯人类免疫系统，潜伏期长，致死率高，是严重威胁人类健康的病原体，血液传播是其三大传播途径之一，输血是现代医学中不可替代的治疗手段，而经血液及血制品的传播概率几乎达100%，医院患者输注含有HIV病毒的血液是普通人群感染艾滋病的高危途径［1］。
本文对太原市2013—2016年345951名无偿献血者HIV抗体感染情况及高发人群特点进行分析，探讨如何从源头上加强献血前的招募和咨询工作，以建立一支低风险的无偿献血队伍，为临床提供更安全的血液。
1资料与方法1.1标本来源：选择2013—2016年太原市无偿献血标本345951份，均符合《献血者健康检查要求》（GB18467⁃2011）的规定。
1.2酶联免疫吸附试验（EL I SA）筛查试剂与仪器：FAME全自动酶免分析系统（瑞士Hamilton公司2420，2430），Xan-tus150全自动加样仪（深圳爱康公司），F reedom evo全自动加样仪（瑞士TECAN公司）；ELlSA项目采用两种试剂盒进行筛查，HIV Ag/Ab：法国伯乐、厦门新创，均为中国药品生物制品鉴定所鉴定的合格产品，有效期内使用；外部质控购自北京康彻思坦生物技术有限公司。
1.3核酸检测试剂与仪器：ChiTas BSS1200核酸提取系统（上海浩源生物科技有限公司），ABI7500实时荧光PCR仪（美国ABI）；上海浩源生物科技有限公司提供配套试剂。
HAMILTON Microlab STAR混样仪（瑞士），CobasAmpliPrep+ CobasTapMan（罗氏公司），CobasTaqScreen MPX Test，version2.0试剂盒。
1.4试验方法：采用两种不同厂家ELISA试剂对无偿献血者标本进行初筛检测，严格按照试剂说明书和标准操作规程进行操作，当实验结果初复检均为非反应性或其中一种试剂检测为反应性，经再次双孔复查均为非反应性时判断为非反应性，均为反应性或其中一种试剂检测为反应性，经再次双孔复查至少有一孔为反应性时，判断为反应性，按照《全国艾滋病检测技术规范》送太原市疾病预防控制中心做确认试验，确认阳性者为HIV感染。
隐匿性乙肝的最新研究进展
隐匿性HBV感染与血液安全—OBI与HBV血液
传播
许多实验及临床研究均证实HBsAg阴性、
HBV-DNA 阳性血液的传染性
用HBsAg 阴性HBV-DNA 阳性血清(HBV病毒载 量为3-169拷贝/ml)给猩猩注射, 结果猩猩感染了 HBV; 输HBsAg阴性的血和母亲为HBsAg 阴性结果发 生了输血后肝炎和母婴HBV-DNA的传染 。
HBV感染的转归
中国乙肝流行概况
中国各年龄人口中血清HBsAg阳性率
我国乙肝病毒的基因型分布
隐匿性HBV 感染 （Occult HBV infection)
历史： 1978年，美国学者首次报道了一起HBsAg(‐) /HBcAb(+)的血液导致的受血者HBV感染。 1991年， 法国学者用HBsAg(‐)/DNA(+) 的血浆接种大猩猩，观察到急性乙肝的发生。 1996年后，在全球献血员和各种肝脏疾病患 者中有越来越多的隐匿性HBV感染报道。
隐匿性HBV感染与血液安全—OBI的分类
根据抗－ＨＢＶ模式，可将ＯＢＩ分为： 血清阳性的OBI: 即抗-HBc和(或)抗-HBs阳性； 血清阴性的OBI: 即抗-HBc和(或)抗-HBs阴性。
临床类型（ISBT OBI研究国际协作组）：
急性感染的“窗口期”； 慢性感染后期； 感染恢复期，体内存在抗-HBs，但病毒仍低水 平复制； 免疫逃逸突变株感染
隐匿性HBV感染的医学意义
公共卫生意义： 1、 输血后乙肝 2、HBV垂直传播 3、疫苗免疫失败的原因之一
隐匿性HBV感染的诊断
尚缺乏统一的、标准化的检测方法
1、核酸检测（NAT）。 是隐匿性HBV感染诊断的金 标准。但由于常规荧光定量PCR检测灵敏度不够高 且受引物或探针区序列变异影响，因此一般需用多 区段套式PCR辅以测序确认。 2、 HBcAb筛查。 HBcAb是HBV感染的间接指标， HBcAb单阳的人群中存在相对较高比例（~5%） 的OBI，部分发达国家用于血液筛查。 3、 新型试剂。 如超敏广谱表面抗原（HBsAgUltra)， Dane Ag（联合检测前S1与核心抗原），HBcrAg， HBcAg等。
体外诊断试剂分析和研发课件
肿瘤标志物诊断试剂市场情况
我国每年新增肿瘤患者200万人、死亡130万人， 现存约600万肿瘤患者，肿瘤标志物目前国内市场需求 约为2000万人份、市场容量约为5亿元，年增长15%。 主要生产厂家有伯乐太平洋、上海太阳生物、福建新 大陆及晶美生物工程公司。
08年达安基因公司取得了乙肝试剂盒（免疫荧光 法）、糖类抗原CA15-3定量测定试剂盒（免疫荧光法） 及游离前列腺特异性抗原定量测定试剂盒（免疫荧光 法）等数个FDA证书，其目标市场定位于乙肝及肿瘤 免疫诊断，可望获得较快发展。
体外诊断试剂分析和研发
2007-2014年全球MDx市场预测
体外诊断试剂分析和研发
总体规模：2007年，全球体外诊断试剂市场规模已经超过 380亿美元。
增长速度：预计2007至2012年，体外诊断试剂的年复合增长 率将接近7%。
主要销售领域：北美、欧洲以及日本占据市场份额的90%。 增长率最大市场：中国、印度与巴西等新兴经济体将成为增
就核酸类试剂来说，由于技术上尚不完全成熟，多用于科研和实验室，并 未列入卫生部的统一指导价格目录中，因此临床应用不广泛，份额较少。
体外诊断试剂分析和研发
国内诊断试剂市场分布
体外诊断试剂分析和研发
五、 国内主要生产企业
达安基因 上海科华 中生北控 华美生物 复星医药 上海浩源 ……
体外诊断试剂分析和研.3、生化诊断试剂：市场大、毛利率低
生化类产品主要有酶类、糖类、脂类、蛋白及非蛋白氮类等。该类产品 市场较大，目前国内生化诊断试剂的领导者为上海复兴长征及中生北控，各 占有30%的市场份额，其它厂家较多、占40%份额，此类产品毛利率较低。达 安基因08年拟涉足该类产品经营，其主要目的是向客户提供高中低端等多层 面产品服务、形成规模优势，提高销售队伍营运效率及摊低费用，增强公司 全方位竞争力及业务拓展能力，预计生化类产品年内对公司利润贡献不大。
核酸扩增检测结果的分析及阳性结果确认程序
检测系统的 组成
HAMILTON 混样仪、提 取仪、实时 荧光PCR仪
上海浩源
中山达安
实时荧光 PCR
实时荧光 PCR
有
有
1）分管检测； 各指标分管 2）一管内多 检测 重PCR，但 直接检测三 项指标。
HAMILTON 混样仪、提 取仪、实时 荧光PCR仪
混样仪、提 取仪、实时 荧光PCR仪
ROCHE （Cobas
追踪献血员（12月后检测）“ 两对半”及核酸
确实不能 追踪者
送参比 Lab验证
HBsAg+
仍全阴
送参比 Lab验证
阳性
阴性
追踪献血员 (1-2月)可同时检 测特异抗原
抗体（+）
抗体或抗原 （—）
阳性
再次检 测核酸
阳性（反 应性）样 本的确认 程序
阳性
阴性
继续追踪献血员或 送参比Lab验证
谢谢！
Pooling and Data
Management (PDM)
Software
TECAN混样仪 （如混合样本）、 TMA检测仪（一 管内完成提取、 扩增及杂交发光 检测）
实时荧光定量PCR 检测的结果分析报告
线性基线期 (Linear base-line phase) 指数期初期 （The beginning of exponential phase） 指数期（Exponential phase） 平台期（Plateau phase）
TaqScreen MPX Test）
Chiron （Procleix＠
Ultrio TM Assay）
多重实时荧 光PCR
有
TMA 有
一管内多重 PCR，不能 区分是何指 标
乙型肝炎病毒的核酸检测技术
乙型肝炎病毒的核酸检测技术乔艳辉;文国新【摘要】@@ 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是乙型肝炎的病原体,自1965年Blumberg等发现"澳大利亚抗原",1970年Dane等在电镜下鉴定了Dane颗粒,即HBV颗粒,从而阐明了颗粒的表面成分,病毒表面抗原(HBsAg)、核壳成分HB-cAg和HBeAg.HBV属嗜肝DNA病毒,是不完全环状双链DNA病毒,全长约3.2 kb,是目前已知对人类致病的最小双链DNA病毒,严重威胁着人类生命健康.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2009(032)008【总页数】3页(P1203-1205)【作者】乔艳辉;文国新【作者单位】新疆乌鲁木齐市血液中心,新疆,乌鲁木齐,830000;新疆乌鲁木齐市血液中心,新疆,乌鲁木齐,830000【正文语种】中文【中图分类】R512.6乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)是乙型肝炎的病原体，自1965年Blumberg等发现“澳大利亚抗原”，1970年Dane等在电镜下鉴定了Dane颗粒，即HBV颗粒，从而阐明了颗粒的表面成分，病毒表面抗原(HBsAg)、核壳成分HBcAg和HBeAg。
HBV属嗜肝DNA病毒，是不完全环状双链DNA病毒，全长约3.2 kb，是目前已知对人类致病的最小双链DNA病毒[1]，严重威胁着人类生命健康。
我国HBV的人群携带率约10%, 每年新发病例50万, 而目前我国仍以HBsAg阳性与否作为筛查献血者HBV感染的指标, 由于存在窗口期、低水平乙肝感染及基因变异等, 会导致HBV DNA阳性血样漏检。
随着分子生物学技术的发展，人们可以通过病毒核酸检测技术(Nucleic acid test,NAT)直接检测病毒核酸，不受个体免疫反应差异的影响，显著缩短窗口期，从而有效预防输血传播疾病。
本文将针对性地对血液及血液制品的HBV核酸检测技术作一综述。
实时荧光定量PCR技术在人类细小病毒B19检测中的应用
人类微小病毒B19（Human parvovirus B19，HPV B19）是儿科常见的出疹性疾病——传染性红斑（又称第五病，Erythema infection ，EI ）的病因。
除了这一轻型自限性感染外，B19病毒还可使慢性溶血病病人发生再障危象及急性多关节病。
在免疫缺损病人中可造成持续性感染。
由于细小病毒B19致病的广泛性和复杂性，目前国际上对该病毒的研究比较活跃。
B19可通过呼吸道传播，也可通过输血和使用血液制品传播，从而引起多种疾病。
B19病毒的近期感染主要通过IgM 抗体的检测，常用捕获法或放射免疫测定，IgG 抗体对诊断急性感染无意义，其存在仅表明曾感染过，主要用于血清流行病学调查。
目前实验室和临床检测中，最敏感检测病毒的方法是PCR 法，通过对B19进行实时荧光定量PCR 检测，能突破窗口期的局限性，更利于B19病毒的早期诊断和治疗。
本文，笔者根据荧光定量PCR 的原理建立了人类细小病毒B19的实时荧光定量PCR 检测方法，经过对临床样本的检测，显示建立的方法敏感性高，特异性好，适合B19病毒的筛查和核酸定量检测。
一、材料与方法1.标本来源。
WHO B19标准品购自英国国家生物制品检定所（NIBSC ）。
单纯疱疹病毒样本、巨细胞病毒样本、带状疱疹病毒样本、T 细胞白血病病毒样本、腺病毒样本、呼吸道合胞病毒样本、流感病毒样本和副流感病毒样本来自上海地区医院。
89份临床样本为血液中心献血员血浆留样中筛检到的B19阳性样本。
2.试剂和仪器。
DNA 提取采用上海浩源磁珠提取试剂盒，dNTP （dATP 、dCTP 、dGTP 、dUTP 、dTTP ）和Tris 为宏锦公司采购，尿嘧啶糖基化酶（UNG ）为roche 公司产品、热启动TaqDNA 聚合酶购自Fermentas 公司。
pMD18-T 试剂盒试剂盒购自Takara 。
DNA1000微流芯片试剂盒购自Agilent 。
artus®Parvo B19RG PCR Kit 购自QIAGEN 公司。
科华核酸血筛系统介绍
核酸血筛全自动工作平台
实验操作自动化
样本汇集、核酸提取、核酸扩增检测
样本汇集过程、样本核酸提取过程（从待处理的汇集或单份
标本到纯化出核酸模板）实现全程无间断自动化工作流程
独立的核酸扩增完全符合卫生部临检中心的对实验室分区的 要求
维护保养简单
核酸血筛扩增检测系统
病毒核酸扩增检测系统
–
靶基因序列的特异性、引物错配、非特异性扩增
实时荧光（Real-time）：引物与探针同时控制
污染问题
污染来源
由于PCR检测的高灵敏度，使得极其轻微污染也能被检出。 分析标本发生污染的来源可分为以下两类：
样本污染 产物污染
样本污染
标本采集、运输、保存过程发生标本间的污染。
标本开盖过程发生标本间污染。
2007年 试剂临床考核
科华核酸血筛系统组成
乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病 毒1型核酸检测试剂盒
+
KHB全自动核酸工作站 （HAMILTON-磁模块组合）
自动化完成样品汇集、磁珠法核 酸提取和PCR反应液准备全过程
ABI 7500实时荧光定量 PCR全自动分析系统
同步完成核酸扩增和检测
ABI 7500荧光PCR仪 实时荧光聚合酶链反应 同步完成扩增和检测
–
–
核酸血筛扩增检测系统
实验数据直观，并且直接 显示项目结果
可直观观察数据的扩增情况 检测结果能直接显示项目结 果
（HBV、HCV、HIV中哪个为 阳性
结果）
一步拆分
信息管理服务器系统
不同ELISA试剂检测传染病四项弱反应性结果的比较
不同ELISA试剂检测传染病四项弱反应性结果的比较目的对比进口和国产几种不同厂家品牌的试剂对HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1/2、抗-TP传染病四项的检测结果，观察分析不同试剂对传染病四项检测弱反应性结果的差异。
方法2017年1—12月无偿献血者血液标本47 586份，应用不同全自动酶免分析仪进行ELISA 2次检测，并对除梅毒以外的167份弱反应性样本利用NAT检测技术进行确认。
结果47 586份样本中HBsAg弱反应性120份（伯乐71份;万泰49份）;抗-HCV弱反应性20份（丽珠5份;万泰15份）;抗-HIV1/2弱反应性27份（丽珠5;伯乐22）;抗-TP弱反应性98份（丽珠41;万泰57），167份弱反应性样本NAT检测结果HBV DNA有反应性5份（其中伯乐3;万泰2）;HCV RNA有反应性0份;HIV-1 RNA有反应性0份;梅毒螺旋体离体存活时间短不进行核酸检测。
结论不同试剂对传染病四项检测弱反应性结果存在差异，尽管存在假反应性结果的可能，但核酸检测发现仍有输血残余风险，单独使用都有可能存在漏检。
为了进一步提高临床输血安全水平，2次ELISA检测在血液筛查中仍有实际应用价值。
标签：ELISA;NAT;传染病四项;弱反应性;血液筛查酶联免疫吸附实验（ELISA）是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术[1-2]。
其方法简单，方便讯速，特异性强，目前仍广泛应用于医疗及采供血机构[3]。
国内绝大部分采供血机构对献血者筛查可经血传播感染的检测项目和方法的模式，仍主要以选择2个不同生产厂家的ELISA试剂检测为主，进行2次ELISA方法的血液筛查。
目前我国采供血机构已普遍开展NAT检测，血液筛查策略下一步可能有所改进。
为此，选取2017年1—12月无偿献血者血液标本47586份将不同ELISA试剂对传染病四项检测弱反应性结果进行了统计分析和比较，并利用NAT检测技术进行确认。
天津市血液中心_企业报告(业主版)
天津市血液中心 2023-02-07
报告解读：本报告数据来源于各政府采购、公共资源交易中心、企事业单位等网站公开的招标采购 项目信息，基于招标采购大数据挖掘分析整理。报告从目标单位的采购需求、采购效率、采购供应 商、代理机构、信用风险 5 个维度对其招标采购行为分析，为目标单位招标采购管理、采购效率 监测和风险预警提供决策参考；帮助目标单位相关方包括但不限于供应商、中介机构等快速了解目 标单位的采购需求、采购效率、采购竞争和风险水平，以辅助其做出与目标单位相关的决策。 报告声明：本数据报告基于公开数据整理，各数据指标不代表任何权威观点，报告仅供参考！
仪项目中标公告
有限公司
35.0
2022-08-29
TOP7
天津市血液中心采血秤购置项目 深圳市达科为医疗
中标公告
科技有限公司
32.0
2022-06-16
TOP8
天津市血液中心半自动生化分析 北京瑞尔达生物科
筛查系统购置项目中标公告
技有限公司
23.6
2022-10-09
TOP9
天津市血液中心全自动血液细胞 天津市拓一行商贸
山东新易腾生物技 术有限公司
北京华泽林医疗器 械有限公司
深圳市血之缘医疗 科技有限公司
深圳市血之缘医疗 科技有限公司
1747.5 1737.5 742.5
79.2
2021-12-22 2022-02-18 2022-10-14 2022-11-09
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天津市血液中心全自动生化分析 天津市拓一行商贸
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2019/2/24
核酸血液筛查相关技术
TaqMan荧光PCR技术
forward primer
5' 3' 5'
February 24, 2019
R
probe
Q
3' 5' 3' 5'
R
Q
5' 3' 5' 3' 5' 3' 5'
1. Polymerisation
reverse primer
2. Strand displacement
2019/2/24
核酸血液筛查相关技术
PCR技术
February 24, 2019
P16
2019/2/24
分子生物学概论
TMA技术
February 24, 2019
P17
2019/2/24
核酸血液筛查相关技术
TMA与PCR比较
TMA 扩增原理 靶目标 模拟自然 DNA 转录成 mRNA 的过程 RNA PCR
DNA聚合酶
一种酶，一对引物，dNTP 循环导热 （变性，退火，延伸） 热循环仪 DNA 以2n扩增，2～3 h就能将待扩目的 基因扩增放大10亿倍
扩增速度
P18
2019/2/24
核酸血液筛查相关技术
荧光PCR技术
February 24, 2019
SYBR GREEN
P19
Molecularbeacon
P11
2019/2/24
核酸血液筛查相关技术
磁珠法提取核酸
February 24, 2019
第三步：洗涤：用洗 涤液将非核酸成分冲 洗分离（为清洗干净 该步骤可以重复多 次）。
第四步：核酸的洗脱： pH升高，在低盐环境 下，核酸被洗脱下来。
P12
2019/2/24
核酸血液筛查相关技术
PCR技术
3’ 5’ 5’
PCR技术
3’
3’ 3’ 3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ 5’
February 24, 2019
第二个循环 4个拷贝
3’ 3’ 3’
3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’
5’
第三个循环 8个拷贝
3’
3’ 3’ 3’
3’
第n个循环 2n个拷贝
P15
February 24, 2019
模拟自然 DNA复制的过程 DNA
酶
反应体系 温度条件 扩增仪器 扩增产物
MMLV逆转录酶及T7 RNA聚合酶
两种酶，两条引物，dNTP, NTP 恒温（41.5℃ ） 水浴箱或者加热块 RNA 每个循环可以生成100-1000个复制物 ，在15-30分钟内可增加10亿倍复制物
P4
2019/2/24
分子生物学概论
DNA的二级结构
February 24, 2019
DNA双螺旋结构
DNA分子由相互平行、 走向相反、碱基互补 的两条脱氧核糖核苷 酸链围绕同一中心轴， 盘绕成双螺旋结构， 螺旋的一侧为大沟， 另一侧为小沟。平行 链对应碱基总是 A==T、G === C配对 （base pairing)或互 补，形成稳定联系。
中的每—条链为模板，在DNA指导下 的DNA聚合酶催化下，按A与T、G与 C碱基配对原则合成子代DNA的过程 称DNA的复制(replication)。由于复制 合成的子代DNA两条脱氧核糖核苷酸 链中有一条来自亲代DNA，另一条是
February 24, 2019
以前者为模板新合成的子代DNA链，
核酸血液筛查相关技术
磁珠法提取核酸
February 24, 2019
• 样品核酸提取 • 磁珠法
P10
2019/2/24
核酸血液筛查相关技术
磁珠法提取核酸
February 24, 2019第一步：细胞的ຫໍສະໝຸດ 解： 破碎细胞，并向溶液 中加入磁珠。
第二步：结合核酸：pH较 低，在高盐环境下，硅胶磁 珠带正电荷，选择性的与优 化试剂中的核酸结合
核酸分子杂交 hybridization
February 24, 2019
当不同来源的核酸变性后一起复性时，只要这些核酸分 子中含有相同序列的片段，即可形成碱基配对，出现复性 现象，形成杂种核酸分子，或称杂化双链，称核酸分子杂 交。
P7
2019/2/24
分子生物学概论
DNA半保留复制 DNA合成进行时，以两条亲代DNA链
R Q
5' 3' 5' 3' 5' 3' 5' 5' 3' 5' 3'
R
Q
3. Cleavage
5' 3' 5'
R = Reporter Q = Quencher
4. Polymerisation completed
February 24, 2019
核酸血液筛查
P1
2019/2/24
目
一 二 三 四 三
录
February 24, 2019
分子生物学概论
核酸血液筛查相关技术
核酸血液筛查系统 血站核酸检测样本的采集、运送和保存 PCR实验室的污染防治
P2
2019/2/24
分子生物学概论
核酸的分子组成-核苷酸
February 24, 2019
February 24, 2019
3’
d.NTPs
引物
耐热DNA聚合酶
加入试管中
P13
2019/2/24
核酸血液筛查相关技术
PCR技术
3’ 5’ 5’ 3’
February 24, 2019
延伸
3’
Taq Taq
5’
5’
3’
继续延伸
3’
Taq
Taq
5’
3’
P14
循环 循环 循环
2019/2/24
核酸血液筛查相关技术
P3
2019/2/24
分子生物学概论
DNA的一级结构
February 24, 2019
•由A/T/G/C四种单核苷酸组成
Cytosine Adenine
Hydrogen Bonds
Thymin e Guanine
Deoxyribose (Sugar molecule) Phosphoric Acid (Phosphate molecule)
所以DNA的这种合成作用又称半保留 复制(semiconservative replication)。
P8
2019/2/24
核酸血液筛查相关技术
核酸血液筛查相关技术
February 24, 2019
磁珠法提取核酸 荧光PCR技术与TMA技术 UNG-dUTP防污染系统 内对照分子
P9
2019/2/24
P5
2019/2/24
分子生物学概论
核酸的理化性质
February 24, 2019
DNA的热变性与复性
慢
骤
DNA热变性后缓慢冷却处理过程称退火 annealing
DNA加热变性后，若经骤然降温，互补链碱基之间来不及配对互补，形成氢 键联系，两链维持分离状态。
P6
2019/2/24
分子生物学概论