甘草种子质量检验方法研究

变异系数 /% 五百粒重 /g
2． 17
5． 383 4
2． 23
6． 803 3
2． 08
4． 862 0
2． 16
5． 682 9
五百粒法
标准差 /g 0． 196 2 0． 301 3 0． 128 7 0． 208 7
变异系数 /% 3． 64 4． 43 2． 65 3． 57
千粒重 /g 10． 725 13． 570
9． 649 8 11． 31 5
千粒法
标准差 /g 0． 227 2 0． 217 8 0． 246 2 0． 230 4
变异系数 /% 2． 12 1． 61Hale Waihona Puke Baidu2． 55 2． 09
对甘草种子发芽率有明显影响。从 2 份种子实际发 芽率看，浓硫酸处理 20，30 min 时，发芽率较高。考 虑到对甘草种子损伤最小，选择浓硫酸处理 20 min 为宜，见表 3。
表 3 硫酸浸种时间对甘草种子发芽的影响 %
处理时间 / min
0 10 20 30 40
内蒙杭锦旗
发芽率
损伤率
18． 25
1． 25
58． 25 87． 75
5． 50 8． 25
83． 00
14． 75
72． 75
21． 25
甘肃靖远
发芽率
损伤率
11． 00
2． 50
42． 25 69． 00
6． 25 10． 25
水分损失量; ②低恒温烘干法: 分别在( 105 ± 2) ℃ 低恒温条件下，设置 5，10，15，20 h 计算种子水分损 失量。以上试验每处理 4 次重复，每次重复 ( 5 ± 0. 001) g。 2. 7 生活力测定 2. 7. 1 染色的试验条件确定 在常温下用蒸馏水 浸泡 12 h 后，直接将种皮剥去暴露子叶和胚。采用 3 因素 3 水平 L9 ( 34 ) 的正交试验设计。四唑染色时 间为 1，3，5 h，梯度设 0. 2% ，0. 4% ，0. 6% ，培养温 度为 25，30，35 ℃ 。每个处 理 400 粒 种 子，4 次 重 复，每重复 100 粒种子。染色结束后，沥去溶液，用 清水冲洗 3 次，将裸种子摆在培养皿中，逐一检查， 子叶和胚完全染成红色的表示有生活力的种子。 2. 7. 2 有无生活力鉴定标准的确定 参照种子的 发芽试验结果，拟定出有生活力种子中允许出现的 不染色、软弱或坏死组织的最大面积，建立甘草种子 四唑活力染色的鉴定标准。 3 结果与分析 3. 1 扦样
不同种子 内蒙古杭锦旗 甘肃靖远 宁夏马家滩
分取样品质量 60． 58 60． 32 61． 00
注: 其他种子质量为 0. 000 g。
杂质质量 6． 860 4． 200 7． 400
净种子质量 53． 62 55． 98 53． 44
g
净度后总质量 60． 48 60． 18 60． 84
3. 3 真实性鉴定 甘草种子真实性鉴定结果如下: 种子呈肾圆形，
第 36 卷第 6 期 2011 年 3 月
Vol. 36，Issue 6 March，2011
甘草种子质量检验方法研究
于福来1 ，王文全1，2* ，方玉强1 ，王文杰3 ，李卫东1，2 ，邢丹1，2
( 1. 北京中医药大学 中药学院，北京 100102; 2. 中药材规范化生产教育部工程研究中心，北京 100102;
第 36 卷第 6 期 2011 年 3 月
Vol. 36，Issue 6 March，2011
4∶ 1) ，然后置种。培养条件为 25 ℃ 光照培养。 2. 5. 3 适宜发芽温度的确定 以滤纸为发芽床，分 别考察温度 20，25，30 ℃ 对种子萌发的影响，光照 培养。
以上发芽试验，每 个 处 理 400 粒 种 子，4 次 重 复，每重复 100 粒种子。 2. 5. 4 发芽计数时间的确定 根据种子发芽表现， 确定初次计数和末次计数时间。以胚根伸出种皮 2 mm 时的天数为初次计数时间，以种子萌发数达到 最高时，以后再无萌发种子出现时的天数为末次计 数时间。 2. 5. 5 幼苗鉴定［6］ 在发芽期间，注意观察种苗发 育过程，按 照 国 际 种 子 检 验 协 会 的《种 苗 评 定 手 册》，对甘草种子进行评价、归类。 2. 5. 6 结果统计 发芽率以发芽终期的全部正常 发芽种子粒数占供检种子粒数的百分率表示。发芽 指数( GI) 以下列公式进行计算: GI = Σ( Gt / Dt) 。式 中，Gt 为在 t 日后的发芽数，Dt 为相应的发芽天数。 采用 Excel 软件进行数据分析。 2. 6 含水量测定
72． 25
21． 75
60． 75
25． 50
3. 5. 2 发芽床的确定 通过比较 3 个产地甘草种 子在不同发芽床上的发芽率及发芽指数，在滤纸床 和纱布床上无论从发芽率还是发芽指数都无显著差 异，而在砂床上发芽表现较差。在纱布床上的甘草 幼苗胚根深入纱布间隙，影响计数。从操作方便上 考虑，选择滤纸床为甘草种子发芽床，见表 4。 3. 5. 3 发芽温度的确定 不同发芽温度下，甘草种 子发芽率表现出一定的差异。通过比较 3 个产地甘 草种子在不同发芽温度下的发芽率和发芽指数，结 果表明，当温度为 20，30 ℃ 时，发芽率和发芽指数都 较高，但差异不显著，而与 20 ℃ 差异显著。考虑到 当温度达到 30 ℃ 时，较易染霉菌，并且需要经常补 水。故选择 25 ℃ 作为甘草种子发芽温度，见表 5。
通过对种子形态、大小、表面特征和种子颜色的 鉴定能够比较准确地鉴别物种的真伪。采用种子外 观形态法，随机数取 100 粒净种子，4 次重复，逐粒 观察甘草种子形态特征，并对其记录。 2. 4 千粒重测定
分别考察百 粒 法、五 百 粒 法 及 千 粒 法。 ① 百 粒 法: 随机从净种子中数取 100 粒，重复 8 次，分别记 录百粒重，计算标准差及变异系数; ②五百粒法: 随 机从净种子中数取 500 粒，重复 3 次，分别记录五百 粒重，计算标准差及变异系数; ③千粒法: 随机从净 种子中数取 1 000 粒，重复 2 次，分别记录千粒重， 计算标准差及变异系数。 2. 5 发芽率测定 2. 5. 1 发芽前种子的处理 分别考察浓硫酸处理 0，10，20，30，40 min，用清水冲洗 5 次后浸种 12 h， 计算种子发芽率和损伤率。 2. 5. 2 适宜发芽床的确定 发芽床试验设 3 个处 理: ①在发芽盒中铺 3 层湿润的滤纸，然后置种; ② 在发芽盒中铺 3 层湿润的纱布，然后置种; ③发芽盒 中铺 4 cm 厚 0. 05 ～ 0. 8 mm 的湿细砂 ( 砂水比为
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草种子批的最大质量和样品最小质量。 2. 1. 2 扦 取 送 验 样 品 和 试 验 样 品 按 GB / T3543. 2———“农作物种子检验规程”扦样执行。 2. 2 种子净度分析
按 GB / T 3543. 3———“农作物种子检验规程” 净度分析执行。结合 10 目和 8 目筛子，在不损伤发 芽力的基础上进行检查，直接挑选纯净种子。 2. 3 种子真实性鉴定
两端钝圆，长 2. 75 ～ 3. 60 mm，宽 2. 45 ～ 3. 10 mm， 厚 2. 15 ～ 2. 55 mm。表面黄绿褐色或暗绿色至褐 色，光滑，略有光泽，种脐位于腹部凹陷处，圆点状， 周边 有 一 色 略 浅 的 微 隆 起 环。 千 粒 重 7. 90 ～ 14. 11 g。 3. 4 千粒重测定
百粒法各处理间变异系数小于 4. 0% ，而五百 粒法中甘肃靖远种子变异系数较大，其他两产地的 种子变异系数也高于百粒法。千粒法测定变异系数 最小，平均为 2. 09。对 3 种方法测定的千粒重值进 行多重比较，无显著差异。综合比较 3 种方法，选择 百粒法作为甘草种子千粒重的测定方法，见表 2。 3. 5 发芽率测定 3. 5. 1 甘草种子发芽前处理方法 硫酸浸种时间
［稿件编号］ 20100705003 ［基金项目］ 国家科技重大专项 ( 2009ZX09308-002) ［通信 作 者］ * 王 文 全，Tel: ( 010 ) 84738334，E-mail: wwq57 @ 126. com ［作者简介］ 于福来，在读博士，研究方向为药用植物种质资源评 价与利用，E-mail: fulai. yu@ 163. com
种子批的最大质量为 2 000 kg，送验样品最少 为 300 g，净度分析试样最少为 30 g。 3. 2 净度分析
3 份甘草种子试样均没有其他植物种子，所以 本次检验不用记录这一项。使用此方法作净度分 析，各试样增失差距均没有偏离原始质量的 5% ，所 以此方法和程序切实可行，见表 1。
表 1 不同产地甘草种子净度测定
75． 75 ± 4． 19a 74． 75 ± 4． 03a 46． 75 ± 3． 59b
14． 22 ± 0． 71a 13． 52 ± 0． 81a 7． 89 ± 0． 60b
92． 25 ± 1． 71a 94． 25 ± 2． 75a 62． 75 ± 2． 50b
17． 32 ± 0． 34a 17． 04 ± 0． 38a 10． 59 ± 0． 50b
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第 36 卷第 6 期 2011 年 3 月
Vol. 36，Issue 6 March，2011
不同产地
百粒重 /g
内蒙古杭锦旗 1． 079 9
甘肃靖远
1． 370 2
宁夏马家滩 0． 963 8
均值
1． 138 0
表 2 甘草种子不同千粒重测定方法比较
百粒法
标准差 /g 0． 023 4 0． 030 5 0． 020 0 0． 024 6
表 4 不同发芽床间甘草种子发芽情况比较( x珋± s，n = 4)
发芽床
内蒙杭锦旗
发芽率 /%
发芽指数
甘肃靖远
发芽率 /%
发芽指数
宁夏马家滩
发芽率 /%
发芽指数
滤纸床 纱布床 砂床
90． 50 ± 2． 89a 89． 75 ± 3． 77a 63． 25 ± 3． 50b
16． 99 ± 0． 57a 16． 22 ± 0． 57a 10． 67 ± 0． 53b
参照 GB / T 3543. 6———“农 作 物 种 子 检 验 规 程”水分测定执行。用小型粉碎机将种子粉碎约 5 s，2 次，以甘草种子有 50% 以上能够透过 4. 0 mm 的 筛孔为度。分别考察高温烘干法和低恒温烘干法对 种子 含 水 量 进 行 测 定。 ① 高 温 烘 干 法: 分 别 在 ( 133 ± 2) ℃ 高温条件下，设置 1，2，3，4 h 计算种子
［关键词］ 甘草; 种子; 质量检验方法
甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch. 为豆科多年生 草本植物，干燥根入药，具有补脾益气，清热解毒，祛 痰止咳，缓急止痛，调和诸药之功效［1-2］。我国甘草 人工栽培面积较大，但栽培所用甘草种子基本来自 于野生，种源混杂，种子调拨混乱，所产药材质量良 莠不齐［3-4］，亟待对市场流通用种质量进行规范。其 中，种子检验是保证种子质量的重要措施，统一、标 准的检验方法及程序是保证检验公证性和可靠性的 前提［5］。本试 验 对 反 映 甘 草 种 子 质 量 主 要 指 标 的 检验方法进行研究，以期为甘草种子质量检验规程 及种子质量分级提供依据。 1 材料
3. 北京华宏康中药材种植有限公司，北京 101300)
［摘要］ 目的: 研究甘草种子质量检验方法，为甘草种子质量检验规程及质量分级的制定提供依据。方法: 参考国际植 物种子检验规程和中国农作物种子检验规程的方法对不同产地甘草种子质量进行测定。结果与结论: 初步建立甘草种子扦 样、净度、真实性鉴定、千粒重、发芽率、含水量及生活力 7 项指标的检验方法。
甘草种子于 2009 年 9 月分别采自内蒙古杭锦 旗、甘肃靖远和宁夏马家滩当地野生甘草植株。经 北京中医药大学王文全教授鉴定为甘草 G. uralensis. 的种子。实验于 2010 年 4 月在北京中医药大 学中药学院中药资源系实验室进行。 2 方法 2. 1 扦样 2. 1. 1 种子批 根据甘草种子的市场流通情况和 单次可 能 的 交 易 量 及 净 度 分 析 试 验 样 品 不 少 于 2 500粒种子，送验样品为试验样品 10 倍量确定甘