分枝杆菌属

感染特点
– 病灶局限，不累及临近淋巴组织 – 易发生慢性肉芽肿和干酪样坏死和空 洞
致病性
肺结核-继发感染
病程呈慢性渐进性，伴有乏力、体重减轻、咳嗽、盗汗、 午后潮热、胸痛等。病灶多局限呈干酪样结节，若结节破 溃，则可形成空洞，传染性强。
右 上 干 酪 样 肺 结 核
右 下 干 酪 样 肺 结 核
所致疾病
• 感染类型
–肺部感染：肺结核（原发感染、继发感染） –肺外感染
• 传播途径
–呼吸道 –消化道 –破损皮肤黏膜等 –侵犯多种组织器官
原发结核
致病性
原发综合征：原发灶、淋巴管炎、肺门淋巴结肿大
原 发 型 肺 结 核
正
肺结核-继发感染：成人多发
诱发因素
– 原发病灶中潜伏的结核分枝杆菌引起 – 外界的结核分枝杆菌再次入侵
5%-10%
抵抗力下降时发病 继发感染 成人多发
免疫机制：主要是细胞免疫
• 感染免疫、有菌免疫（infection immunity ） – 感染TB或接种BCG后，机体可产生对该菌特异 性免疫力，维持依赖于TB在体内的存在 • 细胞免疫 • 迟发型超敏反应
郭霍现象
结核菌
皮下注射 初次感染 （10-14d) 既往感染 (1-2d)
强阳性
阴性
微生物学检验
标本采集 • 据感染部位的不同采集不同的标本 • 疑肺结核：收集清晨第一口痰，清洁干燥的容器内送检 • 疑泌尿系结核：清晨一次全部尿量或24小时尿沉淀10～ 15ml送检，必要时作无菌导尿送检（诊断泌尿道结核通 常需3～5份标本） • 采集脓液应直接从溃疡处取脓汁或分泌物,深部脓肿用无 菌注射器抽取送检 • 其他：无菌抽取脑脊液、胸水、腹水及关节液等盛无菌 试管送检。脑脊液标本静置后，表面可有细薄凝块，取 凝块作涂片或接种培养
4＋
>9/视野
>36/视野
结核病快速诊断方法
• 用PCR法快速诊断MTB感染 • PCR法检测DNA特异性更强，敏感性更高
• PCR须按法规要求规范操作，应防止标本 污染出现假性结果 • 全自动核酸扩增试验被世界卫生组织认可 • 约100分钟内可为多名病人做出准确诊断
分离培养与鉴定 培养特性
– – – – – 专性需氧 3％～5％CO2能促进其生长 营养要求高 :须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油以及含某些无机盐类的特殊培养 基上才能生长良好。常用罗氏培养基 最适生长温度为35～37℃，最适pH6.5～6.8 14～18h分裂1次，在固体培养基上2～5周才出现肉眼可见的菌落
• 结果
– 阴性：＜5mm – 阳性：＞5mm – 强阳性：≥15mm
结核菌素试验结果、临床意义
阳性
硬结、红肿直径 5～15mm之间 硬结直径超过 15mm以上
注射部位有针眼大的 红点或稍有红肿，硬 结直径小于5mm
既往感染过结核分枝杆菌 卡介苗接种成功 表明可能有活动性结 核，应进一步检查 原发感染的早期 严重结核病或其他传染病 （麻疹） 老年人 免疫力低下病人
微生物学检查
• 涂片染色镜检：抗酸染色
– 须与非结核分枝杆菌进行鉴别 加热法：非结核分枝杆菌加热2分钟即失去抗酸性，而 结核分支杆菌则不然
• 结核菌素皮肤试验：检测潜伏结核感染的唯 一的方法 • 细菌学基因诊断：PCR • 动物试验
结核分枝杆菌痰标本抗酸染色
结核分枝杆菌尿标本抗酸染色
荧光金胺染色
– 尚无有效的菌苗
• 早期发现、早治疗 • 目前多采用二三种药联合治疗
– 氨苯砜（dapsone，DDS）
Lepromatous Leprosy Preand Post-Treatment
三、非结核分枝杆菌
一、概述与分类
二、临床意义
三、微生物学检验
概述与分类
非结核分枝杆菌（Ｎontuberculosis
致病性
致病物质
1.类脂 2.蛋白质 3.多糖
致病物质
• 类脂（lipid） – 分枝菌酸（mycolic acid）…….抗酸染色特性 – 索状因子（cord factor)………..慢性肉芽肿 – 磷脂（phosphatide）………….结核结节，干酪样坏死 – 蜡质D（wax-D）………………迟发型超敏反应 – 硫酸脑苷酯（sulfatide）……...细胞内寄生 • 蛋白质…………………结核结节形成、全身中毒 • 多糖（polysaccharide）…….胞内寄生
抵抗力
• Resistant to
–干燥 –酸碱 –碱性染料 –青霉素等
Sensitivity
紫外线 酒精 湿热 抗结核药物 异烟肼 利福平等
变异性
• 形态
L型
• 菌落 • 耐药性 • 毒力变异
卡介菌-卡介苗（Bacilli Calmette-Guèrin，BCG） 是毒力变异株，将有毒的 牛型结核分枝杆菌培养于 含甘油、胆汁、马铃薯的 培养基中，经230次传代， 历史13年而获得的减毒活 菌株，目前广泛应用于结 核病的预防
• 我国结核病人450万人，每年死亡人数约25万
• WHO 已把结核病与 AIDS 、疟疾一起 列为人类的最主要杀手
生物学形状
• • • • 形态染色 培养特性 抵抗力 变异性
形态与染色
• 细长略带弯曲的杆菌，大 小1～4X0.4 μm。牛分枝杆 菌则比较粗短。分枝杆菌 属的细菌细胞壁脂质含量 较高，约占干重的60%， 特别是有大量分枝菌酸 (mycolic acid)包围在肽聚 糖层的外面，可影响染料 的穿入。 • 无芽胞无鞭毛, 无内外毒素 • 抗酸染色阳性(ZeihlNeelsen acid-fast stain)
• MTB包括 人结核分枝杆菌（M.tuberculosis） 牛分枝杆菌（M.bovis） 非洲分枝杆菌（M.africanum） 坎纳分枝杆菌（M.canettii） 田鼠分枝杆菌(M.microti)等 • 前四种对人类致病，其中人型MTB感染率最高
结核病的国际形势
• WHO统计
– 世界1/3的人口感染结核 – 世界范围每年死亡人数为200万人↘140万（2010 年） – 90%以上在发展中国家 – 每年新病例为800万-1000万人
–
典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透明，乳白色或淡黄色，如菜花样
分离培养
• 标本接种于选择性培养基中(常用罗氏，所 含的孔雀绿或青霉素可抑制杂菌生长) • 37℃，5％～10％CO2培养8周 • 结核杆菌出现干燥呈颗粒状、灰白色菌落 • 涂片染色为抗酸阳性
三、微生物学检验
鉴定 菌种鉴定
(1) 生化反应（烦琐、费时（ 4～8 周）,影响因素多）
• 世界各地均有报道
– 主要分布在亚、非洲 – 拉丁美洲
生物学形状
形态与染色
• 细长略弯曲 • 无芽胞，无荚膜，无鞭 毛 • 抗酸染色阳性 • 典型的胞内寄生菌 • 麻风细胞 • 抵抗力
–抗干燥：可存活7天 –低温环境生存良好 –紫外线及加热敏感
培养特性
• 不能在人工培养基中生长 • 小鼠足垫：传代 • 动物模型：犰狳（armadillo)
皮肤 外周神经 很少累及内脏
• 镜检病变部位
– 麻风细胞 – 肉芽肿
Mycobacterium leprae
结核样型麻风皮肤损 害
界线类麻风引起的手变形
微生物学诊断
• 显微镜检查，抗酸染色 • PCR：尚在研究阶段
麻风细胞抗酸染色
麻风分枝杆菌组织切片（Triff染色）
防治原则
• 特异的预防
Mycobactericum，NTM） :
指结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分 枝杆菌、非洲分枝杆菌、坎纳分枝杆菌和田鼠分 枝杆菌) 和麻风分枝杆菌以外的其他分枝杆菌。
概 述
• NTM种类众多，现已被鉴定的有150余种, 包括专性寄生菌、腐生菌和中间型。
• 国际分枝杆菌分类研究组（IWGMT）分为 三类，即缓慢生长菌、快速生长菌和不能 培养菌三种类型。
–非结核分枝杆菌
根据生长速度
快生长菌 慢生长菌
一、 结核分枝杆菌
Mycobacterium tuberculosis (TB)
流行病学
• 结核病的病原菌
– 1882年德国细菌学家 Koch 证明
• 全球性卫生问题
– 是艾滋病高发区人群的首 要死因
• 世界防治结核病日
– 3月24日
分类
齐-尼氏抗酸染色法
Ziehl-Neelsen method for acid fast bacteria 涂片、固定、干燥 初染：石炭酸复红 脱色：3%的盐酸酒精 复染：美篮染液 干燥、镜检
培养特性
• 专性需氧，最适pH6.5-6.8 • 生长缓慢：繁殖一代耗时18h • 营养要求高
分枝杆菌属鉴定
概 述
• 分枝杆菌与放线菌属放线菌目 （Actinomycetates） • 分枝杆菌属（Mycobacterium）是一类细长略带 弯曲专性需氧性杆菌。该菌一般认为革兰染色阳 性。多数细菌在生长的一定时期抵抗酸-醇（acidalcohol-fast），故又称抗酸杆菌（acid-fast bacillus） • 放线菌（Actinomyces）是一群在生物学特性上 与细菌类同的原核细胞型微生物，与分枝杆菌、 棒状杆菌等有着亲缘关系
红肿、溃疡、坏死 淋巴结肿大 全身播散 死亡
红肿、浅表溃烂 病灶局限 无播散，无死亡 获得免疫力
结核菌素试验
• 结核菌素试剂
– 旧结核菌素（old tuberculin，
OT)
– 纯蛋白衍化物 (purified
protein derivative，PPD)
结核菌素试验
• 方法
– 取两种PPD 5单位注入两前臂皮内 – 48～72小时后观察红肿直径
致病性
• • • • • 易感人群： 人 传播途径： 密切接触和呼吸道传播 潜伏期： 平均2-5年 发病慢、病程长 麻风分为3种类型
– 瘤型麻风 – 结核样型 – 界线类、未定类
瘤型麻风
• 传染性强 • 病情严重 • 侵犯部位
– 皮肤和粘膜 – 神经 – 眼睛及内脏
结核样型
传染性小 侵犯部位
右下干酪性肺炎并 空洞形成
肺外感染
• 免疫力低下患者 • 形成全身粟粒性结核 或播散性结核
临床表现
• • • • • • • 咳嗽，咳痰(血痰） 全身倦怠感 微热 盗汗 胸痛 食欲低下 体重减少
感染结核菌的过程
5%-10% 80%-90%
初次感染发病 原发感染 数月-2年之内发病 儿童多见
感染不发病 （既往感染）
（2）噬菌体鉴定法
（3）分子生物法菌种鉴定
(4)高效液相色谱（HPLC）检测分枝菌酸
生化反应--烦琐、费时（ 4～8 周）,影响因素多
• 结核分枝杆菌不发酵糖类 • 能产生触酶 • 人型MTB能合成烟酸，还原硝酸盐，耐受 噻吩-2-羧酸酰肼，而牛型MTB则不能 • 人型和牛型的毒株中性红试验均阳性，无 毒株则为阴性，并失去索状生长现象
分枝杆菌属（Mycobacterium） 共同特性
• • • • • • 细长略带弯曲的杆菌 生长速度慢 无鞭毛、无芽孢、不产生内外毒素 细胞壁含有丰富的脂质成分（分枝菌酸） 致病性与菌体成分相关 抗酸杆菌（acid-fast bacillus）
分枝杆菌属
• 分类
–结核分枝杆菌复合群 • 结核分枝杆菌 • 牛型分枝杆菌 • 非洲分枝杆菌 • 田鼠分枝杆菌 –麻风分枝杆菌
特异性防治
• 卡介苗预防
–接种对象：新生儿和结核菌素试验阴性的儿童 –免疫时间：3～5年
• 药物治疗
–五项原则 早期、联合、规则、足量、全程
二、 麻风分枝杆菌 Mycobacterium leprae
麻风分枝杆菌（M. leprae）
• 麻风病的病原菌
– 慢性传染病 – 主要侵及皮肤、粘膜和神经 – 引起关节的畸形性病变
– 罗氏培养基：甘油、天门冬素、 蛋黄、马铃薯、无机盐类、孔 雀蓝 – 液体培养基 吐温-80 (Tween 80)
培养特性
• 细菌在罗氏培养基上菌落呈颗粒、 结节或花菜状，乳白色或米黄色， 不透明。在液体培养基中由于接 触营养面大，细菌生长较为迅速。 一般1～2周即可生长。临床标本 检查液体培养比固体培养的阳性 率高数倍。
结核分枝杆菌
涂片镜检的报告方式
半定量报告
Biblioteka Baidu
石炭酸复红染色：抗 酸杆菌（1000×）
未找到抗酸菌 0 可疑抗酸杆菌； 1～2/300视野 再送标本检测
1＋ 2＋ 3＋ 1～9/100视野 1～9/10视野 1～9/视野
荧光染色：抗酸 杆菌 （450×） 0 1～2/70视野
2～18/50视野 4～36/10视野 4～36/视野